《从罗布麻叶中提取总黄酮的方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《从罗布麻叶中提取总黄酮的方法.pdf（12页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、10申请公布号CN104208112A43申请公布日20141217CN104208112A21申请号201410476686122申请日20140918A61K36/2420060171申请人乌鲁木齐华新分析测试高科技开发公司地址830011新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市新市区科学北路374号72发明人李慕春贺飞宋良辉74专利代理机构石河子恒智专利代理事务所65102代理人李伯勤54发明名称从罗布麻叶中提取总黄酮的方法57摘要本发明公开了一种从罗布麻叶中提取总黄酮的方法，具体过程包含酶解提取，微滤，超滤膜除杂和大孔树脂纯化纯化和洗脱等工艺过程，与现有技术相比，本发明生产过程中只有大孔树脂洗脱工序。
2、需要乙醇，生产成本大大降低，并提高了生产的安全性；工艺过程中利用纯物理过程进行澄清、除杂、浓缩，可很大程度减轻环境污染，提高了产品质量安全；利用膜分离纯化后的提取液上大孔树脂柱进一步纯化，减小了大孔树脂被污染的程度，并大幅提高大孔树脂使用寿命，在优化的条件下，大孔树脂柱可反复使用13次以上，对黄酮的吸附量还可以保持在初次使用时吸附量的87以上，远超一般方法所述的58次，所得罗布麻叶总黄酮提取物中总黄酮含量最高可达80。51INTCL权利要求书2页说明书9页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书9页10申请公布号CN104208112ACN104208112A1/2。
3、页21一种从罗布麻叶中提取总黄酮的方法，其特征在于包含以下过程酶解提取将罗布麻叶除杂后，粉碎至150600M得罗布麻叶粉，按每KG罗布麻叶粉加入纤维素酶2000080000U，加入水中提取，料液比为重量的18150，在温度3060，时间60150MIN后，过3080M滤筛，取滤液待用，所述的滤筛为滤袋、滤网或滤膜中的一种；微滤通过微滤进行澄清处理，去除纤维类杂质，将酶解所得提取液用0105M微滤膜过滤，此处的微滤膜为陶瓷膜或者有机膜中的一种；超滤通过超滤膜分离去除大分子物质，用100010000D的超滤膜除去提取液中的大分子物质，所述的超滤膜为有机膜或者陶瓷膜中的一种；纯化用大孔树脂纯化，所述。
4、的大孔树脂为KX28、KX38、D101、AB8、HPD400、HPD600、XDA6、ADS17中的一种，大孔树脂填装径高比为16115，装填完树脂柱后，按照13柱床体积/H的速度循环上样，即树脂柱流出液直接进入上样料液桶再次上样，紫外检测器在340380NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为上样终点；洗脱静置0524H后进行洗脱，将所得洗脱液减压浓缩、干燥，得本发明的罗布麻叶总黄酮提取物。2根据权利要求1所述的从罗布麻叶中提取总黄酮的方法，其特征在于所述酶解提取中，按每KG罗布麻叶粉加入2000080000U的果胶酶，所述纤维素酶与果胶酶二者的比例是3139。3根据权利要求。
5、1所述的从罗布麻叶中提取总黄酮的方法，其特征在于所述滤渣进行重复提取13次，重复提取加水量为第一次加水量的30100，不加酶，温度3060，时间60150MIN，用3080M滤袋过滤，重复提取结束，合并所得滤液进入下一程序。4根据权利要求1所述的从罗布麻叶中提取总黄酮的方法，其特征在于所述微滤中，调节膜后压力为115BAR，膜前压力为1520BAR，跨膜压力055BAR，提取液温度为1560。5根据权利要求4所述的从罗布麻叶中提取总黄酮的方法，其特征在于所述微滤中，过滤至剩余1/31/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/31/5的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/31/5体积初始提取液。
6、时，终止分离，该过程进行13次。6根据权利要求15任一项所述的从罗布麻叶中提取总黄酮的方法，其特征在于所述超滤中，过滤时调节膜后压力为530BAR，膜前压力为535BAR，并且跨膜压力08BAR，提取液温度为1560，膜分离，过滤至剩余1/31/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/31/5的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/31/5体积初始提取液时，终止分离，滤过液进入下一工序。7根据权利要求15任一项所述的从罗布麻叶中提取总黄酮的方法，其特征在于所述纯化中的洗脱初始洗脱液PH值57的水，洗脱速度13倍柱床体积/H，洗脱液用量为14倍柱床体积；之后用1030乙醇洗脱，洗脱速度13倍柱床。
