连翘苷在制备治疗肥胖病口服药物和保健食品中的应用.pdf

有效成分连翘苷在制备治疗肥胖病口服药物和保健食品中的应用。连翘苷是从中药连翘果实或连翘叶中提取分离得到的一种有效成分，有效成分连翘苷与有机或无机的固体或液体赋形剂混合，制备成固体口服制剂如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂，也可以制备成液体口服制剂如乳剂、糖浆剂，有效成分连翘苷还可加入到食品中制成保健食品。连翘苷经毒性和药效试验，毒性试验表明，连翘苷对小鼠的LD50为8.30g/kg，其毒副作用较小，使用比较安全，药效试验表明，连翘苷可以减低营养型肥胖小鼠的体重增长率、脂肪系数、lee’s指数，降低血清总胆固醇和甘油三酯含量，使脂肪细胞变小，连翘苷对营养性肥胖小鼠具有较好的减肥作用。

1、  有效成分连翘苷在制备治疗肥胖病口服药物和保健食品中的应用。

连翘苷在制备治疗肥胖病口服药物和保健食品中的应用
技术领域
本发明涉及连翘苷在机体中减肥的新用途。
背景技术
肥胖病，是人体体重超常的疾病，是当今社会的常见和多发性疾病，也是世界卫生组织确定的疑难性疾病之一。肥胖症已成为世界范围内的流行病，在我国城市有10％～15％左右的发病率，在经济发达国家发病率高达20％～30％，而且有逐年增高和年轻化倾向。肥胖病作为一种全身内分泌代谢疾病，不但影响体态和活动，而且与高脂血症、动脉粥样硬化、冠心病、糖尿病、痛风、脂肪肝、内分泌失调、肺泡低换气综合征、胆囊炎等密切相关，有损健康和有碍延寿，全世界每年因肥胖死亡的人数约28万，仅次于吸烟。因此，科学的防治肥胖是保健、延寿的措施之一。
药物是防治肥胖病的有效手段之一。近年来，随着对肥胖病的深入研究，国内外学者对治疗肥胖病药物的药理作用进行了大量研究，在药物治疗领域出现了不少新理论、新概念及新药物，也有许多种类的治疗肥胖病药物上市。目前市场上销售治疗肥胖病的西药主要有食欲抑制类、抑制肠道消化吸收类、增加能量消耗类，治疗肥胖病西药的主要缺点是副作用大，缺乏长期疗效，停药后体重有反弹现象，如：芬氟拉明，在临床应用20多年，多项研究发现长期服用芬氟拉明可导致心脏瓣膜损害、肺动脉高压和手指坏死。苯丙胺类减肥药可导致失眠、不安、神经过敏、头晕、震颤、血压升高等。目前市场上销售治疗肥胖病的中成药种类很多，但起效速度不及西药迅速，而且产品质量也难以保证，在相当多中成药减肥药物中往往加入了一些西药减肥药物。另外，治疗肥胖病的西药和中成药，价格都比较昂贵。目前开发一种副作用小、起效速度快、价格便宜的治疗肥胖病的药物是当前需要迫切解决的技术问题。
连翘是我国的一种常用中药，连翘苷是从连翘果实或者连翘叶中分离出来的一种化学成分，连翘苷的制备方法、化学性质等方面的研究已有大量报道，但连翘苷药理活性的研究报道较少，目前还未报道过连翘苷在治疗肥胖病药物中的应用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述治疗肥胖病药物的缺点，为用有效成分连翘苷制备的药物和食品提供一种新用途。
解决上述技术问题所采用的技术方案是：有效成分连翘苷在制备治疗肥胖病口服药物和保健食品中的应用。
连翘苷是从我国常用中药连翘果实或连翘叶中提取分离得到的一种化合物，它的分子式是C₂₇H₃₄O₁₁，分子量为534.56，分子结构式见下图：

连翘苷的制备方法已在《中药化学》第188页(上海科学技术出版社，1987)公开。
连翘苷在抗氧化降血脂口服药物中的应用已在专利号为03108073.1、发明名称为《一种抗氧化降血脂的口服药物》的发明专利中公开。
有效成分用连翘苷制备治疗肥胖病的口服药物以常规药用制剂的形式来使用；所述的常规药用制剂含作为活性成分在制剂中与药学上可接受的载体如适宜于胃肠内的有机或无机的固体或液体赋形剂混合，该药用制剂可以是固体形式如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂，也可以是液体形式如乳剂、糖浆剂等。
上述制剂中可含有辅助物质、稳定剂、润湿剂和其它常用的添加剂，如乳糖、柠酸、酒石酸、硬脂酸、硬脂酸镁、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、花生油、橄榄油、可可脂、乙二醇、抗坏血酸等。
上述的药用制剂可按照各种制剂常规的制备工艺制成。
有效成分连翘苷也可以加入乳制品、饮料、茶叶、面包等食品中，制成减肥保健食品。
