一种治疗肾病的中药组合物及其制备方法和检测方法.pdf

本发明涉及一种治疗肾病的中药组合物及其制备方法和检测方法,通过原料大黄、太子参、黄连、法半夏、陈皮、茯苓、丹参、牛膝、红花、甘草，以水提与醇提相结合进行制备，并进行了稳定性和质量含量检测。本发明对现有的肾衰宁经典配方进行了研究改进，使原料中的有效成分得到充分提取和作用发，减少患者的相对用药量且制备方法简便易操作；在检测方法中增加了君药大黄及臣药丹参的含量测定，建立了同时测定大黄以及丹参有效成分含量的高效液相色谱法，该检测方法能够简便高效地定性和定量检测出治疗肾病的中药组合物的有效成分含量，从而实现客观、全面、准确的评价肾衰宁类药物的质量，对控制肾衰宁类药物的质量和保证疗效具有重要意义。

1.  一种治疗肾病的中药组合物，其特征在于，含有以下重量配比的原料：大黄350～400份、太子参200～250份、黄连70～100份、法半夏230～250份、陈皮90～100份、茯苓190～200份、丹参670～700份、牛膝190～200份、红花80～100份、甘草85～100份。

2.  根据权利要求1所述的治疗肾病的中药组合物，其特征在于，含有全部或部分所述原料的提取物，所述提取物为醇提取物或者水提取物。

3.  根据权利要求1或2所述的治疗肾病的中药组合物，其特征在于，所述治疗肾病的中药组合物的剂型为颗粒剂、胶囊剂、汤剂、膏剂或者丸剂。

4.  一种权利要求1至3中任一项所述的治疗肾病的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)按照权利要求1至3中任一项所述的治疗肾病的中药组合物的原料配比称取大黄、太子参、黄连、法半夏、陈皮、茯苓、丹参、牛膝、红花、甘草；
(2)将步骤(1)所称取大黄质量的一半粉碎成大黄粉待用，将所余另一半大黄浸渍提取待用；将步骤(1)所称取的太子参、法半夏、陈皮、茯苓、丹参、牛膝、红花和甘草这八味药进行水煎提取，收集所得提取液待用；将步骤(1)所称取的黄连进行水煎提取，收集所得提取液待用；
(3)将步骤(2)所得原料药的药粉及提取液混合均匀，即得治疗肾病的中药组合物。

5.  根据权利要求4所述的治疗肾病的中药组合物的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所得大黄粉过200目筛；
在所述步骤(2)中，将步骤(1)所称取大黄质量的一半先用质量百分含量为70％的乙醇浸渍，浸渍时间为24小时以上，然后，缓缓渗漉，收集所得渗漉液，将所得渗漉液于90～95℃下浓缩成相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；
在所述步骤(2)中，将步骤(1)所称取的太子参、法半夏、陈皮、茯苓、丹参、牛膝、红花和甘草这八味药进行水煎，水煎三次，其中，第一次水煎时间为2.5～3.5小时，第二次水煎时间为1.5～2.5小时，第三次水煎时间为1～1.5小时，将每次水煎滤过所得煎液合并，然后，将所得煎液于60～70℃下减压浓缩至相对密度为1.10～1.20g/cm³的清膏，再加入乙醇混合，使混合物的含醇量达到60％，充分搅拌后静置72小时以上，滤过，将所得滤液于95～98℃下减压浓缩至相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；
在所述步骤(2)中，将步骤(1)所称取的黄连进行水煎，水煎三次，其中，第一次水煎时间为2.5～3.5小时，第二次水煎时间为1.5～2.5小时，第三次水煎时间为1～1.5小时，将每次水煎滤过所得煎液合并，然后，将所得煎液于60～70℃下减压浓缩至相对密度为1.10～1.20g/cm³的清膏，再加入乙醇混合，使混合物的含醇量达到60％，充分搅拌后静置72 小时以上，滤过，将所得滤液于95～98℃下减压浓缩至相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；
在所述步骤(3)中，将上述步骤(2)所得大黄稠膏、大黄粉末、八味药的稠膏及黄连稠膏混匀，制颗粒，干燥，即得治疗肾病的中药组合物。

6.  权利要求4所述的治疗肾病的中药组合物的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所得大黄粉过200目筛；