7、体积/H，洗脱液用量为13倍柱床体积；继续用5095乙醇洗脱，洗脱速度13倍柱床体积/H，洗脱液用量为13倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，进入减压浓缩，干燥。权利要求书CN104208112A2/2页38根据权利要求6任一项所述的从罗布麻叶中提取总黄酮的方法，其特征在于所述纯化中的洗脱初始洗脱液PH值57的水，洗脱速度13倍柱床体积/H，洗脱液用量为14倍柱床体积；之后用1030乙醇洗脱，洗脱速度13倍柱床体积/H，洗脱液用量为13倍柱床体积；继续用5095乙醇洗脱，洗脱速度13倍柱床体积/H，洗脱液用量为13倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，进入减压浓缩。
8、，干燥。权利要求书CN104208112A1/9页4从罗布麻叶中提取总黄酮的方法技术领域0001本发明涉及一种从罗布麻中提取总黄酮的方法，特别是一种从罗布麻叶中提取总黄酮的方法。背景技术0002罗布麻为夹竹桃科多年生宿根草本植物，罗布麻药用价值高，其根、茎、叶、花、全草入药。早在本草纲目、救荒本草、中就有相关记载。1977年罗布麻被正式录入中华人民共和国药典、能平肝安神、清热利水，用于治疗肝阳眩晕、心悸失眠、浮肿尿少、高血压、神经衰弱、肾炎浮肿。罗布麻不同部位有着不同的治疗功效。罗布麻叶中主要含有黄酮类物质，这些成分能够作用于人的心血管系统、神经系统、呼吸系统，从而起到降血压、降血脂、抗抑郁、。
9、镇静、止咳平喘的功效，除此之外，这些成分还有抗氧化、延缓衰老、抗突变和保肝的作用。0003总黄酮是罗布麻叶中的主要活性成分，主要有槲皮素、山奈酚，及其衍生物组成。罗布麻叶中黄酮类成分主要分布在叶脉维管束木质部导管壁、叶脉上下方的厚角组织、表皮细胞及外方蜡质层。特化的角质层等外围组织对提取黄酮类成分阻碍作用较大，酶解纤维素和角质层有助于黄酮类成分更好的溶出。0004现在主流的从罗布麻叶中提取总黄酮的方法主要是4085乙醇提取，并使用絮凝剂澄清提取液、之后减压浓缩除去乙醇，更近一步的是利用大孔树脂或者聚酰胺进行进一步纯化，获得获得罗布麻叶提取物浸膏，或者粉末。0005中国专利CN200410064。
10、5510、CN103463147A等使用乙醇提取、减压浓缩、壳聚糖等絮凝、聚酰胺柱层析纯化提取液，获得纯度超过50的总黄酮提取物。0006上述工艺方法在罗布麻叶总黄酮的提取分离纯化上做了大量工作，但是还存在一些不足主要在利用4085乙醇提取的工艺由于需要使用乙醇，从安全生产的角度需要防爆厂房，对生产设施的安全性要求较高；乙醇运输成本较高；食品级乙醇价格不菲，生产成本较高；生产过程中需要反复浓缩，显而易见能耗较高；柱层析上柱液成分复杂，生产中会大幅降低柱层析填料的使用寿命，增加生产成本；上柱液需要除去乙醇再上柱。0007针对现有罗布麻叶总黄酮提取分离工艺的不足，研究开发一种节能高效、低成本的罗布。
11、麻总黄酮提供工艺十分必要。发明内容0008本发明的目的是提供一种节能高效、低成本的从罗布麻中提取总黄酮的方法，特别是一种从罗布麻叶中提取总黄酮的方法。0009本发明的目的是通过以下过程实现的将罗布麻叶粉碎后，首先以水为溶剂，加入纤维素酶等水解酶进行提取，所得提取物用微滤膜进行澄清处理，滤过液用超滤膜除杂，除杂后的液体用纳滤膜浓缩，浓缩液直接上大孔树脂柱，用水洗脱后，再用醇洗脱，洗脱液浓缩除醇，喷雾干燥，即得到本发明的高纯度罗布麻叶总黄酮提取物。具体过程如下说明书CN104208112A2/9页5酶解提取将罗布麻叶除杂后，粉碎至150600M得罗布麻叶粉，按每KG罗布麻叶粉加入纤维素酶20000。
12、80000U，加入水中提取，料液比为重量的18150，在温度3060，时间60150MIN。0010提取结束，过3080M滤筛，取滤液待用。所述的滤筛可以为滤袋、滤网或滤膜，或者其他能达到200400过滤精度过滤装置，譬如板框式过滤等。0011所得滤渣最好进行重复提取13次，重复提取只用水，不加酶，加水量为第一次加水量的30100，最后合并滤液进入下一程序。0012上述的罗布麻叶粉在加入纤维素酶的同时还可加入2000080000U果胶酶，纤维素酶与果胶酶二者的比例是3139之间。0013微滤通过微滤膜进行澄清处理，去除纤维类杂质。0014将酶解提取步骤中所得提取液用0105M微滤膜过滤，所述的。
13、微滤膜可为陶瓷膜或者有机膜，优选为陶瓷膜。0015过滤时调节膜后压力为115BAR，膜前压力为1520BAR，跨膜压力055BAR，温度为1560，膜分离取透过液。0016上述的微滤过程至剩余1/31/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/31/5的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/31/5体积初始提取液时，终止分离，该过程可进行13次。0017合并上述所得透过液进入下一工序。0018超滤膜除杂通过超滤膜分离去除大分子物质。0019上一步骤中的滤过液用100010000D的超滤膜除去提取液中的大分子物质，此步骤中的膜可为有机膜或者陶瓷膜。优选的为陶瓷膜。过滤时调节膜后压力为530BAR，。
