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1、10申请公布号CN104083396A43申请公布日20141008CN104083396A21申请号201410296205922申请日20140627A61K31/737200601A61P27/02200601A61P41/0020060171申请人牟国营地址250103山东省济南市高新区经十路9677号申请人李志伟72发明人牟国营李志伟74专利代理机构济南舜源专利事务所有限公司37205代理人江莉莉54发明名称角膜表面保护剂及其制备方法和应用57摘要本发明属于医疗用品技术领域，具体涉及一种角膜表面保护剂，还涉及该角膜表面保护剂的制备方法，以及本产品的应用范围。本发明的角膜表面保护剂包括。
2、下述的组分分子量为10万D至200万D的透明质酸钠，浓度范围5MG/ML至200MG/ML；或者分子量为5KD至10万D的硫酸软骨素，浓度范围5MG/ML至200MG/ML；或者分子量为5KD至200万D的壳聚糖，浓度范围5MG/ML至200MG/ML。与传统的仅应用于保存离体的角膜组织的保存液相比，采用本发明的方法所制备得到的角膜表面保护剂，可应用于临床手术中，在手术过程中涂抹于角膜表面，可在一段时间内保持角膜的湿润以及透光性，大幅度降低了手术中点水的频率，加速的手术进度，提高了患者舒适度。51INTCL权利要求书2页说明书6页附图2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求。
3、书2页说明书6页附图2页10申请公布号CN104083396ACN104083396A1/2页21一种角膜表面保护剂，其特征在于，所述的角膜表面保护剂包括下述的组分分子量为10万D至200万D的透明质酸钠,浓度范围5MG/ML至200MG/ML；或者分子量为5KD至10万D的硫酸软骨素,浓度范围5MG/ML至200MG/ML；或者分子量为5KD至200万D的壳聚糖,浓度范围5MG/ML至200MG/ML。2如权利要求1所述的角膜表面保护剂，其特征在于，所述的角膜表面保护剂包括下述的组分分子量为20万D至150万D的透明质酸钠，浓度范围5MG/ML至100MG/ML；或者分子量为5KD至10万D。
4、的硫酸软骨素，浓度范围5MG/ML至50MG/ML；或者分子量为1万D至100万D的壳聚糖，浓度范围20MG/ML至200MG/ML。3如权利要求1所述的角膜表面保护剂的制备方法，包括下述的步骤分别称取0045G的NAH2PO4H2O、02G的NA2HPO4、以及044G的NACL，溶于100ML注射水中配制成缓冲溶液，待上述的原料完全溶解，采用022微米滤膜过滤除菌；称取05G至20G的透明质酸钠溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至20G的硫酸软骨素溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至20G的壳聚糖，溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；所述的透明质酸钠的。
5、分子量为10万D至200万D的透明质酸钠,浓度范围5MG/ML至200MG/ML；所述的硫酸软骨素分子量为5KD至10万D，浓度范围5MG/ML至200MG/ML；所述的壳聚糖分子量为1万D至200万D，浓度范围5MG/ML至200MG/ML。4如权利要求1所述的角膜表面保护剂的制备方法，包括下述的步骤分别称取0045G的NAH2PO4H2O、02G的NA2HPO4、以及044G的NACL，溶于100ML注射水中配制成缓冲溶液，待上述的原料完全溶解，采用022微米滤膜过滤除菌；称取05G至20G的透明质酸钠溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至20G的硫酸软骨素溶解在100ML的。
6、缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至20G的壳聚糖，溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；所述的透明质酸钠的分子量为20万D至150万D，浓度范围5MG/ML至100MG/ML；所述的硫酸软骨素分子量为5KD至10万D，浓度范围5MG/ML至50MG/ML；所述的壳聚糖分子量为1万D至100万D，浓度范围20MG/ML至200MG/ML。5如权利要求1所述的角膜表面保护剂的制备方法，包括下述的步骤分别称取0045G的NAH2PO4H2O、02G的NA2HPO4、以及044G的NACL，溶于100ML注射水中配制成缓冲溶液A，在缓冲溶液中加入妥布霉素粉剂至终浓度25MG/ML，和/或地塞米松原。