在所述步骤(2)中，将步骤(1)所称取大黄质量的一半先用质量百分含量为30％～60％的乙醇浸渍，浸渍时间为40小时以上，然后，将浸渍后所得大黄及其浸渍液进行加热回流提取，加热温度为85～95℃，提取时间为1.5～2.5小时，收集所得提取液，将所得提取液于90～95℃下浓缩成相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；
在所述步骤(2)中，将步骤(1)所称取的太子参、法半夏、陈皮、茯苓、丹参、牛膝、红花和甘草这八味药进行水煎，水煎三次，其中，第一次水煎时间为2.5～3.5小时，第二次水煎时间为1.5～2.5小时，第三次水煎时间为1～1.5小时，将每次水煎滤过所得煎液合并，然后，将所得煎液于60～70℃下减压浓缩至相对密度为1.10～1.20g/cm³的清膏，再加入乙醇混合，使混合物的含醇量达到60％，充分搅拌后静置72小时以上，滤过，将所得滤液于95～98℃下减压浓缩至相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；
在所述步骤(2)中，将步骤(1)所称取的黄连进行水煎，水煎三次，其中，第一次水煎时间为2.5～3.5小时，第二次水煎时间为1.5～2.5小时，第三次水煎时间为1～1.5小时，将每次水煎滤过所得煎液合并，然后，将所得煎液于60～70℃下减压浓缩至相对密度为1.10～1.20g/cm³的清膏，再加入乙醇混合，使混合物的含醇量达到60％，充分搅拌后静置72小时以上，滤过，将所得滤液于95～98℃下减压浓缩至相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；
在所述步骤(3)中，将步骤(2)所得大黄稠膏、大黄粉末、八味药的稠膏及黄连稠膏混匀，制颗粒，干燥，即得治疗肾病的中药组合物。

7.  一种权利要求1至3中任一项所述的治疗肾病的中药组合物的检测方法，其特征在于，在含量检测中，通过高效液相色谱法同时测定大黄中的有效成份芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。

8.  根据权利要求7所述的治疗肾病的中药组合物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)对照品溶液的制备：取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1ml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各20μg和大黄素甲醚10μg的溶液，即得对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备：取权利要求1至3中任一项所述的治疗肾病的中药组合物样品 0.2g，加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
(3)色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇与磷酸水溶液组成的混合液为流动相，其中，磷酸水溶液中磷酸的质量百分含量为0.1％，甲醇与0.1％磷酸水溶液的体积比为75:25至85:15；检测波长为254nm；柱温为30℃；理论板数按大黄素峰计算不低于4000；
(4)测定方法：分别取步骤(1)所得对照品溶液与步骤(2)所得供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定供试品溶液与对照品溶液色谱保留时间相同的色谱峰。

9.  一种权利要求1至3中任一项所述的治疗肾病的中药组合物的检测方法，其特征在于，在含量检测中，通过高效液相色谱法同时测定丹参中有的效成份丹参素钠、丹酚酸B的含量。

10.  根据权利要求9所述的治疗肾病的中药组合物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)对照品溶液的制备：取丹参素钠、丹酚酸B对照品，加甲醇制成每1ml含丹参素钠、丹酚酸B各40μg的溶液，即得对照品溶液；
