一种制备c-Met抑制剂PF22341066的新方法 【技术领域】
本发明涉及制药技术领域，具体地说，是一种c-Met抑制剂PF22341066及其衍生物的制备方法.
背景技术
PF22341066是一种口服生物利用度较高的具有c-Met激酶催化活性的ATP竞争性小分子抑制剂，它能有效抑制c-Met的磷酸化，并能在体外有效抑制c-Met依赖的细胞增殖、迁移和侵袭(IC50值为5～20nmolPL)，此外，它还能有效抑制HGF刺激引起的内皮细胞增殖和侵袭以及血清刺激引起的血管形成。PF22341066耐受性良好，其抗肿瘤活性呈现明显的剂量依赖性[Cancer Res.，2007，67(9)：44082-44171]。c-Met抑制剂PF22341066的英文名：(R)-3-(1-(2，6-dichloro-3-fluorophenyl)ethoxy)-5-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyridin-2-amine，分子式：C21H22Cl2FN5O，分子量：449.12，外观：白色粉末。结构是如下：
在c-Met抑制剂PF22341066及其衍生物的合成步骤中，中间体(III)的不对称合成是合成目标化合物的关键。目前已有专利(WO2006021881A2，WO2007066187A2，WO2009036404A2)公开了PF-22341066及关键中间体(III)的合成。上述已公开专利主要是通过酯酶催化水解的方法合成关键中间体(III)见下图，以取代苯乙酮为原料经还原、乙酰化两步得到化合物A2，A2再通过酶催化的方法得到S2和R1的混合物，继续甲磺酰化得到R3与S2的混合物，乙酰化，水解得到关键中间体(III)。该方法的缺点是：①化合物A2的酶催化反应所需时间长，反应条件苛刻；②反应收率低，操作复杂，实验重现性差；③酶催化剂价格昂贵；④很难大规模工业化生产。
【发明内容】
本发明的目的是为了克服现有文献中采用生物酶催化，步数多，收率低，周期长，不利于大规模生产的缺点，而采用化学拆分法一步合成关键中间体(III)的一种成本低廉、操作简便、收率高、光学纯度好且适用于大规模生产的PF-22341066及其衍生物的化学合成方法。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：以取代苯乙酮(I)为起始原料经还原、与拆分剂(0.5-0.9当量)缩合后分离得到手性代苯乙醇(III)，进一步经过缩合、还原、溴代、偶联、脱保护等多步反应制备得到PF-22341066。本发明方法制备PF-22341066，原料易得、价格便宜、反应条件温和、操作简便、收率高、光学纯度好，且是成本较低的新合成路线。
下面对本发明的方法进一步说明：包括如下步骤：
(1)取代苯乙酮(I)在溶剂中与还原剂A1反应生成苯乙醇(II)。
其中R1、R2、R3均代表氢原子或者卤原子，所述卤原子为氟原子、氯原子、溴原子或者碘原子；所述的还原剂A1为硼氢化物优选为硼氢化钠、硼氢化钾、硼氢化锂；所述溶剂为醇类、醚类或其两种溶剂的混合溶剂；温度为-20～30℃，优选为0℃。
(2)消旋体苯乙醇(II)与拆分剂D-Cat.或L-Cat.，缩合剂A2，催化剂C1作用下在溶剂中反应生成酯(XIa或XIb)，柱层析分离得到手性的取代苯乙醇(IIIa或IIIb)。
其中R1、R2、R3均代表氢原子或者卤原子，所述卤原子为氟原子、氯原子、溴原子或者碘原子；所述拆分剂D-Cat.或L-Cat.为N-保护的手性脯氨酸或羟基保护的扁桃酸，其中L和D代表两种不同构型，所述N-保护基为Boc(叔丁氧羰基)，Cbz(苄氧羰基)，Bz(苯基)，Bn(苄基)；所述扁桃酸羟基保护的基团为成醚键的Me(甲基)，Et(乙基)等烷烃或成硅醚键的TMS(三甲基硅基)，TBS(叔丁基三甲基硅基)等硅烷烃；或成酯键的Ms(甲磺酰基)，Ts(对甲苯磺酰基)等酰化试剂；缩合剂A2为EDCI(1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐)、HOBt(1-羟基-苯并-三氮唑)、DCC(二环己基碳二亚胺)、HATU(2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯)，催化剂C1为DMAP(4-二甲氨基吡啶)，溶剂为非质子性溶剂，如DMF(二甲基甲酰胺)，DMSO(二甲基亚砜)，DCM(二氯甲烷)，二氯乙烷，优选为二氯乙烷。拆分剂D-Cat.或L-Cat的用量为0.5-0.9当量，优选为0.7当量。反应温度为-20～30℃，优选为室温。