14、膜前压力为535BAR，跨膜压力08BAR，提取液温度为1560，膜分离，过滤至剩余1/31/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/31/5的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/31/5体积初始提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。0020纯化用大孔树脂纯化。0021选用的大孔树脂可为KX28、KX38、D101、AB8、HPD400、HPD600、XDA6、ADS17等。大孔树脂填装要求径高比为16115，滤过液中总黄酮含量与填料用量（充分用水浸泡后的体积）的使用量比例为每620MG总黄酮使用1ML填料。按需装填完树脂柱后，按照13柱床体积/H的速度循环上样，即树脂柱流出液。
15、直接进入上样料液桶再次上样，紫外检测器在340380NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。0022洗脱静置0524H后开始洗脱初始洗脱液PH值57的水，洗脱速度13倍柱床体积/H，洗脱液用量为14倍柱床体积；之后用1030乙醇洗脱，洗脱速度13倍柱床体积/H，洗脱液用量为13倍柱床体积；继续用5095乙醇洗脱，洗脱速度13倍柱床体积/H，洗脱液用量为13倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，减压浓缩，干燥，得本发明的罗布麻叶总黄酮提取物。0023与现有技术相比，本发明的优点在于提取液中加入水解酶，酶解叶片组织，条件温和，能够够呛较大程度地提高总。
16、黄酮的提取率；特别是生产过程中只有大孔树脂洗脱工说明书CN104208112A3/9页6序需要用到乙醇，生产成本大大降低，并提高了生产的安全性；工艺过程中利用纯物理过程进行澄清、除杂、浓缩，可很大程度减轻环境污染，提高了产品质量安全；利用膜分离纯化后的提取液上大孔树脂柱进一步纯化，减小了大孔树脂被污染的程度，并大幅提高大孔树脂使用寿命，在优化的条件下，大孔树脂柱可反复使用13次以上时，对黄酮的吸附量还可以保持在初次使用时吸附量的87以上，远超一般方法所述的58次，所得罗布麻叶总黄酮提取物中总黄酮含量最高可达80。具体实施方式0024实施例1罗布麻叶除杂后，粉碎过60目筛，称取100KG，加入纤。
17、维素酶6000000U，加入已调节PH值为5的水2500KG提取，温度50，时间90MIN。第一次提取结束，用48M滤袋过滤，取滤液待用。残渣进行第二次提取，第二次提取加水2000KG，不加酶，温度50，时间60MIN。第二次提取结束，用3080M滤袋过滤，合并2次滤液。上一步骤中合并的提取液用03M陶瓷膜过滤，过滤时调节膜后压力为2BAR，膜前压力为22BAR，跨膜压力02BAR，提取液温度为室温，进行膜分离，过滤至剩余1000KG提取液时，再加入1000KG水，继续进行膜分离至再次剩余约1000KG液体时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。上一步骤中的滤过液用10000D的陶瓷膜除。
18、去提取液中的大分子物质，过滤时调节膜后压力为5BAR，膜前压力为6BAR，跨膜压力1BAR，提取液温度为室温，膜分离，过滤至剩余1000KG提取液时，再加入初始提取液体积1000KG的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1000KG提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。选用HPD600大孔树脂，充分溶胀并冲洗至无醇味，量取1800L大孔树脂，填装径高比为110，按需装填完树脂柱后，按照15柱床体积/H的速度循环上样，即树脂柱流出液直接进入上样料液桶再次上样，紫外检测器在360NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。静置2H后开始洗脱。初始洗脱液为P。
19、H值6的水，洗脱速度2倍柱床体积/H，洗脱液用量为6倍柱床体积；之后用10乙醇洗脱，洗脱速度3倍柱床体积/H，洗脱液用量为2倍柱床体积；继续用70乙醇洗脱，洗脱速度3倍柱床体积/H，洗脱液用量为25倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，减压浓缩，干燥，得354总黄酮含量的罗布麻叶总黄酮提取物。0025实施例2罗布麻叶除杂后，粉碎过40目筛，称取100KG，加入纤维素酶3000000U，果胶酶6000000U，加入已调节PH值为5的水，1500KG提取，温度60，时间90MIN。第一次提取结束，用38M滤袋过滤，取滤液待用。残渣进行第二次提取，第二次提取加水1000KG，不加酶，温。
