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从以下实施例中将明显看出本发明的其他特征，这些实施例是为了
阐述而不是限制本发明的。在下述实施例中，PAMAM树状聚合物是
指如美国专利No.4,507,466,4,558,120,4,568,737和4,587,329中详细
描述的基于氨核心的聚酰氨基胺树状聚合物；PAMAM(EDA)树状
聚合物是指基于乙二胺核心的聚酰氨基胺树状聚合物；而
BHAlys_xlys_ylys_z树状聚合物是指如美国专利No.4,289,872和4,410,688
中描述的基于二苯甲基胺核心和赖氨酸分支单元的聚赖氨酸不对称树
状聚合物。如美国专利No.4289872,4410688,4507466,4558120,
4568737和4578639以及国际专利申请No.WO88/01178,WO
88/01179,WO88/01180和WO95/24221中所述制得的聚酰氨基胺树状
聚合物PAMAM1.0,PAMAM2.0,PAMAM3.0,PAMAM4.0,
PAMAM5.0或更高代产物，PAMAM4.0(EDA)，以及聚赖氨酸
树状聚合物BHAlyslys₂,BHAlyslys₂lys₄,BHAlyslys₂lys₄lys₈和
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆,BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂,
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂lys₆₄，或更高代产物分别相应于上述树状聚
合物。

                       实施例1
树状聚合物与2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反应得到以磺酸结尾的树状
聚合物。
A．PAMAM1.0

将固体碳酸钠(0.13g；1.0mmol)缓慢加入2-丙烯酰氨基-2-甲基
丙磺酸(0.41g；2.0mmol)的搅拌的水(3ml)溶液中。当停止放出
气体后，该溶液的pH为8.0。然后向该溶液中加入PAMAM1.0(0.12g；
0.33mmol)的水溶液(1ml)，接着加入四滴氢氧化苄基三甲铵的40
％水溶液。然后在氮气下在60℃加热该溶液三天后将其浓缩。残余物
用凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；水)纯化，之后冷冻干燥得到磺化
PAMAM1.0树状聚合物，为米色固体(0.51g)。¹H和¹³C核磁共振
谱显示出二烷基化和一烷基化PAMAM1.0树状聚合物的混合物(约
70∶30)。¹³C nmr(D₂O):
δ31.0,31.1,37.1,37.7,41.3,48.6,51.5,53.1,53.4,55.6,56.2,61.2,61.5,178.3,
179.0,179.8。
B．PAMAM2.0

PAMAM2.0如上所述与2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反应。粗产物
用凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；水)纯化，之后冷冻干燥得到米色
固体。¹H和¹³C核磁共振谱显示出二烷基化和一烷基化PAMAM2.0
树状聚合物的混合物(约65∶35)。¹³C nmr(D₂O):
δ31.0,31.1,37.1,37.7,41.3,48.7,51.5,53.4,55.6,56.2,
61.2,61.5,178.4,179.0,179.1,179.6。

当重复上述反应但略去氢氧化苄基三甲铵时，会得到类似结果。
C．PAMAM3.0 BRI2783

PAMAM3.0如上所述与2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反应，只是使
用稍微过量的碳酸钠并略去氢氧化苄基三甲铵。¹H和¹³C核磁共振谱
显示出二烷基化和一烷基化PAMAM3.0树状聚合物的混合物(约
50∶50)。¹³C nmr(D₂O):
δ31.0,31.1,36.9,37.4,41.1,48.6,51.5,53.4,55.7,56.2,61.1,61.5,
178.2,178.9,179.0,179.8。
D．PAMAM4.0 BRI2784

PAMAM4.0如PAMAM3.0中所述与2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸
反应。¹H和¹³C核磁共振谱显示出二烷基化和一烷基化PAMAM4.0
树状聚合物的混合物(约35∶65)。¹³C nmr(D₂O):δ31.0,
31.1,36.9,37.3,41.1,48.5,51.5,53.5,55.7,56.2,61.1,61.5,178.1,178.9,179.0,
179.8。

                       实施例2
以磺乙酰胺钠结尾的树状聚合物的制备。
A．PAMAM1.0

将4-硝基苯基溴乙酸酯(0.40g；1.5mmol)的无水DMF(1ml)
溶液加入PAMAM1.0(0.18g；0.5mmol)的搅拌的DMF(3ml)溶
液中。当茚三酮试验为阴性时，所得黄色溶液在室温下搅拌20小时。
浓缩该溶液(30°/0.1mmHg)得到黄色油。该油在水和氯仿之间分配，
分离水层并用氯仿洗涤(2×)，最后用乙酸乙酯洗涤。浓缩该水溶液
(35°/25mmHg)得到溴乙酰化PAMAM1.0树状聚合物，为黄色油
(0.36g；100％)。¹³C nmr(D₂O):δ32.8,33.3,
43.0,43.5,54.4,174.5,176.4。

将亚硫酸钠(0.2g；1.6mmol)的水溶液(1ml)加入上述溴乙酰
化PAMAM1.0树状聚合物(0.36g；0.5mmol)的水(5ml)溶液中,
并将该溶液在室温下放置11天。浓缩该黄色溶液得到黄色固体
(0.60g)。¹³C nmr(D₂O):δ
34.4,43.1,43.4,54.0,61.7,171.3,177.2。

上述反应也可不分离溴乙酰化树状聚合物，而是通过简单地将亚硫
酸钠溶液加入到第一个反应中得到的粗水提取物中而进行。
B．PAMAM2.0
方法1：

将4-硝基苯基溴乙酸酯(0.18g；0.7mmol)的无水DMF(1ml)
溶液加入PAMAM2.0(0.10g；0.1mmol)的搅拌的DMF(3ml)溶
液中。当茚三酮试验为阴性时，所得黄色溶液在室温下搅拌20小时。
然后边打旋边将该溶液加入水(150ml)中，该混合物用氯仿(3X)
和乙酸乙酯萃取。将亚硫酸钠(0.1g；0.8mmol)的水(1ml)溶液加
入粗溴乙酰化树状聚合物溶液中并使该混合物在室温下放置三天。然后
浓缩该黄色溶液得到黄色固体残余物，其用凝胶过滤法(交联葡聚糖
LH20；水)纯化得到以磺乙酰胺钠结尾的PAMAM2.0树状聚合物
(103mg)。¹³C nmr(D₂O):
δ33.0,35.7，36.0,37.7,40.3,43.0,43.2,53.4,53.7,56.0,61.6,171.2,174.6,
178.5。
方法2：

将固体乙酰基硫代乙酸琥珀酰亚氨酯(67mg；0.33mmol)加入
PAMAM2.0(52mg；0.05mmol)的无水DMF(2ml)溶液中，所
得溶液在室温下搅拌2天。然后将该混合物浓缩(30°/10^-3mmHg)得
到油状残余物。该残余物在水和氯仿之间分配，分离水层并浓缩得到粘
性油(117mg)。¹H和¹³C核磁共振谱显示该油为乙酰化树状聚合物
和N-羟基琥珀酰亚胺的混合物。凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；水)
得到以乙酰基硫代乙酰胺结尾的PAMAM2.0树状聚合物的纯样品
(29mg)。¹³C nmr(D₂O):
δ34.0,34.2,37.3,43.0,43.1,43.3,53.5,54.0,56.3,175.4,177.2,177.5。

然后将上述官能化树状聚合物在40％甲酸水溶液(7ml)中的溶
液加入冰冷的新鲜制备的过甲酸(1.6mmol)的甲酸溶液(2ml)中。
该混合物在0℃搅拌1小时，然后在室温下搅拌20小时。加入小量活
性碳以分解任何过量的过酸，该混合物搅拌30分钟后过滤并浓缩得到
粘性油。

将粗产物溶于水，用碳酸氢钠水溶液将pH调节到9.0，该物质通
过交联葡聚糖G10柱而脱盐。冷冻干燥后得到白色固体(20mg)，其
光谱表明其与用方法1得到的物质本质上相同。¹³C nmr (D₂O):
δ33.0,38.7,42.9,43.0,43.1,53.9,54.3,56.5,61.6,171.2,176.4,177.0。