有效成分连翘苷作为治疗肥胖病的口服药物和保健食品中的应用，所制备成各种剂型的口服药物和保健食品，成人口服，药物和保健食品中连翘苷的含量应为每天63～90mg，20天为一个疗程，用药3～5个疗程，儿童酌情减量，保健食品可长期使用。
上述药品和保健食品中的有效成分连翘苷经急性毒性试验和药效试验。急性毒性试验表明，连翘苷对小鼠的LD₅₀为8.30g/kg，说明其毒副作用较小，使用比较安全。药效试验表明，连翘苷可以减低营养型肥胖小鼠的体重增长率、脂肪系数、lee’s指数，降低血清总胆固醇和甘油三酯含量，使脂肪细胞变小，说明连翘苷对营养性肥胖小鼠具有较好的减肥作用。
具体实施方式
下面发明人给出了用连翘苷制备治疗肥胖病药物的药用制剂和保健食品的实施例。
实施例1
药用制剂制备成片剂，以生产片剂1000片为例所用原料和辅料及其重量配比如下：
      连翘苷                                 30g
      淀  粉                                150g
      乳  糖                                120g
其制备工艺按制剂学片剂的常规工艺进行，每片重0.3g，每片含连翘苷30mg。
用法用量：口服，每次一片，一日三次，小儿酌减。20天为一个疗程。
实施例2
药用制剂制备成胶囊剂，以生产胶囊剂1000粒为例所用原料和辅料及其重量配比如下：
      连 翘 苷                               30g
      玉米淀粉                               35g
      硬脂酸镁                                5g
其制备工艺按制剂学胶囊剂的常规工艺进行，每粒重0.07g，每粒含连翘苷30mg。
用法用量：口服，每次一粒，一日三次，小儿酌减。20天为一个疗程。
实施例3
药用制剂制备成颗粒剂，以生产颗粒剂1000g为例所用原料和辅料及其重量配比如下：
      连翘苷                                   10g
      蔗糖粉                                  650g
      糊  精                                  340g
制备工艺按制剂学颗粒剂的常规工艺进行，每袋3g，1g含连翘苷10mg。
用法用量：口服，每次1袋，一日三次，小儿酌减。20天为一个疗程。
实施例4
药用制剂制备成糖浆剂，以生产糖浆剂1000mL为例所用原料和辅料及其重量配比如下：
      连翘苷                                    3g
      蔗  糖                                  600g
      苯甲酸                                    1g
      蒸馏水                            加至1000mL
其制备工艺按制剂学糖浆剂的常规工艺进行，1mL含连翘苷3mg。
用法用量：口服，每次10mL，一日三次，小儿酌减。20天为一个疗程。
实施例5
取连翘苷7g，用10倍量的乙醇溶解，均匀喷洒到1Kg茶叶上，使每克茶叶中连翘苷的含量为7mg，烘干，分装成每袋3g的袋泡茶，每天饮用1～3袋，可长期饮用。
实施例6
取连翘苷70mg，用30mL的0.3％食品用羧甲基纤维素钠悬浮，加入1L牛奶中制成具有减肥保健乳制品，每100mL含连翘苷7mg，灭菌后包装，每袋230mL，每人每天饮用不超过1000mL，可长期饮用。
实施例7
取连翘苷280mg，加入1000g标准粉，植物油50g，20g活性酵母，按照常规面包制作工艺进行。每人每天食用250g，含连翘苷70mg。
在其他食品中，如饼干、蛋糕等食品中，也可以加入连翘苷，按每人每天连翘苷食用量70mg为宜。
为了验证有效成分连翘苷治疗肥胖病的有益效果，申请人将已制备的连翘苷进行了毒性和药效试验，各种试验情况如下：
一、连翘苷的急性毒性试验
1、受试药物
连翘苷(纯度大于97.22％)，自制。用0.5％羧甲基纤维素钠配制成相应浓度的悬浮液。
2、实验动物
ICR小鼠由陕西省中医药研究院实验动物中心提供，体重20～22g，鼠龄6～7周，动物合格证为医动字08-24号。