(3)(S)或(R)-取代苯乙醇(III)在溶剂中，A3、A4存在下与2-硝基-3-羟基吡啶反应得到化合物(IV)。
其中R1、R2、R3均代表氢原子或者卤原子，所述卤原子为氟原子、氯原子、溴原子或者碘原子；所述的催化剂C2为DMAP(4-二甲氨基吡啶)，反应物A3为三苯基磷，A4为DEAD(偶氮二甲酸二乙酯)，DIAD(偶氮二甲酸二异丙酯)优选为DEAD(偶氮二甲酸二乙酯)；溶剂为醚类溶剂，如四氢呋喃、乙醚，优选为乙醚；反应温度为-20～30℃，优选为室温。
(4)化合物(IV)在溶剂中与还原剂A5反应生成化合物(V)。
其中R1、R2、R3均代表氢原子或者卤原子，所述卤原子为氟原子、氯原子、溴原子或者碘原子；所述A5为是还原铁粉、锌粉，优选为还原铁粉；溶剂为质子性溶剂，如乙醇、乙酸或其混合溶剂为溶剂；所述的R或者S代表式(IV)和(V)的分子构型，在反应中手性碳构型保持；反应温度为-20～30℃，优选为室温。
R或S R或S
(5)化合物(V)在溶剂中与化合物A6反应生成溴代物(VI)。
其中R1、R2、R3均代表氢原子或者卤原子，所述卤原子为氟原子、氯原子、溴原子或者碘原子；所述的A6为溴代试剂NBS(N-溴代丁二酰亚胺)、溴素，优选为NBS(N-溴代丁二酰亚胺)；溶剂为四氯化碳；所述的R或者S代表式(V)和(VI)的分子构型，在反应中手性碳构型保持；反应温度为-20～30℃，优选为室温。
R或S R或S
(6)碘代物(IX)与N-Boc哌啶甲磺酸酯在溶剂中碱A7，催化剂C3存在下，反应生成化合物(X)。
所述的A7为碱，可以是氢化钠、叔丁醇钾、叔丁醇钠、氢氧化钠、氢氧化钾，优选为氢化钠；所述的C3为催化剂，可以是醋酸钯、四三苯基磷钯、二氯二三苯基磷钯，优选为二氯二三苯基磷钯；溶剂为极性非质子性溶剂，优选为二甲基甲酰胺；反应温度为0～130℃，优选为100℃。
(7)化合物(X)与二硼酸酯在溶剂中碱A8，催化剂C4存在下反应生成硼酸酯(VII)。
其中R1、R2、R3均代表氢原子或者卤原子，所述卤原子为氟原子、氯原子、溴原子或者碘原子；所述的A8为碱金属的醋酸盐，优选为醋酸钾；所述的C4为催化剂，可以是醋酸钯、四三苯基磷钯、二氯二三苯基磷钯，优选为二氯二三苯基磷钯；溶剂为极性非质子性溶剂，优选为二甲基亚砜；反应温度为0～130℃，优选为80℃。
(8)溴代物(VI)与硼酸酯(VII)在溶剂中碱A9、催化剂C5存在下反应生成化合物(VIII)。
其中R1、R2、R3均代表氢原子或者卤原子，所述卤原子为氟原子、氯原子、溴原子或者碘原子；所述的A9为碱金属的碳酸盐、碳酸氢盐，优选为碳酸钾；所述的C5为催化剂，可以是醋酸钯、四三苯基磷钯、二氯二三苯基磷钯，优选为二氯二三苯基磷钯；溶剂为极性非质子性溶剂，优选为二甲基甲酰胺；所述的R或者S代表式(VI)和(VII)的分子构型，在反应中手性碳构型保持；反应温度为0～130℃，优选为87℃。
(9)N-Boc化合物(VIII)在溶剂中与酸A10反应得到最终产物PF-2341066。
R或S R或S
其中R1、R2、R3均代表氢原子或者卤原子，所述卤原子为氟原子、氯原子、溴原子或者碘原子；所述的A10为氯化氢或三氟乙酸，优选为氯化氢；溶剂为乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环中或其两种以上溶剂的混合溶剂；所述的R或者S代表式(VIII)和PF-2341066及其衍生物或其盐的分子构型，在反应中手性碳构型保持；反应温度为-10～50℃，优选为25℃。
有益效果：本发明提供的制备c-Met抑制剂PF-22341066的方法与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明使用手性化学拆分法代替已有的生物酶法合成c-Met抑制剂PF-22341066，整条路线反应周期短，操作简单，原料来源广，价格低廉。
