新的取代咪唑化合物 本发明涉及一类新的咪唑化合物、其制备流程、治疗细胞活素介导的疾病的应用和用于该治疗的药学组合物。
本发明的背景
白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF)是由各种细胞如单核细胞或巨噬细胞所产生的生物物质。已经证明IL-1参与了各种生物学活动，这些活动在免疫调节和其它生理状态如炎症中被认为是非常重要的[见：如Dinarello等，Rev.Infect.Disease,6,51(1984)]。IL-1的大量已知生物活性包括T辅助细胞的激活、发热的诱导、前列腺素或胶原酶产生的刺激、嗜中性粒细胞趋化性、蛋白急性期的诱导和血浆中铁水平的抑制。
在许多疾病状态中，过量或未调节的IL-1的产生与加重和/或导致疾病有关。这些疾病包括类风湿性关节炎、骨关节炎、内毒素血症和/或中毒性休克综合征，其它急性或慢性炎症疾病状态如由内毒素或炎症性肠道疾病引起的炎症反应；结核、动脉粥样硬化、肌肉萎缩、恶病质、牛皮癣性关节炎、Reiter氏综合征、类风湿性关节炎、痛风、创伤性关节炎、风疹关节炎以及急性滑膜炎。最近的证据也表明IL-1活性与糖尿病及胰腺的β细胞有关。
Dinarello在J.Clinical Immunology,5(5),287-297(1985)中，对与IL-1有关的生物学活性作了综述。应该注意到其他人将某些这类作用描述为IL-1的间接作用。
过量或未调节的TNF的产生与诱导或加重一些疾病有关，包括类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎和其它关节炎症状；脓毒症、脓毒性休克、内毒素性休克、革兰氏阴性脓毒症、中毒性休克综合征、成人呼吸窘迫综合征、脑性疟疾、慢性肺炎性疾病、矽肺、肺肉瘤病、骨再吸收疾病、再灌注损伤、移植对宿主的排斥反应、自身移植排斥反应、由感染如流感引起的发烧及肌痛，感染或恶性肿瘤继发地恶病质、获得性免疫缺乏症(AIDS)继发的恶病质、AIDS,ARC(AIDS相关综合征)、瘢痕瘤形成、瘢痕组织的形成、Crohn氏病、溃汤性结肠炎或热病(pyresis)。
AIDS是由于人体免疫缺陷病毒(HIV)感染T淋巴细胞而引起的。至少已鉴定了三种类型或株的HIV，即HIV-1、HIV-2和HIV-3。作为HIV感染的后果，损害了T细胞介导的免疫力且感染的个体显示严重的机会性感染和/或异常肿瘤。HIV进入T淋巴细胞需要T淋巴细胞的激活。T细胞激活后其它病毒如HIV-1、HIV-2感染T淋巴细胞，该T细胞的激活介导和/或支持了上述病毒蛋白的表达和/或复制。一旦HIV感染了一种活化的T淋巴细胞，该T淋巴细胞必定以活化状态继续支持HIV基因表达和/或HIV复制。单核因子，特别是TNF，通过在维持T淋巴细胞活化中所起的重要作用影响着活化T细胞介导的HIV蛋白表达和/或病毒复制。所以，如通过抑制HIV感染个体中的单核因子(特别是TNF)的产生以干扰单核因子的活性有助于限制T细胞活化的维持，可以减缓HIV对先前未感染细胞的感染进程，从而使HIV感染所导致的免疫机能障碍的进程减慢或消除。单核细胞、巨噬细胞和相关的细胞如枯否氏和神经胶质细胞也都与HIV感染的维持有关。这些细胞如T细胞是病毒复制的靶细胞并且病毒复制的水平取决于这些细胞的活化状态。已表明单核因子(如TNF)可以激活单核细胞和/或巨噬细胞中HIV的复制[见Poli等，Proc.Natl.Acad.Sci 87:782-784(1990)]，所以，如上面对T细胞所述，抑制单核因子的产生或活化有助于限制HIV进程。
如前所述相同的原因，TNF也与其它病毒如巨细胞病毒(CMV)、流感病毒和疱疹病毒感染的各种作用有关。
白细胞介素-8(IL-8)是在1987年首次鉴定和定性的趋化性因子。IL-8是由各种类型细胞产生的，如单核细胞、成纤维细胞、内皮细胞以及角质细胞(Keratinocytes)。内皮细胞产生的IL-8是由IL-1、TNF、或脂多糖(LPS)诱导的。已经证明人IL-8可作用于小鼠、豚鼠、大鼠和兔的中性白细胞。IL-8具有许多不同的名称，如中性白细胞诱引剂/活化蛋白质-1(NAP-1)、单细细胞诱导的中性白细胞趋化因子(MDNCF)、中性白细胞活化因子(NAF)和T细胞淋巴细胞趋化因子。
IL-8刺激体内多种功能。已经证明它对中性白细胞、T淋巴细胞以及嗜碱性细胞具有化学诱引性。另外它诱导组胺自正常和异常个体的嗜碱细胞中释放，同样也诱导溶菌酶自中性白细胞中释放及呼吸加剧。也已证明IL-8能够增加Mac-1(CD11b/CD 18)在中性白细胞上的表面表达而没有上述蛋白质的合成，这可以有助于提高中性白细胞对血管内皮细胞的粘附。许多疾病的特征是大量的中性白细胞的浸润。抑制IL-8产生的化合物有益于与IL-8产生增加相关的病症正是由于上述IL-8产生增加导致了中性白细胞进入炎症部位的趋化性。
IL-1和TNF影响了大量细胞及组织，这些细胞活素和其它白细胞所诱导的细胞活素是大多数疾病状态重要的和关键的炎症介质。这些细胞活素的抑制有益于控制、减轻和缓解许多这类疾病的状态。
在本领域中仍然有对此种治疗方法的需求，即对细胞活素抑制的抗炎药物的化合物，例如能够抑制细胞活素的化合物如IL-1、IL-6、IL-8和TNF的需求。
本发明概述
本发明涉及新的式(Ⅰ)化合物及含有式(Ⅰ)化合物和药学上可接受的稀释剂或载体的药用组合物。
本发明涉及哺乳动物所需要的CSBP/RK/p38激酶所介导的疾病的治疗方法，它包括对所述哺乳动物给予有效剂量的式(Ⅰ)化合物。
本发明也涉及哺乳动物所需要的抑制细胞活素及治疗细胞活素介导的疾病的治疗方法，它包括给予所述哺乳动物有效剂量的式(Ⅰ)化合物。
本发明特别涉及哺乳动物所需要的抑制IL-1产生的方法，它包括给予所述哺乳动物有效剂量的式(Ⅰ)化合物。
本发明更具体地涉及哺乳动物所需要的抑制IL-8产生的方法，它包括对所述哺乳动物给予有效剂量的式(Ⅰ)化合物。
本发明更特别地涉及哺乳动物所需要的抑制TNF产生的方法，它包括所述哺乳动物给予有效剂量的式(Ⅰ)化合物。
因此，本发明提供式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的盐：其中R1为4-吡啶基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉-4-基、1-咪唑基或1-苯并咪唑基环，该环被-Y-Ra取代并任选被另外的选自下列基团的取代基取代：C1-4烷基、卤素、羟基、C1-4烷氧基、C1-4烷基硫基、C1-4烷基亚磺酰基、CH2OR12、氨基、一或二C1-4烷基取代的氨基、N(R10)C(O)Rb或者NHRa；Y为氧或硫；R4为苯基、萘-1-基或萘-2-基，或杂芳环，任选被一或两个取代基取代，其中每一个是独立选择的，对于4-苯基、4-萘-1-基、5-萘-2-基或6-萘-2-基取代基而言，所述取代基为卤素、氰基、硝基、-C(Z)NR7R17、-C(Z)OR16、-(CR10R20)vCOR12、-SR5、-SOR5、-OR12、卤素取代的C1-4烷基、C1-4烷基、-ZC(Z)R12、-NR10C(Z)R16或(CR10R20)vNR10R20，对于其它取代位置而言，所述取代基为卤素、氰基、-C(Z)NR13R14、-C(Z)OR3、-(CR10R20)m”COR3、-S(O)mR3、-OR3、卤素取代的C1-4烷基、-C1-4烷基、-(CR10R20)m”NR10C(Z)R3、-NR10S(O)m’R8、-NR10S(O)m’NR7R17、-ZC(Z)R3或-(CR10R20)m”NR13R14；v为0，或1或2；m为0，或1或2；m’为1或2；m”为0或1-5的整数；R2为-(CR10R20)n’OR9、杂环基、杂环基C1-10烷基、C1-10烷基、卤素取代的C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10炔基、C3-7环烷基、C3-7环烷基C1-10烷基、C5-7环烯基、C5-7环烯基C1-10烷基、芳基、芳基C1-10烷基、杂芳基、杂芳基C1-10烷基、(CR10R20)nOR11,(CR10R20)nS(O)mR18, (CR10R20)nNHS(O)2R18,(CR10R20)nNR13R14,(CR10R20)nNO2,(CR10R20)nCN,(CR10R20)n’SO2R18,(CR10R20)nS(O)m’NR13R14,(CR10R20)nC(Z)R11,(CR10R20)nOC(Z)R11,(CR10R20)nC(Z)OR11,(CR10R20)nC(Z)NR13R14,(CR10R20)nC(Z)NR11OR9,(CR10R20)nNR10C(Z)R11,(CR10R20)nNR10C(Z)NR13R14,(CR10R20)nN(OR6)C(Z)NR13R14,(CR10R20)nN(OR6)C(Z)R11,(CR10R20)nC(=NOR6)R11,(CR10R20)nNR10C(=NR19)NR13R14,(CR10R20)nOC(Z)NR13R14,(CR10R20)nNR10C(Z)NR13R14,(CR10R20)nNR10C(Z)OR10,5-(R18)-1,2,4-噁二唑-3-基或4-(R12)-5-(R18R19)-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基；其中芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基和杂环基烷基基团可选择地被取代；n为1-10的整数；n’为0或1-10的整数；Z为氧或硫；Ra为芳基、芳基C1-6烷基、杂环基、杂环基C1-6烷基、杂芳基、杂芳基C1-6烷基，其中这些基团分别可任选被取代；Rb为氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环基或杂环基C1-4烷基；R3为杂环基、杂环基C1-10烷基或R8；R5为氢、C1-4烷基、C2-4链烯基、C2-4炔基或NR7R17，排除-SR5为-SNR7R17和-SOR5为-SOH；R6为氢或药学上可接受的阳离子、C1-10烷基、C3-7环烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环基、芳酰基或C1-10链烷酰基；R7和R17独立选自氢或C1-4烷基或R7和R17与它们所连接的氮原子一起形成5至7元杂环，所述环任选含有选自氧、硫或NR15的杂原子；R8为C1-10烷基、卤素取代的C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10炔基、C3-7环烷基、C5-7环烯基、芳基、芳基C1-10烷基、杂芳基、杂芳基C1-10烷基、(CR10R20)nOR11、(CR10R20)nS(O)mR18、(CR10R20)nNHS(O)2R18、(CR10R20)nNR13R14；其中芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基可任选被取代；R9为氢、-C(Z)R11或任选取代的C1-10烷基、S(O)2R18、任选取代的芳基或任选取代的芳基C1-4烷基；R10和R20独立选自氢或C1-4烷基；R11为氢、C1-10烷基、C3-7环烷基、杂环基、杂环基C1-10烷基、芳基、芳基C1-10烷基、杂芳基或杂芳基C1-10烷基；R12为氢或R16；R13和R14独立选自氢或任选取代的C1-4烷基、任选取代的芳基或任选取代的芳基-C1-4烷基或与它们所连接的氮原子一起形成5或7元杂环，所述环任选含有选自氧、硫或NR9的杂原子；R15为R10或C(Z)-C1-4烷基；R16为C1-4烷基、卤代C1-4烷基或C3-7环烷基；R18为C1-10烷基、C3-7环烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环基C1-10烷基、杂芳基或杂芳基1-10烷基；R19为氢、氰基、C1-4烷基、C3-7环烷基或芳基。本发明详述
在式(Ⅰ)中，合适的R1部分包括4-吡啶基、4-嘧啶基、4-喹啉基、6-异喹啉基、4-喹唑啉基、1-咪唑基或1-苯并咪唑基环，其中优选4-吡啶基、4-嘧啶基和4-喹啉基环。更优选4-嘧啶基和4-吡啶基部分，最优选4-嘧啶基环。
R1部分用-Y-Ra取代，其中Y为氧或硫，Ra为芳基、芳基C1-6烷基、杂环基、杂环基C1-6烷基、杂芳基或杂芳基C1-6烷基；其中Ra部分可任选的每一种取代详述如下：
当Ra为芳基时，优选苯基或萘基。当Ra为芳基烷基，优选苄基或萘甲基。当Ra为杂环基或杂环基烷基部分时，杂环基部分优选吡咯烷基、哌啶、吗啉代、四氢吡喃、四氢硫代吡喃基、四氢硫代吡喃亚硫酰基、四氢硫代呋喃磺酰基、吡咯烷基、吲哚、或胡椒基环。需强调的是这里的杂环可以含有不饱和现象，如在色胺环中。
当Ra为下述的杂芳基时，优选吡啶或四唑环。
Ra芳基。杂环和杂芳基环可任选用下列基团独立地取代一到多次，优选一到三次，如卤素；C1-4烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基或叔丁基；卤素取代的烷基，如CF3；羟基；羟基取代的C1-4烷基；C1-4烷氧基，如甲氧基或乙氧基；S(O)m烷基和S(O)m芳基(其中m为0、1或2)；C(O)OR11，如C(O)C1-4烷基或C(O)OH部分；C(O)R11；-CO(O)RC；-O-(CH2)s-O-，如酮缩醇或二氧亚烷基桥；氨基；单-或双-C1-6烷基取代氨基；-N(R10)C(O)Rb；-C(O)NR10R20；氰基，硝基或一种N-杂环，该环为5到7元环，可任选含有选自氧、硫或NR15的另外的杂原子；芳基，如苯基；可任选取代的芳基烷基，如苄基或苯乙基；芳基氧基，如苯氧基；或芳基烷氧基，如苄基氧基。
Rb为适当的氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环基、或杂环基C1-4烷基部分，所有上述基团可如下述任选被取代。
RC为适当的C1-6烷基、C3-7环烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环基、或杂环基C1-4烷基部分，所有上述基团可如下述任选被取代。
适当的Ra基团包括但不限于苄基、卤素取代的苄基、萘甲基、苯基、卤素取代的苯基、氨基羰基苯基、烷基苯基、氰基苯基、烷基硫代苯基、羟基苯基、烷氧基苯基、苯氧基苯基、苄氧基苯基、苯基苯基、亚甲基二氧基苯基、三氟甲基苯基、甲基磺酰基苯基、四唑、甲基四唑基、吗啉代丙基、胡椒基、哌啶-4-基、烷基取代哌啶，如1-甲基哌啶、或2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基。