                       实施例3
以磺基琥珀酰胺酸钠结尾的树状聚合物的制备。
A．PAMAM1.0

将固体马来酐(0.11g；1.1mmol)加入PAMAM1.0(0.12g；
0.33mmol)的搅拌的无水DMF(3ml)溶液中.当该酐溶解时该混
合物变成棕色并轻微发热，将所得溶液在室温下搅拌过夜。然后将该溶
液浓缩(30°/10^-4mmHg)得到粘性油。¹H和¹³C(D₂O)核磁共振
谱(D₂O)显示PAMAM1.0完全转化为三酰胺和一些马来酸。
¹³C nmr(D₂O):δ33.1,42.8,43.1,54.3,135.0,137.1,169.1,171.9,173.3。

然后将粗三酰胺溶于水(4ml)并加入固体亚硫酸钠(0.20g；
1.6mmol)。使所得溶液在室温下放置4天，然后浓缩。¹H和¹³C
(D₂O)核磁共振谱显示为以区域异构的磺基琥珀酰胺酸钠结尾的
PAMAM1.0树状聚合物与一些磺基琥珀酸的1∶1混合物。该粗产物用
凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；水)纯化得到以磺基琥珀酰胺酸钠结
尾的PAMAM1.0树状聚合物的样品(107mg)。¹³C nmr(D₂O):
δ33.3.39.6,40.0,42.9,43.1,54.0,67.9,69.4,173.8,176.3,177.6,181.8。
B．PAMAM2.0

如上所述制备以区域异构的磺基琥珀酰胺酸钠结尾的PAMAM2.0
树状聚合物的混合物。¹³C nmr PAMAM2.0马来酰
胺酸衍生物(D₂O):δ32.8,33.0,38.7,42.9,53.8,54.3,56.5,135.2,136.8,169.2,
171.9,173.5,174.6。¹³C nmr PAMAM2.0磺基琥珀酰胺酸钠衍生物
(D₂O):δ37.0,40.1,41.1,43.0,43.2,43.9,53.0,53.3,55.5,68.0,69.4,173.8.
177.6,179.1,179.5,179.8.182.3。
C．PAMAM4.0 BRI6038

将固体马来酐(60mg；0.6mmol)加入PAMAM4.0(51mg；
0.01mmol)的搅拌的无水DMF(2ml)溶液中。一开始该混合物变
得混浊但很快得到澄清溶液，将其在室温下搅拌过夜。然后将该溶液浓
缩(35°/10^-4mmHg)得到粘性油。¹H和¹³C(D₂O)核磁共振谱显
示PAMAM4.0完全转化为聚酰胺和一些马来酸。然后将该粗聚酰胺溶
于水(2ml)并加入亚硫酸钠(126mg；1.0mmol)水(2ml)溶液。使
所得溶液在室温下放置2天，然后浓缩。¹H和¹³C(D₂O)核磁共振
谱显示为以区域异构的磺基琥珀酰胺酸钠结尾的PAMAM4.0树状聚
合物与一些磺基琥珀酸的混合物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖
LH20；水)纯化得到以24个区域异构的磺基琥珀酰胺酸基团结尾的
PAMAM4.0的样品(90mg)。¹H nmr(D₂O):δ2.4-
2.6；2.7-3.1；3.2-3.4；3.9-4.0。¹³C nmr(D₂O):δ36.2；39.8；40.5；43.0；43.2；53.5；
55.8；68.1；69.5；173.8；177.4；177.6；178.7；182.3。

                         实施例4
以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠结尾的树状聚合物的制备。
a．N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁基铵的制备

将固体琥珀酐(0.5g；5.0mmol)加入2-氨乙基磺酸四丁基铵
(1.83g；5.0mmol)的搅拌的无水二氯甲烷(30ml)溶液中。该琥珀
酐缓慢溶解，并将所得混浊溶液在室温下搅拌过夜。将该混合物过滤并
浓缩滤液得到粘性油(2.41g)。¹³C核磁共振谱显示完全转化为预期
的一酰胺和小量琥珀酸。通过将二氯甲烷溶液逐滴加入到大大过量的二
乙醚中而使该产物重复沉淀，从而得到N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁基
铵(1.762g；76％)，为白色固体，mp125-127℃。¹H nmr
(CDCl₃):δ0.86(t,12h,4×CH₃),1.28(m,8H,4×CH₂),1.50(m,8H,4×CH₂),2.33
(m,2H,CH₂COOH),2.44(m,2H,CH₂CONH),2.76(m,2H,CH₂NHCO),3.12(m,
8H,4×CH₂N),3.50(m,2H,CH₂SO₃),7.53(br t,1H,NH)。¹³C nmr(CDCl₃):δ
13.5,19.5,23.8,30.1,30.9,35.6,50.0,58.5,172.0,174.1。
b．4-硝苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁铵的制备

将二环己基碳化二亚胺(45mg；0.22mmol)的无水二氯甲烷
(1ml)溶液加入N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁铵(94mg；0.20mmol)
的搅拌的二氯甲烷(2ml)溶液中，该混合物在室温下搅拌过夜。将所
得悬液过滤并浓缩滤液得到粗的活性酯，其不必进一步纯化即可使用。
A．以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠结尾的PAMAM树状聚合物的制备
PAMAM4.0 BRI2786

将粗4-硝苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁铵(0.30mmol)的无
水DMF(1ml)溶液加入搅拌的PAMAM4.0(51.5mg；0.01mmol)
的50％DMF水溶液(3ml)中，并将所得黄色溶液在室温下搅拌过
夜。然后浓缩该混合物(35°/10^-5mmHg)，且黄色残余物在水和氯仿
之间分配。分离水层，用氯仿(2×)和乙酸乙酯洗涤，然后浓缩得到
黄色油(134mg)。将该粗产物通过离子交换树脂Amberlite IR120(Na)
柱而将其转化为85mg钠盐。将该物质通过凝胶过滤法(交联葡聚糖
LH20；水)进一步纯化得到以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠结尾的PAMAM
4.0树状聚合物(45mg)。¹³C nmr(D₂O):δ33.2,33.6,35.5,39.0,
39.5,42.8,43.2,53.8,54.1,54.4,56.6,176.5,176.9,177.2,178.9,179.4。

类似地制备相应的以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠基团结尾的
PAMAM1.0和PAMAM3.0(BRI2785)树状聚合物。
¹³C nmr PAMAM3.0衍生物(D₂O):δ33.4,35.5,39.0,39.5,42.9,43.2,53.8,
54.1,54.3,56.5,176.4,176.9,177.4,178.9,179.4。
¹³C nmr PAMAM1.0衍生物(D₂O):δ34.9,35.5,39.5,42.9,43.1,53.7,54.1,
179.0,179.1,179.3。
B．以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠结尾的聚赖氨酸树状聚合物的制备
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆ BRI2789

将三氟乙酸(1ml)加入BHAlyslys₂lys₄lys₈DBL₁₆(36.5mg；
5.0μmol)的无水二氯甲烷(1ml)悬液中，并将所得溶液在氮气下在
室温下搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶于干燥DMSO(2ml)并
用三乙胺将pH调节到8.5。然后滴加粗4-硝苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰
胺酸四丁铵(约0.2mmol)的DMSO溶液(1ml)并将该混合物在室
温下搅拌过夜。浓缩该黄色溶液(50°/10^-5mmHg)，且黄色残余物在
水和氯仿之间分配。分离水层，用氯仿(3×)和乙酸乙酯洗涤，然后
浓缩得到油(99mg)。将该粗产物通过离子交换树脂Amberlite
IR120(Na)柱而将其转化为81mg钠盐。将该物质通过凝胶过滤法(交
联葡聚糖LH20；水)进一步纯化得到以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠结尾
的BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆树状聚合物(39mg)。
¹³C nmr(D₂O):δ27.0,32.3,35.2,35.3,
35.6,35.7,39.5,43.5,54.1,58.5,131.5,132.0,133.3,145.1,177.8,178.0,178.4,
178.8,178.9,179.2,179.7,179.8。

