一种小儿退热药物 【技术领域】
本发明涉及一种小儿退热药物，属于中药领域。
背景技术
儿童是祖国的未来，我国有3亿儿童，确保其健康成长，对中华民族的繁衍昌盛意义重大。根据临床资料统计，急性上呼吸道感染是儿科最常见的疾病，约占儿科门诊量的80％以上，发热为其最常见的临床症状，持续发热可引起体内调节功能紊乱等一系列不良反应。因此，对小儿急性上呼吸道感染尤其伴有发热者应采取积极有效的治疗措施。
目前已知小儿急性上呼吸道感染约90％以上是由病毒感染所致，而西药对病毒感染有直接作用者尚不多见，国内业已投放市场的治疗小儿急性上呼吸道感染的中成药新品种，多为辛凉解表、清热解毒类，对小儿上感常见临床表现寒热夹杂证针对性较强者尚不多见。因此，深入开展小儿上感治疗学研究，开发适合小儿上感寒热夹杂证型之外用中成药，对丰富中医辨证施治内容，发挥中医药对小儿上感的治疗学优势，无疑具有十分重要的现实意义。
【发明内容】
本发明提供了一种小儿退热药物，
本发明还提供制备方法。
本发明药物是以下述重量比的原料制备而成：
柴胡300-700 黄 芩100-400 青 蒿100-300
桂枝100-300 荆芥穗100-300 薄荷脑0.5-3
制备本发明药物的上述原料重量比优选为：
柴胡400-600 黄 芩200-300 青 蒿100-200
桂枝100-200 荆芥穗100-200 薄荷脑0.5-2
制备本发明药物的原料药物最佳重量比是：
柴胡500 黄芩250 青蒿150 桂枝150 荆芥穗150 薄荷脑1
上述原料药物按照常规的制剂工艺，可以制备常用的临床药剂，例如，丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、咀嚼剂、膏剂、糖浆剂、气雾剂、栓剂、软胶囊、滴丸、外用药剂等。在制剂过程当中，可以加入常用的药物赋形剂。
制备方法是：
1.按照上述原料组方，取柴胡，青蒿，桂枝，荆芥穗四味药，加10-14倍量水，加热蒸馏4-6小时，收集蒸馏液，分取挥发油，备用。水煎液滤过，药渣再加6-9倍量水煎煮0.5-1小时，滤过，合并水煎液，减压浓缩至相对密度约1.09(50℃)，冷却后加乙醇使含醇量达70-80％，冷藏24小时，滤过，滤液减压回收乙醇(60-70℃，-0.08Mpa)，浓缩至相对密度约为1.25(60℃)，备用。
2.取黄芩饮片，分别加8-12倍量水煎煮1-3次，每次0.5-2小时，滤过后药液加2mol/L盐酸调pH至1.0-2.0，70-90℃保温20-50分钟，静置12小时后离心(4000rpm)，沉淀加6-8倍量水搅匀，用40％氢氧化钠溶液调pH至7.0～7.5，再加入等量乙醇搅溶，滤过，滤液加2mol/L盐酸调pH至1.0～2.0，充分搅拌，加热至50-70℃，保温20-50分钟，静置12小时，离心(4000rpm)，沉淀用水洗至pH约为5.0，继用乙醇洗至pH约为7.0，得到黄芩苷粗品，加入70％乙醇120ml制成悬浊液，备用。
以上原料供制备口服液，颗粒，栓剂，外用制剂等。
本发明药物的鉴别方法及含量测定方法如下：
[鉴别方法]：
(1)取本发明药物5g，加石油醚10ml，萃取，倾出上清液，低温水浴挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取桂枝对照药材1g，加乙醚20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液自然挥干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液4uL，供试品溶液8uL分别点于同一以0.5％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)—醋酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的橙色斑点。
(2)取上述方法(1)项下经石油醚提取后的残渣，加醋酸乙酯10ml，萃取，倾出上清液，低温水浴蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取青蒿对照药材1g，加乙醚20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液自然挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIB)试验，吸取对照药材溶液4uL，供试品溶液8uL，分别点于同一以0.5％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇(15∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下(365nm)检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的天蓝色荧光斑点。