已知R1基团可另外用下列基团独立地取代一到多次，如C1-4烷基、卤素、OH、C1-4烷氧基、C1-4烷基硫代、C1-4烷基亚磺酰基、CH2OR12、氨基、单-或双-C1-6烷基取代氨基、N(R10)C(O)Rb、NHRa或N-杂环，该环为5到7元环并可选择性地含有选自氧、硫或NR15的另外的杂原子。
当另外的R1可任选的取代基为N(R10)C(O)Rb时，Rb优选C1-6烷基；优选R10为氢。已确证Rb部分特别是C1-6烷基可任选用优选的卤素如三氟甲基或三氟乙基中的氟取代，优选一到三次。
YRa取代的R1上的优选的环取代，在4-吡啶基衍生物为2-位，4-咪啶基环上的优选的环取代也在2-位。
适当的，R4为苯基、萘-1-基或萘-2-基、或杂芳基、并可任选被一或二个取代基取代。更优选R4为苯基或萘基环。当R4为4-苯基、4-萘-1-基、5-萘-2-基或6-萘-2-基部分时，其适当的取代为一或二个取代基，其中每一个均可独立地选自卤素、-SR5、-SOR5、-OR12、CF3、或-(CR10R20)vNR10R20，对于这些环上其它位置的取代基，优选取代基为卤素、S(O)mR3、-OR3、CF3、-(CR10R20)mNR13R14、-NR10C(Z)R3和-NR10S(O)m’R8。对于苯基和萘-1-基的4-位和萘-2-基的5-位，优选取代基包括卤素(特别是氟和氯)和-SR5和-SOR5(其中R5优选C1-2烷基，更优选甲基)；其中更优选氟和氯，更特别优选氟。对于苯基和萘-1-基环的3-位，优选取代基包括：卤素，特别为氟和氯；-OR3，特别为C1-4烷氧基；CF3,NR10R20，如氨基；NR10C(Z)R3，特别为-NHCO(C1-10烷基)；-NR10S(O)m’R8，特别为NHSO2(C1-10烷基)和-SR3和-SOR3，其中R3优选为C1-2烷基，更优选甲基。当苯环为双取代时，优选为二个独立的卤素部分，如氟和氯，优选双-氯并更优选在3,4-位。对于-OR3和-ZC(Z)R3部分的3-位也优选，R3也可包括氢。
优选R4部分为未取代或取代的苯基部分。更优选R4为苯基或4-位氟取代的苯基和/或3-位用氟、氯、C1-4烷氧基、甲烷-亚磺酰氨基或乙酰氨基取代的苯基，或者R4为在3,4-位独立地用氟或氯(更优选氯)双取代的苯基。最优选R4为4-氟苯基。
在式(Ⅰ)中，Z为氧或硫，优选氧。
适合的R2为-(CR10R20)n’OR9、杂环基、杂环基C1-10烷基、C1-10烷基、卤取代C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10炔基、C3-7环烷基、C3- 7环烷基C1-10烷基、C5-7环烯基、C5-7环烯基C1-10烷基、芳基、芳基C1-10烷基、杂芳基、杂芳基C1-10烷基、(CR10R20)nOR11、(CR10R20)nS(O)mR18,(CR10R20)nNHS(O)2R18,(CR10R20)nNR13R14,(CR10R20)nNO2,(CR10R20)nCN,(CR10R20)n’SO2R18,(CR10R20)nS(O)m’NR13R14,(CR10R20)nC(Z)R11,(CR10R20)nOC(Z)R11,(CR10R20)nC(Z)OR11,(CR10R20)nC(Z)NR13R14,(CR10R20)nC(Z)NR11OR9,(CR10R20)nNR10C(Z)R11,(CR10R20)nNR10C(Z)NR13R14,(CR10R20)nN(OR6)C(Z)NR13R14,(CR10R20)nN(OR6)C(Z)R11,(CR10R20)nC(=NOR6)R11,(CR10R20)nNR10C(=NR19)NR13R14,(CR10R20)nOC(Z)NR13R14,(CR10R20)nNR10C(Z)NR13R14,(CR10R20)nNR10C(Z)OR10,5-(R18)-1,2,4-噁二唑-3-基或4-(R12)-5-(R18R19)-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基；其中环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基和杂环基烷基部分可任选被取代。
合适的n为1到10的整数，m为0或1或2；n’为0或1到10的整数；m’为1或2。优选n为1到4。
优选R2为可任选取代的杂环，和可任选取代的杂环基C1-10烷基、可任选取代的C1-10烷基、可任选取代的C3-7环烷基、可任选取代的C3-7环烷基C1-10烷基、(CR10R20)nC(Z)OR11基团、(CR10R20)nNR13R14、(CR10R20)nNHS(O)2R18、(CR10R20)nS(O)mR18、可任选取代的芳基；可任选取代的芳基C1-10烷基、(CR10R20)nOR11、(CR10R20)nC(Z)R11或(CR10R20)nC(=NOR6)R11基团。
更优选R2为可任选取代的杂环基环、和任选取代的杂环基C1-10烷基、可任选取代的芳基、可任选取代的C3-7环烷基、可任选取代的C3-7环烷基C1-10烷基、(CR10R20)nNR13R14或(CR10R20)nC(Z)OR11基团。
当R2为可任选取代的杂环基时，该环优选为吗啉代、吡咯烷基或哌啶基团。当该环可任选取代时，取代基可以直接连接在自由氮上(如哌啶基基团或吡咯环)或环本身上。该环优选为哌啶或吡咯，更优选哌啶。该杂环可任选用下列基团取代一到四次：卤素；C1-4烷基；芳基，如苯基；芳基烷基，如苄基-，其中芳基或芳基烷基部分本身可任选被取代(如下面定义部分所述)；C(O)OR11，如C(O)C1-4烷基或C(O)OH部分；C(O)H；C(O)C1-4烷基，羟基取代的C1-10烷基，C1- 10烷氧基，S(O)mC1-4烷基(其中m为0,1或2)，NR10R20(其中R10和R20为独立的氢或C1-4烷基)。
如果该环为哌啶，优选该环在4-位与咪唑相连接，并且取代基直接在可用氮上，例如1-甲酰基-4-哌啶、1-苄基-4-哌啶、1-甲基-4-哌啶、1-乙氧基羰基-4-哌啶。如果该环被烷基基团取代，且该环于4-位连接，优选于2-或6-位或者2,6-位被取代，如2,2,6,6-四甲基-4-哌啶。相同的，如果该环为吡咯，该环于3-位与咪唑相连，且取代基全部直接在可利用的氮上。
当R2为可任选取代的杂环基C1-10烷基基团时，该环优选为吗啉代、吡咯烷基、或哌啶基基团。优选该烷基部分为从1到4，更优选从3到4，最优选为3，如在丙基基团中。优选杂环基烷基基团包括但不限于吗啉代乙基、吗啉代丙基、吡咯烷基丙基和哌啶基丙基部分。这里的杂环也可任选与上述直接连接在杂环上的相同方式取代。
当R2为可任选取代的C3-7环烷基，或为可任选取代的C3-7环烷基C1-10烷基时，环烷基基团可优选为C4或C6环，最优选为C6环，且该环可任选被取代。该环烷基环可任选被下列基团独立地取代-到三次：卤素，如氟、氯、溴或碘；羟基；C1-10烷氧基，如甲氧基或乙氧基；S(O)m烷基，其中m为0、1或2，如甲基硫代、甲基亚磺酰基或甲基磺酰基；S(O)m芳基；氰基，硝基，氨基，单或双-取代氨基，如在NR7R17基团中，其中R7和R17如式(Ⅰ)中所定义，或者R7R17连接于氮并与氮一起环合形成5到7元环，该环可任选包括选自氧、硫或NR15的另外的杂原子(NR15如式(Ⅰ)所定义)；N(R10)C(O)X1(其中R10如式(Ⅰ)所定义，X1为C1-4烷基、芳基或芳基C1-4烷基)；N(R10)C(O)芳基；C1-10烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基或叔丁基；可任选取代的烷基，其中取代基为卤素(如CF3)、羟基、硝基、氰基、氨基、单或双-取代氨基(如NR7R17基团中)，S(O)m烷基和S(O)m芳基，其中m为0、1或2；可任选取代的亚烷基，如乙烯或丙烯；可任选取代的炔基，如乙炔；C(O)OR11(其中R11如式(Ⅰ)所定义)，如游离酸或甲酯衍生物；基团Re；-C(O)H；=O；=N-OR11；-N(H)-OH(或其在氮或肟部分上的取代的烷基或芳基衍生物)；-N(ORd)-C(O)-Rf；可任选取代的芳基，如苯基；可任选取代的芳基C1-4烷基，如苄基或苯乙基；可任选取代的杂环或杂环基C1-4烷基，并且进一步讲，这些芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基部分可任选被下列基团取代一到二次：卤素、羟基、C1-10烷氧基、S(O)m烷基、氰基、硝基、氨基、单或双-取代氨基(如NR7R17基团中)、烷基、卤素取代烷基。
合适的Rd为氢、药学上可接受的阳离子、芳酰基或C1-10链烷酰基。
合适的Re为式-O-(CH2)s-O-的1,3-二氧亚烷基基团，其中s为1到3，优选s为2得到一个1,3-二氧乙烯部分，或醇缩酮官能团。
合适的Rf为NR21R22；烷基1-6；卤取代烷基1-6；羟基取代烷基1-6；链烯基2-6；可任选被卤素、烷基1-6、卤取代烷基1-6、羟基或烷氧基1-6取代的芳基或杂芳基。
合适的R21为氧或烷基1-6。
合适的R22为氢、烷基1-6、芳基、苄基、杂芳基、被卤素或羟基取代的烷基或被选自含有卤代、氰基、烷基1-12、烷氧基1-6、卤取代烷基1-6、烷基硫代、烷基磺酰基或烷基亚磺酰基的基团一元取代的苯基；或者R21或R22可连接于氮并与氮一起形成5到7元环，该环可任选被选自氧、硫或氮的杂原子所取代。该环可以是饱和的或者含有一个以上的不饱和键。优选Rf为NR21R22，且更优选R21和R22都为氢。
当R2环烷基部分被NR7R17基团或NR7R17C1-10烷基基团取代，且R7和R17如式(Ⅰ)所定义时，则取代基优选为氨基、氨基烷基或可任选取代的吡咯烷基部分。
环烷基部分上的优选的环取代为4-位，如在C6环中。当环烷基环被双-取代，优选双-取代在4-位，例如：其中R1’和R2’为前面R2中所述的独立的可任选取代基。优选R1’和R2’为氢、羟基、烷基、取代的烷基、可任选取代的炔基、芳基、芳基烷基、NR7R17和N(R10)C(O)R11。适合的，烷基为C1-4烷基，如甲基、乙基或异丙基；NR7R17和NR7R17烷基，如氨基、甲氨基、氨甲基、氨乙基；取代的烷基如氰甲基、氰乙基、硝基乙基、吡咯烷基；芳基如苯基；芳基烷基，如苄基；可任选取代的炔基，如乙炔或丙炔；或R1’和R2’一起为酮基官能团。
当R2为(CR10R20)nNR13R14时，且R13和R14如式(Ⅰ)所定义，R13和R14分别独立地选自氢、可任选取代的C1-4烷基、可任选取代的芳基或可任选取代的C1-4烷基、或者它们连接于氮并与氮一起形成5到7元杂环，该环可任选含有选自氧、硫或NR9的另外的杂原子。已证实在某些情况下，这样可以获得如前所述的杂环基C1-10烷基部分的相同部分，它也是适当的R2可变物。优选R13和R14独立地为氢、C1-4烷基(优选甲基)或苄基。n值优选为1到4，更优选3或4，最优选3，如丙基基团。优选基团包括(但不限于)氮基丙基、(N-甲基-N-苄基)氨基丙基、(N-苯基甲基)氨基-1-丙基或二乙基氨基丙基。
当R2为(CR10R20)nC(Z)OR11基团，R11为适合的氢、C1-4烷基(特别是甲基)。n值优选为1到4，更优选2或3，如乙基或丙基基团。优选基团包括(但不限于)羧基甲基-1-丁基、羧基-1-丙基或2-乙酰氧基乙基。
当R2为(CR10R20)nS(O)mR18基团，m为0、1或2，且R18优选为芳基(特别是苯基)或C1-10烷基(特别为甲烷)。n值优选为1到4，更优选2或3，如乙基或丙基基团。
当R2为(CR10R20)nOR11基团，R11为适合的氢、芳基(特别是苯基)或C1-10烷基(特别是甲基或乙基)。n值优选为1到4，更优选2或3，如乙基或丙基基团。
当R2为(CR10R20)nNHS(O)2R18基团，R18为适当的烷基，特别是甲基。n值优选为1到4，更优选2或3，如乙基或丙基基团。
当R2为可任选取代的芳基，芳基优选为苯基。该芳基环可任选被取代一或多次，优选被一或二个取代基取代，上述取代基独立地选自C1-4烷基、卤素(特别是氟或氯)、(CR10R20)tOR11、(CR10R20)tNR10R20(特别是氨基或单-或双-烷基氨基)；(CR10R20)tS(O)mR18，其中m为0、1或2；SH-,(CR10R20)nNR13R14,NR10C(Z)R3(如NHCO(C1-10烷基))；NR10S(O)mR8(如NHSO2(C1-10烷基))；且t为0或1到4的整数。优选苯基在3或4-位被(CR10R20)tS(O)mR18取代，且R18优选为C1-10烷基，特别是甲基。
当R2为可任选取代的杂芳基或杂芳基烷基基团，该环可任选被取代一或多次，优选被一或2个取代基取代，上述取代基独立地选自C1-4烷基、卤素(特别是氟或氯)、(CR10R20)tOR11、(CR10R20)tNR10R20(特别是氨基或单-或双-烷基氨基)；(CR10R20)tS(O)mR18，其中m为0、1或2；SH,(CR10R20)nNR13R14,NR10C(Z)R3(如NHCO(C1-10烷基))；NR10S(O)mR8(如NHSO2(C1-10烷基))；且t为0或1到4的整数。
本领域中熟练技术人员很容易认识到当R2为(CR10R20)nOC(Z)R11或(CR10R20)nOC(Z)NR13R14部分或任何相似的取代基团。且n优选至少为2时，这样可以有利于稳定的化合物的合成。
优选R2为C1-4烷基(有支链或没有支链)，特别是甲基、甲硫基丙基、甲基亚磺酰基丙基、氨基丙基、N-甲基-N-苄基氨基丙基基团、二乙基氨基丙基、环丙基甲基、吗啉基丁基、吗啉基丙基、吗啉基乙基、哌啶或取代哌啶。更优选R2为甲基、异丙基、丁基、叔丁基、正丁基、甲硫基丙基，或甲基亚磺酰基丙基、吗啉代丙基、吗啉基丁基、卤素、硫代烷基或亚磺酰基烷基如甲硫基、甲基亚磺酰基或甲基磺酰基部分取代的苯基；哌啶基、1-甲酰基-4-哌啶、1-苄基-4-哌啶，1-甲基-4-哌啶或1-乙氧基羰基-4-哌啶。
在这里所有的例子中，当有链烯基或炔基部分作为取代基基团时，不饱和键(如亚乙烯基或亚乙酰基键)优选不直接连结于氮、氧或硫部分，例如在OR3中或对于某些R2部分。
这里所用的“可任选取代的”除非特别定义是指下述基团如：卤素，如氟、氯、溴、碘；羟基；羟基取代的C1-10烷基；C1-10烷氧基，如甲氧基或乙氧基；S(O)m烷基，其中m为0、1或2，如甲硫基、甲基亚磺酰基或甲基磺酰基；氨基，单或双-取代氨基，如NR7R17基团；或者R7R17连接于氮上并与氮一起环合形成5到7元环，该环可任选包括选自O/N/S的另外杂原子，C1-10烷基，C3-7环烷基或C3-7环烷基C1-10烷基基团，如甲基、乙基、丙基、异丙基、叔-丁基等或环丙基甲基；卤素取代的C1-10烷基，如CF2CF2H或CF3；可任选取代的芳基(如苯基)，或可任选取代的芳基烷基(如苄基或苯乙基)，其中这些芳基部分也可被卤素、羟基、羟基取代烷基、C1-10烷氧基、S(O)m烷基、氨基、单或双-取代氨基(如NR7R17基团)、烷基或CF3取代一到三次。