7、液至终浓度051MG/ML，搅拌均匀，待上述的原料完全溶解，得缓冲溶液B，对缓冲溶液B采用022微米滤膜过滤除菌；称取05G至20G的透明质酸钠溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至20G的硫酸软骨素溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至20G的壳聚糖，溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；所述的透明质酸钠的分子量为10万D至200万D,浓度范围5MG/ML至200MG/ML；所述的硫酸软骨素分子量为5KD至10万D，浓度范围5MG/ML至200MG/ML；所述的壳聚糖分子量为1万D至200万D，浓度范围5MG/ML至200MG/ML。权利要求书CN104083。
8、396A2/2页36如权利要求5所述的角膜表面保护剂的制备方法，包括下述的步骤分别称取0045G的NAH2PO4H2O、02G的NA2HPO4、以及044G的NACL，溶于100ML注射水中配制成缓冲溶液A，在缓冲溶液中加入妥布霉素粉剂至终浓度25MG/ML，和/或地塞米松原液至终浓度051MG/ML，搅拌均匀，待上述的原料完全溶解，得缓冲溶液B，对缓冲溶液B采用022微米滤膜过滤除菌；称取05G至10G的透明质酸钠溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至5G的硫酸软骨素溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或2G至20G的壳聚糖，溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；透明。
9、质酸钠的分子量为20万D至150万D，浓度范围5MG/ML至100MG/ML；硫酸软骨素分子量为5KD至10万D，浓度范围5MG/ML至50MG/ML；壳聚糖分子量为1万D至100万D，浓度范围20MG/ML至200MG/ML。7如权利要求1所述的角膜表面保护剂的制备方法，其特征在于，采用所述的方法制备得到的角膜表面保护剂其剂型为滴眼剂。8如权利要求1所述的角膜表面保护剂在眼科手术中的应用，所述的眼科手术包括所有暴露角膜的手术，具体包括白内障摘除术，人工晶体植入术，青光眼手术，斜视手术，玻璃体切割手术，巩膜外垫压手术，角膜裂伤缝合术，巩膜裂伤缝合术。9如权利要求1所述的角膜表面保护剂在白内障摘。
10、除术的应用。权利要求书CN104083396A1/6页4角膜表面保护剂及其制备方法和应用技术领域0001本发明属于医疗用品技术领域，具体涉及一种角膜表面保护剂，还涉及该角膜表面保护剂的制备方法，以及本产品的应用范围。0002背景技术眼科手术中角膜保持湿润以及良好的透光性是手术进行的必要条件，现有手术中需要频繁的在角膜表面点水来实现上述目的，而普通生理盐水或者缓冲液保持在角膜表面的均匀覆盖很难超过半分钟，手术过程中的点水手续繁琐，影响了手术的进度，同时增加了患者的不适。本研究设计的角膜保护剂在手术过程中涂抹于角膜表面，可在一段时间内（510分钟）保持角膜的湿润以及透光性，可以使大幅度降低了手术中。
11、点水的频率，加速的手术进度，提高了患者舒适度。0003CN1262866A披露了一种角膜活性保存液，该保存液中含有MEM细胞培养基4549G、硫酸软骨素1213G、低分子右旋糖酐4852G，地塞米松1214MG，抗生素4852MG和HEPES4550G，余者为去离子水，将它们依次混合均匀，调PH值达7274，经分装，封口成成品，4保存。0004上述的保存液可使角膜活性的保存时间达2周以上，存放期间内皮细胞活性稳定，变化小，可与美国公司生产的OPTISOL相匹配，经临床应用，角膜保存7天以上后再使用，术后14周植片内皮细胞数均超过1500个/MM2，而且所需原料易得，价格低廉，经济性好，适合国内。
12、中期保存法。0005CN1270605C公开了一种角膜中期保存液，该保存液中含有RPMI1640培养液4262G，硫酸软骨素1535MG，透明质酸525MG，HEPES缓冲液376576G，地塞米松550MG，其特征在于还含有25000100000DA的低分子量海藻多糖1030MG，妥布霉素或万古霉素10150MG，其中妥布霉素的规格为2550万单位；该保存液为淡橘红色，透明轻度粘稠液体，其PH值为7076，渗透压300400M0SM/KGH2O，在26保存。上述方法的优点是，可使角膜活性的保存时间达2周以上，存放期间内皮细胞活性稳定，变化小，而且在上皮细胞的保存时间上要优于美国公司生产的OP。