类似地制备相应的以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠基团结尾的
BHAlyslys₂,BHAlyslys₂lys₄(BRI2787)和BHAlyslys₂lys₄lys₈
(BRI2788)树状聚合物。
¹³C nmr BHAlyslys₂lys₄lys₈衍生物(D₂O):δ26.9,32.3,35.1,35.3,35.6,35.7,
39.5,43.5,54.1,58.5,131.6,131.9,132.2,132.3,133.2,133.3,145.0,145.2,177.2,
177.8,177.9,178.0,178.2,178.3,178.6,178.7,178.8,178.9,179.2,179.3,179.7,
179.8。
¹³C nmr BHAlyslys₂1ys₄ 衍生物(D₂O):δ26.9,32.3,35.1,35.4,35.7,35.8,39.5,
43.5,54.1,58.5,61.8,131.7,132.0,132.2,132.3,133.2,133.3,145.0,145.1,177.3,
178.0,178.3,178.4,178.7,178.9,179.0,179.3,179.7,179.8。
¹³C nmr BHAlyslys₂衍生物(D₂O):δ26.9,27.1,32.2,32.3,34.7,34.8,35.1,
35.3,35.6,35.7,39.5,43.4,54.1,58.6,61.8,131.7,131.9,132.2,132.3,133.3,
144.9,145.0,177.7,178.4,178.8,179.0,179.3,180.0。

                       实施例5
以4-磺苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
A．PAMAM4.0 BRI2791

将固体4-磺苯基异硫氰酸钠一水合物(500mg；1.96mmol)加入
PAMAM4.0(300mg；0.0582mmol)的水(10ml)溶液中，并将所
得溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，黄色固
体残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分
并冷冻干燥得到以4-磺苯基硫脲钠结尾的PAMAM4.0树状聚合物，为
松散的白色固体(370mg)。
¹H nmr(D₂O):δ2.28；2.52；2.69；3.15；3.27；3.60；7.32(d,
J=9Hz)；7.72(d,J=9Hz)。¹³C nmr(D₂O):δ36.9；41.1；43.1；48.3；53.6；55.8；
129.0；131.1；144.4；178.5；179.1；184.4。

类似地制备相应的分别以3、6、12和48个4-磺苯基硫脲钠基团
结尾的PAMAM1.0,PAMAM2.0(BRI2790),PAMAM3.0和
PAMAM5.0(BRI2991)树状聚合物。
B．PAMAM4.0(EDA)BRI6045

将固体4-磺苯基异硫氰酸钠一水合物(130mg；0.5mmol)加入
PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmo1)的水(4ml)溶液中，
并将所得溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，
固体残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级
分并冷冻干燥得到以32个4-磺苯基硫脲钠基团结尾的PAMAM4.0，
为松散的白色固体(136mg)。
¹H nmr(D₂O):δ2.30；2.50；2.70；3.18；3.62；7.35(d,J=9Hz)；7.72(d,
J=9Hz)。¹³C nmr(D₂O):δ36.8；41.0；43.1；48.4；53.6；55.7；128.9；131.0；144.3；
178.5；179.0；184.5。
C．BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆ BRI2792

在氮气下，将三氟乙酸(4ml)加入BHAlyslys₂lys₄lys₈DBL₁₆
(0.73g；0.1mmol)的无水二氯甲烷(4ml)悬液中。观察到在短时
间内有大量气体放出，将所得溶液在室温下搅拌2小时，然后浓缩。将
残余糊浆溶于水(5ml)，让该溶液通过Amberlite IRA-401(OH)柱并
将滤液浓缩得到BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆，为粘性油(0.49g)。将该
油再次溶于水(5ml)并加入N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；
3ml)。然后加入固体4-磺苯基异硫氰酸钠一水合物(1.30g；
5.1mmol)并将所得溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓
缩该溶液，棕色固体残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯
化。合并纯的级分，通过Amberlite IR 120(Na)柱并冷冻干燥得到以4-
磺苯基硫脲钠结尾的BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆树状聚合物，为松散的白
色固体(374mg)。¹H nmr(D₂O):δ1.40；1.72；3.08；3.42；
4.24；4.60；7.30；7.40(d,J=9Hz)；7.78(d,J=9Hz)。¹³C nmr(D₂O):δ27.3；32.5；
35.9；43.7；48.9；58.6；63.3；128.8；131.0；143.7；144.7；145.1；177.7；178.1；183.8；
185.2。

类似地制备相应的分别以16、64和128个4-磺苯基硫脲钠基团结
尾的BHAlyslys₂lys₄lys₈,BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂(BRI2992)和
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂lys₆₄(BRI2993)树状聚合物。

                       实施例6
以3,6-二磺萘基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
A．PAMAM4.0 RRI2923

将固体3,6-二磺萘基异硫氰酸钠(160mg；0.41mmol)加入
PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(3ml)溶液中，并将所得溶
液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，棕色固体残
余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分并浓
缩得到以3,6-二磺萘基硫脲钠结尾的PAMAM4.0树状聚合物，为棕色
固体(73mg)。

¹H nmr(D₂O):δ2.30；2.60；2.74；3.20；3.57；7.75；7.86；8.28。¹³C nmr
(D₂O):δ35.0；39.9；43.1；48.1；53.8；56.1；128.4；128.6；129.3；131.0；131.3；136.0；
136.8；138.2；145.5；146.0；177.2；177.8；185.5。

类似地制备相应的以3,6-二磺萘基硫脲钠基团结尾的PAMAM2.0
树状聚合物。
B．PAMAM4.0(EDA)BRI6046

将固体3,6-二磺萘基异硫氰酸钠(220mg；0.57mmol)加入
PAMAM4.0(EDA)(74mg；0.01mmol)的水(4ml)溶液中，
并将所得溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，
棕色固体残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯
的级分并浓缩得到以32个3,6-二磺萘基硫脲钠基团结尾的PAMAM
4.0，为黄褐色固体(148mg)。

¹H nmr(D₂O):δ2.30；2.80；3.20；3.54；7.74；7.85；8.25。¹³C nmr(D₂O):
δ36.0；40.8；43.1；48.3；53.6；55.9；128.5；129.4；131.0；131.3；136.0；136.8；138.3；
145.5；146.0；178.2；185.6。
C．BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆ BRI2999

在氮气下，将三氟乙酸(2ml)加入BHAlyslys₂lys₄lys₈DBL₁₆
(73mg；0.01mmol)的无水二氯甲烷(2ml)悬液中。观察到在短时
间内有大量气体放出，将所得溶液在室温下搅拌2小时，然后浓缩。将
残余糊浆溶于水(5ml)，让该溶液通过Amberlite IRA-401(OH)柱并
将滤液浓缩得到BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆，为粘性油。将该油再次溶于
水(5ml)并加入N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；3ml)。然
后加入固体3,6-二磺萘基异硫氰酸钠(234mg；0.60mmol)并将所得
溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，棕色固体
残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分，
通过Amberlite IR 120(Na)柱并冷冻干燥得到以32个3,6-二磺萘基硫
脲钠基团结尾的BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆树状聚合物，为松散的米色固
体(119mg)。¹H nmr(D₂O):δ1.0-2.0；3.18；3.43；
4.31；7.22；7.80；7.89；8.25。¹³C nmr(D₂O):δ27.2；32.4；35.3；43.7；49.0；58.5；
63.6；128.4；129.1；131.4；136.1；136.6；138.6；139.0；145.1；145.6；178.4；184.8；
186.7。   

                       实施例7
以4-磺萘基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0 BRI2997

将固体4-磺萘基异硫氰酸钠(180mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0
(51mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中，并将该混合物在氮气下在
53℃加热2小时，然后冷却。从所得悬液中减压馏去水，米色固体残
余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分并冷
冻干燥得到以4-磺萘基硫脲钠结尾的PAMAM4.0树状聚合物，为松散
的白色固体(60mg)。¹H
nmr(D₂O):δ2.20；2.60；3.14；3.48；7.23；7.47；7.56；7.77；7.93(d,J=6Hz)；8.56(d,
J=6Hz)。¹³C nmr(D₂O):δ 35.8；40.5；43.1；48.4；53.6；55.9；127.6；128.6；130.3；131.9；
132.5；133.5；134.7；140.5；142.7；177.8；178.0；185.4。

                       实施例8
以3,5-二磺苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0 BRI6039

将固体3,5-二磺苯基异硫氰酸钠(110mg；0.32mmol)加入
PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)的水(3ml)溶液中，并将所得
溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，棕色固体
残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G25；水)纯化。合并纯的级分并
浓缩得到以24个3,5-二磺苯基硫脲钠基团结尾的PAMAM4.0，为米
色固体(110mg)。¹H nmr(D₂O):δ2.53；3.08；
3.36；3.66；7.90；7.95。¹³C nmr(D₂O):δ 34.8；41.0；43.1；48.0；53.7；56.2；124.1；128.6；
143.5；148.8；177.6；185.0。