(3)取荆芥穗对照药材1g，加乙醚20ml，超声20分钟，滤过，滤液低温挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液8uL，上述方法(1)项下供试品溶液8uL，分别点于同一以0.5％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)—醋酸乙酯—甲酸(9∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.05％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同地红色斑点。
(4)取本发明药物5g，加30ml饱和氯化钠水溶液搅拌，滤过，取滤液20ml，乙醚萃取两次(20ml，15ml)，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇萃取三次(20ml，15ml，15ml)合并正丁醇液，低温水浴蒸干，残渣加甲醇2ml，作为供试品液。另取柴胡对照药材1g，加甲醇20ml，超声20分钟，滤过，滤液低温蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液8uL，供试品溶液12uL，分别点于同一以0.5％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇(4∶1)为展开剂，浓氨水饱和10分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯下(365nm)检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的天蓝色荧光斑点，喷20％氢氧化钠乙醇液荧光斑点增强。
含量测定方法：照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇—水—磷酸(47∶53∶0.2)为流动相，检测波长为280nm，理论板数按黄芩苷计算应不低于2000。
对照品溶液的制备：精密称取在105℃干燥至恒重的苷对照品，加甲醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品1g，精密称定，加甲醇30ml，超声(250W，40KHz)40分钟，移至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以微孔滤膜滤过(0.45μm)滤过，即得。
测定法：分别精密吸取对照品与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
依照上述方法测得本发明药物每1g含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于16.0mg。
采用本发明药物对小儿上感发热(表寒里热证)临床愈显率达75％，总有效率达86.67％
以下药效学实验资料，进一步证实了本发明药物的退热抗炎作用。
实验例 与功能主治相关的主要药效学研究
受试药物
名称：小儿退热浸膏
小儿退热浸膏小剂量组(以下简称小剂量)：含量：每g含生药量1.5g，批号：20010406。
小儿退热浸膏中剂量组(以下简称中剂量)：含量：每g含生药量3g，批号：20010406。
小儿退热浸膏大剂量组(以下简称大剂量)：含量：每g含生药量6g，批号：20010406。
扑热息痛：山东济南永宁制药有限公司生产，批号：200010201
阿司匹林：山东济南永宁制药有限公司生产，批号：19990101
试验试剂
2，4-二硝基苯酚：上海市试剂三厂生产，批号：891218
二甲苯：齐鲁石化公司研究院试剂厂生产，批号：911112
伤寒Vi多糖疫苗：北京市天坛生物制品股份有限公司生产，批号：2001030201。
酵母：烟台酵母厂生产。
流感病毒甲型溶液：由山东省卫生防疫站提供。
液体石蜡：济宁市化工研究所生产，批号：20001027。
试验动物
动物、品系、来源：昆明系小鼠、WISTER大鼠均由山东大学动物中心提供。动物合格证号：鲁动物质字200001002、200001003。家兔系新西兰纯种兔，由山东省卫生防疫站提供动物，动物合格证号为：200001007.