适合的药学上可接受的盐对那些本领域中的技术人员来讲是众所周知的，它包括无机或有机酸的碱性盐，如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、乙酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苯甲酸、水杨酸、苯乙酸和杏仁酸。另外，如果取代基基团含有羧基部分，也可以与药学上可接受的阳离子形成式(Ⅰ)化合物药学上可接受的盐。适合的药学上可接受的阳离子在本领域的技术人员中是众所周知的，它包括碱金属、碱土金属、铵和季铵阳离子。
这里所使用的下列述语是指：
●“卤代”或“卤素”，包括卤素：氯、氟、溴和碘。
●“C1-10烷基”或“烷基”-1-10个碳原子的直链和支链基团，除非链的长度有限制，包括(但不限于此)甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基等。
●这里所用的术语“环烷基”是指环基，优选3-8个碳，包括但不限于环丙基、环戊基、环己基等。
●这里所用术语“环烯基”是指环状基团，优选5-8个碳，它具有至少一个键，包括但不限于环戊烯基、环己烯基等。
●这里所用术语“链烯基”在所有的情况下是指含有2-10个碳原子的直或支链基团，除非链长另有限制，它包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。
●“芳基”-指苯基和萘基；
●“杂芳基”(单独使用或在组合中使用，如“杂芳基氧基”或“杂芳基烷基”)-5-10元的芳环体系，其中一个或多个环含有选自由N、O或S组成的基团的一或多个杂原子，例如，但不限于吡咯、吡唑、呋喃、噻吩、喹啉、异喹啉、喹唑啉基、吡啶、嘧啶、噁唑、噻唑、噻二唑、四唑、三唑、咪唑或苯并咪唑。
●“杂环基”(单独使用或在组合中使用，如“杂环基烷基”)-饱和或部分不饱和的4-10元环体系，其中一或多个环含有选自由N、O或S的一或多个杂原子；例如，但不限于吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、四氢吡喃或咪唑烷。
●在此所用术语“芳烷基”或“杂芳基烷基”或“杂环烷基”是指如上述定义的连接于芳基、杂芳基或杂环部分的C1-4烷基。
●“亚磺酰基”-相应硫化物的氧化物S(O)，术语“硫代”是指硫化物，术语“磺酰基”指完全氧化的S(O)2部分。
●“芳酰基”-C(O)Ar，其中Ar为如上定义的苯基、萘基或芳基烷基衍生物，这些基团包括，但不限于苄基及苯乙基。
●“链烷酰基”-C(O)C1-10烷基，其中烷基如上定义。
为此，R1和R2的“母核”4-嘧啶基部分是指下式：
本发明的化合物可能含有一个或多个不对称碳原子，且以外消旋和光学活性形式存在。所有这些化合物者包括在本发明的范围内。
式(Ⅰ)的代表性化合物包括：
1-(4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-(2-苯氧基嘧啶-4-基)咪唑
1-(4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-(2-苯氧基-4-吡啶基)咪唑
1-(4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-甲氧基苯氧基)-4-吡啶基)咪唑
1-(4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-氟代苯氧基)-4-吡啶基)咪唑
1-(哌啶基-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-甲氧基苯氧基)嘧啶-4-基)咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-氟代苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-氨基羰基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-乙基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-苄氧基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-氰基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-羟基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(4-羟基环己基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(2,6-二甲基苯氧基)吡啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-甲基苯氧基)吡啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-氯代苯氧基)吡啶-4-基]咪唑
1-[3-(N-吗啉代)丙基]-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(3-甲氧基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-苯基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-苯氧基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(3-羟基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(3-(N-吗啉代)丙基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-氟代苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(2-羟基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(3,4-亚甲二氧基)苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(3-氟代苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(2-氟代苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(2-甲氧基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(3-三氟甲基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(3,4-二氟代苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-甲磺酰基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
1-(4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-(2-硫代苯氧基嘧啶-4-基]咪唑
1-(4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(1-甲基四唑-5-基硫代)吡啶-4-基]咪唑。
通过应用合成流程可以获得式(Ⅰ)化合物，某些合成流程在这里的图式Ⅰ到Ⅺ已阐明。这些图式所提供的合成方法可用于生产具有一系列不同R1、R2和R4基团的式(Ⅰ)化合物，通过应用适当保护的可选择的取代基，使上述基团反应以能够与这里所列出的反应相容。在那些情况下，随后的去保护可提供通常公开的该性质的化合物。当图式公开了具有Y为氧的式(Ⅰ)化合物，本领域中的技术人员使用在此作例证的反应过程，可以很容易地制备其中Y为硫的式(Ⅰ)化合物。
一旦咪唑核被确立，通过应用本领域中熟知的官能团内部转换的标准工艺可制备其它的式(Ⅰ)化合物。例如：在有或无催化性的金属氰化物如NaCN时，通过将在CH3OH中的HNR13R14与-CO2CH3共热。可得到-C(O)NR13R14；自-OH和如ClC(O)R3在吡啶中得到-OC(O)R3；自-NHR10和烷基异硫代氰化物或硫代氰酸得到-NR10-C(S)NR13R14；自-NHR6和氯代甲酸烷基酯得到NR6C(O)OR6；通过用异氰酸盐如NH=C=O或R10N=C=O处理-NHR10得到-NR10C(O)NR13R14；通过在吡啶中用Cl-C(O)R3处理-NHR10得到-NR10-C(O)R8；将-C(NR13R14)SR3和H3NR3+OAC-在乙醇中加热得到-C(=NR10)NR13R14；自-C(S)NR13R14和R6-Ⅰ在惰性溶剂如丙酮中得到-C(NR13R14)SR3；由-C(S)NH2和HNR13R14得到-C(S)NR13R14(其中R13和R14不是氢)；通过将-C(=NR13R14)-SR3和NH2CN在无水乙醇中加热，或可选择的，用BrCN和NaOEt在EtOH中处理-C(=NH)-NR13R14得到-C(=NCN)-NR13R14。用(R8S)2C=NCN处理-NHR10得到-NR10-C(=NCN)SR8；通过在吡啶中加热，用ClSO2R3处理-NHR10得到-NR10SO2R3；用Lawesson’s试剂[2,4-二(4-甲氧基苯基)-1,3,2,4-二噻二磷烷(dithiadiphosphetane)-2,4-二硫化物]处理-NR10C(O)R8得到NR10C(S)R3；由-NHR6与三氟甲磺酸酐和碱得到-NR10SO2CF3，其中R3、R6、R10、R13和R14如式(Ⅰ)所定义。
基团R1、R2和R4的前体可以是其它R1、R2和R4基团，通过应用官能团内部转换的标准工艺可将上述基团进行内部转换。例如通过与一种适当的叠氮盐反应，可将其中R2为卤素-取代的C1-10烷基的式(Ⅰ)化合物转化为相应的C1-10烷基N3衍生物，然后，如果需要，可将其还原为相应的C1-10烷基NH2化合物，然后使上述化合物与R18S(O)2X(X为卤素、如氯)反应产生相应的C1-10烷基NHS(O)2R18化合物。
可选择的，其中R2为卤素取代的C1-10烷基的式(Ⅰ)化合物可以与一种胺R13R14NH反应产生相应的C1-10烷基NR13R14化合物，或者可以与R18SH的碱金属盐反应产生相应的C1-10烷基SR18化合物。
参照流程Ⅰ，使式Ⅱ化合物与式Ⅲ化合物反应制备式Ⅰ化合物，在式Ⅲ中，p为0或2,R1、R2、和R3与式Ⅰ所定义的相同或为R1、R2和R4的前体，Ar为任选取代的苯基，因此如果需要可以将R1、R2和R4的前体转化为基团R1、R2和R4。认识到当式(Ⅲ)的R2部分含有活性官能团，例如伯胺或仲胺、醇或硫羟基化合物时，使R2NH2与R1CHO反应形成亚胺时，必须对官能团进行适当的保护。可以在Greene T W(Wiley-Interscience,New York,1981)的Protecting Groupsin Organic Synthesis中发现适当的保护基团，在此引入公开作为参考。例如，当R2为如哌啶环的杂环时，可以用基团如t-Boc、CO2R18或取代的芳烷基部分保护氮原子。
所述反应适于在室温或冷却(例如-50-10℃)或加热下，在惰性有机溶剂例如二氯甲烷、DMF、四氢呋喃、甲苯、乙腈或二甲氧基乙烷中，在适当的碱如碳酸钾、t-buNH2、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)或胍碱例如1,5,7-三氮杂-双环[4.4.0]癸-5-烯(TBD)存在下进行。已经发现式(Ⅱ)的中间体非常稳定，能够长时间存放。优选p为2。PTC在此被定义为相转移催化剂使用。
式(Ⅱ)化合物具有下列结构：其中p为0或2；R4与式(Ⅰ)定义的相同，Ar为任选取代的在此所定义的芳基。Ar适于为任选由C1-4烷基、C1-4烷氧基或卤取代的苯基。优选Ar为苯基或4-甲基苯基，即对甲苯磺酰基衍生物。
在流程Ⅰ中，当p=2时，式(Ⅱ)化合物与式(Ⅲ)反应得到的式(Ⅰ)化合物的产量比p=0时高。此外，当p=2时，式(Ⅱ)化合物的反应更利于环境且具有经济价值。当p=0时，虽优选使用的溶剂为二氯甲烷，它由于大规模处理而不利于环境，优选的碱为TBD也比较贵而且产生部分副产物和杂质，因而比不上上述的经济上较有吸引力的合成(p=2)。
可以注意到，流程Ⅰ使用取代的芳基硫代异氰化物(当p=0时)的阴离子与亚胺的1,3-两极的环加成反应。特别是，该反应需要强碱，例如胺碱进行去质子化步骤。尽管也可以使用叔丁醇、Li+或Na+或K+六甲基二硅叠氮化物，但是优选商业上可得到的TBD。尽管优选二氯甲烷作溶剂，但是也使用其它的卤代溶剂，例如氯仿或四氯化碳；醚，例如THF、DME、DMF、乙醚、叔丁基甲基醚；以及乙腈、甲苯或这些溶剂的混合物也可以使用。所述反应可以在约-20℃至约40℃进行，优选约0℃至约23℃，更优选约0℃至约10℃，最优选约4℃(如果反应涉及到嘧啶的R1基团)。对于其中R1为吡啶的化合物，应该认识到温度和溶剂两个反应条件的变化是必要的，例如将温度降低至约-50℃或将溶剂改变为THF。
在另外的方法中，可以通过使式(Ⅸ)化合物的适当的衍生物，其中T1为氢，T4为T4，或T1为R1，T4为H，其中的R1、R2和R4与上述定义相同；与下列物质偶合：(ⅰ)当T1为氢时，在环偶合的条件下，R1H杂芳环的适当的衍生物在5位上产生R1杂芳环与咪唑核的偶合；(ⅱ)当T4为氢时，在环偶合的条件下，R4H芳环的适当的衍生物在4位上产生R4芳环与咪唑核的偶合。
本领域技术人员熟知此类芳基/杂芳基偶合反应。一般而言，在适当的催化剂存在下，使有机金属合成当量的一种成分的阴离子与第二种成分的活性衍生物偶合。在芳基/杂芳基化合物提供活性衍生物的情况下由式(Ⅸ)的咪唑形成阴离子当量，或者在咪唑提供活性衍生物的情况下由芳基/杂芳基化合物形成阴离子当量。因此，式(Ⅸ)化合物的适当的衍生物或芳基/杂芳基环包括有机金属衍生物，例如有机镁、有机锌、有机锡和硼酸衍生物，适当的活性衍生物包括溴、碘、氟代磺酸酯和三氟甲磺酸酯衍生物。适当的方法在WO 91/19497中描述，在此引入所述公开作参考。