20、度50，时间60MIN。第二次提取结束，用3080M滤袋过滤，合并2次滤液。上一步骤中合并的提取液用01M陶瓷膜过滤，过滤时调节膜后压力为6BAR，膜前压力为7BAR，跨膜压力1BAR，提取液温度为室温，进行膜分离，过滤至剩余700KG提取液时，再加入700KG水，继续进行膜分离至再次剩余约700KG液体时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。上一步骤中的滤过液用5000D的有机膜除去提取液中的大分子物质，过滤时调节膜后压力为10BAR，膜前压力为12BAR，跨膜压力2BAR，提取液温度为60，膜分离，过滤至剩余700KG提取液时，再加入初始提取液体积700KG的水，继续进行膜分离至再次。
21、剩余700KG提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。选用XDA6大孔树脂，充分溶胀并冲洗至无醇味，量取2000L大孔树脂，填装径高比为110，按需装填完树脂柱后，按说明书CN104208112A4/9页7照15柱床体积/H的速度循环上样，即树脂柱流出液直接进入上样料液桶再次上样，紫外检测器在360NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。静置2H后开始洗脱。初始洗脱液为PH值6的水，洗脱速度2倍柱床体积/H，洗脱液用量为2倍柱床体积；之后用30乙醇洗脱，洗脱速度3倍柱床体积/H，洗脱液用量为2倍柱床体积；继续用70乙醇洗脱，洗脱速度3倍柱床体积/H。
22、，洗脱液用量为25倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，减压浓缩，干燥，得782总黄酮含量的罗布麻叶总黄酮提取物。0026实施例3罗布麻叶除杂后，粉碎过100目筛，称取50KG，加入纤维素酶4000000U，果胶酶1500000U，加入已调节PH值为55的水，500KG提取，温度55，时间120MIN。第一次提取结束，用30M滤袋过滤，取滤液待用。残渣进行第二次提取，第二次提取加水500KG，不加酶，温度50，时间60MIN。第二次提取结束，用3080M滤袋过滤，合并2次滤液。上一步骤中合并的提取液用05M陶瓷膜过滤，过滤时调节膜后压力为6BAR，膜前压力为7BAR，跨膜压力1B。
23、AR，提取液温度为室温，进行膜分离，过滤至剩余300KG提取液时，再加入300KG水，继续进行膜分离至再次剩余约300KG液体时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。上一步骤中的滤过液用10000D的有机膜除去提取液中的大分子物质，过滤时调节膜后压力为3BAR，膜前压力为35BAR，跨膜压力05BAR，提取液温度为40，膜分离，过滤至剩余300KG提取液时，再加入150KG的水，继续进行膜分离至再次剩余150KG提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。选用XDA6大孔树脂，充分溶胀并冲洗至无醇味，量取1000L大孔树脂，填装径高比为115，按需装填完树脂柱后，按照2柱床体积/。
24、H的速度循环上样，即树脂柱流出液直接进入上样料液桶再次上样，紫外检测器在350NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。静置05H后开始洗脱。初始洗脱液为PH值6的水，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积；之后用30乙醇洗脱，洗脱速度3倍柱床体积/H，洗脱液用量为2倍柱床体积；继续用95乙醇洗脱，洗脱速度3倍柱床体积/H，洗脱液用量为25倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，减压浓缩，干燥，得70总黄酮含量的罗布麻叶总黄酮提取物。0027实施例4将罗布麻叶除杂后，粉碎至300M得罗布麻叶粉，按每KG罗布麻叶粉加入纤维素酶50000U，。
25、同时加入20000U果胶酶，按料液比110加水，在温度50下提取90MIN，过38M滤袋取滤液，将滤渣最好进行重复提取2次，重复提取按罗布麻叶粉8倍量加水，最后合并滤液进入下一程序。将酶解提取步骤中所得提取液用03M微滤膜过滤，所述的微滤膜为陶瓷膜，过滤时调节膜后压力为5BAR，膜前压力为10BAR，温度为40，取透过液，微滤过程至剩余1/4体积提取液时，再加入初始提取液体积1/4的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/31/5体积初始提取液时，终止分离，该过程可进行3次，合并上述透过液用7000D的超滤膜除去提取液中的大分子物质，此步骤中的膜为有机膜，过滤时调节膜后压力为5BAR，膜前压力为。