(2)供式品溶液的制备：取权利要求1至3中任一项所述的治疗肾病的中药组合物样品0.2g，加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B；检测波长280nm；柱温30℃；流速为每分钟1.0ml；理论板数按丹参素峰计算不低于3500；
(4)测定方法：分别称取步骤(1)所得对照品溶液与步骤(2)所得供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定供试品溶液与对照品溶液色谱保留时间相同的色谱峰。

一种治疗肾病的中药组合物及其制备方法和检测方法
技术领域
本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种治疗肾病的中药组合物及其制备方法和检测方法。
背景技术
肾功能衰竭等肾脏疾病是临床常见重病，通常采用透析和肾移植治疗，但医疗费用过高，一般家庭经济无法负担，且透析治疗过程中易引发并发症，肾移植手术后还普遍存在排斥反应，对此，患者及其家属普遍较难承受。传统中药的应用则能够有效避免上述情况发生，如肾衰宁胶囊等，能够有效缓解症状，减少患者痛苦，但为保障临床疗效显著，还需进行改进。为保障以高质量的肾衰宁这些治疗肾病的中药进行治疗，并使其在临床中充分发挥功效，使患者尽早恢复健康，此类药物的制备方法及质量控制至关重要，而现有的治疗肾病的药物肾衰宁的制备方法，其君药大黄及黄连的有效成份未得以充分利用，其质量控制方法未纳入君药大黄及臣药丹参的定量检测，不能很好的反应制剂的质量，因此为了维护患者利益，很有必要在现有的技术基础之上研究设计出能同时测定大黄中有效成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚和丹参中有效成分丹参素钠、丹酚酸B的含量的检测方法。
发明内容
本发明的目的是，针对现有技术存在的问题，提供一种治疗肾病的中药组合物及其制备方法和检测方法，改进提高现有肾衰宁制剂的疗效，提高药效检测的准确度，并以新检测方法客观、全面、准确的评价肾衰宁制剂的质量，从而利于严格控制投入治疗使用的药量，进而保障用药患者获得预期的治疗效果。
本发明解决问题的技术方案是：提供一种治疗肾病的中药组合物，含有以下重量配比的原料：大黄350～400份、太子参200～250份、黄连70～100份、法半夏230～250份、陈皮90～100份、茯苓190～200份、丹参670～700份、牛膝190～200份、红花80～100份、甘草85～100份。
在本发明治疗肾病的中药组合物中，含有全部或部分所述原料的提取物，所述提取物为醇提取物或者水提取物。
本发明治疗肾病的中药组合物作为药剂的剂型为颗粒剂、胶囊剂、汤剂、膏剂或者丸剂，优选为颗粒剂或者胶囊剂。
本发明治疗肾病的中药组合物能够采用现有中药的常规制备方法来制备，为保障相对现 有肾衰宁等药物的疗效得到明显提高，将上述各原料制成本发明治疗肾病的中药组合物包括如下步骤：
(1)按照上述治疗肾病的中药组合物的原料配比称取大黄、太子参、黄连、法半夏、陈皮、茯苓、丹参、牛膝、红花、甘草；
(2)将步骤(1)所称取大黄质量的一半粉碎成大黄粉待用，将所余另一半大黄浸渍，提取待用；将步骤(1)所称取的太子参、法半夏、陈皮、茯苓、丹参、牛膝、红花和甘草这八味药进行水煎提取，收集所得提取液待用；将步骤(1)所称取的黄连进行水煎提取，收集所得提取液待用；
(3)将步骤(2)所得原料药的药粉及渗漉液和煎液混合均匀，即得治疗肾病的中药组合物。
优选地，在本发明治疗肾病的中药组合物的制备方法中，在所述步骤(2)中，所得大黄粉过200目筛；在所述步骤(2)中，将步骤(1)所称取大黄质量的一半先用质量百分含量为70％的乙醇浸渍，浸渍时间为24小时以上，然后，缓缓渗漉，收集所得渗漉液，将所得渗漉液于90～95℃下浓缩成相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；在所述步骤(2)中，将步骤(1)所称取的太子参、法半夏、陈皮、茯苓、丹参、牛膝、红花和甘草这八味药进行水煎，水煎三次，其中，第一次水煎时间为2.5～3.5小时，第二次水煎时间为1.5～2.5小时，第三次水煎时间为1～1.5小时，将每次水煎滤过所得煎液合并，然后，将所得煎液于60～70℃下减压浓缩至相对密度为1.10～1.20g/cm³的清膏，再加入乙醇混合，使混合物的含醇量达到60％，充分搅拌后静置72小时以上