用于提高机体免疫功能的口服金黄色葡萄球菌滤液制剂 【技术领域】
本发明涉及生物药物，具体地说是用于提高机体免疫功能的口服金黄色葡萄球菌滤液制剂。
背景技术
现在人们交往日益频繁，细菌、病毒等引起的疾病也乘机活动，尤其人们免疫功能低下时，易受侵犯而致病，影响了身体健康，特别是儿童及老年人由于免疫功能较为软弱更易受致病菌的侵害。
肿瘤是严重威胁人类生命健康的疾病之一，目前，它已成为人类的最大杀手；从现阶段的治疗手段来看，主要有化疗和放疗两种方法，其中的化疗药物对正常细胞有较大的毒副作用，严重影响机体地免疫功能。随着对肿瘤发生机理的研究，人们认识到：潜在的肿瘤细胞在正常机体内是经常产生的，由于这些潜在的肿瘤细胞不断被机体的免疫系统识别并杀灭，因此大多数动物和人体不会表现出肿瘤，而当机体的这一功能不足时，就会发展成为肿瘤；因此提高机体免疫系统对肿瘤细胞的识别和杀伤能力，就越来越受到重视并发展成为肿瘤的预防和治疗手段，即肿瘤的杀伤作用，通过各种免疫调节剂来激活机体免疫系统以杀灭肿瘤细胞，现在已越来越受到人们的重视；从目前提高机体免疫功能的制剂来看，属于生物口服制剂且药效显著的制剂还比较少，经常使用的为一些中药品种，如云芝多糖，香菇多糖等；生物制品多为一些注射剂如升白能、ok-432等，使用起来极为不便。
【发明内容】
为了克服目前口服生物制剂品种的缺乏，本发明地目的在于提供一种服用方便的用于提高机体免疫功能的口服金黄色葡萄球菌滤液制剂。
为实现上述目的，本发明提供的提高机体免疫功能口服制剂是以金黄色葡萄球菌滤液制剂为主要原料，其中含有(肠毒素)SEA、SEB、SEC、SED及TSST-1作为提高机体免疫功能的活性成份，滤液中肠毒素的含量为5～10ng/ml；
所述的金黄色葡萄球菌的滤液主要是从金黄色葡萄球菌发酵液中分离制得；其中所述滤液通过如下步骤制得：金黄色葡萄球菌发酵液(肠毒素的含量约为5～30μg/ml)经浓缩，用阳离子柱层析分离，用5～400mmol/L的PB缓冲液梯度洗脱，收集28000～33000D分子量段，调配，灭菌，即可得到；
其中还可以加入适量的药物辅料，经常采用的药物辅料为甜菊糖、阿斯巴甜等；
所需产品的具体制备过程为：首先培养金黄色葡萄球菌于适当的培养基(例如：猪心培养基、LB培养液)中进行培养，然后分离纯化出含有SEA、SEB、SEC、SED及TSST-1的培养液；所述的培养液为LB培养液，其PH值为6.5～7.5。
口服金黄色葡萄球菌滤液制剂可升高人体内白细胞的数量，也可提高人体内白小板数量，其进一步可用于作为提高人体内白小板数量的制剂。
本发明具有如下优点：
1.疗效确切。本发明产品为一种从金黄色葡萄球菌的培养液中提取的一类物质，动物实验表明，经口服给药后，能显著提高小鼠免疫细胞的活性和小鼠的淋转率，可显著提高机体的免疫功能。
2.克服了目前口服生物制剂过少不足，毒副作用小。
【具体实施方式】
本发明实施例所采用的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)已经保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNO.0165(详见中国专利91106067.7)。
菌株情况：从一病人的尿中分离得到的菌株。
菌株CGMCC NO.0165的特征：
1.形态特征：为典型的球体，直径0.2～1.2μm，各个菌体的大小排列也较整齐，细菌繁殖时呈多平面不规则分裂，堆积成葡萄串状排列，无鞭毛，不形成夹膜，不产生芽孢。
2.培养特征：为厌氧菌，在普通LB培养基上生长良好，最适PH76.2～7.4，最适培养增值温度为37℃，耐盐性强，普通琼脂培养18～24小时，形成凸起、光滑、不透明、金黄色、边缘整齐的菌落。
3.染色特征：革兰氏阳性染色。
4.生理生化特征：能分解葡萄糖、产酸，表达金黄色葡萄球菌肠毒素。
实施例1
接0165菌种于1ml的LB斜面上，37℃培养12小时后，挑取单菌落，转接到含100ml的LB培养液的三角瓶中，于恒温摇床30℃培养8小时至对数生长期，按5％(按体积百分含量计)接种量，接种于发酵罐中，再于35℃培养20小时，离心除去菌体后所得到发酵液进行浓缩，得到的样品经离子层析柱(本实施例中采用羧甲基纤维素)纯化；分别用5mmol/L PB缓冲液(PH5.5)、20mmol/L PB缓冲液(PH6.8)分别洗脱，收集所需组分，调配，加入阿斯巴甜，灭菌，分装即得。
实施例2