                        实施例9
以3,6,8-三磺萘基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0 BRI2998

将固体3,6,8-三磺萘基异硫氰酸钠(250mg；0.5mmol)加入
PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)和N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液
(pH9.5；1ml)的水(2ml)溶液中，并将该混合物在氮气下在53℃
加热2小时，然后冷却。将该混合物减压浓缩得到橙色固体。将残余固
体溶于水(2ml)并通过Amberlite IR-120(Na)短柱。然后浓缩滤液，
残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分并
冷冻干燥得到以3,6,8-三磺萘基硫脲钠结尾的PAMAM4.0树状聚合
物，为米色固体(102mg)。
¹H nmr(D₂O):δ2.65；3.02；3.30；3.66；8.05；8.42；8.59；8.67。¹³C nmr
(D₂O):δ33.2；38.7；43.2；43.7；47.8；54.0；54.3；56.7；131.0；131.3；131.9；135.9；138.0；
139.6；143.8；144.1；145.6；176.2；176.5；186.0。

                       实施例10
以4-(磺甲基)苯甲酰胺钠结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0 BRI6040

将固体4-硝苯基4-(氯甲基)苯甲酸酯(200mg；0.68mmol)加入
PAMAM4.0(70mg；0.014mmol)的搅拌的无水DMSO(4ml)溶
液中，并将所得黄色溶液在室温下搅拌2小时。然后浓缩(10^-4mmHg；
40℃)该溶液，残余物用水和二氯甲烷(1∶1)的混合物萃取。将剩下
的固体物质溶于DMSO(5ml)并加入亚硫酸钠(130mg；1mmol)
的水(3ml)溶液。将所得到的微混浊的混合物放置4天，之后加入水
(2ml)，由此形成澄清的均质的黄色溶液。然后浓缩该溶液，首先在
25mmHg和40℃条件下，然后在10^-4mmHg和50℃条件下浓缩得到
粗产物。粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G25；水)纯化得到以24
个4-(磺甲基)苯甲酰胺钠基团结尾的PAMAM4.0(24mg)。
¹H nmr(D₂O):δ
2.25；2.66；3.08；3.20；3.33；3.38；4.01；7.40(br d)；7.62(br d)。¹³C nmr(D₂O):δ 36.7；
40.9；43.0；43.6；53.5；55.5；61.0；131.6；135.0；137.2；140.4；174.5；178.6；179.2。

                       实施例11
以4-磺基苯甲酰胺结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0(EDA)BRI6116

将固体N-羟基琥珀酰亚氨基4-磺基苯甲酸钾(100mg；
0.3mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(35mg；0.005mmol)的0.1M pH8.5
硼酸盐缓冲溶液(5ml)中，并将该溶液在室温下搅拌2小时。在此阶
段所得奶状溶液的pH为4.5。然后加入1M碳酸钠溶液(1ml)得到
澄清溶液，将其浓缩得到白色固体粗产物。该粗产物用凝胶过滤法(交
联葡聚糖G25；水)纯化得到以32个4-磺基苯甲酰胺钠基团结尾的
PAMAM4.0(EDA)(47mg)。¹H nmr(D₂O):δ2.25；2.42；
2.63；3.05；3.18；3.31；3.38；7.72(d,J=8Hz)；7.78(d,J=8Hz)。¹³C nmr(D₂O):δ36.0；40.4；
43.0；43.7；53.7；55.8；130.2；132.2；140.4；150.1；173.6；178.0；178.5。

                      实施例12
以N-(4-磺苯基)丙酰胺钠结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0(EDA)BRI6117

将固体N-(4-磺苯基)丙烯酰胺钠(250mg；1mmol)和固体碳酸钠
(106mg；1mmol)依次加入PAMAM4.0(EDA)(78mg；
0.011mmol)的搅拌的水(4ml)溶液中。所得溶液在氮气下搅拌4
天，然后冷冻干燥得到松散的白色固体。该粗产物用凝胶过滤法(交联
葡聚糖LH20；水)纯化得到以64个N-(4-磺苯基)丙酰胺钠基团结尾
的PAMAM4.0(EDA)(206mg)。¹³C核磁共振谱显示有一烷基化末
端氨基的弱痕迹。¹H nmr(D₂O):δ2.10；2.48；
2.58；2.79；3.20；7.42(d,J=7Hz)；7.65(d,J=7Hz)。¹³C nmr(D₂O):δ 36.5；37.9；41.1；53.4；
55.6；124.8；130.9；143.0；144.2；177.4；178.5。

                     实施例13
以4-磺苯基脲钠结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0(EDA)BRI6115

将磺胺酸钠(195mg；1mmol)的无水DMSO(3ml)溶液滴加
到N,N’-二琥珀酰亚胺碳酸酯(530mg；2mmol)的无水DMSO溶液
(4ml)中，并将所得棕色溶液在室温下搅拌20小时。加入PAMAM
4.0(EDA)(75mg；0.011mmol)的无水DMSO(1ml)溶液并将该溶
液再搅拌18小时。然后在高真空下浓缩该溶液(10^-5mmHg；35℃)
得到黄色半固体。将该粗产物溶于DMSO(4ml)并将该溶液加入到
200ml充分搅拌的乙酸乙酯中。通过过滤收集沉淀出的白色固体并用乙
酸乙酯(2×)和乙醚(2×)洗涤，然后干燥得到白色粉末(275mg)。
该物质进一步用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到以32
个4-磺苯基脲钠基团结尾的PAMAM4.0(EDA)(106mg)。
¹H nmr(D₂O):δ2.31；2.55；2.75；3.19；7.32(d,
J=9Hz)；7.63(d,J=9Hz)。¹³C nmr(D₂O):δ36.3；40.7；43.3；43.8；53.7；55.7；123.3；130.9；
140.9；146.0；161.4；178.2；178.6。

                      实施例14
以N,N,N-三甲基氯化甘氨酰胺结尾的树状聚合物的制备
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆ BRI2922

将三氟乙酸(4ml)加入BHAlyslys₂lys₄lys₈DBL₁₆(220mg；
30μmol)的无水二氯甲烷(2ml)悬液中，并将所得溶液在氮气下在
室温搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶于干燥DMSO(5ml)并用
三乙胺将pH调节到85。然后加入固体4-硝苯基N,N,N-三甲基氯化甘
氨酸酯(0.50g；1.8mmol)并将该混合物在室温下搅拌过夜。然后浓
缩该混浊溶液(50°/10^-5mmHg)，残余物在水和二氯甲烷之间分配。
分离水层，用二氯甲烷(3×)和乙酸乙酯洗涤，然后浓缩得到油
(1.128g)。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化
得到以N,N,N-三甲基甘氨酰胺结尾的BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆树状聚合
物(116mg)。¹³C nmr(D₂O):δ25.5,30.5,30.8,33.4,42.1,56.5,57.1,67.5,68.1,
166.7,167.0,167.1,176.0,176.2。

                      实施例15
以4-三甲铵苯甲酰胺结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0 BRI6043

将1,1’-羰基二咪唑(85mg；0.52mmol)加入4-三甲铵苯甲酸碘化
物(154mg；0.5mmol)的无水DMF(4ml)溶液中并将该混合物在
氩气下在室温搅拌2小时。在此期间有白色固体与该溶液分离。然后加
入PAMAM4.0(58mg；0.011mmol)的无水DMF(2ml)溶液并
将该混合物在室温下搅拌过夜。这一阶段后大部分沉淀已溶解,且该溶
液的茚三酮试验为阴性。浓缩该混合物(10^-4mmHg；30℃)得到白
色固体残余物。粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；10％
AcOH)纯化得到以24个4-三甲铵苯甲酰胺基团结尾的PAMAM4.0,
为乙酸盐(89mg)。¹H nmr(D₂O):δ1.96；2.65-2.85；3.25-3.55；3.64；7.92。
¹³C nmr(D₂O):δ25.8；33.1；33.5；38.7；43.1；43.5；53.5；54.1；56.4；61.2；124.8；133.6；
139.9；153.2；173.2；176.3；176.8；182.6。