3、实验方法
取健康ICR小鼠60只，体重20～22g，雌雄各半，随机分为四组，每组15只，喂养一周，待动物熟悉饲养环境后，禁食12小时，灌胃给予不同浓度的连翘苷药液，在12小时内给药两次，间隔6小时，给药体积为0.2mL/10g(根据预实验，一次给药最大浓度和最大体积动物死亡数仅20％左右，给药两次)，给药后观察一周，记录各组动物死亡数。
4、实验结果
实验结果见表1。
      表1  连翘苷对小鼠的LD₅₀测定实验结果表
组别  鼠数(n)   剂量(d)(g/kg)    logd     死亡数   死亡率(p)    p²
1       15          12.0        1.0792      13       0.866     0.755
2       15           8.4        0.9243       8       0.533     0.284
3       15           5.9        0.7684       2       0.133     0.018
        15           4.1        0.6149       0       0         0
用改进寇氏法计算LB₅₀及95％可信限，经计算，LD₅₀＝8.30g/kg，LD₅₀的95％可信限为：7.29～9.45g/kg。
实验结论：连翘苷对小鼠的LD₅₀为8.30g/kg，按照世界卫生组织规定地化学物质急性毒性分级标准，属于实际无毒物质。
二、连翘苷对营养性肥胖小鼠的减肥作用试验
1、受试药物
连翘苷(纯度大于97.22％)，用0.5％羧甲基纤维素钠配制成相应浓度的悬浮液；
阳性对照药盐酸芬氟拉明(上海现代浦东药厂有限公司生产)，用0.5％羧甲基纤维素钠配制成相应浓度。
2、实验动物
ICR小鼠由陕西省中医药研究院实验动物中心提供，体重20～22g，鼠龄6～7周，动物合格证为医动字08-24号。
3、实验方法
实验动物随机分为正常对照组和高脂饲料组，正常对照组动物从实验开始至结束均用普通饲料喂养，其余动物均给予高脂饲料(高脂饲料重量配比：胆固醇1％、蛋黄粉10％、猪油10％、普通饲料79％)，3周后测体重与正常对照组比较，数据差异具有显著意义，确定已形成营养性肥胖动物模型。将高脂饲料组动物随机分为5组：高脂血症对照组、阳性药对照组、连翘苷45mg/kg大剂量组、连翘苷15mg/kg中剂量组、连翘苷5mg/kg小剂量组，每天继续给予高脂饲料，高脂血症对照组按照0.2mL/10g给予0.5％羧甲基纤维素钠，连翘苷大、中、小三个剂量组，每天分别以剂量为45mg/kg、15mg/kg、5mg/kg的连翘苷悬浮液(连翘苷用0.5％羧甲基纤维素钠配制成浓度为2.25mg/mL、0.75mg/mL、0.25mg/mL)灌胃给药，阳性药对照组每天灌胃给药4mg/kg的芬氟拉明；正常对照组给以等体积的0.5％羧甲基纤维素钠溶液。17天后，各组小鼠称重，眼眶取血，分离血清备用；动物引颈脱臼处死，分离生殖器旁脂肪备用。
4、指标测定
血清总胆固醇测定用酶法：试剂盒由山东潍坊开发区三潍(3V)生物工程有限公司生产，批号：200402166，按照试剂盒使用说明进行测定操作。
血清甘油三酯的测定用酶法：试剂盒由山东潍坊开发区三潍(3V)生物工程有限公司生产，批号：200402166，按照试剂盒使用说明进行测定操作。
体重增长率及lee’s指数计算：记录给药前体重(始重)，解剖前体重(终重)，计算体重增长率。测小鼠鼻尖到肛门的长度，计算lee’s指数。
脂肪湿重和脂肪系数计算：分离小鼠生殖器旁边脂肪，称量脂肪湿重，用脂肪湿重除以小鼠体重记作脂肪系数。
脂肪细胞大小测定：取生殖器旁同一位置处脂肪一小块，用2.5％甲醛乙醇液固定，石蜡切片，HE染色，在400倍镜下计数全视野中脂肪细胞数目，并用经标准物镜测微尺纠正的目镜测微器测量视野最大细胞最大径。
5、数据处理
计量资料均以x±s表示.两样本比较采用t检验。
6、试验结果
(1)连翘苷对营养性肥胖小鼠血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的影响试验结果见表2。
表2连翘苷对营养性肥胖小鼠血清总胆固醇和甘油三酯的影响(x±s，n＝12)
组别             鼠数       TG(mmol/l)          TC(mmol/L)