13、TISOL，酶组织化学检查显示随保存时间的延长，上述的保存液可比OPTISOL维持更高的内皮细胞袋功能。经临床应用，角膜保存7天以上后再使用，术后14周植片内皮细胞数均超过2000个/MM2。上述发明的角膜中期保存液所需原料易得，价格低廉，经济性好，适合国内中期保存法。0006CN101524063B公开了一种角膜中期保存液，该保存液以蒸馏水为溶液，配成1000ML的溶液，该溶液中含有DMEM培养基0515G，羟丙基甲基纤维素110G，2巯基乙醇0110ML，分子量40000的右旋糖苷1020G，非必需氨基酸13MOL，HEPES缓冲液1032MOL，地塞米松001005MMOL，庆大霉素50。
14、70MG，该保存液的PH值为7280，渗透压为350400MMOL/L。上述的专利可以降低细胞代谢速度，对细胞无毒害作用，可以提高胶体渗透压，而且价格低廉，不仅具有好的角膜保存质量，而且还有优良的性价比，是一种广泛适用于国内外眼库合适的角膜中期保存液。0007但是上述的保存液的用途仅限于保存离体的角膜组织，尚未使用在临床手术中，说明书CN104083396A2/6页5对于上述的保存液是否能应用于临床手术，上述的几项技术并未披露，因此需要设计一种能应用于临床手术中的角膜表面保护剂，而且使该角膜表面保护剂在一段时间内保持角膜的湿润以及透明性，降低手术中点水的频率，加速的手术进度，提高患者舒适度。发。
15、明内容0008为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种角膜表面保护剂，主要应用于术中对角膜表面的保护，本发明的角膜表面保护剂能在一定时间内保持角膜表面湿润并且保持角膜良好的透明性，以提供良好的手术视野。0009本发明还提供了上述的角膜表面保护剂的制备方法。0010本发明的角膜表面保护剂包括下述的组分分子量为10万D至200万D的透明质酸钠,浓度范围5MG/ML至200MG/ML；或者分子量为5KD至10万D的硫酸软骨素,浓度范围5MG/ML至200MG/ML；或者分子量为5KD至200万D的壳聚糖,浓度范围5MG/ML至200MG/ML。0011优选的，上述的角膜表面保护剂包括下述的组分分子量。
16、为20万D至150万D的透明质酸钠,浓度范围5MG/ML至100MG/ML；或者分子量为5KD至10万D的硫酸软骨素,浓度范围5MG/ML至50MG/ML；或者分子量为1万D至100万D的壳聚糖,浓度范围20MG/ML至200MG/ML。0012上述的角膜表面保护剂的制备方法，包括下述的步骤分别称取0045G的NAH2PO4H2O、02G的NA2HPO4、以及044G的NACL，溶于100ML注射水中配制成缓冲溶液，待上述的原料完全溶解，采用022微米滤膜过滤除菌；称取05G至20G的透明质酸钠溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至20G的硫酸软骨素溶解在100ML的缓冲液中，得。
17、角膜保护剂；或05G至20G的壳聚糖，溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；上述的透明质酸钠的分子量为10万D至200万D的透明质酸钠,浓度范围5MG/ML至200MG/ML；上述的硫酸软骨素分子量为5KD至10万D，浓度范围5MG/ML至200MG/ML；上述的壳聚糖分子量为1万D至200万D，浓度范围5MG/ML至200MG/ML。0013优选的，上述的角膜表面保护剂的制备方法，包括下述的步骤分别称取0045G的NAH2PO4H2O、02G的NA2HPO4、以及044G的NACL，溶于100ML注射水中配制成缓冲溶液，待上述的原料完全溶解，采用022微米滤膜过滤除菌；称取05G至20G。
18、的透明质酸钠溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至20G的硫酸软骨素溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至20G的壳聚糖，溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；透明质酸钠的分子量为20万D至150万D，浓度范围5MG/ML至100MG/ML；硫酸软骨素分子量为5KD至10万D，浓度范围5MG/ML至50MG/ML；壳聚糖分子量为1万D至100万D，浓度范围20MG/ML至200MG/ML。0014优选的，上述的角膜表面保护剂的制备方法，包括下述的步骤分别称取0045G的NAH2PO4H2O、02G的NA2HPO4、以及044G的NACL，溶于100ML注射水中配。