根据Kumada等(Tetrahedron Letters,22,5319(1981))的方法，可以使式(Ⅸ)化合物的适当的有机镁和有机锌衍生物在环偶合催化剂，例如钯(O)或钯(Ⅱ)催化剂的存在下，与杂芳基环或芳环的卤素、氟代磺酸酯或三氟甲磺酸酯衍生物反应。适当的催化剂包括四-(三苯基膦)钯和PdCl2[1,4-双(二苯基磷基)-丁烷]，任选在氯化锂和碱例如三乙胺存在下。此外，根据Pridgen等(J.Org.Chem,1982,47,4319)所述方法也可以使用镍(Ⅱ)催化剂，例如Ni(Ⅱ)Cl2(1,2-联苯基磷基)乙烷进行芳环偶合。适当的反应溶剂包括六甲基磷酰胺。当所述杂芳环为4-吡啶基时，适当的衍生物包括4-溴代和4-碘代-吡啶和4-羟基吡啶的氟代磺酸酯和三氟甲磺酸酯。同样，当芳环为苯基时，适当的衍生物包括溴、氟代磺酸酯、三氟甲磺酸酯，并优选碘代衍生物。同样用烷基锂化合物处理式(Ⅸ)化合物或其溴代衍生物通过分别去质子化或金属转移作用获得适当的有机镁或有机锌衍生物，产生相应的锂试剂。然后可以用过量的卤化镁或卤化锌处理该锂的中间体得到相应的有机金属试剂。
根据Stille(J.Amer.Chem.Soc,1987,109,5478)、US专利4719218和5002942所述方法在适当的偶合催化剂例如钯(O)催化剂，如四(三苯基膦)钯存在下，在惰性溶剂例如四氢呋喃，优选含有10％硫甲基膦酰胺中，或者用钯(Ⅱ)催化剂，在任选含有加入的碱例如三乙胺的氯化锂存在下，在惰性溶剂例如二甲基甲酰胺中，用芳基或杂芳基环化合物的溴化物、氟代磺酸酯、三氟甲磺酸酯或优选的碘代衍生物处理式(Ⅸ)化合物的三烷基锡衍生物。三烷基锡衍生物可以方便地通过在醚制的溶剂，例如四氢呋喃中，用锂化试剂例如仲丁基锂或正丁基锂使式(Ⅸ)的相应的化合物金属化，或者通过用烷基锂处理然后用卤化三烷基锡处理(在两种情况下)获得。或者，可以在催化剂例如用四(三苯基膦)钯存在下，在上述相同的条件下，用适当的杂芳基或芳基三烷基锡化合物处理式(Ⅸ)化合物的溴代衍生物。
硼酸衍生物也是有用的。因此，在钯催化剂，如四(三苯基膦)钯或PdCl2[1,4-双(二苯基磷基)-丁烷]存在下，在碱例如碳酸氢钠存在下，在回流条件下，在溶剂例如二甲氧基乙烷中用杂芳基或芳基硼酸与式(Ⅸ)化合物的适当的衍生物，例如溴代、碘代、三氟甲磺酸酯或氟代磺酸酯衍生物反应(见Fischer和Haviniga,Rec.Trav.Chim.PaysBas,84,439,1965,Snieckus,V.,Tetrahedron Lett.,29,2135,1988和Terashimia,M.,Chem.Pharm.Bull.,11,4755,1985)。也可以使用非水溶液条件，例如在溶剂如DMF中，在温度约为100℃时，在钯(Ⅱ)催化剂存在下(见Thompson W J等，J Org Chem,49,5237,1984)。根据标准的方法，通过用硼酸三烷基酯，例如硼酸三乙酯、三异丙酯或三丁酯处理镁或锂衍生物可以制备适当的硼酸衍生物。
在此偶合反应中，必须考虑式(Ⅸ)化合物中存在的官能团将是容易理解的。因此，一般而言，氨基和硫取代基应该是非氧化的或为保护的。
式(Ⅸ)化合物为咪唑，可以通过在此所述的任何制备式(Ⅰ)化合物的方法获得。特别是，在惰性溶剂例如卤代烃溶剂，例如氯仿中，在适当升高的温度下，如果需要，在适当的缩合试剂例如碱存在下，使α-卤代-酮或其它适当活化的酮R4COCH2卤(在式(Ⅸ)化合物中，T1为氢)或R1COCH2卤(在式(Ⅸ)化合物中，T4为氢)与式R2NH-C=NH(其中R2与式(Ⅰ)所定义的相同)的脒或其盐反应。适当的α-卤代-酮的制备在WO 91/19497中有描述。适当的活化酯包括强的有机酸例如低级烷基磺酸或芳基磺酸，如甲磺酸或对甲苯磺酸的酯。优选脒以盐(适当的盐酸盐)形式使用，通过使用活化酯是在惰性有机溶剂例如氯仿中，盐是在水相的两相系统，在剧烈搅拌下向所述溶液中缓慢加入2摩尔碱的水溶液可以将其当场转化为游离的脒。用标准的方法(见例如GarigipatiR,Tetrahedron Letters,190,31,1989)可以获得适当的脒。
通过这样一个方法也可以制备式(Ⅰ)化合物，该方法包括：根据US专利4803279、US专利4719298和US专利5002942所公开的方法，使其中T1为氢的式(Ⅸ)化合物与N-酰基杂芳基盐反应得到中间体，其中杂芳基环连接于咪唑核上，并以1,4-二氢衍生物存在，然后可以使中间体经历氧化去酰基化反应条件(流程Ⅱ)。杂芳基盐，例如吡啶鎓盐或者可以进行反应，或更优选通过将取代的羰基卤(例如酰卤、芳酰卤、卤代甲酸芳基烷基酯或优选卤代甲酸烷基酯，例如乙酰溴、苯甲酰氯、氯代甲酸苄酯或优选氯代甲酸乙酯)加至式(Ⅸ)化合物的杂芳基化合物R1H中或在已经加入了杂芳基化合物的惰性溶剂例如二氯甲烷中的溶液中来制备。适当的去酰化和氧化条件在US专利Nos.4803279、4719218和5002942中有描述，在此引入作参考。适当的氧化系统包括在惰性溶剂或溶剂混合物中的硫，例如十氢萘、十氢萘和二甘醇二甲醚、对异丙基甲苯、二甲苯或1,3,5-三甲基甲苯中，在回流条件下，或优选含有干燥空气或氧气的叔丁醇钾的叔丁醇中。
流程Ⅱ
在另一个方法中(下面流程Ⅲ中说明)，通过处理热的式(Ⅹ)化合物或在环化剂例如氧氯化磷或五氯化磷帮助下可以制备式(Ⅰ)化合物(见Engel和Steglich,Liebigs Ann Chem,1978和Strazbny等，J OrgChem,1963,28,3381)。例如在标准酰化条件下，通过用活化的甲酸酯的衍生物，例如相应的酸酐酰化相应的a-酮-胺，接着与R2NH2形成亚胺而获得式(Ⅹ)化合物。通过氨羰基化反应和还原反应由母体酮可以衍生氨基酮，可以芳基(杂芳基)乙酸酯与R1COX组分的缩合获得的β-酮的去羧基化制备所需的酮。
流程Ⅲ
下面流程Ⅳ说明用酮(式Ⅺ)制备式(Ⅰ)化合物的两条不同途径。通过将烷基杂环例如4-甲基-喹啉(通过用烷基锂例如正丁基锂处理制备)的阴离子加至N-烷基-O-烷氧基苯甲酰胺、酯或任何其它相同的氧化状态的适当活化的衍生物中制备杂环的酮(Ⅺ)。或者，使所述阴离子与苯甲醛缩合得到醇，然后使其氧化为酮(Ⅺ)。
流程Ⅳ
在另一个流程中，通过将式(Ⅻ)酰胺的阴离子：
R1CH2NR2COH (Ⅻ)其中R1和R2，用：
(a)式(ⅩⅢ)的腈：
R4CN (ⅩⅢ)其中R4与上述定义的相同，或
(b)过量的酰卤，例如式(ⅩⅣ)的酰氯：
R4COHal (ⅩⅣ)其中R4与上述定义的相同，Hal为卤素，或相应的酸酐处理得到双酰化的中间体，然后将其用氨，例如乙酸铵处理可以制备N-取代的式(Ⅰ)化合物。
流程Ⅴ
本方法的改变用上述流程Ⅴ说明。用式R1CH2X的卤代甲基杂环处理伯胺(R2NH2)，然后用标准的技术将其转化为酰胺。或者如流程Ⅴ所示，通过用R1CH2X使甲酰胺烷基化也可以制备酰胺。用强的酰胺碱例如二异丙基氨化锂或双(三甲基甲硅烷基)氨化钠使该酰胺去质子化，接着加入过量的芳酰氯得到双酰化的化合物，然后通过在含有乙酸铵的乙酸中加热使其闭合为式(Ⅰ)咪唑化合物。或者，可以使酰胺的阴离子与取代的芳基腈反应直接产生式(Ⅰ)的咪唑。
下列描述和流程进一步解释流程Ⅰ所述的方法。如在下面的流程Ⅵ中所描述，根据Bredereck等(Chem.Ber.1964,97,3407)(在此引入作参考)方法的改良可以制备各种嘧啶醛衍生物。然后将这些嘧啶醛用作下面合成的中间体。
流程Ⅵ
van Leusen(vaj Leusen等，J.Org.Chem.1977,42,1153)首先报道了亚胺与对甲磺酰基甲基异腈的反应。报道的条件如下：在二甲氧基乙烷(DME)中的叔丁胺(tBuNH2)、在MeOH中的K2CO3和在DME中的NaH。再检查这些条件时发现每一个产率都很低。涉及胺交换产生叔丁胺，然后与异氰化物反应产生1-tBu咪唑的第二条途径也是可行的。这一反应似乎用任何的伯胺作为碱都可以发生。尽管仲胺不是优选的也可以使用，但是它们可以缓慢的分解异腈。反应需要约3当量的胺才能完成，分离产率约50％。尽管位阻的仲胺(二异丙胺)可以使用，但极其缓慢，通常不太有效。在部分试验条件下，使用叔胺和芳香胺(如吡啶和三乙胺)不反应，但是其它碱的类型例如DBU和4-二甲基氨基吡啶(DMAP)尽管缓慢，但的确有一些产量，因此在此可以使用。
如下面流程Ⅶ和Ⅷ所述，可以使流程Ⅵ中的吡啶醛与伯胺缩合产生亚胺，可以适当地将其分离或在各种在此所述的适当的碱和溶剂的存在下使其当场与所需的异腈反应产生5-(4-吡啶基)-取代的咪唑，其中R2和R4与式(Ⅰ)化合物所定义的相同。
制备式(Ⅰ)化合物的优选的方法在下面流程Ⅶ所示。在分离步骤制备和分离的亚胺常常为焦油，它很难处理。其黑色也常常带至终产物中。制备亚胺的产量常常变化，在其制备中常常使用环境不愿意接受的溶剂，例如二氯甲烷。
其中p=2的反应需要适当的碱以使所述反应进行。该反应需要足以强的碱以使异腈去质子化。适当的碱包括胺、碳酸盐、氢化物或烷基或芳基锂试剂；或它们的混合物。碱包括(但不限于)碳酸钾、碳酸钠、伯胺和仲胺，例如叔丁胺、二异丙胺、吗啉、哌啶、吡咯烷和其它非亲核碱例如DBU、DMAP和1,4-二氮杂双环[2.2.2]庚烷(DABCO)。
在此所用的适当的碱包括(但不限于)N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、MeCN、卤化溶剂例如二氯甲烷或氯仿、四氢呋喃(THF)、二甲基亚砜(DMSO)、醇如甲醇或乙醇、苯或甲苯、DME或EtOAc。优选的溶剂为DMF、DME、THF或MeCN，更优选DMF。通过加入水并过滤为纯品的化合物通常可以完成产物的分离。
流程Ⅶ
由于不方便大规模操作，因此向NaH中加入异腈可能需要在低于25℃(在THF中)温度下进行。另外，也报道在-50℃时BuLi是有效的使对甲苯磺酰基苄基异腈去质子的碱(DiSanto等，Synth.Commun.1995,25,795)。
根据优选的碱可以使用各种温度条件。例如，在40℃以上，用tBuNH2/DME、K2CO3/MeOH、在DMF中用K2CO3时，产率可下降至约20％，但在0℃和25℃之间无差异。因此，也认为在0℃以下和80℃以上温度范围包括在本发明范围内。优选，温度范围为约0℃至约25℃。为此，室温通常定为25℃，但认为可以在20℃至30℃之间变化。
如下面流程Ⅷ所述，优选亚胺在溶剂中当场形成。优选的合成方法为在一个罐发生的合成反应过程。适当地，当将伯胺用作盐时，例如在实施例中的二盐酸盐，所述反应进一步包括碱，例如碳酸钾在异腈加入之前。或者，可能需要对哌啶氮进行保护(PG)(如下面所示)，适当的PG为BOC或C(O)2R，其中R优选为本领域技术人员熟知的烷基、芳基、芳烷基部分。反应条件，例如溶剂、碱、温度等与如流程Ⅶ所示的亚胺的分离说明和讨论的相似。本领域技术人员可以容易地认识到在某些情况下，亚胺的当即形成可能需要脱水条件或可能需要酸催化。
流程Ⅷ
流程Ⅸ描述了制备式(Ⅰ)化合物的另外的方法。在这个特殊的例子中，使烷硫基部分氧化为甲基亚磺酰基或磺酰基部分，再使其与适当的YRa部分反应。
流程Ⅸ
本发明的另一个实施方案为使2-硫代甲基嘧啶缩醛水解为2-硫代甲基嘧啶醛，如下面流程Ⅹ所示。用各种反应条件例如甲酸进行缩醛水解为醛不能产生令人满意的产率的醛，获得的产率＜13％。优选的合成方法包括使用AcOH(新鲜的)作为溶剂和浓硫酸并在加热条件下进行，优选存在催化量的硫酸。加热条件包括温度约60℃至约85℃，优选约70℃至约80℃，因为更高的温度下显示反应混合物颜色变深。反应完成后，使所述混合物冷至室温，去除乙酸。该方法的更优选的替换方法包括在3N HCl中，于40℃将缩醛加热18小时，冷却，用乙酸乙酯萃取碳酸氢盐中和的溶液。
流程Ⅹ
用下列3种方法之一可以制备式(Ⅰ)的2-(RaY)嘧啶-4-基化合物以及含有化合物的吡啶：1)使2-(RaY)嘧啶亚胺与异腈直接反应；2)使2-烷基卤代嘧啶衍生物氧化为相应的亚砜，接着在碱性条件下，例如用HYRa的金属盐或在非亲核碱或碱金属碱存在下，用所需HYRa的置换；或3)使2-卤代嘧啶或吡啶亚胺与异腈反应，接着在第二种方法所述的碱性条件下用HYRa置换，亦见Adams等(USSN 08/659,102 1996年6月3日递交)，在此引入其公开作参考。
在此提供这些流程，例如用在R2位上适当取代的哌啶或R4上为4-氟代苯基，以该方式可以加入任何适当的R2和R4部分，只要它们可以用伯胺制备。同样，通过异腈途径可以加入任何适当的R4。
在流程Ⅰ中，可以根据van Leusen等，supra的方法制备式(Ⅱ)化合物。例如，通过使式(Ⅳ)(流程Ⅰ)化合物脱水可以制备式(Ⅱ)化合物，其中Ar、R4和p与在此所定义的相同。
适当的脱水剂包括氧氯化磷、草酰氯、亚硫酰氯、光气或对甲苯磺酰氯，在适当的碱例如三乙胺或二异丙基乙胺或相似的碱例如吡啶存在下。适当的溶剂为二甲氧基醚、四氢呋喃或卤化溶剂，优选THF。当所述反应温度在-10℃至0℃之间时，所述反应最有效。在更低的温度下可能反应不完全，在更高的温度下，所述溶液变深，产物的产率下降。
式(Ⅳ)化合物(流程Ⅰ)可以如下制备：适当地在酸催化剂存在下，在室温或更高的温度，如30℃至150℃，在方便回流下，在脱水条件下，使式(Ⅴ)化合物(流程Ⅰ)，R4CHO(其中R4与在此所定义的相同)与ArS(0)pH和甲酰胺(去水或不去水)反应。或者可以用三甲基甲硅烷基氯代替酸催化剂。酸催化剂的实例包括樟脑-10-磺酸、甲酸、对甲苯磺酸、盐酸或硫酸。
制备式(Ⅱ)异腈的最佳方法在下面的流程Ⅺ中说明。
流程Ⅺ
通过加热醛(1-流程Ⅺ)和酸例如对甲苯磺酸、甲酸或樟脑磺酸；甲酰胺和对甲苯亚磺酸[反应条件：约60℃，约24小时]可以完成取代的醛向甲苯磺酰基苄基甲酰胺的转化。优选不使用溶剂。当使用溶剂例如DMF、DMSO、甲苯、乙腈或过量的甲酰胺时，所述反应产率不佳(＜30％)。温度低于60℃通常不利于产生所需的产物，温度高于60℃可能产生分解的产物或得到苄型双甲酰胺(2-流程Ⅺ)。
本发明的另一个实施方案为甲苯磺酰基苄基甲酰胺化合物的合成，可以通过使双甲酰胺中间体(2-流程Ⅺ)与对甲苯亚磺酸反应获得。在该优选的途径中，在适当的含有酸催化剂的溶剂中通过加热醛和甲酰胺完成由醛到双甲酰胺的制备。适当的溶剂包括甲苯、乙腈、DMF和DMSO或它们的混合物。酸催化剂是本领域熟知的催化剂，包括(但不限于)盐酸、对甲苯磺酸、樟脑磺酸和其它的无水酸。所述反应可以在约25℃至110℃温度范围内进行，优选约50℃，以约4至约5小时为宜，更长的反应时间也是可以接受的。在更高的温度下(＞70℃)和更长的反应时间可以观察到产物的分解和低的产率。产物的完全转化通常需要从所述反应混合物中去除水。