接0165菌种于1ml的LB培养液中，37℃摇床培养12小时后，转接到含30ml的LB培养液的三角瓶中，于恒温摇床30℃培养8小时至对数生长期，按5％(按体积百分含量计)接种量，接种于发效罐中，再于30℃培养20小时；离心除去菌体后所得到滤液进行透析、浓缩，得到的样品经离子层析柱(本实施例中采用羧甲基纤维素)纯化；分别用8mmol/L PB缓冲液(PH5.0)、10mmol/L PB缓冲液(PH6.8)、45mmol/L PB缓冲液(PH6.5)分步洗脱，收集所需组分，调配，加入阿斯巴甜，灭菌，分装即得。
实验例
本实验采用Laca小鼠，雄性，体重18～20g，实验组先全部采用环磷酰胺——处理，然后给以高(360ng/Kg)、中(180ng/Kg)、低(90ng/Kg)剂量(本发明药剂)，和给以云芝多糖，采用灌胃给药，每天一次，每次给药体积为0.5ml/20g，连续给药10天，停药后24小时处死动物并进行各项检查，实验结果如下表1。
表1.各组小鼠脾脏重量和指数变化比较n＝10组别脾脏重量(g) 脾脏指数 (ng/g)P值正常对照组0.272±0.05 9.22±2.03＜0.01高剂量组0.230±0.06 8.97±2.60＜0.01中剂量组0.21±0.04 7.96±1.69＜0.05低剂量组0.200±0.05 7.44±1.32＜0.05云芝多糖组0.220±0.04 8.84±1.47＜0.01环磷酰胺组0.185±0.02 6.60±0.42
表2.各组实验小鼠HC50(半数溶血值)反应的变化比较n＝10组别脾脏指数(ng/g)P值正常对照组366.66±42.28＜0.05高剂量组231.49±65.82＜0.05中剂量组240.72±50.40＜0.05低剂量组220.12±45.09＞0.05云芝多糖组232.30±39.52＞0.05环磷酰胺组187.07±33.88
表3.本品对小鼠NK细胞活性和ConA诱导淋巴细胞增值能力影响n＝12组别NK细胞活性 ConA反应(OD)正常对照组15.558±2.469a 0.664±0.088a高剂量组15.033±2.195a 0.791±0.185a中剂量组13.225±1.867a 0.654±0.155a低剂量组11.483±2.702b 0.711±0.155a云芝多糖组13.455±2.273a 0.705±0.109a环磷酰胺组9.842±2.852 0.413±0.048
与环磷酰胺组比较a：P＜0.01；b：P＜0.05。
表4.口服本品对小鼠IL-2和TNF含量的影响n＝10组别TNF(ng/ml) IL-2(ng/ml)正常对照组4.79±1.00a 11.72±1.44a高剂量组2.87±0.79a 8.43±2.01a中剂量组1.83±0.39a 6.81±2.60a低剂量组1.22±0.27a 4.32±1.18a云芝多糖组2.44±0.63a8.28±1.48a环磷酰胺组0.39±0.192.32±0.8
与环磷酰胺组比较a：P＜0.01。
从表1～4可知，金黄色葡萄球菌滤液经口服给药后，可显著提高机体的免疫功能。
1992年4月至1993年10月，沈阳市抗癌协会肿瘤康复医院、深圳边检中医肿瘤康复中心等单位应用金黄色葡萄球菌滤液对125例各种不同类型的病人进行了临床观察，总结如下：
本实验组共125例，男性58例，女性67例，11～79岁，平均年龄为57.96岁；
一般疾病：胃溃疡18例，结肠炎2例，肾炎1例，神经衰弱6例，脾亢2例，粒细胞减少症7例苯中毒2例，支气管炎2例，贫血4例；
肿瘤：食道癌16例，胃癌28例，肝癌1例，结肠癌16例，乳腺癌4例，肺癌10例，宫颈癌2例，脑膜瘤2例，慢粒2例；
每日早晚各服一支，30天为一疗程，一般疾病1个疗程，肿瘤患者3个疗程；结果如表5所示。
表5.疗效观察指标和结果类别服药前X服药后X P值IgG6790mg/L9400mg/L＜0.01淋巴细胞转化率49％61％＜0.01NK细胞活性14％21％＜0.01肿瘤标记物 CEA22ng/ml15ng/ml＜0.01 AFP-- hcG1800Iu/日920Iu/日＜0.01白细胞3400/mm36700/mm3＜0.01血小板7.8万/mm312.7万/mm3＜0.01
自觉症状：如疼痛、失眠、食欲不振等均有明显改善；
肿瘤病人KAPNOFSKY健康状况，总评分从45分增加到60分；无任何毒副反应。
可升高人体内白细胞的数量：服药前白细胞的数量为4.2±0.49(*109)个/L，服药前白细胞的数量为6.5±1.32(*109)个/L。