，滤过，将所得滤液于95～98℃下减压浓缩至相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；在所述步骤(2)中，将步骤(1)所称取的黄连进行水煎，水煎三次，其中，第一次水煎时间为2.5～3.5小时，第二次水煎时间为1.5～2.5小时，第三次水煎时间为1～1.5小时，将每次水煎滤过所得煎液合并，然后，将所得煎液于60～70℃下减压浓缩至相对密度为1.10～1.20g/cm³的清膏，再加入乙醇混合，使混合物的含醇量达到60％，充分搅拌后静置72小时以上，滤过，将所得滤液于95～98℃下减压浓缩至相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；在所述步骤(3)中，将上述步骤(2)所得大黄稠膏、大黄粉末、八味药的稠膏以及黄连稠膏混匀，制颗粒，干燥，即得治疗肾病的中药组合物。
优选地，在本发明治疗肾病的中药组合物的制备方法中，在所述步骤(2)中，所得大黄粉过200目筛；在所述步骤(2)中，将步骤(1)所称取大黄质量的一半先用质量百分含量为30％～60％的乙醇浸渍，浸渍时间为40小时以上，然后，将浸渍后所得大黄及其浸渍液进行加热回流提取，加热温度为85～95℃，提取时间为1.5～2.5小时，收集所得提取液，将所得提取液于90～95℃下浓缩成相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；在所述步骤(2)中，将 步骤(1)所称取的太子参、法半夏、陈皮、茯苓、丹参、牛膝、红花和甘草这八味药进行水煎，水煎三次，其中，第一次水煎时间为2.5～3.5小时，第二次水煎时间为1.5～2.5小时，第三次水煎时间为1～1.5小时，将每次水煎滤过所得煎液合并，然后，将所得煎液于60～70℃下减压浓缩至相对密度为1.10～1.20g/cm³的清膏，再加入乙醇混合，使混合物的含醇量达到60％，充分搅拌后静置72小时以上，滤过，将所得滤液于95～98℃下减压浓缩至相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；在所述步骤(2)中，将步骤(1)所称取的黄连进行水煎，水煎三次，其中，第一次水煎时间为2.5～3.5小时，第二次水煎时间为1.5～2.5小时，第三次水煎时间为1～1.5小时，将每次水煎滤过所得煎液合并，然后，将所得煎液于60～70℃下减压浓缩至相对密度为1.10～1.20g/cm³的清膏，再加入乙醇混合，使混合物的含醇量达到60％，充分搅拌后静置72小时以上，滤过，将所得滤液于95～98℃下减压浓缩至相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；在所述步骤(3)中，将上述步骤(2)所得大黄稠膏、大黄粉末、八味药的稠膏以及黄连稠膏混匀，制颗粒，干燥，即得治疗肾病的中药组合物。
优选地，因本发明治疗肾病的中药组合物为口服给药，在本发明治疗肾病的中药组合物的制备方法中，为便于服用，在所述步骤(3)后，能够将步骤(2)所得产物混合制成颗粒剂、胶囊剂、汤剂、膏剂或者丸剂等药剂。较佳地，根据患者患病的程度和实际需要，为便于服用，将步骤(2)所得混合产物中加入填充剂、矫味剂，混匀，制成颗粒剂、胶囊剂等剂型的治疗肾病的中药组合物，其中，所述矫味剂优选为甜菊素，以改善中药较苦的口感，而且甜菊素不参与胰岛素代谢，更有利于人体康复。
本发明还提供了另一种治疗肾病的中药组合物的检测方法，在含量检测中，通过高效液相色谱法同时测定大黄中的有效成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。
优选地，在本发明治疗肾病的中药组合物的检测方法中，包括如下步骤：
(1)对照品溶液的制备：取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各20μg和大黄素甲醚10μg的溶液，即得对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备：取权利要求1至3中任一项所述的治疗肾病的中药组合物样品0.2g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟(功率250W，频率50kHz)，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