将双甲酰胺衍生物转化为甲苯磺酰基苄基甲酰胺的优选的条件可以通过在含有酸催化剂和对甲苯亚磺酸的适当的溶剂中加热双甲酰胺完成。用于该反应的溶剂包括(但不限于)甲苯和乙腈或它们的混合物。也可以使用这些溶剂与DMF或DMSO的另外的混合物，但可能导致产率降低。温度可以在约30℃至约100℃范围。不优选低于40℃和高于60℃，因为产量和产率降低。优选约40℃至60℃温度范围，更优选约50℃。最佳时间为约4至5小时，尽管可以长一些。优选所用的酸为(但不限于)甲苯磺酸、樟脑磺酸和盐酸以及其它的无水酸。更优选在1∶1的甲苯∶乙腈中，将双甲酰胺与对甲苯用磺酸和盐酸一起加热。
本发明的另一个实施方案为甲苯磺酰基苄基甲酰胺化合物合成的优选的途径，该反应是用一步反应完成的。该过程首先将醛转化为双甲酰胺衍生物，随后使双甲酰胺衍生物与甲苯用磺酸反应。该方法将各种最佳条件结合成单一的，有效的工艺过程。在此方法中，可以获得高产率(＞90％)的芳基苄基甲酰胺。
优选的反应条件为：使用催化剂例如三甲基甲硅烷基氯(TMSCl)，在优选的溶剂甲苯∶乙腈中，优选的比例为1∶1。试剂例如TMSCl为优选的，它可以与产生的水反应并同时产生盐酸催化所述反应。也优选使用盐酸和对甲苯磺酸。因此，使用的3种适当的条件包括1)使用脱水剂例如TMSCl，它也可以提供盐酸；或2)使用适当的脱水剂和适当来源的酸，例如(但不限于)樟脑磺酸、盐酸或甲苯磺酸；和3)替换的脱水条件，例如共沸去除水和使用酸催化剂和对甲苯亚磺酸。
在强碱存在下，使式(Ⅵ)(流程Ⅰ,R4CH2NC)化合物与式(Ⅶ)(流程Ⅰ,ArSO2L1，其中R4和Ar与在此所定义的相同，L1为离去基团如卤素像氟)反应也可以制备式(Ⅱ)化合物，其中p为2。适当的强碱包括(但不限于)烷基锂例如丁基锂或二异丙基氨化锂(Van Leusen等，Tetrahedron Letters,No.23,2367-68(1972))。
使式(Ⅷ)(流程Ⅰ,R4CH2NH2)化合物与甲酸烷基酯(如甲酸乙酯)反应产生中间体酰胺，然后通过在适当的碱例如三乙胺存在下，使其与熟知的脱水剂例如(但不限于)草酰氯、氧氯化磷或甲苯磺酰氯反应转化为所需的异腈来制备式(Ⅵ)(流程Ⅰ)化合物。
或者在二氯甲烷水溶液中，在相转移催化下可以通过与氯仿或氢氧化钠的反应将式(Ⅷ)(流程Ⅰ)化合物转化为式(Ⅵ)(流程Ⅰ)化合物。
使式R1CHO化合物与伯胺R2NH2反应可以制备式(Ⅲ)(流程Ⅰ)化合物。
式(Ⅷ)(流程Ⅰ)的氨基化合物是已知的或可以用标准的官能团的转换由相应的醇、肟或酰胺制备。
用于羟基和咪唑氮的适当的保护基团是本领域熟知的，并在许多参考文献中描述，例如Protecting Groups in Organic Synthesis,Greene TW,Wiley-Interscience,New York,1981。适当的羟基保护基团的实例包括甲硅烷基醚，例如叔丁基二甲基或叔丁基二苯基和烷基醚，例如由变换烷基链连接的甲基，(CR10R20)n。适当的咪唑氮保护基团的实例包括四氢吡喃基。
用已知的方法，例如在适当的溶剂存在下用适当量的酸处理可以获得式(Ⅰ)化合物的药学上可接受的酸加成盐。
治疗方法
式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐可以用于生产预防或治疗人或其它哺乳动物疾病药物，所述疾病可以由哺乳动物细胞过量或失控的细胞活素的产生恶化或引起，例如(但不限于)单核细胞或巨噬细胞。
式(Ⅰ)化合物可以抑制前炎症(proinflammatory)细胞活素，例如IL-1、IL-6、IL-8和TNF并因此可以用于治疗。IL-1、IL-6、IL-8和TNF影响多种细胞和组织，这些细胞活素以及其它的白细胞衍生的细胞活素为多种疾病和紊乱重要的和关键的炎症介导因子。这些前炎症细胞活素的抑制有助于控制、减少和缓解许多此类疾病。
因此，本发明提供治疗细胞活素介导的疾病的方法，所述方法包括给予有效细胞活素干扰量的式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐。
式(Ⅰ)化合物能够抑制诱导的前炎症蛋白，例如COX-2，也指许多其它的名称，例如前列腺素内过氧化合成酶-2(PGHS-2)，并因此用于治疗。这些环氧化酶(CO)通道的前炎症脂质的介导剂是由诱导的COX-2酶产生的。因此对COX-2(负责由影响多种细胞和组织的花生四烯酸例如前列腺素衍生的产物)的调节，为多种疾病和紊乱重要的和关键的炎症介导因子。COX-1的表达不受式(Ⅰ)化合物的影响。这种对COX-2的选择性抑制可以缓解或减轻与COX-1抑制有关的产生溃疡的可能性，因此可以抑制细胞保护作用所需的前列腺素。因此这些前炎症介导剂的抑制有助于控制、减少和缓解多种此类疾病。大多数已知的此类炎症介导剂，特别是前列腺素与疼痛，例如疼痛受体的过敏化或水肿有关。因此疼痛的处理包括治疗神经肌肉疼痛、头痛、癌痛和关节痛。式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐通过抑制COX-2酶的合成可以用于人或其它哺乳动物的预防或治疗中。
因此，本发明提供抑制COX-2合成的方法，包括给予有效量的式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐。本发明也提供通过抑制COX-2酶的合成用于人或其它哺乳动物的预防或治疗的方法。
具体地讲，式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐可以用于预防或治疗人或其它哺乳动物疾病，所述疾病可以由哺乳动物细胞过量或失控的产生IL-1、IL-8或TNF恶化或引起，例如(但不限于)单核细胞或巨噬细胞。
因此，本发明的另一方面涉及在需要的哺乳动物抑制IL-1产生的方法，该方法包括给予所述哺乳动物有效量的式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐。
存在许多疾病，其中在这些疾病的恶化和/或引起中涉及到IL-1的产生过量或失控。所述疾病包括类风湿性关节炎、骨关节炎、中风、内毒素性血症和/或中毒性休克综合征、其它的急性或慢性炎症性疾病例如内毒素或炎性肠道疾病引起的炎症反应、肺结核、动脉粥样硬化症、肌肉萎缩、多发性硬化症、恶病质、骨再吸收、牛皮癣性关节炎、Reiter氏综合征、类风湿性关节炎、痛风、创伤性关节炎、风疹性关节炎和急性滑膜炎。最近的证据也表明IL-1活性与糖尿病、胰岛的β细胞和Alzheimer氏综合征。
在另一方面，本发明涉及在需要的哺乳动物抑制TNF产生的方法，该方法包括给予所述哺乳动物有效量的式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐。
TNF过量的或失控的产生与多种疾病的介导和恶化有关，所述疾病包括类风湿性关节炎、类风湿性滑膜炎、骨关节炎、痛风性关节炎和其它的关节炎病症、脓毒症、脓毒性休克、内毒素性休克、革兰氏阴性脓毒症、中毒性休克综合征、成人呼吸窘迫综合征、中风、脑性疟疾、慢性肺炎性疾病、矽肺、肺肉瘤病、骨再吸收性疾病例如骨质疏松、再灌注损伤、移植与宿主排斥反应、自身移植排斥反应，由于感染如流感而引起的发热和肌痛、由于感染或恶性肿瘤引起的恶病质，由于获得性免疫缺陷综合征(AIDS)引起的恶病质、AIDA、ARC(AIDS相关的综合征)、瘢痕瘤形成、疤痕组织形成、Crohn氏疾病、溃疡性结肠炎或热病(pyresis)。
式(Ⅰ)化合物也用于治疗病毒性感染，其中这些病毒对TNF的调节敏感或在体内能够激发TNF的产生。因此对于所述病毒的治疗为那些由于感染产生TNF的，或那些对抑制敏感的，例如通过直接或间接地降低复制，通过给予抑制TNF的式(Ⅰ)化合物。这些病毒包括(但不限于)HIV-1、HIV-2和HIV-3、巨细胞病毒(CMV)、流感病毒、腺病毒和疱疹类病毒例如带状疱疹病毒和单纯疱疹病毒。因此，另一方面本发明涉及治疗人免疫缺陷病毒(HIV)的方法，该方法包括给予此哺乳动物有效抑制TNF量的式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐。
式(Ⅰ)化合物也可以用于与兽医有关的需要抑制TNF产生的哺乳动物(不包括人)的治疗。治疗(治疗或预防)在动物中TNF介导的疾病包括上面所述的疾病，但特别是病毒感染。病毒感染的实例包括(但不限于)慢病毒感染例如马感染缺血病毒、山羊关节炎病毒、visns病毒或梅迪病毒或逆病毒例如(但不限于)猫免疫缺陷病毒(FIV)、小牛免疫缺陷病毒或犬免疫缺陷病毒或其它逆病毒感染。
式(Ⅰ)化合物可以局部使用用于治疗或预防由细胞活素例如分别为IL-1或TNF过量产生介导或恶化的局部疾病，如炎症关节、湿疹、牛皮癣和其它炎症性皮肤疾病如晒伤；炎症性眼疾病包括结膜炎、热病、疼痛和其它与炎症有关的疾病。
显示式(Ⅰ)化合物也可以抑制IL-8(白细胞介素-8,NAP)的产生。因此，另一方面，本发明涉及抑制需要的哺乳动物的IL-8产生的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物有效量的式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐。
存在许多疾病，其中在所述疾病的恶化和/或引起中与IL-8的过量的或失控的产生有关。这些疾病的特征为大量的嗜中性白细胞浸润例如牛皮癣、炎性肠道疾病、哮喘、心和肾再灌注损伤、成人呼吸窘迫综合征、血栓形成和肾小球性肾炎。所有这些疾病均与IL-8产生增高有关，因此导致嗜中性白细胞趋化性进入炎症部位。与其它的炎症性细胞活素(IL-1、TNF和IL-6)比较，IL-8具有独特的促进嗜中性白细胞趋化性和活化的性质。因此，IL-8产生的抑制会导致嗜中性白细胞浸润的直接的减少。
给予足够量的式(Ⅰ)化合物以抑制细胞活素，具体地讲IL-1、IL-6、IL-8或TNF产生以将它们调低至正常水平，或在某些情况下调节至正常水平以下以缓解或预防所述疾病。IL-1、IL-6、IL-8或TNF的水平不正常指如在本发明中，包括：(ⅰ)游离的(非细胞结合的)IL-1、IL-6、IL-8或TNF大于或等于1微微克/毫升；(ⅱ)与IL-1、IL-6、IL-8或TNF相关的任何细胞；或(ⅲ)在产生IL-1、IL-6、IL-8或TNF的细胞或组织中存在基础水平以上的IL-1、IL-6、IL-8或TNFmRNA。
发现式(Ⅰ)化合物为细胞活素，特别是IL-1、IL-6、IL-8或TNF的抑制剂是基于下列所述的体外测定中式(Ⅰ)化合物对IL-1、IL-8或TNF产生的作用。
在此所用术语“抑制IL-1、IL-6、IL-8或TNF的产生”指：
a)通过在体内抑制所有细胞释放细胞活素而在人体内将细胞活素(IL-1、IL-6、IL-8或TNF)过量产生降低至正常或低于正常的水平，所述细胞包括(但不限于)单核细胞或巨噬细胞；
b)在人体内，在基因水平上将人体内过量的细胞活素水平(IL-1、IL-6、IL-8或TNF)向下调节至正常或正常水平以下；
c)通过直接抑制作为转译后事件的细胞活素(IL-1、IL-6、IL-8或TNF)的合成向下调节
d)在转译水平上向下调节人体内过量的细胞活素(IL-1、IL-6、IL-8或TNF)水平至正常或正常水平以下。
此处所用术语“TNF介导的疾病”指任何和所有在其中TNF起作用的疾病，或者是通过TNF本身的产生，或者是通过TNF引起另一种细胞活素的释放，例如(但不限于)IL-1、IL-6或IL-8。因此认为下列疾病是由TNF介导的疾病：其中例如IL-1为主要因素，且其产生或作用因受TNF影响而恶化或分泌。
在此所用术语“细胞活素”指影响细胞功能的任何分泌的多肽并且是免疫、炎症或造血反应中细胞间反应的调节剂。细胞活素包括(但不限于)单核因子和淋巴因子，而无论是由何种细胞产生的。例如，单核因子通常指由单核细胞产生和分泌的，例如巨噬细胞和/或单核细胞。然而，许多细胞也产生单核因子，例如杀伤细胞、成纤维细胞基底细胞、嗜中性白细胞、内皮细胞、脑星形细胞、骨髓基质细胞、内皮角化细胞和B-淋巴细胞。淋巴活素通常认为是由淋巴细胞产生的。细胞活素的实例包括(但不限于)白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)。
在此所用术语“细胞活素干扰”或“细胞活素抑制量”指当给予病人用于预防或治疗由细胞活素产生过量或失控恶化或引起的疾病时，在体内可以使细胞活素水平降低至正常或正常水平以下的有效量的式(Ⅰ)化合物。
在术语“细胞活素的抑制，用于治疗HIV-感染的人”中所用的细胞活素指与下列有关的细胞活素：(a)在T细胞活化和/或活化T细胞介导的HIV基因表达和/或复制的起始和/或维持和/或(b)在与例如恶病质或肌肉退化问题有关的任何细胞活素。
TNF-β(亦称为淋巴毒素)与TNF-α(亦称为恶病质素(cachectin))具有相近的结构同源性，两种可以诱导相似的生物应答并与相同的细胞受体结合，因此TNF-α和TNF-β均可以被本发明的化合物所抑制，因此除特别指明外在此均被称为“THF”。
最近几个实验室独立鉴定了新的MAP激酶家族成员或者称为CSBP、p38或RK。在被广谱的刺激物例如物理化学压力和用脂多糖或前炎症细胞活素如白细胞介素-1和肿瘤坏死因子的刺激过程中，可以在不同的细胞体系观察到这些新的蛋白激酶通过双重的磷酸化的活化。认为本发明式(Ⅰ)、(Ⅱ)和(A)化合物的细胞活素生物合成的抑制剂为CSBP/p38/RK激酶活性的有效的和选择性的抑制剂。这些抑制剂可以帮助测定涉及的炎症反应的信号通路。特别是，确定的信号传导通路首次归于在巨噬细胞中细胞活素产生中的脂多糖的作用。除所述说明的疾病外，也包括中风、神经创伤、心和肾再灌注损伤、血栓形成、肾小球性肾炎、糖尿病和胰岛性β细胞、多发性动脉硬化、肌肉萎缩、湿疹、牛皮癣、晒伤和结膜炎。
下面在多种动物模型中测定了细胞活素抑制剂的抗炎活性。选择对环氧化酶抑制剂相对不敏感的模型体系以揭示细胞活素抑制剂的独特的活性。抑制剂在体内研究中表现出明显的活性。大多数在胶原诱导的关节炎模型中显著有效并抑制内毒素性休克模型中TNF的产生。在后一研究中，血浆中TNF水平的降低与存活有关且对内毒素休克致死的保护有关。在胎鼠长骨器官培养体系中所述化合物可以有效地抑制骨再吸收也是非常重要的(Griswold等，(1988)ArthritisRheum.31:1406-1412；Badger等，(1989)Circ.Shock 27,51-61；Botta等，(1994)in vitro.Bone 15,533-538；Lee等，(1993).B Ann.N.Y.Acad.Sci.696,149-170)。
