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1、10申请公布号CN104083436A43申请公布日20141008CN104083436A21申请号201410355714422申请日20140724A61K36/53200601A61P3/1020060171申请人河南中医学院地址450008河南省郑州市金水区金水路1号72发明人苗明三苗艳艳王灿74专利代理机构郑州天阳专利事务所普通合伙41113代理人聂孟民54发明名称冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用57摘要本发明涉及冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用,有效解决高血糖的治疗用药问题,冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用,所述的提取物为,冬凌草粉碎成粗粉,用石油醚回流提取,弃去石油醚液,。
2、冬凌草药渣挥干石油醚,再用乙醇浸泡,回流提取,得滤液,滤液减压回收乙醇至无醇味,浓缩成浓缩液,浓缩液加蒸馏水分散得含生药量01G/ML的分散液;分散液上AB8型大孔吸附树脂柱,用蒸馏水洗脱,弃去水液,继用乙醇洗脱,弃去乙醇液,再用乙醇洗脱,乙醇洗脱液减压回收乙醇,干燥,即得,本发明具有降糖作用,有效用于制备降糖药物,实现冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用。51INTCL权利要求书1页说明书5页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页10申请公布号CN104083436ACN104083436A1/1页21一种冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用,所述的冬凌草提取物。
3、是,冬凌草粉碎为过2030目筛的粗粉,加冬凌草10倍重量的石油醚回流提取2次,每次1H,弃去石油醚液,冬凌草药渣挥干石油醚,冬凌草药渣再加冬凌草10倍重量质量浓度为50的乙醇浸泡05H,回流提取3次,每次1H,过滤,合并滤液,减压回收乙醇至无醇味,并浓缩至50时相对密度为110120的浓缩液,浓缩液加蒸馏水分散得含生药量01G/ML的分散液;分散液上AB8型大孔吸附树脂柱,先用4倍柱体积蒸馏水洗脱,弃去水液,继用4倍柱体积的质量浓度为10的乙醇洗脱,弃去质量浓度为10的乙醇液,再用8倍柱体积的质量浓度为50的乙醇洗脱,收集质量浓度为50的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,50干燥粉碎,得冬凌草提取物,。
4、冬凌草提取物中总黄酮质量含量58以上。权利要求书CN104083436A1/5页3冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用技术领域0001本发明涉及医药,特别是一种冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用。背景技术0002冬凌草又名冰凌草,为唇形科香茶属多年生草本或亚灌木,小灌木,系唇形科香茶菜属植物碎米桠变种,因其植株凝结薄如蝉翼、形态各异的蝶状冰凌片而得名。全株结满银白色冰片,风吹不落,随风摇曳,日出后闪闪发光,展现出神奇的自然景观,具有独到的观赏作用。具有清热解毒、消炎止痛、健胃活血之效。药用部位是全株。现虽有关于冬凌草的多方面研究,但至今未见有冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用。发明内容0003针。
5、对上述情况,为克服现有技术之缺陷,本发明之目的就是提供一种冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用,可有效解决高血糖的治疗用药问题。0004本发明解决的技术方案是,冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用,所述的提取物为,冬凌草粉碎成粗粉,用石油醚回流提取,弃去石油醚液,冬凌草药渣挥干石油醚,再用乙醇浸泡,回流提取,得滤液,滤液减压回收乙醇至无醇味,浓缩成浓缩液,浓缩液加蒸馏水分散得含生药量01G/ML的分散液;分散液上AB8型大孔吸附树脂柱,先用蒸馏水洗脱,弃去水液,继用质量浓度为10的乙醇洗脱,弃去质量浓度为10的乙醇液,再用质量浓度为50的乙醇洗脱,收集质量浓度为50的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,干燥。