26、8BAR，提取液温度为30，过滤至剩余1/3体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。选用的大孔树脂KX28，大孔树脂填装径高比为110，按照13柱床体积/H的速度循环上样，即树脂柱流出液直接进入上样料液桶再次上样，紫外检测器在370NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。静置12H后开始洗脱初始洗脱液PH值55的水，洗脱速度3说明书CN104208112A5/9页8倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积；之后用15乙醇洗脱，洗脱速度13倍柱床体积/H，洗脱液。
27、用量为13倍柱床体积；继续用65乙醇洗脱，洗脱速度2倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，60下减压浓缩，干燥至含水量小于或等于12，得本发明的罗布麻叶总黄酮提取物。0028实施例5将罗布麻叶除杂后，粉碎至400M得罗布麻叶粉，按每KG罗布麻叶粉加入纤维素酶60000U，同时加入30000U果胶酶，按料液比120加水，在温度40下提取60MIN。提取结束，过75M滤网，取滤液待用。将滤渣重复提取2次，重复提取按罗布麻叶粉重量的10倍加水，最后合并滤液进入下一程序。将酶解提取步骤中所得提取液用05M有机膜过滤，过滤时调节膜后压力为1BAR，膜前压力为3。
28、BAR，温度为20，膜分离取透过液。当上述的微滤过程至剩余1/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离。合并上述透过液用8000D的超滤膜除去提取液中的大分子物质，此步骤中的膜为有机膜，过滤时调节膜后压力为5BAR，膜前压力为12BAR，提取液温度为40，膜分离，过滤至剩余1/4体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。选用的大孔树脂为KX38，填装径高比为115，按照3柱床体积/H的速度循环上样，即树脂柱流出液直接进入上样料。
29、液桶再次上样，紫外检测器在360NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。静置5H后开始洗脱初始洗脱液PH值7的水，洗脱速度3倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积；之后用30乙醇洗脱，洗脱速度3倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积；继续用85乙醇洗脱，洗脱速度3倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，70下减压浓缩，干燥至含水量低于8，得本发明的罗布麻叶总黄酮提取物。0029实施例6将罗布麻叶除杂后，粉碎至250M得罗布麻叶粉，按每KG罗布麻叶粉加入纤维素酶50000U，同时加入80000U果胶酶，按料液比130。
30、加水，在温度60下提取100MIN。提取结束，过44M滤袋，取滤液待用。将滤渣重复提取3次，重复提取按罗布麻叶粉重量的15倍加水，最后合并滤液进入下一程序。将酶解提取步骤中所得提取液用05M陶瓷膜，过滤时调节膜后压力为15BAR，膜前压力为20BAR，温度为15，膜分离取透过液，上述的微滤过程至剩余1/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/4的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/4体积初始提取液时，终止分离，该过程进行3次。合并上述透过液用5000D的超滤膜除去提取液中的大分子物质，此步骤中的膜为有机膜，过滤时调节膜后压力为20BAR，膜前压力为28BAR，温度为15，过滤至剩余1/5体积。
31、提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。选用大孔树脂D101大孔树脂填装径高比为112，按照2柱床体积/H的速度循环上样，即树脂柱流出液直接进入上样料液桶再次上样，紫外检测器在380NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。静置12H后开始洗脱初始洗脱液PH值6的水，洗脱速度2倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积；之后用20乙醇洗脱，洗脱速度13倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积；继续用50乙醇洗脱，洗脱速度3倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积，以该。