为在治疗中使用式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐，用标准的制药技术将其制成药用组合物。因此，本发明也涉及含有有效的、非毒性量的式(Ⅰ)化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药用组合物。
可以通过任何传统的给药途径例如口服、局部给药、胃肠道外给药或吸入给药给予式(Ⅰ)化合物、其药学上可接受的盐和合并的药用组合物。可以以根据传统的方法，通过将式(Ⅰ)化合物与标准的药用载体合并制备的传统的剂型的方式给予式(Ⅰ)化合物。也可以将式(Ⅰ)化合物以传统的剂型与已知的第二种治疗活性化合物联合给药。这些方法包括混合、制粒和压片或活性组分溶解为适当的所需的制剂中。应该意识到药学上可接受的载体或稀释剂的形式或性质受其所结合的活性组分的量、给药途径以及其它熟知的可变因素的控制。载体必须是“可接受的”的意义为与制剂的其它组分相容并对受体无害。
使用的药用载体可以是例如固体或液体。固体载体的实例包括乳糖、白陶土、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。液体载体的实例包括糖浆、花生油、橄榄油、水等。同样，载体或稀释剂可以包括本领域熟知的缓释物质，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯单独的或与蜡混合使用。
可以使用多种药用形式。因此，如果使用固体载体，所述制剂可以为片剂、置于硬明胶胶囊中的粉或丸剂或锭剂和糖锭。固体载体的量变化范围很广，但优选为约25mg至约1g。当使用液体载体时，所述制剂可以为糖浆剂、乳剂、软胶囊、无菌注射液体如安瓿或非水液体悬浮剂。
可以局部给予式(Ⅰ)化合物，即通过非系统给药。这包括将式(Ⅰ)化合物外用于皮肤或口腔和将此化合物吸入耳、眼和鼻中，使所述化合物尽量不进入血流。相反，系统性给药指口服、静脉、腹腔内和肌肉内给药。
适于局部给药的制剂包括透过皮肤进入炎症部位的液体或半液体制剂，例如搽剂、洗剂、乳剂、膏剂或糊剂，适于眼、耳和鼻给药的滴剂。局部用药的活性组分含量约为制剂的0.001％-10％(w/w)，例如1％至2％(w/w)。然而，可以含有多达10％(w/w)，但优选低于5％(w/w)，更优选0.1％至1％(w/w)。
根据本发明洗剂包括那些适于皮肤或眼的制剂。眼的洗剂可以含有无菌水溶液，任选含有杀菌剂并可以用与制备滴剂的相似的方法制备。适于皮肤的洗剂或膏剂也可以包括促进干燥和使皮肤冷却的试剂，例如乙醇或丙酮，和/或保湿剂例如甘油或蓖麻油或花生油。
根据本发明乳剂、膏剂或糊剂为外用的活性组分的半固体制剂。可以通过在适当的设备帮助下将精细的或粉状形式的活性组分单独或在溶液中或在水或非水流体的悬浮液中与油性或非油性的基质混合制备。所述基质可以包括烃例如硬、软或液体石蜡、甘油、蜂蜡、金属皂、胶浆；天然油例如杏仁油、玉米油、花生油或橄榄油；羊毛脂或其衍生物或脂肪酸例如硬脂酸(steric)或油酸以及与醇例如丙二醇或大粒凝胶一起。所述制剂可以加入任何适当的表面活性剂例如阴离子、阳离子或非离子表面活性剂，如脱水山梨醇酯或聚氧乙烯衍生物。也可以包括悬浮剂例如天然胶、纤维素衍生物或无机物质如硅胶(silicaceous silicas)和其它的组分如羊毛脂。
根据本发明滴剂可以包括无菌水溶液或油溶液或悬浮液，可以通过将活性组分溶于适当的含有杀菌剂和/或杀真菌剂和/或任何其它的适当的防腐剂的水溶液中，并优选包括表面活性剂。可以将产生的溶液经过滤纯化、转移至适当经密封和高压灭菌的容器中，或在98-100℃维持半小时。或者用无菌技术将所述溶液经过滤除菌，转移至容器中。适合于滴剂使用的杀菌剂和杀真菌剂的实例包括硝酸苯汞或乙酸苯汞(0.002％)、benzalkonium chloride(0.01％)和chlorhexidineacetate(0.01％)。制备油溶液的适当的溶剂包括甘油、稀释的醇和丙二醇。
可以胃肠道外给予式(Ⅰ)化合物，即通过静脉、肌内、皮下、鼻内、直肠内、阴道内或腹膜内给药。通常优选皮下和肌内形式的胃肠道外给药。可以用传统的技术制备适当此类给药的适当的剂型。也可以通过吸入给予式(Ⅰ)化合物，即通过鼻内或经口吸入给药。可以用传统的技术制备适当此给药方法的适当的剂型，如气溶胶剂或定量剂量的吸入剂。
对于式(Ⅰ)化合物的在此公开的所有的给药方法而言，日口服剂量优选为每公斤体重约0.1至约80mg，优选约0.2至30mg/kg，更优选约0.5mg至15mg。日肠道外剂量为每公斤体重约0.1至约80mg，优选约0.2至约30mg/kg，更优选约0.1mg至150mg。日局部用药剂量优选0.1mg至150mg，分一至四次给药，优选每天给药二至三次。日吸入剂量优选约0.01mg/kg至约1mg/kg。本领域的技术人员也可以认识到式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐的最佳的量和单独剂量的间隔将根据治疗的疾病的性质和程度、给药的形式、途径和部位和治疗的特定的病人决定，最佳量可以用传统的技术决定。本领域的技术人员也可以接受本领域的技术人员根据传统的疗程的治疗测定试验可以确定治疗的最佳疗程即在一定数目的天数内每天给予式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐剂量的次数。
新的式(Ⅰ)化合物也可以用于需要抑制细胞活素产生的非人类的哺乳动物有关的兽医治疗中。具体而言，用于在动物中治疗(治疗或预防)细胞活素介导的疾病，包括在治疗方法部分所述的疾病，但特别是病毒感染。此类病毒的实例包括(但不限于)慢病毒感染例如马感染缺血病毒、山羊关节炎病毒、绵羊脱髓鞘性脑白质病毒或maedi病毒或逆病毒例如(但不限于)猫免疫缺陷病毒(FIV)、牛免疫缺陷病毒或犬免疫缺陷病毒或其它逆病毒感染。
参考下列生物实施例对本发明描述，所述实施例为说明性的，而不是用于限制本发明。
生物实施例
用下列体外测定方法评价本发明化合物的细胞活素的抑制作用：
白细胞介素-1(IL-1)
根据Colotta等(J Immunol,132,936(1984))所述的方法，从新鲜的志愿献血者的血液制剂中或者从血库的血沉棕黄层中分离和纯化人外周血单核细胞。将这些单核细胞(1×106)以每孔1-2百万/毫升的浓度铺于24孔培养板上。使所述细胞粘附2小时，然后轻轻洗涤去除未粘附的细胞。然后在加入脂多糖(50ng/ml)前1小时加入受试化合物，于37℃将所述培养物再孵育24小时。孵育结束后，去除上清液并使细胞和所有的碎片澄清。然后根据Simon等(J.Immunol.Methods,84,85,(1985)(基于IL-1刺激白细胞介素2使细胞系(EL-4)产生IL-2的能力，同A23187电离层一致)所述方法或根据Lee等(J.Immuno Therapy,6(1),1-12(1990))(ELISA测定)所述方法立即测定培养物上清液的IL-1生物活性。
肿瘤坏死因子(TNF)：
根据Colotta等(JImmunol,132,936(1984))所述的方法，从血库的血沉棕黄层或血小板去除后的残留物中分离和纯化人外周血单核细胞。将该单核细胞以1×106细胞/毫升培养基/孔的浓度平铺于24孔多培养皿上。使所述细胞粘附1小时，然后吸出上清液，加入含有1％胎牛血清和青霉素以及链霉素(10单位/毫升)的新鲜的培养基(1ml,RPMI-1640,Whitaker Biomedical Products,Whitaker,CA)。在1nM-10mM剂量范围的受试化合物(将化合物溶于二甲基亚砜/乙醇中，培养基中溶剂的最终浓度为0.5％二甲基亚砜/0.5％乙醇)存在或不存在下将上述细胞孵育45分钟。然后加入细菌性脂多糖(E.coli 055:B5[LPS],得自Sigma Chemicals Co.)(100ng/ml，在10ml磷酸盐缓冲液中)，将培养物于37℃在5％二氧化碳孵箱中孵育16-18小时。孵育结束后，从细胞中取出培养上清液，在3000rpm离心去除细胞碎片。然后根据WO 92/10190和Becher等(J Immunol,1991,147,4307)所述方法用放射-免疫或ELISA测定上清液的TNF活性。
IL-1和TNF抑制活性似乎与式(Ⅰ)化合物在介导花生四烯酸代谢抑制中的性质无关。具有有效的环氧化酶和/或脂氧化酶抑制活性的非甾体抗炎药抑制前列腺素和/或白三烯产生的能力不意味着所述化合物在非毒性剂量也抑制TNF或IL-1产生。
体内TNF测定：
上述为体外测定，如下述也在体内系统测定了式(Ⅰ)化合物：
(1)“Differentiation In Vivo of Classical Non-SteroidalAntiinflammatory Drugs from Cytokine Supperssive AntiinflammatoryDrugs and Other Pharmacological Classes Using Mouse Tumour NecrosisFactor Alpha Production” Griswold等, Drugs Under Exp.and ClinicalRes.XIX(6),243-248(1993)；或在
(2)Boehm等，1-取代的4-芳基-5-吡啶基咪唑-一类具有低的5-脂氧化酶和环氧化酶抑制活性的新的细胞活素抑制药物。Joumal OfMedicinal Chemistry 39,3929-3937(1996)，在此引入其公开作参考。
用上述测定方法测定，在该测定中式(Ⅰ)的代表性化合物，实施例1至6、11、12、16、17、20至24、26和31的阳性抑制活性＜50uM。
白细胞介素-8(1L-8)：
将原始人脐带内皮细胞(HUVEC)(细胞系统，Kirland Wa)维持于补充有15％胎牛血清和1％的含有aFGF和肝素的CS-HBGF的培养基中。在铺(250μl)于凝胶包被的96-孔培养板之前，将所述细胞稀释20倍。使用前，用新鲜的培养基(200μl)代替培养物的培养基。然后向每孔中以一式四份加入缓冲液或受试化合物(25μl，浓度为1和10μM之间)，于37℃将培养板在5％二氧化碳的湿化孵箱中孵育6小时。孵育结束后，取出上清液，用由R&D Systems(Minneapolis,MN)获得的IL-8 ELISA试剂盒测定IL-8的浓度。所有的数据根据标准曲线上多个样品的均值(ng/ml)给出。根据非线性回归分析得到适当的IC50’s。
细胞活素特异结合蛋白测定
发展了放射竞争性结合测定以提供测定结构活性研究的高度重现性的初步筛选。该测定方法相对于传统的生物测定方法有许多优点，在传统的测定方法中使用新鲜分离的人单核细胞作为细胞活素的来源并用ELISA测定对其定量。结合测定不仅是一个更容易的测定方法，而且还被证明为与生物测定结果高度相关的测定。用得自THP.1细胞的可溶性胞质液组分和放射标记的化合物发展了特异和重现性的细胞活素抑制剂的结合测定方法。专利申请USSN 08/1231175(Lee等，1993年9月递交，USSN；Lee等，PCT申请94/10529,1994年9月16日递交和Lee等，Nature 300,n(72),739-746(12月，1994))，在此引入所有公开作参考，描述筛选药物以鉴定化合物的方法，所述化合物与细胞活素特异性结合蛋白(在此指CSBP)相互作用并结合。然而，所述结合蛋白可以为在溶液中的分离的形式或固化的形式，或者可以是以噬菌体体系或融合蛋白形式通过基因工程表达于重组宿主细胞的表面。或者在creening中使用含有CSBP的完整的细胞或胞质液组分。无论结合蛋白为何种形式，在充分的条件下，多数的化合物均可以与结合蛋白接触形成化合物/结合蛋白复合物，并且检测到能够形成、促进或干扰所述复合物的化合物。
在该结合测定中式(Ⅰ)的代表性化合物，实施例1至6、11、17、20至31抑制活性均＜50uM。
CSBP激酶测定：
该测定检测CSBP-催化的32P由[a-32P]ATP向具有下列序列表皮生长因子受体(EGFR)-衍生的肽(T669)的苏氨酸残基的转移：KRELVEPLTPSGEAPNQALLR(残基661-681)(见Gallagher等“Regulationof Stress Induced Cytokine Production By Pyridinyl Imidazoles:Inhibition of CSPB Kinase”,BioOrganic & Medicinal Chemistry,to bepublished 1996)。
激酶反应物(总体积30μl)含有：25mM Hepes缓冲液，pH 7.5；10mM MgCl2；170uM ATP(1)；10uM正钒酸钠；0.4mM T669肽；20-80ng酵母表达的纯化的CSBP2(见Lee等，Nature 300,n(72),739-746(Dec.1994))。在开始与32P/MgATP反应前将化合物(由[6X]储备液(2)中取5ul)与所述酶和肽在冰上孵育20分钟。将反应物于30℃孵育10分钟，通过加入10ul 0.3M磷酸中止反应。通过点加30ul反应混合物在磷酸纤维(Wattman,p81)滤器上分离32P标记的肽。将滤器用75mM磷酸洗涤3次，接着用水洗涤2次，计数32P。
(1)在CSBP中ATP的Km为170uM。因此，在ATP的Km值筛选化合物。
(2)通常将化合物溶于DMSO中并在25mM Hepes缓冲液中稀释至DMSO的终浓度0.17％。
在该结合测定中式(Ⅰ)的代表性化合物，实施例1至19、30和31均显示其IC50的阳性抑制活性＜50uM。
前列腺素内过氧化酶-2(PGHS-2)测定：
下列测定描述检测式(Ⅰ)化合物在LPS刺激的人单核细胞中对人PGHS-2蛋白表达的抑制作用的方法。
方法：通过Ficoll和Percoll梯度离心从血沉棕黄层中分离人外周血单核细胞。将细胞以2×106/孔接种于24孔培养板中，并使其在补充1％人AB血清、20ml L-谷氨酸、青霉素-链霉素和10mM HEPES的RPMI中粘附1小时。以各种浓度加入化合物，于37℃孵育10分钟。以50ng/孔加入LPS(诱导酶的表达)并于37℃孵育过夜。去除上清液，用冷PBS将细胞洗涤一次。将细胞溶解在100μl的冷的溶解缓冲液(50mM Tris/HCl pH 7.5,150mM NaCl,1％NP40,0.5％脱氧胆酸钠，0.1％SDS,300ug/ml DNA酶，0.1％TRITON X-100,1mM PMSF,1mM亮肽素，1mM抑肽素)中。将溶解物离心(1000 Xg,10min,4℃)去除碎片，对溶解的组分进行SDS PAGE分析(12％的胶)。通过在60伏电压下电泳2小时将在凝胶上分离的蛋白转移至硝酸纤维素膜上。将所述膜在含有5％脱脂奶粉的PBS/0.1％Tween 20中预处理1小时。在PBS/Tween缓冲液中洗涤3次后，将所述膜在含有1％BSA的PBS/Tween中与1∶2000稀释的单特异性的PGHS-2抗血清或1∶1000稀释的PGHs-1抗血清一起孵育，并不断振摇。将所述膜用PBS/Tween缓冲液中洗涤3次，然后在含有1％BSA的PBS/Tween中与1∶3000稀释的辣根过氧化酶结合的驴抗兔Ig(Amersham)血清一起孵育1小时，并不断振摇。将所述膜用PBS/Tween缓冲液中洗涤3次并用ECL免疫检测系统(Amersham)检测前列腺素内过氧化合成酶-2的表达水平。