饲料：试验鼠、试验兔全价颗粒饲料，由山东省动物中心提供，执行标准：GB19424-94。
饲养：常规饲养，室温控制在22-26℃
试验方法与结果
一、小儿退热浸膏对发热的影响
1.小儿退热浸膏对脱脂牛奶所致发热的影响
挑选体温正常的家兔(体温为38～39.2℃)50只，随机分成5组，每只家兔静脉注射脱脂牛奶2ml/kg，3h后，每只家兔给生理盐水作为阴性对照，给药组分别小儿退热浸膏小剂量、中剂量、大剂量，阳性对照组口服1％扑热息痛5ml/kg(剂量相当于临床用量的10倍)，分别于给药后15min、0.5h、1h、2h、3h、4h测家兔肛温，实验结果见表1：
表1：小儿退热浸膏对脱脂牛奶所致发热的影响( X±SD)(℃)
正常 致热 给药后体温
组别 体温 体温 15min 0.5h 1h 2h 3h 4h
生理盐水组 38.81±0.32 40.04±0.24 40.45±0.25 40.75±0.48 41.03±0.53 41.25±0.51 41.33±0.50 41.41±0.50
小剂量组 38.80±0.28 39.95±0.26 40.15±0.23※ 40.44±0.22※ 40.63±0.22※ 40.77±0.24※ 41.03±0.26 41.19±0.38
中剂量组 38.69±0.37 39.87±0.19 40.16±0.21※ 40.42±0.28 40.63±0.25※ 40.66±0.28 40.97±0.26 40.97±0.36
大剂量组 38.87±0.27 40.02±0.27 40.06±0.21※※40.32±0.31※ 40.56±0.29※ 40.68±0.30 40.80±0.33※ 41.08±0.31
扑热息痛组 38.73±0.32 39.82±0.29 40.21±0.2 40.33±0.21※ 40.55±0.21※ 40.68±0.29※ 40.88±0.34※ 41.04±0.44
与生理盐水组比较※P＜0.05，※※P＜0.01
从试验可以看出：小儿退热浸膏解热作用起效比较快，小、中、大剂量在15min就可以起效，大剂量可以维持3h。起效时间扑热息痛快。
2.小儿退热浸膏对酵母所致大鼠发热的影响
挑选体温正常的大鼠50只(体温为36.6～38.3℃)，体重200-250g，随机分成5组，每组10只，每只大鼠背部皮下注射10％酵母1ml/100g，3小时后，每只大鼠分别给药小儿退热浸膏小剂量、中剂量、大剂量，阳性对照组口服0.5％扑热息痛1ml/100g(剂量相当于临床用量的10倍)，分别于给药后15min、0.5h、1h、2h、3h、4h测大鼠肛温，实验结果见表2：
表2：小儿退热浸膏对酵母所致大鼠发热的影响( X±SD)(℃)
正常 致热 给药后体温
组别 体温 体温 15min 0.5h 1h 2h 3h 4h
生理盐水组 37.33±0.52 38.63±0.47 38.87±0.42 39.04±0.32 39.21±0.21 39.29±0.19 39.34±0.34 39.06±0.41
小剂量组 37.49±0.47 38.67±0.37 38.56±0.41 38.59±0.40※ 38.99±0.33 39.14±0.28 39.00±0.43 38.73±0.36
中剂量组 37.45±0.50 38.72±0.44 38.46±0.44※ 38.66±0.48 38.84±0.42※39.08±0.32 39.19±0.19※ 38.79±0.34
大剂量组 37.36±0.25 38.68±0.26 38.53±0.23※ 38.52±0.47※※ 38.68±0.39 38.83±0.36※※ 38.90±0.36※ 38.84±0.31
扑热息痛组 37.27±0.42 38.64±0.30 38.55±0.30 38.74±0.33 38.82±0.39※39.12±0.34 39.10±0.18 38.95±0.26
与生理盐水组比较※P＜0.05，※※P＜0.01