19、制成缓冲溶液A，在缓冲溶液中加入的妥布霉素粉剂至终浓度25MG/ML，和/或说明书CN104083396A3/6页6地塞米松原液至终浓度051MG/ML，搅拌均匀，待上述的原料完全溶解，得缓冲溶液B，对缓冲溶液B采用022微米滤膜过滤除菌；称取05G至20G的透明质酸钠溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至20G的硫酸软骨素溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至20G的壳聚糖，溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；透明质酸钠的分子量为10万D至200万D,浓度范围5MG/ML至200MG/ML；硫酸软骨素分子量为5KD至10万D，浓度范围5MG/ML至200MG。
20、/ML；壳聚糖分子量为1万D至200万D，浓度范围5MG/ML至200MG/ML。0015妥布霉素以及地塞米松已经有多年的眼科临床应用历史，可以有效的预防术后的感染以及无菌性炎症。现有的有类似成分的眼科临床药物包括托百士眼水，典必殊眼水等。本产品粘度较一般临床应用眼水的粘度高，术中与角膜以及眼部其他组织的接触时间较普通临床应用的眼水保留时间长，预期有较好的术后抗菌抗感染效果。0016更优选的，角膜表面保护剂的制备方法，包括下述的步骤分别称取0045G的NAH2PO4H2O、02G的NA2HPO4、以及044G的NACL，溶于100ML注射水中配制成缓冲溶液A，在缓冲溶液中加入妥布霉素粉剂至终浓。
21、度25MG/ML，和/或地塞米松原液至终浓度051MG/ML，搅拌均匀，待上述的原料完全溶解，得缓冲溶液B，对缓冲溶液B采用022微米滤膜过滤除菌；称取05G至10G的透明质酸钠溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或05G至5G的硫酸软骨素溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；或2G至20G的壳聚糖，溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂；透明质酸钠的分子量为20万D至150万D，浓度范围5MG/ML至100MG/ML；硫酸软骨素分子量为5KD至10万D，浓度范围5MG/ML至50MG/ML；壳聚糖分子量为1万D至100万D，浓度范围20MG/ML至200MG/ML。0017采用上。
22、述的方法制备得到的角膜表面保护剂其剂型为滴眼剂。0018本发明的角膜表面保护剂在眼科手术中的应用，眼科手术包括所有暴露角膜的手术，具体包括白内障摘除术，人工晶体植入术，青光眼手术，斜视手术，玻璃体切割手术，巩膜外垫压手术，角膜裂伤缝合术，巩膜裂伤缝合术，上述的应用也在本发明的保护范围之内。0019本发明的有益效果在于，与传统的仅应用于保存离体的角膜组织的保存液相比，采用本发明的方法所制备得到的角膜表面保护剂，可应用于临床手术中，在手术过程中涂抹于角膜表面，可在一段时间内保持角膜的湿润以及透明性，大幅度降低了手术中点水的频率，加速的手术进度，提高了术后患者舒适度。附图说明0020图1为角膜表面荧。
23、光染色示，术中使用生理盐水点眼后角膜上皮呈弥漫性的点状缺失，箭头处为上皮缺失位置；图2为角膜表面荧光染色示，术中使用角膜保护剂点眼后角膜上皮形态完好。0021图3为术后通过角膜表面荧光染色对角膜上皮缺失进行的统计分析，显示角膜保护剂组的上皮缺失显著低于生理盐水组P1天；4重度痛觉，无法或者很难入睡），问卷显示术后3天内生理盐水组患者痛觉参数（2106）显著高于角膜保护剂组患者痛觉参数（03006）（附图4）（P005）。0025实施例2使用实施例1中的方法制作缓冲液，将分子量为2万的硫酸软骨素15G溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂，用于白内障摘除人工晶体植入术中；术中使用注射器将02M。