结果：测试了下列化合物，发现在该测定中是有活性的(即抑制LPS诱导的PGHS-2蛋白表达，效力顺序与在抑制细胞活素产生的顺序相同)：4-(4-氟代苯基)-2-(4-甲基亚磺酰基苯基)-5-(4-吡啶基)咪唑；6-(4-氟代苯基)-2,3-二氢-5-(4-吡啶基)咪唑[2,1-b]噻唑和地噻米松
测试了数种化合物并发现是无活性的(至10uM):2-(4-甲基亚磺酰基苯基)-3-(4-吡啶基)-6,7-二氢-(5H)-吡咯并[1,2-a]imidazole rolipram；phenidone和NDGA。在相似的试验中这些化合物无一能够抑制PGHS-1或cPLA2蛋白水平。
TNF-α在创伤性脑伤害中的测定
该测定提供在特殊的脑区域检测肿瘤坏死因子mRNA的表达，所述脑区域是在大鼠中进行试验诱导的侧流体-撞击创伤性脑损伤(TBI)。用戊巴比妥钠(60mg/kg,i.p)麻醉成年Sprague-Dawley大鼠(n=42)并经历中等程度的侧流体撞击创伤性脑损伤(2.4atm)，主要集中于左侧颞部顶骨皮层(n=18)或假装处理(麻醉，手术但无损伤，n=18)。在损伤后1、6和24小时，将动物经断头致死，取出大脑，制备左侧(损伤的)顶骨皮层(LC)、对右侧皮层(RC)的相应的区域、损伤顶骨皮层(LA)的相邻的区域、对侧右皮层的相邻的区域(RA)、左海马回(LH)和右海马回(RH)的组织样品。分离总的RNA，进行Norther斑点杂交并相对于TNF-α阳性对照RNA(巨噬细胞=100％)进行定量。损伤后1小时在损伤的半球TNF-αmRNA表达显著增加，LH(104+17％阳性对照，与假装相比p＜0.05)、LC(105±21％,p＜0.05)、LA(69±8％,p＜0.01)。在6小时后，TNF-αmRNA表达也增加，LH(46±8％,p＜0.05)、LC(30+3％,p＜0.01)、LA(32±3％,p＜0.01)，但在24小时消散。在对侧半球，TNF-αmRNA表达增加，在损伤后1小时为RH(46±2％,p＜0.01)、RC(4±3％)和RA(22±8％),6小时为RH(28±11％)、RC(7±5％)和RA(26±6％,p＜0.05)，但24小时未见异常。在假装(有手术而无损伤)或天然动物中，在任何半球任何时间在6个脑部区域没有观察到TNF-αmRNA表达的变化。这些结果表明旁矢状面流体撞击脑损伤，在特定的脑区域颞部TNF-αmRNA表达改变，包括那些非损伤的半球。由于TNF-α可以诱导神经生长因子(NGF)并刺激细胞活素从活化的星形细胞中释放，这种损伤后TNF-α表达的改变在对CNS创伤的急性和再生反应中起重要的作用。
IL-βmRNA的CNS损伤模型
该测定特征为在特殊的脑区域检测白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA的表达，所述脑区域是在大鼠中进行试验诱导的侧流体-撞击创伤性脑损伤(TBI)。用戊巴比妥钠(60mg/kg,i.p)麻醉成年Sprague-Dawley大鼠(n=42)并经历中等程度(2.4atm)的侧流体撞击创伤脑损伤，主要集中于左侧颞部顶骨皮层(n=18)或假装处理(麻醉，手术但无损伤)。在损伤后1、6和24小时，将动物经断头致死，取出大脑，制备左侧(损伤的)顶骨皮层(LC)、对侧右皮层(RC)的相应的区域、损伤顶骨皮层(LA)的相邻的区域、对侧右皮层的相邻的区域(RA)、左海马回(LH)和右海马回(RH)的组织样品。分离总的RNA，进行Norther斑点杂交并以相对于放射活性的IL-1β阳性对照巨噬细胞RNA(上同一凝胶)的百分比对脑组织的IL-1βmRNA定量。损伤后1小时在损伤的半球IL-1βmRNA表达显著增加，LC(20.0±0.7％阳性对照，n=6，与假装相比p＜0.05)、LH(24.5±0.9％,p＜0.05)和LA(21.5±3.1％,p＜0.05)，在损伤6小时后仍然很高，LC(4.0+0.4％,n=6,p＜0.05)和LH(5.0±1.3％,p＜0.05)。而在假装的和天然的动物中，在任何脑区域均没有观察到IL-1βmRNA的表达。这些结果表明在TBI后，颞部IL-1βmRNA表达在特定的脑区域是区域性刺激的。这些区域的细胞活素例如IL-1β在脑损伤的创伤后病理或再生后遗症中起重要的作用。
合成的实施例
通过参考下列实施例描述本发明，所述实施例是用于说明性的而不用于限制本发明的范围。除特别指明外，所有的温度均以摄氏温度给出，所有的溶剂均为最高纯度的溶剂，所有的反应均在无水条件下在氩气环境下进行。
在实施例中，所有的温度均为摄氏温度(℃)。除特别指明外，质谱在VG Zab质谱仪上用快速原子轰击或在micromass platform电子喷雾离子化质谱仪上以阳离子的方式进行，用含有1％甲酸的95∶5乙腈/甲醇作溶剂。用Bruker AM 250或AM 400光度计在250MHz时记录1H-NMR(此后指“NMR”)谱。多重性表示为：s=单峰，d=双峰，t=三重峰，q=四重峰，m=多重峰和br指宽峰。Sat指饱和的溶液，eq指相对于主要的反应剂的试剂的摩尔当量的比例。
快速层析在Merck Silica硅胶60(230-400目)上进行。
实施例1
1-(4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-(2-苯氧基嘧啶-4-基)咪唑
a)2-甲硫基嘧啶-4-甲醛缩二甲醇
于100℃将丙酮醛缩二甲醇(60ml,459mmol)和N,N-二甲基甲酰胺缩二甲醇(dimethyl acetal)(60ml,459mmol)一起搅拌18小时。冷却所述混合物。
将甲醇(300ml)、硫脲(69.6g)和甲醇钠(231ml,25％wt于甲醇中)加至上述混合物中，于70℃搅拌2小时。冷却后，滴加碘甲烷(144ml)，于室温下将所述混合物搅拌3小时。用乙酸乙酯和水稀释后，分离有机相，干燥(硫酸钠)，浓缩得到为棕色油状物的目标化合物(75.5g，产率82％)。1H NMR(CDCl3):d 8.17(d,1H),6.77(d,1H),5.15(s,1H),3.40(s,6H).
b)2-甲硫基嘧啶-4-甲醛
将实施例1的产物(a)(9.96g,50mmol)和3N HCl(42ml,126mmol)合并并于48℃搅拌16小时，冷至23℃，与乙酸乙酯(200ml)合并并通过加入固体碳酸钠(12.6g,150mmol)调至碱性。用乙酸乙酯(4×150ml)萃取水相，干燥(硫酸钠)，浓缩并通过硅胶垫(约150ml)过滤残留物，用二氯甲烷洗脱得到7.49g(97％)目标化合物 1H NMR(CDCl3):δ9.96(s,1),8.77(d,1),7.44(d,1),2.62(s,3).
c)1-叔-丁氧基羰基-4-氨基哌啶
将1-叔-丁氧基羰基哌啶-4-酮(购自Lancaster Chem)(39.9g,0.20mol)、THF(150ml)、水(300ml)和H2NOHHCl(55.2,0.80mol)一起溶解，分次少量加入碳酸钠(55.2g,0.53mmol)。于23℃将所述混合物搅拌14小时，真空蒸发大部分THF，用50％氢氧化钠水溶液调节pH＞10，用乙酸乙酯(5×50ml)萃取并浓缩为白色泡沫状物。与己烷一起研磨，过滤，真空干燥得到固体40.31g。
将上述残留物溶于乙醇(无水)(1L)中，加入阮内镍(50ml在乙醇中的淤浆)，于氢气环境下(50psi)将所述混合物还原3.5小时。滤除催化剂，用乙醇洗涤。浓缩得到38.44g(96％总量)为无色油状物的目标化合物，于-20℃放置后固化为白色固体。
d)2-甲硫基嘧啶-4-甲醛[1-叔-丁氧基羰基-4-氨基哌啶]亚胺
将前一步骤的产物(6.51g,32.6mmol)、硫酸镁(约2g)、实施例1(b)的产物(4.84g,31.4mmol)和二氯甲烷(100ml)合并，于23℃搅拌16小时。过滤并浓缩滤液得到为黄色油状物的目标化合物。
1H NMR(CDCl3):δ8.57(d,1),8.27(s,1),7.58(d,1),4.05(m,2),3.55(m,1),3.00(m,2),2.60(s,3),1.75(m,4),1.48(s,9).
e)4-氟代苯基-甲苯磺酰基甲基甲酰胺
向对甲苯亚磺酸钠盐(30g)的水(100ml)悬浮液中加入甲基叔丁基醚(50ml)，然后滴加浓盐酸(15ml)。搅拌5分钟后，去除有机相，用甲基叔丁基醚萃取水相。干燥(硫酸钠)有机相并浓缩至近干燥。加入己烷，收集产生的沉淀得到对甲苯亚磺酸；产量22g。将对甲苯亚磺酸(22g,140.6mmol)、对氟代苯甲醛(22ml,206mmol)、甲酰胺(20ml,503mmol)和樟脑磺酸(4g,17.3mmol)合并，于60℃搅拌18小时。分解产生的固体并与甲醇(35ml)和己烷(82ml)的混合液一起搅拌，然后过滤。将固体再悬浮于甲醇/己烷(1∶3,200ml)中，剧烈搅拌分解残留的厚块。过滤得到目标化合物(27g，产率62％)：
1H NMR(400MHz,CDCl3)d8.13(s,tH),7.71(d,2H),7.43(dd,2H),7.32(d,2H),7.08(t,2H),6.34(d,1H),2.45(s,3H).
f)4-氟代苯基-甲苯磺酰基甲基异氰化物
将4-氟代苯基-甲苯磺酰基甲基甲酰胺(2.01g,6.25mmol)在DME(32ml)冷至-10℃。加入POCl3(1.52ml,16.3mmol)，接着滴加三乙胺(4.6ml,32.6mmol)的DMF(3ml)溶液并保持内部温度低于-5℃。用1小时将所述混合液逐渐温热至室温，倒入水中，用乙酸乙酯萃取。用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤有机相，干燥(硫酸钠)并浓缩。用石油醚研磨产生的残留物并过滤得到目标化合物(1.7g，产率90％)：
1H NMR(CDCl3)d7.63(d,2H),7.33(m,4H),7.10(t,2H),5.60(s,1H),2.50(s,3H).
g)1-[(1-叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]-4-(4-氟代苯基)-5-[(2-甲硫基(嘧啶-4-基)]咪唑
将实施例1(d)的产物和前一实施例产物(9.41g,32.6mmol)、DMF(64ml)和碳酸钾(4.43g,32.4mmol)合并并搅拌2天，用乙醚稀释，过滤。用乙醚洗涤固体，将滤液浓缩成黄色固体，用乙醚研磨固体，过滤，用更多的乙醚洗涤，真空干燥得到9.07g目标化合物，为白色固体(来自实施例1(b)产物的62％)。MS ES+m/z=470(MH+)。
h)1-[(1-叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]-4-(4-氟代苯基)-5-[(2-甲苯磺酰基(嘧啶-4-基)]咪唑
将溶于THF中的前一实施例的产物(9.07g,19.3mmol)冷至-10℃，滴加溶于水的OXONE(28.5g,46.4mmol)。于23℃将产生的混合液搅拌24小时，与冰水(100ml)和二氯甲烷(700ml)合并，振摇，分离水层。用盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(硫酸钠)，浓缩并真空干燥得到目标化合物8.27g(85％)，为白色泡沫状物。MS ES+m/z=502(MH+)。
i)1-[(1-叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]-4-(4-氟代苯基)-5-(2-苯氧基嘧啶-4-基)咪唑
用无水THF洗涤氢化钠(60％于矿物油中)(1.6g,40mmol)，用更多的THF(75ml)使其分层，以固体形式加入苯酚(4.14g,44mmol)。在5分钟内使剧烈的反应减缓，然后分次加入前一实施例的产物(5.01g,10mmol)，搅拌反应物90分钟，真空浓缩，将残留物溶于二氯甲烷(300ml)中，用10％氢氧化钠水溶液(2x)洗涤，干燥(硫酸钠)，通过硅胶垫过滤，用0-2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，浓缩所需的部分，使残留物从丙酮/己烷中结晶得到2.79g(54％)产物。MS ES+m/z=502(MH+)。
j)1-(4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-(2-苯氧基嘧啶-4-基)咪唑
将前一实施例的产物(3.91g,7.59mmol)与冰冷的TFA(75ml)合并，然后温热至23℃，搅拌15分钟，真空浓缩反应物，使残留物溶于乙酸乙酯(200ml)中，用10％氢氧化钠(2×100ml)洗涤，干燥(硫酸钠)，浓缩，使残留物从丙酮/己烷中结晶得到目标化合物2.24g(71％)，为白色结晶。mp=182-183℃。
实施例2
1-(4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-(2-苯氧基-4-吡啶基)咪唑
a)2-氯代-4-羟基甲基吡啶
于0℃将2-氯代-4-吡啶羧酸(12.9g,82.1mmol)分次加至NaBH4(4.66g,123mmol)的THF(400ml)悬浮液中。使产生的溶液温热至室温，搅拌1.5小时，然后用3小时加入BF3O(Et)2(19.2ml,156mmol)的THF(125ml)溶液。于室温下将所述反应物再搅拌20小时，冷至0℃，滴加1.5N HCl(100ml)。使反应物温热至室温，减压蒸发THF，加入4N NaOH溶液调节pH至10-11。用乙酸乙酯将所述溶液萃取thrice，用饱和的氯化钠溶液洗涤有机层。合并有机层，经硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得到目标化合物，为白色固体(10.8g，产率92％)：
1H NMR(CDCl3):δ8.30(d,1H,J=4.9Hz),7.37(s,1H),7.22(d,1H,J=4.9Hz),4.76(s,2H),2.50(br-s,1H).