类似地制备以6个4-三甲铵苯甲酰胺基团结尾的相应的PAMAM
2.0树状聚合物。

                       实施例16
以4-(三甲铵甲基)苯甲酰胺结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0 BRI6044

将固体4-硝苯基4-(氯甲基)苯甲酸酯(150mg；0.5mmol)加入搅
拌的PAMAM4.0(52mg；0.01mmol)的无水DMSO(3ml)溶液
中。当茚三酮试验为阴性(pH约8.5)时，将所得黄色溶液在室温下
搅拌20小时。然后浓缩该溶液(10^-5mmHg；40℃)，残余物用水和
二氯甲烷的混合物(1∶1)振摇。通过过滤收集不溶的凝胶样物质，用
水(2×)和二氯甲烷(2×)洗涤，然后空气干燥。将粗的以4-(氯
甲基)苯甲酰胺结尾的树状聚合物溶于25％三甲胺水溶液(20ml)中
并将该黄色溶液放置过夜。然后浓缩该溶液，残余物溶于水(5ml)并
让该溶液通过Amberlite IRA-401(OH)柱。将无色的滤液浓缩得到粘性
油，其用凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；10％AcOH)纯化得到以24
个4-(三甲铵甲基)苯甲酰胺基团结尾的PAMAM4.0(90mg)。

¹H nmr(D₂O):δ1.88；2.65-2.80；2.98；3.10-3.60；7.52(br d,J=9Hz)；7.72
(br d,J=9Hz)。¹³C nmr(D₂O):δ26.6；33.4；38.8；43.2；43.5；53.6；53.6；54.1；56.8；
62.8；73.0；132.1；135.3；137.5；140.0；176.4；176.9；183.6。

                       实施例17
以N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲铵)甲基羧酰胺结尾的树状聚合物的
制备
PAMAM4.0

将固体1,1'-羰基二咪唑(85mg；0.52mmol)加入N-(2-乙酰氧基
乙基)-N-(羧甲基)-N,N-二甲基溴化铵(135mg；0.5mmol)的无水DMF
(3ml)溶液中并将所得溶液在氮气下搅拌2小时。然后加入PAMAM
4.0(60mg；0.012mmol)的DMF(2ml)溶液，这使得立即形成了
絮状沉淀，随后又缓慢溶解。将该混合物搅拌2天，然后浓缩(10
^-4mmHg；40℃)得到粘性油。粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；
10％AcOH)纯化得到以24个N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲铵)甲
基羧酰胺基团结尾的PAMAM4.0(64mg)。¹H
nmr(D₂O):δ1.93；2.05；2.70；3.10-3.60；3.28；3.93(m)；4.14；4.48(m)。¹³C nmr
(D₂O):δ24.6；26.2；33.2；38.7；42.8；42.9；53.9；57.4；62.6；67.3；67.5；168.9；
176.4；176.8；177.3；183.2。

                      实施例18
以胍基结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0 BRI6042

将PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)和甲基硫代硫酸假脲
(170mg；0.61mmol)的水(5ml)溶液(pH 10.5)在氮气下在80℃
加热2小时。然后浓缩该溶液，残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；
10％AcOH)纯化得到以24个胍基结尾的PAMAM4.0，为乙酸盐
(107mg)。¹H nmr(D₂O):δ2.00；2.80(brt)；3.09
(brt)；3.32,3.45(brt)；3.60(brt)。¹³C nmr(D₂O):δ25.2；33.2；33.4；38.7；41.2；
42.6；43.4；44.7；53.5；54.0；56.3；176.5；176.7；176.9；181.6。

类似地制备相应的以6个胍基结尾的PAMAM 2.0树状聚合物。

                         实施例19
以4-([1,4,8,11-四氮杂环十四烷]甲基)苯甲酰胺结尾的树状聚合物的制
备
PAMAM4.0 BRI6041

将1-(4-羧苯基)甲基-1,4,8,11-四氮杂环十四烷四盐酸化物(120mg；
0.25mmol),N-羟基琥珀酰亚胺(60mg；0.52mmol)和1-(3-二甲氨
基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸化物(250mg；1.3mmol)在pH7磷酸
盐缓冲液(10ml)中的溶液在室温下放置1小时，然后加入PAMAM
4.0(32mg；0.006mmol)在pH7磷酸盐缓冲液(10ml)中的溶液。
将该混合物放置2天，然后浓缩。残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖
LH20；10％AcOH)纯化得到用¹H和¹³C核磁共振谱确定的以约12
个4-([1,4,8,11-四氮杂环十四烷]甲基)苯甲酰胺基团结尾的PAMAM
4.0(80mg)。然后将该产物溶于水并通过Amberlite IRA-401(Cl)树
脂柱，之后浓缩。将残余物溶于水(1ml)，加入浓盐酸(1ml)，
该溶液用乙醇(30ml)稀释以沉淀出白色固体。通过过滤收集该固体
(68mg)。再次进行¹H和¹³C核磁共振测定显示了末端氨基的约50
％官能化。¹H nmr(D₂O):δ2.17；2.36；
2.50；2.78；2.85；3.25；3.40；3.50；3.60,3.62；4.49；7.63(br d)；7.78(br d)。¹³C nmr
(D₂O):δ22.7；23.1；33.2；38.8；39.9；40.2；40.3；41.0；41.2；42.0；42.9；43.2；43.6；
45.5；46.1；49.1；52.2；53.9；54.3；56.6；62.7；132.5；135.7；137.1；139.7；174.3；
176.2；176.3；176.7；177.0；178.2；178.5。

                       实施例20
以4-羧基-3-羟基苄胺结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0(EDA)BRI6119

将氰基硼氢化钠(32mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(EDA)
(69mg；0.01mmol),4-甲酰-2-羟基苯甲酸(83mg；0.5mmol)和
碳酸氢钠(42mg；0.5mmol)在水(4ml)中的混合物中。将该非均
质的橙色混合物在室温下搅拌4小时，在此期间其变为均质的。然后浓
缩该橙色溶液，残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得
到以约32个4-羧基-3-羟基苄胺基团结尾的PAMAM4.0(EDA)
(91mg)。¹H和¹³C(D₂O)核磁共振谱显示末端氨基多数为一烷
基化，但有一些表现为二烷基化，两个谱均显示为宽峰。
¹³C nmr(D₂O):δ37.0；
41.1；50.9；53.4；55.5；55.8；61.5；120.9；122.2；122.4；132.3；132.7；135.0；135.8；
163.5；163.7；169.0；178.6；179.3。¹H nmr(D₂O):δ 2.20；2.35；2.60；3.15；3.30；
3.55；4.25；6.68；7.12；7.55。

                     实施例21
以4-羧苯基酰胺结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0(EDA)

将固体4-羧苯基异硫氰酸盐(86mg；0.48mmol)加入PAMAM
4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(20ml)溶液中。用饱和碳酸氢
钠溶液将所得混浊溶液的pH调节到9，然后在室温下搅拌24小时。
将该反应混合物过滤，滤液浓缩得到白色固体残余物，其用凝胶过滤法
(交联葡聚糖LH20；水)纯化，然后冷冻干燥得到白色松散固体产物
(68mg)。

                       实施例22
以3,5-二羧苯基酰胺结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0(EDA)

将固体3,5-二羧苯基异硫氰酸盐(112mg；0.5mmol)加入
PAMAM4.0(EDA)(70mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中。用1M
Na₂CO₃溶液将所得混浊溶液的pH调节到10，然后在氮气下在53℃
加热2小时。将该反应混合物过滤，滤液浓缩得到棕色固体残余物，其
用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化，然后冷冻干燥得到淡棕
色固体产物(112mg)。

                      实施例23
以4-膦酰氧基苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0(EDA)

将固体4-膦酰氧基苯基异硫氰酸钠(251mg)加入PAMAM
4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(20ml)溶液中。将所得溶液(pH
9)在氮气下在室温搅拌24小时。将该反应混合物浓缩得到白色固体
残余物，其用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化，然后冷冻干
燥得到松散的白色固体产物(86mg)。

                       实施例24
以4-(膦酰甲基)苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0(EDA)