(3)色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液(75∶25至85:15)为流动相，即以甲醇与磷酸水溶液组成的混合液为流动相，其中，磷酸水溶液中磷酸的质量百分含量为0.1％，甲醇与0.1％磷酸水溶液的体积比为75:25至85:15；检测波长为 254nm；柱温为30℃；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；
(4)测定方法：分别精密称取吸取步骤(1)所得对照品溶液与步骤(2)所得供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定供试品溶液与对照品溶液色谱保留时间相同的色谱峰。
本发明还提供了一种治疗肾病的中药组合物的检测方法，在含量检测中，通过高效液相色谱法同时测定丹参中有的效成分丹参素钠、丹酚酸B的含量。
优选地，在本发明治疗肾病的中药组合物的检测方法中，包括如下步骤：
(1)对照品溶液的制备：取丹参素钠、丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含丹参素钠、丹酚酸B各40μg的溶液，即得对照品溶液；
(2)供式品溶液的制备：取权利要求1至3中任一项所述的治疗肾病的中药组合物样品0.2g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟(功率250W，频率50kHz)，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以质量百分含量为0.1％的磷酸水溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，检测波长280nm；柱温30℃；流速为每分钟1.0ml；理论板数按丹参素峰计算应不低于3500；其中，优选地，梯度洗脱程序如下表所示：

(4)测定方法：分别精密吸取步骤(1)所得对照品溶液与步骤(2)所得供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定供试品溶液与对照品溶液色谱保留时间相同的色谱峰。
为改进提高现有肾衰宁类药物的疗效，充分发挥中药经典配方的功效，在本发明中精选的上述原料药基于现有的中药典籍肾衰宁经典配方选取，发明人做了多次实验和配方调整并根据中药理论进行研制而得本发明治疗肾病的中药组合物及其制备方法，从配方到制备方法和检测方法均进行了改进。在本发明治疗肾病的中药组合物是以大黄为君药的治疗肾病的中药组合物，在本发明治疗肾病的中药组合物的制备方法中，在现有的治疗肾病的中药组合物的基本制备方法基础上进行了改进，使原料中的有效成分得到充分提取，尤其是对君药大黄采取了大黄粉与浸渍提取相结合的处理方法，使大黄的有效成分得到充分利用，并改善大黄性寒对药物整体作用效果的影响；对方中黄连采取了单独水煎的方式，有效地避免了黄连中有效成分在与其它药材同时水煎过程的结合反应，使黄连的有效成分得到充分利用。在本发 明治疗肾病的中药组合物的检测方法中，在现有肾衰宁药物检测方法的基础上，在含量测定中增加了君药大黄的5个有效成分(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)的含量测定，建立了高效液相色谱法同时测定君药大黄中5个有效成分(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)的含量以及臣药丹参中两个有效成分(丹参素、丹酚酸B)的含量，建立了高效液相色谱法通过梯度洗脱同时测定丹参素及丹酚酸B的含量，用于评价本发明的产品质量。该检测方法能够客观、全面、准确的评价肾衰宁类药物的质量，利于增强肾衰宁类药物的质量控制和疗效保证。
附图说明
图1为芦荟大黄素对照品的紫外吸收光谱图；
图2为大黄酸对照品的紫外吸收光谱图；
图3为大黄素对照品的紫外吸收光谱图；
图4为大黄酚对照品的紫外吸收光谱图；
图5为大黄素甲醚对照品的紫外吸收光谱图；
图6为缺大黄空白样品指纹图谱；
图7为芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚指纹图谱；