2、本发明提供地制备c-Met抑制剂PF-22341066的方法总收率高、所的产物光学纯度高、反应所需条件和反应过程易于控制、为药物c-Met抑制剂PF-22341066及其衍生物制备及生产提供了新的选择。
【附图说明】
附图1为本发明制备c-Met抑制剂PF22341066的流程图。
附图2为本发明制备c-Met抑制剂PF22341066的光学纯度报告(ee值)。
附图3为本发明制备c-Met抑制剂PF22341066的1HNMR报告。
【具体实施方式】
以下通过实施例对本发明进行进一步说明，但并非用以限定本发明。
实例1：消旋体苯乙醇(II)的合成
将380g苯乙酮(I)溶于甲醇中，加入70g NaBH4，室温搅拌1h，TLC检测原料消失，加水淬灭，用乙醚萃取后，硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到无色油状物苯乙醇(II)。
实例2：(S)-取代苯乙醇(III)的制备
将20g消旋体苯乙醇(II)和15g Boc-L-脯氨酸溶于二氯甲烷中，依次加入15g EDCI和2g DMAP，混合物在室温条件下搅拌4-12h，TLC检测。Boc-L-脯氨酸消失，以水淬灭反应，萃取，干燥后，通入HCl(g)，TLC检测原料反应完全后，浓缩后柱层析，得(S)-取代苯乙醇(III)收率35％，ee：99％。
实例3：硝基化合物(IV)的制备
将94g三苯基膦，52g苯乙醇(III)和38g 3-羟基-硝基吡啶溶于200mL四氢呋喃，降温至0℃，加入62.4g的DEAD。混合物在氮气保护下室温搅拌3h，TLC检测反应完全后，浓缩反应液，粗产品柱层析(EA∶HEX＝1∶4)得到白色固体硝基化合物(IV)。
实例4：芳香胺(V)的制备
将41g硝基化合物(IV)和200mL醋酸及220mL乙醇混合后，缓慢加入6.95g铁屑，接着，慢慢升温至回流状态并搅拌1小时，TLC检测反应完全后，加入500mL乙醚和500mL水，反应液以碳酸钠中和，分层，有机相以NaHCO3水溶液，水和食盐水洗涤后干燥，过滤，浓缩，得到一粉红色固体。
实例5：溴代物(VI)的制备
将35g芳香胺(V)溶于乙腈中，降至0℃，加入20.7g NBS，搅拌15分钟，浓缩，加入乙醚和水，有机相干燥后得到黄色固体溴代物(VI)。
实例6：化合物X的合成
将110g 4-碘吡唑(IX)溶于2L DMF中，降温至4℃，缓慢加入15.6g NaH。4℃搅拌一小时后加入N-Boc哌啶甲磺酸酯，升温到100℃，保温12小时，TLC检测反应完全后，加水淬灭，加入乙酸乙酯萃取几次，有机相干燥，过滤，浓缩得到橘黄色油状物，经柱层析分离后得到白色固体化合物X。
实例7：硼酸酯(VII)的制备
将150克化合物X溶入1.5升DMSO中，接着将134g二硼酸酯，145g醋酸钾依次加入，用氮气置换几次，后加入12.9g催化剂Pd(PPh3)2Cl2，加热到80℃，搅拌两小时后，冷到室温，硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤，有机相再用饱和NaCl水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤后浓缩，柱层析得到白色固体硼酸酯(VII)。
实例8：N-Boc化合物(VIII)的制备
将7.08g溴代物(VI)和6.4g硼酸酯(VII)溶于70mL DMF中，加入含5.4g Na2CO3的17mL水溶液，用氮气置换空气三次，加入596mg Pd(PPh3)2Cl2，再用氮气置换空气三次，反应混合物升温到87℃搅拌16小时，TLC检测反应完全后，降至室温，加入600mL乙酸乙酯稀释，硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤，合并的乙酸乙酯以硫酸钠干燥后浓缩，粗产品经柱层析纯化。
实例9：抑制剂PF-22341066衍生物的制备
将固体100mg N-Boc化合物(VIII)溶于少量二氯甲烷中，在0℃搅拌，加入4N HCl的乙酸乙酯溶液2mL，搅拌20分钟后，TLC检测反应完全后，减压除去溶剂，加入10mL水，以碳酸氢钠固体调节pH＝10，使用二氯甲烷萃取后干燥，浓缩，重结晶，得到类白色固体。