将固体4-(膦酰甲基)苯基异硫氰酸钠(97mg)加入PAMAM
4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(30ml)溶液中。所得溶液在氮
气下在室温搅拌3天，定期加入饱和碳酸氢钠溶液以维持pH为8。将
该反应混合物浓缩得到白色固体残余物，其用凝胶过滤法(交联葡聚糖
LH20；水)纯化，然后冷冻干燥得到松散的白色固体产物(102mg)。

                       实施例25
以4-(膦酰甲基)苯基硫脲乙酯钠结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0(EDA)

将固体4-(膦酰甲基)苯基异硫氰酸乙酯钠(109mg)加入PAMAM
4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的DMF(30ml)溶液中。所得溶液
在氮气下在室温搅拌17小时，定期加入饱和碳酸氢钠溶液以维持pH
为8。将该反应混合物浓缩得到白色固体残余物，其用凝胶过滤法(交
联葡聚糖LH20；水)纯化，然后冷冻干燥得到松散的白色固体产物
(30mg)。

                      实施例26
以4-磺苯基硫脲钠结尾的聚赖氨酸的制备

将固体4-磺苯基异硫氰酸钠一水合物(2.55g；10mmol)加入聚-
L-赖氨酸(15-30K)(Sigma化学公司)(1.0g)在水(20ml)
和N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；15ml)的混合物中的溶液
中。当茚三酮试验为阴性时，将所得混合物在氮气下在53℃加热3小
时。将冷却后的混合物过滤，滤液浓缩得到灰色固体残余物。将该固体
残余物再溶于水并通过离子交换树脂Amberlite IR 120(Na)柱，然后浓
缩。粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化并冷冻干燥得
到以4-磺苯基硫脲钠结尾的聚-L-赖氨酸BRI2995，为白色松散固体
(1.25g)。

类似地制备分子量级分1-4K BRI2994、4-15K BRI2967、
150-300K BRI2996的以4-磺苯基硫脲钠结尾的聚赖氨酸。

                       实施例27
以3,6-二磺萘基硫脲钠结尾的聚赖氨酸的制备。

将固体3,6-二磺萘基异硫氰酸钠(200mg；0.51mmol)加入聚-L-
赖氨酸(15-30K)(50mg)在水(2ml)和N,N-二甲基-N-烯丙
胺缓冲液(pH9.5；2ml)的混合物中的溶液中。当茚三酮试验为阴性
时，将所得混合物在氮气下在53℃加热3小时。将冷却后的混合物过
滤，滤液浓缩得到棕色固体残余物。将该固体残余物再溶于水并通过离
子交换树脂Amberlite IR 120(Na)柱，然后浓缩。粗产物用凝胶过滤法
(交联葡聚糖LH20；水)纯化并冷冻干燥得到以3,6-二磺萘基硫脲钠
结尾的聚-L-赖氨酸BRI6047，为白色松散固体(87mg)。

                     实施例28
以C_n-烷基连接的2-硫代唾液糖苷(thiosialoside)结尾的树状聚合物和
直链聚合物的制备

用下述方法制备[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-
四-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃
糖苷酸]甲酯。

向5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-2-S-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代
-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖酸甲酯(Hasegawa等人，
1986)(100mg)的无水二甲基甲酰胺(1ml)溶液中加入8-溴辛酸
(41mg)和二乙胺(280mg)，该溶液在20℃搅拌17小时。真空
除去溶剂，残余物在乙酸乙酯和冰冷的5％盐酸之间分配。有机层用水
洗涤，用硫酸钠干燥，并蒸发得到残余物(130mg)。将其溶于乙酸
乙酯(5ml)中并加入N-羟基琥珀酰亚胺(26mg)和二环己基碳化
二亚胺(46mg)。该混合物在20℃搅拌17小时，然后滤除白色沉淀。
将滤液浓缩并用快速硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯洗脱。将含有产物的
洗脱级分合并，蒸发得到白色泡沫97mg。71％。

类似地制备：

[(11-十一烷酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰
基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲
酯。

[(乙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-
二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯。

[(4-丁酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-
3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯。

[(4-甲基苯甲酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙
酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲
酯。
A．PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-
D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]₃₂ BRI6112

在惰性气氛下，向PAMAM[EDA]4.0(50mg)的无水二甲亚砜
溶液(4ml)中加入[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-
四-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃
糖苷酸]甲酯(300mg)，并将该溶液在20℃搅拌60小时。真空除去
溶剂，将残余物溶于甲醇(2ml)。该溶液用交联葡聚糖LH20进行体
积排阻色谱，用甲醇洗脱。蒸发溶剂得到产物PAMAM[EDA]4.0[(8-
辛酰氨基)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油
基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯]₃₂，为白色粉末。182mg。
93％

用下述方法将其转化为游离的唾液糖苷(sialoside)：

在氨气下在20℃，向PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)5-乙酰氨
基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-
nonulo吡喃糖苷酸]甲酯]₃₂(182mg)的无水甲醇(3ml)溶液中加
入新鲜制备的0.19M甲醇钠的甲醇溶液(7ml)并将该混合物搅拌2.5
小时。蒸除溶剂，将残余物溶于水(10ml)并搅拌3小时。该溶液用
交联葡聚糖LH20进行体积排阻色谱，用水洗脱。冷冻干燥后得到产物
PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘
油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]₃₂，为淡柠檬色粉末110mg。
77％

用类似方法制备：

PAMAM[EDA]4.0[(11-十一酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫
代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]₃₂ BRI6147

PAMAM[EDA]4.0[(乙酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-
甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]₃₂ BRI6121

PAMAM[EDA]4.0[(4-甲基苯甲酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-
硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]₃₂ BRI6120
B．BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代
-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]₃₂ BRI6169

将BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆(t-Boc)₃₂(20.3mg)在三氟乙酸(2ml)
和二氯甲烷(2ml)的混合物中的溶液在20℃下搅拌2小时，然后真
空除去溶剂。将残余物溶于干燥的二甲亚砜(1ml)并加入二-异丙基
乙胺(25mg)和[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四
-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖
苷酸]甲酯(78mg)。将该混合物在氩气下在20℃搅拌60小时，然
后真空除去溶剂。将残余物溶于新鲜制备的甲醇钠的0.1M甲醇溶液
(2.5ml)并将该混合物在氩气下在20℃搅拌3小时。蒸除溶剂，将
残余物溶于水(1ml)并搅拌17小时。该溶液用交联葡聚糖LH20进
行体积排阻色谱，用水洗脱。冷冻干燥后得到产物
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-
D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]₃₂，为白色粉末44mg。86
％。
C．聚-L-赖氨酰[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基
-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]_nBRI6150

向聚-L-赖氨酸．HBr MW 150-300Kd(22mg)的无水二甲亚砜
(1ml)溶液中加入二异丙基乙胺(15mg)和[(8-辛酸N-羟基琥珀酰
亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-
α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯(90mg)。该混合物在氩气下
在20℃搅拌60小时，然后真空除去溶剂。将残余物溶于新鲜配制的甲
醇钠的0.5M甲醇溶液(4ml)并将该混合物在氢气下在20℃搅拌48
小时。蒸除溶剂，将残余物溶于水(1.5ml)并搅拌24小时。该溶液
用交联葡聚糖LH20进行体积排阻色谱，用水洗脱。冷冻干燥后得到产
物聚赖氨酰[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-
D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]_n，为白色粉末49mg。94％。

                      实施例29
在唾液酸的4位有修饰的树状唾液糖苷的制备

用下述方法制备4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-2-S-乙酰
基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖酸甲
酯。向4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-2-氯-3,4,5-三脱氧-D-
甘油基-β-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖酸甲酯(Sabesan,1994)(5g)
的无水二氯甲烷溶液(150ml)中加入精细粉碎的硫羟乙酸钾
(5.8g)，并将该悬液在20℃用力搅拌48小时。将该混合物过滤并
蒸发得到浅棕色泡沫(5.2g)。用制备型反相HPLC[C₁₈,30％乙腈/
水]分离出所需产物，为白色泡沫3.9g。72％

用下述方法制备[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)4-叠氮基-5-乙酰氨
基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-
nonulo吡喃糖苷酸]甲酯。