3.小儿退热浸膏对伤寒副伤寒所致大鼠发热的影响
大鼠的挑选同酵母所致大鼠发热试验，每只大鼠腹腔注射伤寒-Vi多糖疫苗0.25ml/100g，1h后得大鼠致热体温，并在此时大鼠给药，给药体积、方法同前试验，实验结果见表3：
表3：小儿退热浸膏对伤寒副伤寒所致大鼠发热的影响( X±SD)(℃)
正常 致热 给药后体温
组别 体温 体温 15min 0.5h 1h 2h 3h 4h
生理盐水组 37.79±0.47 38.79±0.54 39.38±0.60 39.63±0.51 39.62±0.42 39.61±0.36 39.48±0.34 39.44±0.32
小剂量组 37.52±0.52 38.59±0.52 38.75±0.51※ 38.85±0.42※ 38.87±0.45 38.95±0.42※※ 38.84±0.31※※ 38.9±0.45※※
中剂量组 37.74±0.29 38.88±0.23 38.88±0.26※ 39.06±0.24※※39.07±0.34 39.08±0.35※ 39.06±0.46 38.91±0.65※
大剂量组 37.58±0.52 38.69±0.40 38.79±0.44※ 38.93±0.28※ 39.14±0.33 39.28±0.26※ 39.13±0.33 38.97±0.40※
扑热息痛组 37.61±0.51 38.87±0.42 38.96±0.34 39.08±0.34※ 39.14±0.33※39.14±0.29※※ 39.18±0.27 39.13±0.29※
与生理盐水组比较※P＜0.05，※※P＜0.01
4.小儿退热浸膏对2，4-二硝基苯酚所致家兔发热的影响
家兔挑选处理同脱脂牛奶所致发热试验，每只家兔背部皮下注射2，4-二硝基苯酚30mg/kg，1h后得大鼠致热体温，并在此时家兔给药，给药体积、方法同脱脂牛奶所致发热试验。试验结果见表4：
表4：小儿退热浸膏对2，4-二硝基苯酚所致家兔发热的影响( X±SD)(℃)
正常 致热 给药后体温
组别 体温 体温 15min 0.5h 1h 2h 3h 4h
生理盐水组 38.24±0.36 40.37±0.56 40.34±0.48 40.20±0.37 40.11±0.29 39.65±0.31 39.29±0.26 39.17±0.27
小剂量组 38.75±0.32 40.49±0.53 39.97±0.42 39.84±0.40 39.76±0.24※ 39.43±0.28 39.14±0.30 38.98±0.21
中剂量组 38.74±0.30 40.33±0.62 39.85±0.49※ 39.69±0.46※39.69±0.39※ 39.45±0.30※ 39.16±0.30 39.04±0.30
大剂量组 38.58±0.42 40.32±0.52 39.87±0.42※ 39.83±0.32※39.73±0.21※※39.33±0.21※ 39.02±0.28※38.92±0.24
扑热息痛组 37.61±0.34 40.69±0.42 40.15±0.59 39.94±0.51 39.67±0.37※ 39.31±0.38※ 39.15±0.43 39.05±0.33
与生理盐水组比较※P＜0.05，※※P＜0.01
从试验可以看出：小儿退热浸膏解热作用起效比较快，中、大剂量在15min就可以起效，扑热息痛在1h才能有显著性差异。
二、小儿退热浸膏抗炎作用试验
取昆明种小鼠50只，体重18-22g，随机分成5组，每组10只，每只小鼠右耳内外面均匀涂二甲苯0.25ul，1.5h后分别小儿退热浸膏小剂量、中剂量、大剂量，及口服0.25％阿司匹林0.2ml/10g(剂量相当于临床用量的10倍)，于给药后30min后处死小鼠，剪下左右两耳，用直径7mm的打孔器在相同的位置打下耳片，电子天平称重，计算抑制百分率(对照组差值-实验组差值/对照组差值)实验结果见表5：