实例10：消旋体苯乙醇(II)的合成
将380g苯乙酮(I)溶于甲醇中，加入82g KBH4，室温搅拌1h，TLC检测原料消失，加水淬灭，用乙醚萃取后，硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到无色油状物苯乙醇(II)。
实例11：(S)-取代苯乙醇(III)的制备
将20g消旋体苯乙醇(II)和17g(L)-2-甲氧基苯乙酸溶于二氯甲烷中，依次加入15g EDCI和2g DMAP，混合物在室温条件下搅拌4-12h，TLC检测。2-甲氧基苯乙酸消失，以水淬灭反应，萃取，干燥后，浓缩后柱层析，得(S)-取代苯乙醇(III)。
实例12：硝基化合物(IV)的制备
将94g三苯基膦，52g苯乙醇(III)和38g 3-羟基-硝基吡啶溶于200mL四氢呋喃，降温至0℃，加入72.5g的DIAD。混合物在氮气保护下室温搅拌3h，TLC检测反应完全后，浓缩反应液，粗产品柱层析(EA∶HEX＝1∶4)得到白色固体硝基化合物(IV)。
实例13：芳香胺(V)的制备
将41g硝基化合物(IV)和200mL盐酸及220mL乙醇混合后，缓慢加入6.95g铁屑，接着，慢慢升温至回流状态并搅拌1小时，TLC检测反应完全后，加入500mL乙醚和500mL水，反应液以碳酸钠中和，分层，有机相以NaHCO3水溶液，水和食盐水洗涤后干燥，过滤，浓缩，得到一粉红色固体。
实例14：溴代物(VI)的制备
将35g芳香胺(V)溶于乙腈中，降至0℃，加入20.7g NBS，搅拌60分钟，浓缩，加入乙醚和水，有机相干燥后得到黄色固体溴代物(VI)。
实例15：化合物X的合成
将110g 4-碘吡唑(IX)溶于2L DMF中，降温至4℃，缓慢加入15.6g NaH。4℃搅拌一小时后加入N-Boc哌啶甲磺酸酯，升温到85℃，保温12小时，TLC检测反应完全后，加水淬灭，加入乙酸乙酯萃取几次，有机相干燥，过滤，浓缩得到橘黄色油状物，经柱层析分离后得到白色固体化合物X。
实例16：硼酸酯(VII)的制备
将150克化合物X溶入1.5升DMSO中，接着将134g二硼酸酯，145g醋酸钾依次加入，用氮气置换几次，后加入12.9g催化剂Pd(PPh3)2Cl2，加热到65℃，搅拌两小时后，冷到室温，硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤，有机相再用饱和NaCl水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤后浓缩，柱层析得到白色固体硼酸酯(VII)。
实例17：N-Boc化合物(VIII)的制备
将7.08g溴代物(VI)和6.4g硼酸酯(VII)溶于70mL DMF中，加入含5.4g Na2CO3的17mL水溶液，用氮气置换空气三次，加入300mg Pd(PPh3)2Cl2，再用氮气置换空气三次，反应混合物升温到87℃搅拌16小时，TLC检测反应完全后，降至室温，加入600mL乙酸乙酯稀释，硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤，合并的乙酸乙酯以硫酸钠干燥后浓缩，粗产品经柱层析纯化。
实例18：抑制剂PF-22341066的制备
将固体100mg N-Boc化合物(VIII)溶于少量乙酸乙酯中，在0℃搅拌，加入4N HCl的乙酸乙酯溶液2mL，搅拌20分钟后，TLC检测反应完全后，减压除去溶剂，加入10mL水，以碳酸氢钠固体调节pH＝10，使用二氯甲烷萃取后干燥，浓缩，重结晶，得到PF-22341066类白色固体，收率85％；ee：99.9％(见附图2)。MS m/e 450(M+1).1HNMR(DMSO，300MHz)(见附图3)δ7.92(s，1H)，7.76(s，1H)，7.58(m，1H)，7.53(s，1H)，7.45(m，1H)，6.90(s，1H)，6.10(m，1H)，5.55(b s，1H)，4.14(m，1H)，3.05(m，2H)，2.58(m，2H)，1.94(m，1H)，1.80(d，3H)，1.76(m，1H)。