6、,得冬凌草提取物,冬凌草提取物中总黄酮含量58以上。0005本发明制备方法简单,原材料丰富,所制备的冬凌草提取物具有降糖作用,可有效用于制备降糖药物,实现冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用,开拓了冬凌草在制备治疗高血糖引起的糖尿病药物中的新用途。具体实施方式0006以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。0007本发明在具体实施中,是由以下方式实现。0008冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用,所述的冬凌草提取物是,冬凌草粉碎为过2030目筛的粗粉,加冬凌草10倍重量的石油醚回流提取2次,每次1H,弃去石油醚液,冬凌草药渣挥干石油醚,冬凌草药渣再加冬凌草10倍重量质量浓度为50的乙醇浸。
7、泡05H,回流提取3次,每次1H,过滤,合并滤液,减压回收乙醇至无醇味,并浓缩至50时相对密度为110120的浓缩液,浓缩液加蒸馏水分散得含生药量01G/ML的分散液;分散液上AB8型大孔吸附树脂柱,先用4倍柱体积蒸馏水洗脱,弃去水液,继用4倍柱体积的质量浓度为10的乙醇洗脱,弃去质量浓度为10的乙醇液,再用8倍柱体积的质量浓度为50的乙醇洗脱,收集质量浓度为50的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,50干燥粉碎,得冬凌草提取物,冬凌草提取物中总黄酮质量含量58以上。说明书CN104083436A2/5页40009本发明冬凌草提取物具有降糖作用,可有效用于制备降糖药物,实现冬凌草提取物在制备降糖药物中的。
8、应用,进而实现冬凌草提取物在制备治疗糖尿病药物中的应用,并经试验得到了有效证明,有关试验资料如下。00101实验材料001111实验试剂0012本发明冬凌草提取物冬凌草总黄酮质量含量58以上;盐酸二甲双胍片市售;生理盐水河南双鹤华利药业有限公司;羧甲基纤维素钠天津市恒兴化学试剂制造有限公司;链脲佐菌素SIGMA公司提供;柠檬酸天津市致远化学试剂有限公司;柠檬酸钠天津市致远化学试剂有限公司;葡萄糖测定试剂盒由中生北控生物科技股份有限公司生产提供;肝糖原测定试剂盒由南京建成生物工程研究所生产;胰岛素RD公司生产;糖化血清蛋白由南京建成生物工程研究所生产;甲醛烟台市双双化工有限公司;浓硫酸上海振企化。
9、学试剂有限公司。001312实验仪器0014AL204系列电子天平,梅特勒托利多仪器上海有限公司;VIS7220N可见分光光度计,北京瑞利分析仪器有限公司;TGL16G台式离心机,上海安亭科学仪器厂生产;HHS型电热恒温水浴锅,上海博讯实业有限公司医疗设备厂;KDC160HR高速冷冻离心机,科大创新股份有限公司中佳分公司生产;TES1380PH酸度计,泰仕电子工业股份有限公司;酶标仪,美国BIORAD公司,型号680;可调式移液枪,上海雷勃分析仪器有限公司;OLYMPUSBX61电动显微镜,日本OLYMPUS公司生产;TES1380PH酸度计,泰仕电子工业股份有限公司。001513实验动物00。
10、16昆明种小鼠,雄性,体重1822G,由山东鲁抗医药股份有限公司提供,合格证号0017170;实验室合格证号SYXK豫2010001。00172实验方法001821造模与给药0019取体重1822G的昆明种小鼠108只,雄性,适应性饲养后,根据体重随机挑选12只作为空白组,其余为造模组,造模组于实验开始前称重后尾静脉注射柠檬酸柠檬酸钠缓冲溶液配制成的链脲佐菌素80MG/KG,7天后,尾部采血,测定血糖,选取167MMOL/L血糖值21MMOL/L,并明显具有多饮多食多尿症状的小鼠60只。随机分为5组,分别为模型组、二甲双胍组,冬凌草提取物大、中、小剂量组,每组12只。根据组别分别灌服相应药物,。
11、空白组和模型组灌服同体积的05CMCNA01ML/10G,盐酸二甲双胍片组375MG/KG,为临床剂量的15倍,用05的CMCNA配制,01ML/10G,冬凌草提取物大、中、小剂量组400、200、100MG/KG,用05的CMCNA配制,01ML/10G,每天一次,连续给药30天,分别于给药后的第10、20、30天时尾部采血,测定血糖值。于第31天,灌胃后2H,取血,分离血清,测血清中胰岛素、糖基化血清蛋白的含量,取肝脏适量,测肝糖原含量;取胰脏、肾脏甲醛固定,做组织病理切片,观察病理组织变化。0020柠檬酸柠檬酸钠缓冲溶液的配制分别称取5004MG柠檬酸和5012柠檬酸钠溶于50ML的容量。