32、部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，60下减压浓缩，干燥至含水量低于10，说明书CN104208112A6/9页9得本发明的罗布麻叶总黄酮提取物。0030实施例7将罗布麻叶除杂后，粉碎至380M得罗布麻叶粉，按每KG罗布麻叶粉加入纤维素酶80000U，按料液比120加水，在温度60下提取，时间60MIN，过38M滤膜，取滤液待用。将滤渣重复提取13次，重复提取按罗布麻叶粉重量的10倍加水，最后合并滤液进入下一程序。将酶解提取步骤中所得提取液用04M陶瓷膜过滤，过滤时调节膜后压力为15BAR，膜前压力为20BAR，取透过液。上述的微滤过程至剩余1/3体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，。
33、继续进行膜分离，该过程可进行13次，最后一次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离，合并上述透过液用2000D的陶瓷膜除去提取液中的大分子物质，过滤时调节膜后压力为20BAR，膜前压力为25BAR，提取液温度为60，过滤至剩余1/3体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/3体积初始提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。选用的大孔树脂为AB8，大孔树脂填装径高比为16115，按照13柱床体积/H的速度循环上样，即树脂柱流出液直接进入上样料液桶再次上样，紫。
34、外检测器在340NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。静置24H后开始洗脱初始洗脱液PH值6的水，洗脱速度2倍柱床体积/H，洗脱液用量为2倍柱床体积；之后用10乙醇洗脱，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积；继续用70乙醇洗脱，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，60下减压浓缩，干燥至含水量10以下，得本发明的罗布麻叶总黄酮提取物。0031实施例8将罗布麻叶除杂后，粉碎至420M得罗布麻叶粉，按每KG罗布麻叶粉加入纤维素酶50000U，同时加入50000U果胶酶，按料液比150加水，在温度。
35、60下提取，时间150MIN，过75M滤膜，取滤液进入用03M陶瓷膜过滤，过滤时调节膜后压力为5BAR，膜前压力为10BAR，取透过液。上述过程至剩余1/4体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/4体积初始提取液时，终止分离，该过程进行3次。合并上述透过液用6000D的陶瓷膜除去提取液中的大分子物质，过滤时调节膜后压力为8BAR，膜前压力为15BAR，提取液温度为50，过滤至剩余1/4体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。选用的大孔树脂为HPD400，。
36、大孔树脂填装径高比为16，按照1柱床体积/H的速度循环上样，即树脂柱流出液直接进入上样料液桶再次上样，紫外检测器在350NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，静置12H后开始洗脱初始洗脱液PH值6的水，洗脱速度2倍柱床体积/H，洗脱液用量为4倍柱床体积；之后用15乙醇洗脱，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为2倍柱床体积；继续用90乙醇洗脱，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为2倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，50下减压浓缩，干燥至含水量13以下，得本发明的罗布麻叶总黄酮提取物。0032实施例9将罗布麻叶除杂后，粉碎至500M得罗布麻叶粉，按每KG罗。
37、布麻叶粉加入纤维素酶20000U，同时加入60000U果胶酶，按料液比130加水，在温度40下提取，时间90MIN，过80M滤网，取滤液，将滤渣重复提取13次，重复提取按罗布麻叶粉重量的15倍加水，最后合并滤液进入下一程序。将酶解提取步骤中所得提取液用01M陶瓷说明书CN104208112A7/9页10膜过滤，调节膜后压力为10BAR，膜前压力为150BAR，温度为30，膜分离取透过液。上述的微滤过程至剩余1/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/4的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离，合并上述透过液用4000D的陶瓷膜除去提取液中的大分子物质，过滤时调节膜后。