表5：小儿退热浸膏对二甲苯所致炎症作用的影响( X±SD)
组别 动物数 右耳-左耳(mg) 抑制百分率
盐水组 10 8.48±1.73
基质组 10 7.32±1.57 13.6
小剂量组 10 4.31±1.12※※ 49.7
中剂量组 10 3.22±1.15※※ 62.4
大剂量组 10 3.39±1.83※※ 60.4
阿司匹林 10 6.63±2.30※ 22.6
与生理盐水组比较※P＜0.05，※※P＜0.01
从试验可以看出：小儿退热浸膏抗炎作用显著，小、中、大剂量抗炎作用具有显著性差异，抗二甲苯引起的渗出明显好于阿司匹林。
三、小儿退热浸膏对流感病毒感染肺指数的影响
取健康小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，在乙醚浅麻下用0.25ml注射器吸取稀释的流感病毒甲液约15个LD50，约0.15ml滴鼻，然后每天每只小鼠分别给予生理盐水、小儿退热浸膏小剂量、中剂量、大剂量，每天4次，连续4天，于第四天杀剖小鼠，打开胸腔取出全肺称重，计算肺指数(肺重/小鼠体重)和抑制率(对照组平均肺指数-实验组平均肺指数/对照组平均肺指数)实验结果见表6：
表6：小儿退热浸膏对流感病毒肺感染的影响( X+SD)
组别 动物数 肺指数 抑制百分率
生理盐水组 10 1.84±0.25
基质组 10 1.78±0.21 3.3
小剂量组 10 1.65±.17※ 10.3
中剂量组 10 1.61±0.23※ 12.5
大剂量组 10 1.54±0.16※※ 16.3
阿司匹林组 10 1.64±0.13※ 10.9
与生理盐水组比较※P＜0.05，※※P＜0.01
从试验可以看出：小儿退热浸膏具有明显的降低流感病毒引起的肺部重量的增加，降低肺感染指数的作用。
通过上述实验可以看出：小儿退热浸膏具有明显的解热作用，能够降低脱脂牛奶、酵母、伤寒-Vi多糖疫苗、2，4-二硝基苯酚所致的发热；具有明显的抗炎作用，能够降低二甲苯所致小鼠耳廓肿胀率；具有明显的抗病毒作用，降低流感病毒引起的肺部重量的增加，降低肺感染指数，药效学作用与功能主治相吻合。
最佳实施方式
实施例1
柴胡300g 黄芩100g 青蒿100g 桂枝100g 荆芥穗100g 薄荷脑0.5g
制法：
取以上处方中柴胡，青蒿，桂枝，荆芥穗四味药，加12倍量水，加热蒸馏5小时，收集蒸馏液，收集重蒸馏液约1000ml，分取挥发油，备用。水煎液滤过，药渣再加8倍量水煎煮0.5小时，滤过，合并水煎液，减压浓缩至相对密度约1.09(50℃)，冷却后加乙醇使含醇量达80％，冷藏24小时，滤过，滤液减压回收乙醇(60-70℃，-0.08Mpa)，浓缩至相对密度约为1.25(60℃)，备用。
取黄芩饮片，分别加10倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过后药液加2mol/L盐酸调pH至1.0~2.0，80℃保温30分钟，静置12小时后离心(4000rpm)，沉淀加6-8倍量水搅匀，用40％氢氧化钠溶液调pH至7.0～7.5，再加入等量乙醇搅溶，滤过，滤液加2mol/L盐酸调pH至1.0～2.0，充分搅拌，加热至60℃，保温30分钟，静置12小时，离心(4000rpm)，沉淀用水洗至pH约为5.0，继用乙醇洗至pH约为7.0，得到黄芩苷粗品，
上述原料药，加入薄荷脑，混合均匀，制成口服液。
实施例2
制备本发明药物的上述原料重量比优选为：
柴胡600g 黄芩300g 青蒿200g 桂枝200g 荆芥穗200g 薄荷脑2g
所述原料药混合粉碎，过100目筛，加入适量炼蜜，制成蜜丸。
实施例3
柴胡700g 黄芩400g 青蒿300g 桂枝300g 荆芥穗300g 薄荷脑3g
按实施例1所得原料，加入药用淀粉和粉碎的薄荷脑，混合均匀，造粒，压片，制成片剂。
实施例4
柴胡400g 黄芩200g 青蒿100g 桂枝100g 荆芥穗100g 薄荷脑0.5g
按实施例1所得原料，加薄荷脑及适量辅料制成颗粒剂。