图8为供试品大黄指纹图谱；
图9为芦荟大黄素线性关系图；
图10为大黄酸线性关系图；
图11为大黄素线性关系图；
图12为大黄酚线性关系图；
图13为大黄素甲醚线性关系图；
图14为丹参素钠对照品的紫外吸收光谱图；
图15为丹酚酸B对照品的紫外吸收光谱图；
图16为缺丹参空白样品指纹图谱；
图17为丹参素钠、丹酚酸B指纹图谱；
图18为供试品丹参指纹图谱；
图19为丹参素钠线性关系图；
图20为丹酚酸B线性关系图。
具体实施方式
本发明提供的治疗肾病的中药组合物，基于现有的中药典籍肾衰宁经典配方进行研究改进，结合多年医药研究及临床经验和现代医学机理，并经临床观察百余例，对于肾病患者服用本发明的治疗肾病的中药组合物，相较现有肾衰宁药物具有用量少，见效快，疗效稳定可靠且无副作用的显著效果。
下面通过具体实施例进行说明。在本发明实施例中未进行详细介绍的中药活性组分提取的操作为中药制备领域常规技术。本发明实施例的目的是说明本发明的中药组合物可以制成的常规剂型，而非用于限制其保护范围或者影响其公开充分。
实施例1
按下述配比称取原料(g)：大黄400g、太子参250g、黄连100g、法半夏250g、陈皮100g、茯苓200g、丹参700g、牛膝200g、红花100g、甘草100g。
制备方法如下：
(1)将所称各原料药大黄质量的一半即200g大黄粉碎成大黄粉待用，将所余200g大黄先用乙醇浸渍，然后，缓缓渗漉，收集所得渗漉液待用；将所称取的太子参、法半夏、陈皮、茯苓、丹参、牛膝、红花和甘草这八味药进行水煎，收集所得煎液待用；将所称取的黄连进行水煎，收集所得煎液待用；
(2)将步骤(1)所得原料药的药粉及渗漉液和八味药以及黄连水煎液混合均匀，即得治疗肾病的中药组合物。
在上述实施例中，为保障药物整体的效力一致性及患者更好地进行吸收，大黄粉碎后的颗粒度过200目筛，较佳地，大黄粉为75μm以下的颗粒；同时，为保障药效充分得到发挥，在所述步骤(1)中，浸渍200g大黄用质量百分含量为70％的乙醇浸渍，浸渍24小时，以使大黄中的有效成分充分溶出，而后以渗漉法收集提取液保障收集完全，避免流失，在此过程中，缓缓渗漉收集，将所得渗漉液于90～95℃下浓缩成相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；此外，为保障原料药的有效成分得到充分利用，在所述步骤(1)中，将所称取的太子参、法半夏、陈皮、茯苓、丹参、牛膝、红花和甘草这八味药进行水煎，水煎次数优选为三次以上，较佳地，水煎三次，其中，第一次水煎时间优选为2.5～3.5小时，较佳地，第一次水煎2小时；第二次水煎1.5小时；第三次水煎时间为1～1.5小时，较佳地，第三次水煎1小时，将三次水煎滤过所得煎液合并，然后，将所得煎液于60～70℃下减压浓缩至相对密度为1.10～1.20g/cm³的清膏，再加入乙醇混合，所用乙醇优选为质量百分含量为65％以上的乙醇，使加入乙醇后的清膏混合物中含醇量达到60％，充分搅拌后静置72小时以上，静置时间优选为72小时，静置后滤过，将所得滤液于95～98℃下减压浓缩至相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；在所述步骤(1)中，将所称取的黄连进行水煎，水煎次数优选为三次以上，较佳地，水煎三 次，其中，第一次水煎2小时；第二次水煎时间优选为1.5～2.5小时，较佳地，第二次水煎1.5小时；第三次水煎时间为1～1.5小时，较佳地，第三次水煎1小时，将三次水煎滤过所得煎液合并，然后，将所得煎液于60～70℃下减压浓缩至相对密度为1.10～1.20g/cm³的清膏，再加入乙醇混合，所用乙醇优选为质量百分含量为65％以上的乙醇，使加入乙醇后的清膏混合物中含醇量达到60％，充分搅拌后静置72小时以上，静置时间优选为72小时，静置后滤过，将所得滤液于95～98℃下减压浓缩至相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏待用；在随后的所述步骤(2)中，将上述所得大黄稠膏及大黄粉末和八味药以及黄连的稠膏混匀，即得治疗肾病的中药组合物，为便于服用，还能够将所得混合物制成颗粒剂、胶囊剂、汤剂、膏剂或者丸剂等药剂；优选地，根据患者患病的程度和实际需要，为便于服用，将步骤(1)所得混合产物中加入填充剂、矫味剂，混匀，制成颗粒剂、胶囊剂等剂型的治疗肾病的中药组合物，其中，所述矫味剂优选为甜菊素，以改善中药较苦的口感，而且甜菊素不参与胰岛素代谢，更有利于人体康复；在本实施例中，将步骤(1)所得大黄稠膏及大黄粉末和八味药以及黄连的稠膏混匀，制得治疗肾病的中药组合物颗粒剂1000g，分别进行袋装或者胶囊装填。