38、压力为5BAR，膜前压力为13BAR，提取液温度为50，过滤至剩余1/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离，滤过液进入下一工序，选用的大孔树脂为HPD600，大孔树脂填装径高比为110，按照3柱床体积/H的速度循环上样，紫外检测器在350NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。静置6H后开始洗脱初始洗脱液PH值6的水，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为4倍柱床体积；之后用30乙醇洗脱，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积；继续用95乙醇洗脱，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗。
39、脱液用量为3倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，85下减压浓缩，干燥至含水量10以下，得本发明的罗布麻叶总黄酮提取物。0033实施例10将罗布麻叶除杂后，粉碎至180M得罗布麻叶粉，按每KG罗布麻叶粉加入纤维素酶50000U，同时加入50000U果胶酶，按料液比120加水，在温度50下提取100MIN。过75M滤膜，取滤液，将滤渣重复提取3次，重复提取按罗布麻叶粉重量的20倍加水，最后合并滤液进入下一程序。将酶解提取步骤中所得提取液用04M陶瓷膜或者有机膜过滤，调节膜后压力为15BAR，膜前压力为18BAR，温度为30，膜分离取透过液。上述的微滤过程至剩余1/3体积提取液时，再。
40、加入初始提取液体积1/3的水，该过程重复进行3次，最后一次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离，合并上述透过液用3000D的有机膜除去提取液中的大分子物质，过滤时调节膜后压力为10BAR，膜前压力为18BAR，提取液温度为25，过滤至剩余1/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离，滤过液进入下一工序。选用的大孔树脂为XDA6，大孔树脂填装径高比为115，按照2柱床体积/H的速度循环上样，紫外检测器在370NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。静置15H后开始洗脱初始洗脱液PH值65。
41、的水，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为4倍柱床体积；之后用20乙醇洗脱，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积；继续用85乙醇洗脱，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，60GH减压浓缩，干燥至含水量8以下，得本发明的罗布麻叶总黄酮提取物。0034实施例11将罗布麻叶除杂后，粉碎至178M得罗布麻叶粉，按每KG罗布麻叶粉加入纤维素酶30000U，同时加入60000U果胶酶，按料液比115加水，在温度60下提取，时间80MIN。提取结束，过44M滤袋，取滤液待用。将滤渣重复提取2次，重复提取按罗布麻叶粉重量的10倍加水，最后。
42、合并滤液进入下一程序。将酶解提取步骤中所得提取液用01M陶瓷膜或者有机膜过滤，调节膜后压力为10BAR，膜前压力为15BAR，温度为60，膜分离取透过液。上述的微滤过程至剩余1/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/4的水，该过程重复进行3次后，继续进行膜分离至剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离，合并上述透过液用1000D的有机膜或者陶瓷膜除去提取液中的大分子物质，过滤时调节膜后压力为30BAR，膜前压力为33BAR，提取液温度为50，过滤至剩余1/5体积提取说明书CN104208112A108/9页11液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初。
43、始提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。选用的大孔树脂为ADS17，大孔树脂填装径高比为112，按照2柱床体积/H的速度循环上样，紫外检测器在360NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。静置3H后开始洗脱初始洗脱液PH值58的水，洗脱速度2倍柱床体积/H，洗脱液用量为4倍柱床体积；之后用30乙醇洗脱，洗脱速度2倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积；继续用70乙醇洗脱，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，50下减压浓缩，干燥至含水量9以下，得本发明的罗布麻叶总黄酮提取物。0035实施例1。