12、瓶中,此溶液即为PH42的柠檬酸柠檬酸钠缓冲溶液。为确保其准确性可用PH计校正。临用前配制由于链脲佐菌素不十分稳定,且对血管刺激较大,用缓说明书CN104083436A3/5页5冲液配制链脲佐菌素可减轻这些负面影响00213统计方法0022数据分析用SPSS170FORWINDOWS医用统计包进行数据资料的统计学处理,计量资料用平均数标准差表示,各组间比较采用单因素方差分析,方差检验齐者用最小显著差数LSD法,方差不齐者用GAMESHOWELL法检验,等级资料采用RIDIT检验。00234实验结果与小结0024表1冬凌草提取物对链脲佐菌素致小鼠糖尿病模型血糖的影响00250026表示与模型组比。
13、P005,表示与模型组比P0010027从上表可以看出,与空白组相比,模型组在第10、20、30天时的血糖均显著性升高P001,说明模型复制成功。与模型组相比,二甲双胍组可显著降低P001小鼠第10、20、30天的血糖值,冬凌草提取物大、中、小剂量组可显著降低P001小鼠第20、30天的血糖值。说明冬凌草提取物可有效的降低模型的血糖值。0028表2冬凌草提取物对糖尿病模型肝糖原、胰岛素、糖化血清蛋白的影响00290030表示与模型组比P005,表示与模型组比P0010031由上表可以看出与空白组相比,模型组肝糖原含量和胰岛素水平均显著降低P001,糖化血清蛋白含量显著升高P001,说明模型复制。
14、成功。与模型组相比,二甲双胍组可显著升高显著升高P001肝糖原含量,显著降低P001糖化血清蛋白的含说明书CN104083436A4/5页6量;冬凌草提取物大、中剂量组均可显著升高P001肝糖原含量以及胰岛素水平,显著降低P001糖化血清蛋白的含量。0032各组胰脏组织形态光镜观察空白组小鼠胰岛细胞比较松散,边界清晰,细胞浆较为丰富;模型组小鼠胰岛细胞减少,细胞浆萎缩,有些甚至完全萎缩;二甲双胍组胰岛细胞胞浆得到显著改善;大、中、小冬凌草提取物组均可减轻胰岛细胞的萎缩以及细胞核密集的病理变化。0033表3冬凌草提取物对链脲佐菌素所致小鼠糖尿病模型胰腺组织的影响00340035“”胰腺组织中胰岛。
15、在4个以上,胰岛细胞胞浆丰富,细胞核松散;“”胰腺组织中胰岛在4个以上,少数胰岛细胞胞浆萎缩,少数细胞核密集;“”胰腺组织中胰岛在23个,部分胰岛细胞胞浆萎缩,部分细胞核密集;“”胰腺组织中胰岛在01个,全部胰岛细胞胞浆几乎消失,全部细胞核密集。0036由上表可以看出,经RIDIT检验,与空白组比,模型组出现胰岛细胞减少,细胞浆萎缩,有些甚至完全萎缩,出现显著的病理变化P001,说明造模型成功。与模型组相比,大、中、小剂量冬凌草提取物组和二甲双胍组均可显著减轻胰脏的病理变化P001。0037从各组肾脏组织形态光镜观察空白组肾小球、肾小管均正常;模型组小鼠的肾小管上皮细胞水肿以及间质有不同程度的。
16、炎细胞浸润;见照片9、大、中、小剂量冬凌草提取物组和二甲双胍组肾小球稍有萎缩,肾小管上皮细胞炎症减轻,中剂量组个别大鼠肾脏充血较为严重。0038表4冬凌草提取物对链脲佐菌素所致小鼠糖尿病模型肾组织的影响0039说明书CN104083436A5/5页70040“”肾小球细胞正常,肾小囊正常;“”肾小球细胞稍萎缩,肾小囊稍有扩张;“”肾小球细胞萎缩,肾小囊腔扩张;“”肾小球细胞明显萎缩,肾小囊腔明显扩张0041从上表可以看出,经RIDIT检验,与空白组比,模型组出现显著的肾脏病理变化P001,说明出现显著的肾脏病变。与模型组相比,大、中、小剂量组冬凌草提取物组和二甲双胍组肾脏病理变化均显著减轻P0。
17、01。0042上述试验资料充分表明本发明的冬凌草提取物中总黄酮含量达58以上,具有很好的降糖作用,有效用于制备降糖药物,实现冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用,并开拓了糖尿病治疗用药的新途径,并实现冬凌草提取物在制备治疗糖尿病药物中的应用,因为糖尿病最突出的临床症状就是高血糖,因此,治疗糖尿病的关键在于降低血糖,而冬凌草提取物正具备降低血糖的功效,并且经临床对58例高血糖糖尿病患者按常规糖尿病患者服药办法进行服用,每天3次,每次1520G,连服10天,测定血糖,结果血糖均有不同程度的降低,表明无论是经动物试验,还是经临床验证,都证明冬凌草提取物具有降糖之功效,开拓了冬凌草的新用途和药用价值,具有极大的实用价值,是中药上的一大创新。说明书CN104083436A。