黄连的有效成份为小檗碱等碱性物质，与其它药味同时煎煮易与酸性成份反应成盐，在上述实施例中，黄连的处理方法能够使原料中的有效成分得到更充分的利用，通过常规液相色谱检测，小檗碱的提取率高达70％，而常规方法生产的肾衰宁药物小檗碱的提取率仅为50％，本发明的产品与传统方法生产的肾衰宁药物相比较，服用量减少，效果相同，其生产成本降低10％，按照传统方法生产的肾衰宁颗粒服用剂量是每次的10克，每日3～4次，本发明的产品每次4～6克，每日2～3次，效果相同，并经百余例患者临床验证。
实施例2
按下述配比称取原料(g)：大黄400g、太子参250g、黄连100g、法半夏250g、陈皮100g、茯苓200g、丹参700g、牛膝200g、红花100g、甘草100g；基本制备方法同实施例1，其中，不同的是：在步骤(1)的200g大黄浸渍提取中，采用如下方法：将200g大黄先用质量百分含量为30％～60％的乙醇浸渍，浸渍时间为40小时以上，然后，将浸渍后所得大黄及其浸渍液进行加热回流提取，加热温度为85～95℃，提取时间为1.5～2.5小时，收集所得提取液，将所得提取液于90～95℃下浓缩成相对密度为1.25～1.30g/cm³的稠膏。
在上述实施例中，大黄的处理方法能够使原料中的有效成分更充分地活化，通过常规液相色谱检测，提取率达到27.1％，其中，大黄蒽醌类有效成分的提取率为25.8％，总多糖的提取率达到0.8％，大黄素的提取率达到0.5％，相较于现有技术，有效成分的提取率最高提高达4倍，因此，与应用现有的肾衰宁药物相比，相同效果的药物，生产成本降低至少10％，对于现有药物需每次10克、每日3～4次实现的治疗效果，服用本发明的药物只需每次5克、 每日2次，临床验证120例，显著减少患者的负担，且疗效稳定。
实施例3
按下述配比称取原料(g)：大黄350g、太子参200g、黄连70g、法半夏230g、陈皮90g、茯苓190g、丹参670g、牛膝190g、红花80g、甘草85g；基本制备方法及服用方法同实施例1。
实施例4
按下述配比称取原料(g)：大黄350g、太子参200g、黄连70g、法半夏230g、陈皮90g、茯苓190g、丹参670g、牛膝190g、红花80g、甘草85g；基本制备方法及服用方法同实施例2。
实施例5
按下述配比称取原料(g)：大黄370g、太子参230g、黄连85g、法半夏240g、陈皮95g、茯苓195g、丹参685g、牛膝195g、红花90g、甘草95g；基本制备方法及服用方法同实施例1。
实施例6
按下述配比称取原料(g)：大黄370g、太子参230g、黄连85g、法半夏240g、陈皮95g、茯苓195g、丹参685g、牛膝195g、红花90g、甘草95g；基本制备方法及服用方法同实施例2。
本发明提供的治疗肾病的中药组合物检测方法，结合多年医药检测研究及临床经验设计，其线性关系、精密度、重复性、稳定性、准确度、专属性良好，稳定可靠，能够客观、全面、准确的评价治疗肾病的中药组合物的质量，为控制治疗肾病的中药组合物的质量和保证临床疗效提供了保障。下面通过具体实验分别进行说明。
1、大黄的检测
1.1仪器及试剂：
HP-1260液相色谱仪，依利特ODS－BP色谱柱(4.6×250mm，5μm)，HP-1260系列四元泵，VWD可变波长检测器，自动进样器。紫外光谱测定用HP-1260液相色谱仪。
1.2芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品：
中国药品生物制品检定所提供，编号分别为110795-201007、110757-200206、110796-201118、110756-200110、110758-201013，供含量测定用；所用溶剂均为分析纯，流动相配制用色谱纯溶剂。
1.3色谱条件选择：