向4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-2-S-乙酰基-3,4,5-三脱
氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖酸甲酯(300mg)的
无水二甲基甲酰胺(3.5ml)溶液中加入8-溴辛酸(115mg)和二乙
胺(1.26ml)，该溶液在20℃搅拌17小时。真空除去溶剂，残余物
在乙酸乙酯和冰冷的10％盐酸之间分配。有机层用水洗涤，用硫酸钠
干燥，并蒸发得到黄色泡沫(385mg)。将其溶于乙酸乙酯(20ml)
中并加入N-羟基琥珀酰亚胺(95mg)和二环己基碳化二亚胺
(175mg)。该混合物在20℃搅拌17小时，然后滤除白色沉淀。将
滤液浓缩并用制备型反相HPLC[C₁₈,30％乙腈/水]纯化，得到白色泡
沫340mg。83％。
A．PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-叠氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱
氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]₃₂ BRI6146

在惰性气氛下，向PAMAM[EDA] 4.0(72mg)的无水二甲亚砜
溶液(5ml)中加入[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)4-叠氮基-5-乙酰氨
基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-
nonulo吡喃糖苷酸]甲酯(318mg)，并将该溶液在20℃搅拌60小时。
真空除去溶剂，将残余物溶于甲醇(2ml)。该溶液用交联葡聚糖LH20
进行体积排阻色谱，用甲醇洗脱。蒸发溶剂得到产物PAMAM[EDA]
4.0[[(8-辛酰氨基)4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脱
氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯]₃₂，为白
色泡沫。225mg。81％

用下述方法得到游离的唾液糖苷：

在氩气下在20℃，向PAMAM[EDA] 4.0[[(8-辛酰氨基)4-叠氮基
-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半
乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯]₃₂(215mg)的无水甲醇溶液(1ml)
中加入新鲜制备的甲醇钠的1M甲醇溶液(1ml)并将该混合物搅拌3
小时。蒸除溶剂，将残余物溶于水(2ml)并搅拌17小时。该溶液用
交联葡聚糖LH20进行体积排阻色谱，用水洗脱。冷冻干燥后得到产物
PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-叠氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-
2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]₃₂，为松散的白色
粉末160mg。90％
B．PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-
2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]₃₂ BRI6149

在20℃下，将硫化氢气流缓慢通入PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨
基)-4-叠氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-
2-nonulo吡喃糖苷酸]₃₂(25mg)在吡啶(40ml)和水(20ml)的
混合物中的溶液中，持续5天。然后向该溶液中通入氮气2小时以除去
过量的硫化氢。将该溶液蒸发至干，残余物溶于水(5ml)并通过
0.45μm膜滤器过滤以除去硫。冷冻干燥后得到产物PAMAM[EDA]
4.0[(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-
D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]₃₂，为松散的白色粉末23mg。96％

                      实施例30
以硼酸结尾的树状聚合物的制备。
4-羧苯基硼酸N-羟基琥珀酰亚胺酯

向4-羧苯基硼酸(500mg)的无水二甲基甲酰胺(5ml)溶液中
加入N-羟基琥珀酰亚胺(380mg)和二环己基碳化二亚胺(680mg)，
并将该混合物在20℃搅拌64小时，然后滤除白色沉淀。真空除去溶剂，
残余物溶于乙酸乙酯(100ml)。该溶液用水洗涤，用硫酸钠干燥并
蒸发得到白色固体，将其从乙腈/水中结晶，得到细针状体730mg。92
％
PAMAM[EDA]4.0[4-苯甲酰氨基硼酸]₃₂ BRI6160

在惰性气氛下，向PAMAM[EDA]4.0(69mg)的无水二甲亚砜
(5ml)溶液中加入4-羧苯基硼酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(130mg)，
并将该溶液在20℃搅拌65小时。向该稠密的淤浆中加入1M碳酸钠溶
液(1ml)并将该澄清溶液再搅拌24小时。真空除去溶剂，将残余物
溶于10％氨溶液(5ml)。该溶液用交联葡聚糖LH20进行体积排阻
色谱，用10％氨溶液洗脱。蒸发溶剂得到产物PAMAM[EDA]4.0[4-
苯甲酰氨基硼酸]₃₂，为白色松散固体。110mg。94％

                       实施例31
以3,6-二磺萘基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备。
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂

将三氟乙酸(2ml)加入BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆DBL₃₂(147mg)
的搅拌的无水二氯甲烷(2ml)悬液中，并将所得溶液在氮气下在室温
搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶于N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液
(pH9.5；5ml)中，然后加入固体3,6-二磺萘基异硫氰酸盐(400mg)。
加入1M碳酸钠将该混合物的pH调节到9.5，并将该溶液在氮气下在
53℃加热3小时。浓缩该反应混合物，将残余物再次溶于水并将该溶
液通过Amberlite IR 120(Na)柱。将滤液浓缩得到粗产物，其用凝胶过
滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到有64个3,6-二磺萘基脲钠基
团的BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂，为白色松散固体(175mg)。

                       实施例32
以3,5-二磺苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂

将三氟乙酸(3ml)加入BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆DBL₃₂(300mg；
0.02mmol)的搅拌的无水二氯甲烷(3ml)悬液中，并将所得溶液在
氮气下在室温搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶于水并将该溶液通过
Amberlite IRA 401(OH)柱，将滤液浓缩得到粘性油(187mg)。将该
油溶于吡啶/水的1∶1混合物(8ml)中并加入固体3,5-二磺苯基异硫氰
酸钠(680mg；2mmol)。将所得溶液在氮气下在53℃加热3小时。
然后浓缩该溶液得到白色固体残余物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡
聚糖LH20；水)纯化得到有64个3,5-二磺苯基脲钠基团的
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂，为白色松散固体。

                       实施例33
以3,5-二羧苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂

将三氟乙酸(3ml)加入BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆DBL₃₂(300mg；
0.02mmol)的搅拌的无水二氯甲烷(3ml)悬液中，并将所得溶液在
氮气下在室温搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶于水并将该溶液通过
Amberlite IRA 401(OH)柱，将滤液浓缩得到粘性油(186mg)。将该
油溶于吡啶/水的1∶1混合物(8ml)中并加入3,5-二羧苯基异硫氰酸钠
(450mg；2mmol)。将所得溶液在氮气下在53℃加热13小时。然后
浓缩该溶液得到白色固体残余物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖
LH20；水)纯化得到有64个3,6-二羧苯基脲钠基团的
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂，为白色松散固体。

                       实施例34
以4-膦酰氧基苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂

将三氟乙酸(2ml)加入BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆DBL₃₂(147mg；
0.01mmol)的搅拌的无水二氯甲烷(2ml)悬液中，并将所得溶液在
氮气下在室温搅拌2小时，然后浓缩得到粘性油。将该油溶于N,N-二
甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；5ml)中并加入固体4-膦酰氧基苯基异
硫氰酸盐(250mg)。用1M碳酸钠将所得溶液的pH调节到10，并
将该混合物在氮气下在53℃加热3小时。浓缩该溶液得到白色固体残
余物。将残余物再次溶于水并将该溶液通过Amberlite IR 120(Na)柱，
浓缩滤液。残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到有
64个4-膦酰氧基苯基脲钠基团的BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂，为白色
松散固体(150mg)。

                       实施例35
以4-膦酰苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂

将三氟乙酸(2ml)加入BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆DBL₃₂(147mg；
0.01mmol)的搅拌的无水二氯甲烷(2ml)悬液中，并将所得溶液在
氮气下在室温搅拌2小时，然后浓缩得到粘性油。将该油溶于N,N-二
甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；5ml)中并加入固体4-膦酰苯基异硫氰
酸盐(250mg)。用饱和碳酸氢钠溶液将所得溶液的pH调节到9，
并将该混合物在氮气下在53℃加热3小时。浓缩该溶液得到白色固体
残余物。将残余物再次溶于水并将该溶液通过Amberlite IR 120(Na)
柱，浓缩滤液。残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得
到有64个4-膦酰苯基脲钠基团的BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂
BRI6196，冷冻干燥后为白色松散固体(152mg)。

                       实施例36
以4,6-二膦酰萘基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0

将4,6-二膦酰萘基异硫氰酸钠(165mg)的水溶液(2ml)加入
PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(2ml)溶液中。用饱和碳酸
氢钠溶液将该混合物的pH调节到9.5，并将该混合物在室温下用力搅
拌1小时，然后在氮气下在53℃加热3小时。将该混合物过滤，将滤
液浓缩得到棕色固体残余物。粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G25；
水)纯化得到以24个4,6-二膦酰萘基硫脲钠基团结尾的PAMAM4.0，
冷冻干燥后为棕色固体(81mg)。

