本发明是发明专利申请号89108848·2的继续，有些步骤方法等继用前者专利所记。本发明涉及一种抗病毒干扰素的制造方法。 近年来在世界医学发展中形成了一种新的干扰素学，它的研究已成为涉及病毒学、分子生物学、肿瘤学和免疫学等许多学科的一门新兴边缘科学。
干扰素是一类高活性、多功能的诱生蛋白，用于临床治疗常用的有两类：一类是“自然干扰素”（h jFN）;另一类是“重组干素”（yiFN）。临床已证实干扰素具有抗肿瘤、抗病毒的作用。
目前研究和使用的干扰素是在人体外诱导制造的，它的生产是利用正常人的血分离白细胞，进行人体外诱导产生一种人白细胞干扰素。这种干扰素制造工艺复杂、设备多，需用大量健康人的血。收集来的血如有某种传染病，制成的干扰素用于病人必会招来新的疾病，而且这样制成的干扰素效价低，在病人血液中浓度低，治疗病毒感染和肿瘤效果不满意。成本高、价格贵、社会效益差。
本发明地任务是克服上述现有技术中的不足而提供一种人体内诱导干扰素的制造方法，用这种方法可在人体内诱导产生干扰素，不经取出即可生产作用而治疗病毒疾病和肿瘤疾病。
国内外文献检索尚未发现人体内诱导干扰素及其制造方法。
本发明是将对人无易感性的新城鸡瘟弱活病毒（NDV）作诱导剂，给乙肝等病毒所引起的病人，每天肌肉注射NDV即可在人体内产生大量的干扰素从而治疗病毒所引起的乙型肝炎等疾病。
根据本发明的方法，每天给病人注射2-8mNDV。
根据本发明的方法，诱导剂NDV必须大量增殖，其增殖方法是将贮存的诱导剂（NDV）用PH7.5PBS缓冲剂将血凝效价为320HA/ml、640HA/ml、1280HA/ml、2560HA/ml、稀释5-20倍。在无菌条件下，接种于9-11日龄鸡胚胚尿囊中，每个鸡胚种植稀释液0.2ml，继续孵化48-72小时。
根据本发明的方法，诱导剂（NDV）在需用时必须是一次快速融解，即在20±1℃温水溶，不断摇动一次性融解诱导剂（NDV）。
根据本发明的方法在效价1280HA/ml以上的诱导剂，每毫升必须加入保护剂核酸酶（DNaSe200μg、RNaSe100μg）和人蛋白200μg。
实施例：
选用三代F系、效价为320HA/ml新城鸡瘟弱病毒为人体内诱导干扰素的诱导剂。
将上述诱导剂（NDV）活化后，用0.85%盐水或PH7.5磷酸盐缓冲盐水（PBS）稀释成20-30倍，每只鸡胚用稀释液0.2ml接种于9-11日龄鸡胚尿囊内，继续孵化48-72小时。然后放入4℃冰箱内12小时冻死，无菌条件下收获尿囊液，测定血凝效价，作无菌试验阴性者，贮存为大量增殖用。
为供应临床诱导剂（NDV）必须大量增殖，其增殖方法有二种。①鸡胚尿囊培养法：将贮存的诱导剂（NDV）用7.5PBS缓冲剂将血凝效价为320HA/ml、640HA/ml、1280HA/ml、2560HA/ml稀释5-20倍，在无菌条件下，接种于9～11日龄鸡胚尿囊中，每个鸡胚种植稀释液0.2ml继续孵化48-72小时，让诱导剂充分增殖。②鸡胚单层原代细胞培养法：在无菌的条件下，采取9～10日龄鸡胚。置于无菌平皿中，除去头（或只除去嘴和眼）、爪和内脏后，将其剪成直径3-4毫米的组织块，并用HahKS或其它洗液充分冲洗，放入无菌的50毫升注射器筒内，不装针头，塞入筒芯，用力将鸡胚组织压入另一无菌玻璃瓶内，再用HahKS液冲洗两次，吸弃上清液，于沉淀组织块内加入约4倍量的0.25%胰酶，并调整PH值至7.6-7.8，振荡摇匀后置于37℃水洛感作30分钟，每10分钟轻轻摇一次，取出后小心吸弃上层胰酶溶液，用HahKS轻洗两次后，即在洗液内大口吸管吹打数次或数十次，此时即见大量细胞游离、液体变浑，经用双层细亚麻布或72孔不锈钢纱网过滤，收集于离心瓶（管）中，以每分钟600转的速度离心沉淀5-10分钟，吸弃上清液，按每个鸡胚加入5毫升的营养液，并用吸管充分吹打，直至形成均匀的细胞悬液，根据细胞计数的结果，再用营养液将细胞悬液进一步稀释为每毫升50万个细胞的浓度，即可装瓶培养。每1000毫升溶量长方形培养瓶装100ml，置于36-37℃温箱内培养，鸡胚细胞在1-2小时内贴壁，几小时至十几小时后开始生长，24-48小时长成单层，此时更换维持液接种诱导剂（NDV），每个瓶内接种稀释液0.5ml继续培养48-72小时，收获备用。
收获的诱导剂（NDV）经无菌检查阴性，血凝效价为1280HA/ml以上，病毒滴度lOgEID508以上，即可在-30℃以下保存。
需用时，在无菌条件下，一切用品经过除热原处理，快速20±1℃温水溶，不断摇动一次性融解诱导剂（NDV），待完全融解后，经过封闭式双层府绸袋和0.22μ微孔滤膜的滤菌器除去鸡胚尿囊液或鸡胚组织营养液的杂质、蛋白、细菌及部分尿酸盐。
经过滤过的诱导剂（NDV）每毫升加入保护剂核酸酶（DNaSe200μg、RNaSe100μg）和人蛋白200μg，无菌灌封安瓿，或制成冻干制剂，供临床用。
本发明与现有技术相比具有如下优点：
（1）不用其他健康人的血，避免上述他人血中有某种传染病而导致新的疾病。
（2）制成的人体内诱导干扰素制造工艺简单、成本低廉。
（3）通过上述方法制造的人体内诱导干扰素为三种干扰素：①人白细胞干扰素;②人成纤维细胞干扰素;③人类淋巴细胞干扰素。
（4）生产的干扰素在人血中浓度高、疗效高。