HPLC测定大黄游离蒽醌类成分的流动相多为甲醇-缓冲盐溶液和甲醇-磷酸溶液系统，由 于缓冲盐溶液对色谱柱使用效果及寿命影响较大，故选择甲醇－磷酸溶液系统作为流动相。流动相比例随色谱柱品牌和柱长的影响，需作一定调整，多在(75∶25)至(85∶15)范围内，故标准正文中以75∶25列入。
在190-800nm波长下对供试品溶液和对照品溶液中欲测成分进行了全波长扫描，如图1-5所示，结果表明，5个大黄蒽醌类成分在254nm波长附近有明显吸收峰，此波长条件下，各待测成分色谱峰分离度良好，因此，选择254nm作为检测波长。
在上述条件下，对大黄蒽醌类对照品溶液、供试品溶液进行测定，如图6-8所示，结果表明，按同法制备的空白溶液测定结果为阴性，且对样品测定无干扰。因此，本发明提供的色谱条件能够用于同时检测治疗肾病的中药组合物中有效成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚。
1.4测定方法：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。
1.4.1色谱条件与系统适用性试验：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液(75∶25)为流动相；检测波长为254nm；柱温为30℃。理论板数按大黄素峰计算应不低于4000。
1.4.2对照品溶液的制备：
取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各20μg和大黄素甲醚10μg的溶液，即得对照品溶液。
1.4.3供试品溶液制备：
取本发明实施例2所制备的治疗肾病的中药组合物样品4份，每份0.2g，精密称定，精密加入甲醇25ml或50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)提取不同的时间，分别为10分钟、20分钟、30分钟、40分钟，放冷，用甲醇补足损失的重量，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按上述液相色谱条件测定，结果见下表1。
表1提取条件选择结果


由上表可见，样品超声处理(功率250W，频率50kHz)提取30分钟，已经提取完全，最终确定供试品溶液的制备方法为：精密称取样品约0.2g，置于锥型瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，放冷，用甲醇补足损失的重量，滤过，取续滤液，即得。
1.4.4测定方法：
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定供试品溶液与对照品溶液色谱保留时间相同的色谱峰。
1.5方法学验证
1.5.1线性分析：
分别精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品(中国药品生物制品检定所提供，编号分别为110795-201007、110757-200206、110756-200110、110796-201118、110758-201013，供含量测定用，纯度分别为：98.0％，100.0％，100.0％，99.5％，99.8％)，芦荟大黄素9.99mg，大黄酸10.32mg，大黄素9.61mg，大黄酚10.03mg，大黄素甲醚9.33mg，分别置于100ml、100ml、100ml、100ml、250ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，配成质量浓度分别为0.09790mg/ml、0.1032mg/ml、0.1003mg/ml、0.09562mg/ml、0.03725mg/ml的对照品溶液；精密量取上述对照品溶液各2ml置量瓶中，摇匀，配成质量浓度分别为0.01958mg/ml、0.02064mg/ml、0.02006mg、0.01912mg/ml、0.007449mg/ml的混合对照品溶液；
分别精密吸取混合对照品溶液1μl、2μl、3μl、5μl、7μl、10μl、15μl、20μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以测得峰面积积分值对被测物的进样量，用最小二乘法进行线性回归，得各成分的回归方程及线性范围，结果见表3及图9-13。
表3大黄蒽醌类成分线性关系测定