杨树诱变育种新方法.pdf

一种杨树诱变育种新方法，为一种经γ射线诱导突变从而经培育得到大量变异植株的新方法。包括诱变对象的选择，辐射时机的选择和辐射处理，其中，所述的诱变对象为杨树愈伤组织胚性细胞，所述的辐射时机为杨树胚性细胞大量发生时间段，所述的辐射处理总剂量为20～50Gy，剂量率为70～370Gy/H。

1、  一种杨树诱变育种新方法，包括诱变对象的选择，辐射时机的选择和辐射处理，其特征在于：所述的诱变对象为杨树愈伤组织胚性细胞，所述的辐射时机为杨树胚性细胞大量发生时间段，所述的辐射处理总剂量为20～50Gy，剂量率为70～370Gy/H。

2、  根据权利要求1所述的杨树诱变育种新方法，其特征在于：获得杨树胚性细胞大量发生时期的步骤为：
第一步：选取杨树组培苗茎段切成1～2mm作为外植体；
第二步：将茎段接种在脱分化培养基MS+2，4-D 0-1.0mg/ml+KT0-0.5mg/ml+NAA 0-1.0mg/ml+ZT 0-0.5mg/ml上脱分化72～120小时；
第三步：第二步所得愈伤组织转接至再分化培养基MS+6-BA0-1.0mg/ml+KT 0-0.5mg/ml+IAA 0-1.0mg/ml+ZT 0-0.5mg/ml上再分化72～96小时，达到杨树胚性细胞大量发生时间段。

3、  利用权利要求1或2所述的杨树诱变育种新方法的用途，获得优良的杨树变异植株。

杨树诱变育种新方法
技术领域
本发明杨树诱变育种新方法涉及一种对杨树胚性细胞的辐射诱导突变法，尤其是经γ射线诱导突变从而经培育得到大量变异植株的新方法。
背景技术
树木育种研究发展表明，传统的方法存在年限长，育种进展慢等缺点，应用高新技术结合常规育种方式是当前树木育种的主要方向。
利用理化因子诱变，选育优良突变体，培育成品种，在品种改良上被广泛利用。其中最主要是用X-射线、γ-射线辐射种子或其他繁殖器官，但经辐照后的突变频率极低(10^-8-10^-5)，因此要求被处理的个体(种子、芽块或茎等)的数量必须大。就杨树而言，如果用它的种子、枝条、单芽作为处理材料要达到一定的数量是难以实现的。
而胚性细胞是具有全能性表达的能力一种细胞，且因其数量庞大，以其作为单位进行诱变处理，则可获得数量多，种类多的突变植株。
发明内容
本发明杨树诱变育种新方法的目的在于提供一种可获得大量杨树突变植株的新方法。
为达上述目的，本发明提供一种杨树诱变育种新方法，包括诱变对象的选择，辐射时机的选择和辐射处理，其中，所述的诱变对象为杨树愈伤组织胚性细胞，所述的辐射时机为杨树胚性细胞大量发生时间段，所述的辐射处理总剂量为20～50Gy，剂量率为70～370Gy/H。
获得杨树胚性细胞大量发生时期的步骤为：
第一步：选取杨树组培苗茎段切成1～2mm作为外植体；
第二步：将茎段接种在脱分化培养基MS+2，4-D 0-1.0mg/ml+KT0-0.5mg/ml+NAA 0-1.0mg/ml+ZT 0-0.5mg/ml上脱分化72～120小时；
第三步：第二步所得愈伤组织转接至再分化培养基MS+6-BA0-1.0mg/ml+KT 0-0.5mg/ml+IAA 0-1.0mg/ml+ZT 0-0.5mg/ml上再分化72～96小时，达到杨树胚性细胞大量发生时间段。
利用杨树诱变育种新方法的用途，获得优良的杨树变异植株。
本发明的优点是：
利用对胚性细胞大量发生时期的辐射诱变处理，克服了杨树诱变育种基数少，筛选生活周期长的劣势，经筛选、培育可获得优良变异植株。
具体实施方式
实施例1
一种杨树诱变育种新方法，包括诱变对象的选择，辐射时机的选择和辐射处理，所述的诱变对象为杨树愈伤组织胚性细胞，所述的辐射时机为杨树胚性细胞大量发生时期。
获得杨树胚性细胞大量发生时期的步骤为：
第一步：选择组培日龄40天，苗高4～5cm的欧美杨(黑杨派)组培苗，将其茎段切成1mm作为外植体；
第二步：将茎段接种在脱分化培养基MS+2，4D 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4g/L上脱分化120小时；
第三步：第二步所得愈伤组织转接至再分化培养基MS+6-BA0.2mg/L+KT 0.2mg/L+IAA 0.05+蔗糖30g/L+琼脂4g/L上再分化72小时，此时即为胚性细胞发生最多的时期。
将获得的大量欧美杨(黑杨派)胚性细胞置于总剂量为50Gy，剂量率为300Gy/H的γ射线下辐射，之后在温度25℃±2℃，光照时间为每天14h的条件下无菌培养得到单株，经过观察、筛选得到优良突变体。
实施例2
一种杨树诱变育种新方法，包括诱变对象的选择，辐射时机的选择和辐射处理，所述的诱变对象为杨树愈伤组织胚性细胞，所述的辐射时机为杨树胚性细胞大量发生时期。
获得杨树胚性细胞大量发生时期的步骤为：
第一步：选取白杨派组培苗茎段切成1～2mm作为外植体；
第二步：将茎段接种在脱分化培养基MS+2，4-D 0-1.0mg/ml+KT0-0.5mg/ml+NAA 0-1.0mg/ml+ZT 0-0.5mg/ml上脱分化72～120小时；
第三步：第二步所得愈伤组织转接至再分化培养基MS+6-BA0-1.0mg/ml+KT 0-0.5mg/ml+IAA 0-1.0mg/ml+ZT 0-0.5mg/ml上再分化72～96小时，达到杨树胚性细胞大量发生时间段。
将获得的大量白杨派胚性细胞置于总剂量为30Gy，剂量率为145Gy/H的γ射线下辐射，之后在温度25℃±2℃，光照时间为每天14h的条件下无菌培养得到单株，经过观察、筛选得到优良突变体。