                       实施例37
以荧光素硫脲结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0(EDA)

将固体荧光素异硫氰酸盐(188mg)加入PAMAM4.0(EDA)
(74mg；0.01mmol)的水(3ml)溶液中。加入饱和碳酸氢钠溶液将
pH调节到9，并将所得均质溶液在室温下搅拌过夜，然后浓缩。橙色
残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到以21个荧光
素硫脲基团结尾的PAMAM4.0(EDA)，冷冻干燥后为松散的橙色固体
(193mg)。

                        实施例38
以(苯基-3-硼酸)-硫脲钠结尾的树状聚合物的制备
PAMAM4.0(EDA)

将固体(苯基-3-硼酸)异硫氰酸盐(100mg；0.5mmol)加入
PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中。将1M
碳酸钠加入到溶解的异硫氰酸盐中(pH约10)。然后该混合物在氮
气下在53℃加热2小时，之后过滤并将滤液浓缩得到棕色固体残余物。
该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到以32个(苯
基-3-硼酸)硫脲基团结尾的PAMAM4.0(EDA)，冷冻干燥后为白色松散
固体(87mg)。

                       实施例39
以3,5-二羧苯基硫脲钠结尾的聚赖氨酸的制备。

将聚-L-赖氨酸氢溴化物(4-15K)(Sigma化学公司)(50mg)
的水(2ml)溶液加入3,5-二羧苯基异硫氰酸钠(305mg)的水
(3ml)溶液中，用碳酸氢钠水溶液将所得溶液的pH调节到9。然后
将该溶液在氮气下在53℃加热4小时。将该溶液冷却并过滤，滤液浓
缩得到米色固体残余物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；
水)纯化并冷冻干燥得到以3,5-二羧苯基硫脲钠结尾的聚-L-赖氨酸，
为白色松散固体(71mg)。

                       实施例40
以4-(膦酰甲基)苯基硫脲钠结尾的聚赖氨酸的制备。

将固体4-(膦酰甲基)苯基异硫氰酸盐(231mg；1.0mmol)加入聚
-L-赖氨酸氢溴化物(30-70K)(Sigma化学公司)(50mg)在吡啶
/水的1∶1混合物中的溶液中。用1M碳酸钠将该混合物的pH调节到9.5
并将该溶液在氮气下在53℃加热过夜。将该混合物冷却并过滤，滤液
浓缩得到棕色固体残余物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖
LH20；水)纯化得到棕色固体(82mg)。

                       实施例41
以1-膦酰-氧苯基-4-硫脲结尾的聚-L-赖氨酸的制备。

向在53℃加热并搅拌的聚-L-赖氨酸氢溴化物(50mg,Sigma
P2636,30-70千道尔顿)的水(10ml)溶液中加入4-膦酰氧基苯基异
硫氰酸盐(153mg)，并用1M碳酸钠溶液将该混合物的pH调节到
9.5-10。该混合物在53℃加热并搅拌5小时，然后过滤。澄清溶液用
交联葡聚糖LH20凝胶过滤法纯化，用水洗脱。洗脱液冷冻干燥得到白
色泡沫产物。77mg。94％。

                        实施例42
以苯甲酰氨基-4-硼酸结尾的聚-L-赖氨酸的制备。

在惰性气氛下，向聚-L-赖氨酸氢溴化物(50mg,Sigma P2636,
30-70千道尔顿)的DMSO(10ml)溶液中加入4-羧苯基硼酸N-羟
基琥珀酰亚胺酯(90mg)和1M碳酸钠溶液(2ml)，该混合物在20
℃搅拌60小时。真空除去溶剂，将残余物溶于水(5ml)并过滤。澄
清溶液用交联葡聚糖LH20凝胶过滤法纯化，用水洗脱。洗脱液冷冻干
燥得到白色泡沫产物。50mg。90％。

                      实施例43
Ⅰ．尿囊绒膜(CAM)测定

本试验中使用最初由Folkman(1985)描述并由Maragoudakis
等人(1988)加以改进的体内CAM血管生成模型。简言之，当在接
触CAM的卵壳上打开一个小口时，将新鲜的受精卵在37℃下培养4
天。将此开口用玻璃纸带覆盖并将该卵放回到孵化箱中直到第9天应用
受试化合物时为止。将该受试化合物置于无菌塑料盘(10mm)上并
使之在无菌条件下干燥。将对照盘(含有PBS)置于距离含有受试物
质的盘1cm远的CAM上。在所有盘中均加入醋酸可的松的无菌溶液
(100ug/盘，Sigma)以防止炎性应答。将加载并干燥后的盘反转并
置于CAM上，将开口覆盖并培养这些卵直到第11天评定血管生成。
CAM测定中血管生成的形态学评估

如上处理这些卵以进行形态学评估。第11天时，将这些卵注满10
％缓冲的福尔马林(Janssen Chimica,Geel,Belguim)，除去塑料盘
并使这些卵在室温下保持至少4小时。将盘周围的大部分面积切去并置
于玻璃载片上，用Harris-Hooker等人(1983)的方法测定血管密度
指数(表示成血管数)。
Ⅱ．大鼠主动脉测定

本试验中使用由Nicosia等人(1990)最初描述的大鼠主动脉环
模型。简言之，将琼脂糖的1.5％无菌溶液(Pharmacia Biotech AB.
Upppsala,Sweden)倒入培养皿中并使之成凝胶状。在琼脂糖凝胶中
冲压出两个直径分别为10和17mm的同心圈，从而得到琼脂糖环。将
这些环内外多余的琼脂糖除去。将这些环转移到6孔平板(Nuncion,
Roskilde，丹麦)上，每孔中含有三个环。从3月龄的雄性Wistar大鼠
得到胸主动脉。将这些主动脉立即转移到含有无血清最低必需培养液
(MEM)的培养盘中。仔细地除去主动脉周围的纤维脂肪性组织以损
害主动脉壁。切取主动脉环薄片(0.5mm厚)并用无血清培养基连续
彻底冲洗12次。在将这些主动脉环转移到培养皿中的培养基环中之
前，将每个琼脂糖孔的底部涂上150ul凝固纤维蛋白原。当纤维蛋白凝
胶形成后，将主动脉环转移到琼脂糖孔中并置于琼脂糖孔的中心。然后
将琼脂糖孔完全填充上凝固纤维蛋白原。将部分纯化的牛纤维蛋白原
(Sigma)溶于无血清培养基中使浓度为3mg/ml。将20ul 50μl/ml
的牛凝血酶溶液(Sigma)加入到1ml纤维蛋白原溶液中使产生凝固。
在室温下在30秒内形成纤维蛋白凝胶。当纤维蛋白凝胶化后，向6孔
板的每孔中加入6ml添加有20％FCS(Gibco)、10mM Hepes
(Gibco)和1mM L-谷酰胺(Gibco)的MEM培养液，并将合适浓
度的受试化合物加入该培养液中。
大鼠主动脉环测定中血管生成的定量

每日在倒置显微镜下检查培养物并记分。用微脉管生长曲线代表微
脉管的生长。由于微脉管网络的空间复杂性，通常有200-250个以上
的微脉管形成(Nicosia等人，1990)。对微脉管进行计数的观测者
的误差范围较高，因此，所形成的微脉管分为0(无脉管)到10(最
多的脉管数)级打分。
结果：
Ⅰ．CAM测定

试验中用TNP-470(50μ/cam)和戊聚糖多硫酸酯(PPS)
(50μg)这两种用于临床试验的化合物作为对照化合物。它们使脉管
密度分别降低了21％±16和42％±28。不过PPS在这一浓度导致80
％胚胎死亡。
Ⅱ．大鼠主动脉测定

BRI2995,BRI2996和BRI2999在20μg/ml和100μg/ml的浓度
下(几乎)完全抑制了微脉管的形成。

BRI6196在20μg/ml和100μg/ml浓度下近似完全抑制，且在
4μg/ml也有抑制作用。

BRI2923和BRI6039在100μg/ml浓度下减少了微脉管的生长。