b)2-氯代-4-吡啶甲醛
将2-氯代-4-羟基甲基吡啶(8.0g,55.9mmol)、NBS(14.9g,83.9mmol)和碳酸钾(11.75g,97.1mmol)在乙酸乙酯中回流3小时。加入另一份NBS(14.9g,83.9mmol)和碳酸钠(12.0g,114mmol)，继续加热3.5小时。冷却反应混合物，通过硅藻土垫过滤，减压浓缩，层析，用0.5-4％甲醇/二氯甲烷洗脱。用饱和的碳酸氢钠、10％硫代硫酸钠和饱和的氯化钠洗涤合并的组分，干燥，过滤并蒸发得到目标化合物，淡黄色固体(5.3g，产率67％)。1H NMR(CDCl3):δ10.06(s,1H),8.66(d,1H,J=5.0Hz),7.76(s,1H),7.66(d,1H,J=5.0Hz).
c)2-氯代-4-吡啶甲醛(1-叔丁氧基羰基-4-氨基哌啶)亚胺
根据实施例1(d)的方法,但用2-氯代-4-吡啶羰基甲醛得到目标化合物。 1H NMR(CDCl3):δ8.45(d,1H,J=5.1Hz),8.29(s,1H),7.65(s,1H),7.52(d,1H,J=5.1Hz),4.05(br-s,2H),3.48(m,1H),3.03(m,2H),1.73(m,4H),1.48(s,9H).
d)1-(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-(2-氯代-4-吡啶基)咪唑
根据实施例1(g)的方法，但用前一步骤的产物得到目标化合物，将其经快速层析纯化，用0-5％甲醇/二氯甲烷洗脱并从乙酸乙酯/己烷中重结晶得到淡黄色固体。
e)1-(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-(2-苯氧基-4-吡啶基)咪唑
向氢化钠(120mg,3.0mmol)的DMA(1.3ml)搅拌的悬浮液中加入苯酚(0.40g,4.25mmol)。起泡停止后，加入1-(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-(2-氯代-4-吡啶基)咪唑(0.20g,0.44mmol)，于120℃加热生成的溶液至质谱观测不到原料存在(1-3天)。向冷却的溶液中加入1M NaOH，用乙酸乙酯将所述混合物萃取thrice。用饱和的氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发得到淡黄色固体。然后对固体进行层析，用50-80％乙酸乙酯/己烷洗脱得到目标化合物，为白色固体(143mg，产率64％)。MS+ES m/z=515(MH+)。
f)1-(4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-(2-苯氧基-4-吡啶基)咪唑
于-10℃向前一步骤的化合物(143mg,0.28mmol)中加入冷却的TFA溶液(10ml)。使所述反应物温热至室温，于室温下搅拌30分钟，减压蒸发得到桔色油状物，将其溶于水(10ml)中，加入3N HCl(0.5ml)，用乙酸乙酯将水层洗涤两次，用50％氢氧化钠调至碱性，用乙酸乙酯将水层萃取thrice。用氯化钠洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发得到白色泡沫状物(80mg,70％)。ES(+)MS m/e=415(MH+)。
实施例3
1-(4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-甲氧基苯氧基)-4-吡啶基]咪唑
根据实施例2e和2f的方法，但用4-甲氧基苯酚得到目标化合物，白色泡沫状物，两步产率为74％。ES(+)MS m/z=445(MH+)。
实施例4
1-(4-哌啶基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-氟代苯氧基)-4-吡啶基]咪唑
根据实施例2e和2f的方法，但用4-氟代苯酚得到目标化合物，为白色泡沫状物，两步产率为35％。ES(+)MS m/z=433(MH+)。
实施例5
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-甲氧基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但用4-甲氧基苯酚制备目标化合物。mp=190-191℃。
实施例6
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-氟代苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但用4-氟代苯酚制备目标化合物。mp=186-187℃。
实施例7
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-氨基羰基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但用4-羟基苯甲酰胺制备目标化合物。mp=229-230℃。
实施例8
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-乙基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但用4-乙基苯酚制备目标化合物。mp=173-174℃。
实施例9
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-苄氧基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但用4-苄氧基苯酚制备目标化合物。mp=178-179℃。
实施例10
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-氰基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但用4-氰基苯酚制备目标化合物。mp=192-193℃。
实施例11
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-羟基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但用氢醌制备目标化合物。mp=255-260℃(分解)。
实施例12
1-(4-羟基环己基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
a)1-氨基-4-(1,3-二氧基环戊基)环己烷
将碳酸钠(49.2g,547mmol)分次加至1,4-环己烷二酮一乙二醇缩酮(27.6g,177mmol)和羟胺盐酸盐(49.2g,708mmol)在水(250ml)中的混合物中。搅拌1小时后，用乙酸乙酯萃取所述混合物。干燥(硫酸钠)有机相，浓缩得到4-(1,3-二氧基环戊基)-环己酮肟(27.5g，产率90％)。
将肟(27.5g,161mmol)、Raney Ni(ca 13.5ml的乙醇悬浮液)和乙醇(200ml)合并，于50psi氢气环境下振摇4小时。滤除催化剂，浓缩滤液得到目标化合物，为无色油状物(23.6g，产率93％)。1H NMR(CDCl3):δ2.64(m,1H),1.75-1.25(m,12H).
b)2-甲硫基嘧啶4-甲醛(4-乙二醇缩酮环己基)亚胺
将实施例1(b)制备的2-甲硫基嘧啶-4-甲醛(9.5g,6.9mmol)和由前一步骤得到1-氨基-4-(1,3-二氧基环戊基)环己烷(10.8g,6.9mmol)在DMF(150ml)中搅拌18小时。将目标化合物不经纯化使用：
1H NMR(CDCl3):δ8.51(d,1H),8,21(s,1H),7.53(d,1H),3.93,(s,4H),3.40(m,1H),2.55(s,3H),1.94-1.70(m,6H),1.61(m,2H).
c)1-(4-乙二醇缩酮环戊基)咪唑-4-(4-氟代苯基)-5-[(2-甲硫基)嘧啶-4-基]咪唑
向冷至0℃于DMF中的前一实施例的粗品产物中加入实施例1(f)制备的4-氟代苯基-甲苯磺酰基甲基异氰酸化物(26g,90mmol)和碳酸钾(15.7g,113.6mmol)。于0℃将所述混合物搅拌3小时，然后逐渐温热至室温，搅拌18小时。加入乙酸乙酯，过滤所述混合物，用乙酸乙酯洗涤固体。向滤液中加入水，分离有机相，干燥(硫酸钠)并浓缩。蒸发所述混合物至近干燥，用1∶1乙酸乙酯洗涤滤液得到目标化合物，为淡黄色结晶：
1H NMR(CDCl3):δ8.33(d,1H),7.81(s,1H),7.43(q,2H),7.12(t,2H),6.78(d,1H),4.74(m,1H),4.00(s,4H),2.59(s,3H),2.18(dd,2H),2.04(dq,2H),1.89(dd,2H),1.70(dt,2H).
d)1-(4-乙二醇缩酮环己基)]-4-(4-氟代苯基)-5-[(2-甲基磺酰氧基)嘧啶-4-基]咪唑
于0℃向前一步骤化合物(0.20g,48mmol)的THF(2ml)和甲醇(1ml)的溶液中加入溶于水(2ml)的OXONE(0.36g,.56mmo1)。将所述混合物搅拌0.5小时，然后倾至10％氢氧化钠中，用乙酸乙酯萃取。干燥(硫酸钠)有机层并浓缩。用乙醚研磨产生的残留物，过滤得到目标化合物，为白色固体(0.089g，产率45％) 1H NMR(CDCl3):δ8.36(d,1H),7.82(s,1H),7.42(q,2H),7.02(t,2H),6.79(d,1H),4.80(m,1H),4.00(s,3H),2.20(m,2H),2.06(m,3H),1.89(m,2H),1.70(m,5H).
e)1-(4-乙二醇缩酮环己基)]-4-(4-氟代苯基)-5-[(2-苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
将苯酚(0.43g,4.6mmol)加至氢化钠(0.18g,60％,4.6mmol)的无水THF(6ml)的悬浮液中。当气体产生停止时，加入前一步骤的亚砜(0.242g,2.3mmol)，将所述混合物搅拌过夜。用水骤冷所述混合物，用乙酸乙酯萃取所述混合物。EtOAc。干燥(硫酸钠)有机相并浓缩。残留物用乙酸乙酯/己烷研磨得到目标化合物，为白色固体(0.628g，产率57％)。 1H NMR(CDCl3):d 8.40(d,1H),7.97(s,1H),7.45(m,4H),7.27(m,3H),7.04(t,2H),6.85(d,1H),4.57(m,1H),3.99(t,4H),1.89(m,4H),1.72(d,2H),1.43(m,2H).
f)1-(4-氧代环己基)]-4-(4-氟代苯基)-5-[(2-苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
将前一步骤得到的化合物(0.628g,1.3mmol)在3N HCl(6ml)中的混合液搅拌36小时，然后用饱和的碳酸钠水溶液中和并过滤。用水洗涤固体，用乙酸乙酯萃取混合物水溶液。干燥(硫酸钠)有机相并浓缩得到目标化合物，为白色结晶(0.439g,79％)。IR(纯)1717,1570,1506.1H NMR(CDCl3)8.41(d,1HO,7.72(s,1H),7.46(m,4H),7.29(m,3H),7.08(t,2H),6.90(d,1H),5.09(m,1H),2.37(dd,2H),2.24(m,2HO,2.15(dt,2H),2.02(dq,2H)
g)反-1-(4-羟基环己基)]-4-(4-氟代苯基)-5-[(2-苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
向上述实施例化合物(0.439g,1.03mmol)的MeOH/THF(1ml,1∶1)溶液中加入NaBH4溶液[1ml,1M sln.通过合并1.52g,NaBH4,MeOH(30ml)和25％NaOMe的甲醇(2ml)溶液制备]。搅拌30分钟后，用饱和的碳酸钠骤冷所述混合物，蒸发溶剂。使残留物从甲醇/水中重结晶得到目标化合物，为白色针状(0.275g，产率64％)。
mp 212-215℃.1HNMR(CDCl3)8.40(d,1H),7.70(s,1H),7.44(m,4H),7.28(m,3H),7.05(t,2H),6.85(d,1H),4.51(m,1H),3.63(m,1H),1.96(d,4H),1.62(q,2H),1.17(q,2H)
实施例13
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(2,6-二甲基苯氧基)吡啶-4-基]咪唑
根据实施例2(e)和2(f)的方法，但用2,6-二甲基苯酚得到目标化合物，为白色泡沫状物，两步产率34％。ES(+)MS m/e=443(MH+)。
实施例14
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-甲基苯氧基)吡啶-4-基]咪唑根据实施例2(e)和2(f)的方法，但用4-甲基苯酚得到目标化合物，为白色泡沫状物，两步产率49％。ES(+)MS m/e=429(MH+)。
实施例15
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-氯代苯氧基)吡啶-4-基]咪唑根据实施例2(e)和2(f)的方法，但用4-氯代苯酚得到目标化合物，为白色泡沫状物，两步产率46％。ES(+H)MS m/e=449(MH+)。
实施例16
1-[3-(N-吗啉代)丙基]-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
a)2-甲硫基嘧啶-4-甲醛3-(N-吗啉代)丙胺亚胺
将实施例1(d)产物(2.75g,17.8mmol)和N-(氨基丙基)吗啉(2.87ml,19.4mmol)二氯甲烷(75ml)和部分硫酸镁混合并搅拌16小时，过滤并浓缩得到棕色油状物。
1H NMR(CDCl3):d 8.57(d,1),8.23(s,1),7.55(d,1),3.73(m,6),2.58(s,3),2.42(m,6),1.91(m,2).
b)1-[3-(N-吗啉代)丙基]-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(甲硫基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(g)的方法使前一实施例的产物和实施例1(f)产物反应得到5.3g(来自实施例1(d)产物的72％)。
1H NMR(CDCl3):d 8.32(d,1),7.67(s,1),7.46(m,2),7.04(t,2),6.80(d,1),4.42(t,2),3.69(m,4),2.60(s,3),2.38(m,4),2.29(t,2),1.86(m,2).
c)1-[3-(N-吗啉代)丙基]-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(h)和1(i)的方法使前一实施例的产物反应得到目标化合物，为蜡状固体。mp=95-96.
实施例17
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(3-甲氧基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但改用3-甲氧基苯酚制备目标化合物。mp=117-118℃。
实施例18
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-苯基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但改用4-苯基苯酚制备目标化合物。mp=192-193℃。
实施例19
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-苯氧基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但改用4-苯氧基苯酚制备目标化合物。mp=174-175℃。
实施例20
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(3-羟基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但改用间苯二酚制备目标化合物。MS ES+m/z=431(MH+)。
实施例21
1-(3-N-吗啉基-丙基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-氟代苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例16的方法，但改用4-氟代苯酚制备目标化合物。MSES+m/z=278(MH+)。
实施例22
1-(哌啶-4-基)4-(4-氟代苯基)-5-[2-(2-羟基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但改用邻苯二酚制备目标化合物。MS ES+m/z=431(MH+)。
实施例23
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-((3,4-亚甲二氧基)苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但改用芝麻酚制备目标化合物。mp=131-132℃。
实施例24
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(3-氟代苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但改用3-氟代苯酚制备目标化合物。mp=155-156℃。
实施例25
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(2-氟代苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但改用2-氟代苯酚制备目标化合物。mp=154-155℃。
实施例26
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(2-甲氧基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但改用2-甲氧基苯酚制备目标化合物。MS ES+m/z=446(MH+)。
实施例27
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(3-三氟甲基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但改用3-三氟甲基苯酚制备目标化合物。mp=137-138℃。
实施例28
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(3,4-二氟代苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(j)的方法，但改用3,4-二氟代苯酚制备目标化合物。MS ES+m/z=452(MH+)。
实施例29
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[2-(4-甲磺酰基苯氧基)嘧啶-4-基]咪唑
根据实施例1(i)和1(i)的方法，但改用4-甲磺酰基苯酚制备目标化合物。MS ES+m/z=494(MH+)。
实施例30
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[(2-(苯硫基)吡啶-4-基]咪唑
根据实施例2(e)和2(f)的方法，但改用2-苯硫酚制备目标化合物，为黄色泡沫状物，两步产率为36％。ES(+)MS m/z=431(MH+)。
实施例31
1-(哌啶-4-基)-4-(4-氟代苯基)-5-[(2-(1-甲基四唑-5-基硫基)吡啶-4-基]咪唑
根据实施例2(e)和2(f)的方法，但改用5-巯基-1-甲基四唑制备目标化合物，为浅黄色泡沫状物。将泡沫状物经反相层析进一步纯化，用60-70％的乙腈/水和0.1％TFA洗脱。合并相关的组分，用1M氢氧化钠调至碱性，用乙酸乙酯萃取thrice。用硫酸镁干燥合并的有机层，过滤并减压蒸发得到灰白色泡沫状物，两步产率为13％。ES(+)MS m/e=43 7(MH+)。
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