44、2将罗布麻叶除杂后，粉碎至300M得罗布麻叶粉，按每KG罗布麻叶粉加入纤维素酶20000U，同时加入40000U果胶酶，按料液比130加水，在温度60下提取，时间150MIN，过3080M滤袋取滤液，将滤渣重复提取1次，重复提取按罗布麻叶粉重量的30倍加水，合并滤液进入下一程序。将酶解提取步骤中所得提取液用015M陶瓷膜或者有机膜过滤，调节膜后压力为8BAR，膜前压力为10BAR，温度为60，膜分离取透过液。上述的微滤过程至剩余1/3体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，该过程重复进行3次后，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离，合并上述透过液用3000D的有。
45、机膜或者陶瓷膜除去提取液中的大分子物质，过滤时调节膜后压力为5BAR，膜前压力为10BAR，提取液温度为60，过滤至剩余1/3体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。选用的大孔树脂为ADS17，大孔树脂填装径高比为112，按照1柱床体积/H的速度循环上样，紫外检测器在360NM波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。静置10H后开始洗脱初始洗脱液PH值6的水，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积；之后用20乙醇洗脱，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用。
46、量为3倍柱床体积；继续用65乙醇洗脱，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，60下减压浓缩，干燥动态含水量13以下，得本发明的罗布麻叶总黄酮提取物。0036实施例13将罗布麻叶除杂后，粉碎至150M得罗布麻叶粉，按每KG罗布麻叶粉加入纤维素酶30000U，同时加入60000U果胶酶，按料液比130加水，在温度60下提取，时间120MIN。提取结束，过75M滤袋取滤液，将滤渣重复提取3次，重复提取按罗布麻叶粉重量的10倍加水，最后合并滤液进入下一程序。将酶解提取步骤中所得提取液用02M陶瓷膜或者有机膜过滤，调节膜后压力为10BAR，膜前压力为。
47、15BAR，温度为55，膜分离取透过液。上述的微滤过程至剩余1/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离，合并上述透过液用2000D的有机膜或者陶瓷膜除去提取液中的大分子物质，过滤时调节膜后压力为30BAR，膜前压力为35BAR，提取液温度为60，过滤至剩余1/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离，滤过液进入下一工序，选用的大孔树脂为ADS17，大孔树脂填装径高比为110，按照2柱床体积/H的速度循环上样，紫外检测器在360NM波长在线检测，至流出液的。
48、紫外吸收强度不再发生变化为止，此时为上样终点。静置15H后开始洗脱初始洗脱液PH值62的水，洗脱速度15倍说明书CN104208112A119/9页12柱床体积/H，洗脱液用量为4倍柱床体积；之后用25乙醇洗脱，洗脱速度2倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积；继续用70乙醇洗脱，洗脱速度1倍柱床体积/H，洗脱液用量为3倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标，收集完毕后，55下减压浓缩，干燥至含水量12以下，得本发明的罗布麻叶总黄酮提取物。0037实施例14将罗布麻叶除杂后，粉碎至180M得罗布麻叶粉，按每KG罗布麻叶粉加入纤维素酶80000U，同时加入80000U果胶酶，按料液比140加水。
49、，在温度60下提取，时间120MIN。提取结束，过75M滤网取滤液，将滤渣重复提取2次，重复提取按罗布麻叶粉重量的20倍加水，最后合并滤液进入下一程序。将酶解提取步骤中所得提取液用025M陶瓷膜或者有机膜过滤，调节膜后压力为8BAR，膜前压力为10BAR，温度为50，膜分离取透过液。上述过程至剩余1/4体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离，合并上述透过液用2000D的有机膜或者陶瓷膜除去提取液中的大分子物质，过滤时调节膜后压力为20BAR，膜前压力为33BAR，提取液温度为60，膜分离，过滤至剩余1/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/5体积初始提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。选用的大孔树脂为HPD400，大孔树脂。