正常对照组        12        0.48±0.19**       1.68±0.02**
模型对照组        12        1.34±0.17         3.49±0.30
连翘苷大剂量组    12        0.81±0.38**       2.91±0.05**
连翘苷中剂量组    12        1.08±0.30*        2.90±0.13**
连翘苷小剂量组    12        1.03±0.34*        3.29±0.06*
阳性药对照组      12        0.92±0.46*        3.09±0.09**
注：与模型对照组相比，经t检验^*P＜0.05，^**P＜0.01
连翘苷各剂量组均可以降低肥胖小鼠的血清总胆固醇和甘油三酯水平，经统计学处理，数据差别有显著意义。
(2)连翘苷对营养性肥胖小鼠体重增长率和lee’s指数的影响试验结果见表3。
表3连翘苷对营养性肥胖小鼠体重和lee’s指数的影响(x+s，n＝12)
组  别     鼠数     始重(灌药前)           终重          Lee’s指数    体重增长率(％)
正常对照组  12      22.93±2.48        24.41±2.87      344.5±14.7*        6.06
模型对照组  12      26.79±1.03        30.92±2.39      362.5±16.2        13.35
大剂量组    12      26.52±1.98        26.90±2.51      332.8±15.0*        1.41
中剂量组    12      26.60±2.52        27.16±3.14      345.3±13.6*        1.91
小剂量组    12      26.47±2.31        26.87±2.88      355.7±23.2         1.71
阳性药对照组12      26.95±2.34        27.61±3.06      339.7±15.8*        2.39
注：与模型对照组相比，经t检验^*P＜0.05，
连翘苷各剂量组均可以降低肥胖小鼠的体重增长率及lee’s指数，经统计处理，除连翘苷小剂量组外，阳性药组、连翘苷大剂量和中剂量组lee’s指数的数据差别有显著意义。
(3)连翘苷对营养性肥胖小鼠脂肪湿重、脂肪系数、全视野细胞数及脂肪细胞大小的影响
试验结果见表4。
      表4连翘苷对营养性肥胖小鼠脂肪细胞及肝系数的影响：(x±s，n＝12)
组别         脂肪湿重(g)      脂肪系数(％)      全视野细胞数(个) 脂肪细胞最大径(um)
正常对照组  0.307±0.060**    1.20±0.29**      118.7±6.1**       74.6±4.84**
模型对照组  0.770±0.057      2.91±0.20        71.9±7.0**        97.3±5.84
大剂量组    0.571±0.056**    1.88±0.21**      115±5.9**         71.7±4.54**
中剂量组    0.575±0.070**    2.11±0.28**      102.9±10.3**      81.2±5.83**
小剂量组    0.526±0.061**    1.91±0.44**      110.1±5.6**       84.4±2.67**
阳性药对照组0.630±0.092**    2.01±0.63**      109±5.3**         80.9±5.89**
注：与模型对照组相比，经t检验^**P＜0.01。
连翘苷各剂量组的小鼠脂肪湿重、脂肪系数、均小于模型对照组，连翘苷各剂量组的全视野脂肪细胞数目也高于模型对照组，模型对照组的脂肪细胞最大径高于给药组及正常对照组、阳性药组，经t检验，各组别的上述指标与模型对照组比较，数据差异均有显著性意义。
试验结论：连翘苷可以减低营养型肥胖小鼠的体重增长率、脂肪系数、lee’s指数，降低血清总胆固醇和甘油三酯含量，使脂肪细胞变小，说明连翘苷对营养性肥胖小鼠具有较好的减肥作用。