24、L的本发明的产品滴于角膜表面，2秒后形成表面平坦的液体界面，所保持的良好的屈光状态和平坦的表面维持时间约在10分钟左右，术中使用1次。对16个患者术后效果进行临床调查，其中生理盐水组10个，角膜保护剂组6个，使用T检验对比两个实验组数据统计学差异，P005为有显著差异。数据显示，术后第1，2，3天生理盐水组角膜上皮点状缺失数量（599）显著高于角膜保护剂组角膜上皮点状缺失数量（41）（附图3）（P005）。术后3天内生理盐水组患者痛觉参数（2211）显著高于角膜保护剂组患者痛觉参数（0301）（附图4）（P005）。0026实施例3使用实施例1中的方法制作缓冲液，将分子量为70万的壳聚糖10G。
25、溶解在100ML的缓冲液中，得角膜保护剂，用于白内障摘除人工晶体植入术中；说明书CN104083396A5/6页8术中使用注射器将02ML的本发明的产品滴于角膜表面，2秒后形成表面平坦的液体界面，所保持的良好的屈光状态和平坦的表面维持时间约在10分钟左右，术中使用1次。对13个患者术后效果进行临床调查，其中生理盐水组5个，角膜保护剂组8个，使用T检验对比两个实验组数据统计学差异，P005为有显著差异。数据显示，术后第1，2，3天生理盐水组角膜上皮点状缺失数量（7116）显著高于角膜保护剂组角膜上皮点状缺失数量（51）（附图3）（P005）。术后3天内生理盐水组患者痛觉参数2609显著高于角膜保。
26、护剂组患者痛觉参数（0302）（附图4）（P005）。0027实施例4使用实施例1中的角膜保护剂，用于青光眼手术（小梁切除虹膜周切术）中；术中使用注射器将02ML的本发明的产品滴于角膜表面，2秒后形成表面平坦的液体界面，屈光状态良好，保证了手术视野的清晰，本产品所保持的良好的屈光状态和平坦的表面维持时间约在10分钟左右，本手术时间20分钟左右，术中使用2次。对19个患者术后效果进行临床调查，其中生理盐水组7个，角膜保护剂组12个，使用T检验对比两个实验组数据统计学差异，P005为有显著差异。数据显示，术后第1，2，3天生理盐水组角膜上皮点状缺失数量（12621）显著高于角膜保护剂组角膜上皮点状。
27、缺失数量（92）（图3）（P005）。术后3天内生理盐水组患者痛觉参数3111显著高于角膜保护剂组患者痛觉参数（03005）（附图4）（P005）。0028实施例5使用实施例1中的角膜保护剂，用于视网膜复位术（玻璃体切割视网膜复位术）中；术中使用注射器将02ML的本发明的产品滴于角膜表面，2秒后形成表面平坦的液体界面，屈光状态良好，保证了手术视野的清晰，本产品所保持的良好的屈光状态和平坦的表面维持时间约在10分钟左右，本手术时间60分钟左右，术中使用3次。对16个患者术后效果进行临床调查，其中生理盐水组9个，角膜保护剂组7个，使用T检验对比两个实验组数据统计学差异，P005为有显著差异。数据显。
28、示，术后第1，2，3天生理盐水组角膜上皮点状缺失数量（29151）显著高于角膜保护剂组角膜上皮点状缺失数量（217）（图3）（P005）。术后3天内生理盐水组患者痛觉参数3203显著高于角膜保护剂组患者痛觉参数（05006）（图4）（P005）。0029实施例6使用实施例2中的角膜保护剂，用于视网膜复位术（玻璃体切割视网膜复位术）中；术中使用注射器将02ML的本发明的产品滴于角膜表面，2秒后形成表面平坦的液体界面，屈光状态良好，保证了手术视野的清晰，本产品所保持的良好的屈光状态和平坦的表面维持时间约在10分钟左右，本手术时间60分钟左右，术中使用5次。对16个患者术后效果进行临床调查，其中生理。
29、盐水组6个，角膜保护剂组10个，使用T检验对比两个实验组数据统计学差异，P005为有显著差异。数据显示，术后第1，2，3天生理盐水组角膜上皮点状缺失数量（33661）显著高于角膜保护剂组角膜上皮点状缺失数量（269）（图3）（P005）。术后3天内生理盐水组患者痛觉3406参数显著高于角膜保护剂组患者痛觉参数（031009）（图4）（P005）。0030附图3中，角膜保护剂1,2,3均可在白内障手术，青光眼手术，视网膜复位术后显著减少角膜上皮缺失。（P005）（角膜保护剂1分子量为50万的透明质酸钠，浓度9MG/说明书CN104083396A6/6页9ML；角膜保护剂2分子量为2万的硫酸软骨素，浓度为15MG/ML；角膜保护剂3，分子量为70万的壳聚糖，浓度为10MG/ML）。0031附图4中，角膜保护剂1,2,3均可在白内障手术，青光眼手术，视网膜复位术后显著减轻患者痛觉。（P005）（角膜保护剂1分子量为50万的透明质酸钠，浓度9MG/ML；角膜保护剂2分子量为2万的硫酸软骨素，浓度为15MG/ML；角膜保护剂3，分子量为70万的壳聚糖，浓度为10MG/ML）。说明书CN104083396A1/2页10图1图2图3说明书附图CN104083396A102/2页11图4说明书附图CN104083396A11。