含番茄红素和辅酶Q10的制剂及其制备方法 技术领域：本发明涉及一种具有抗氧化、改善细胞呼吸、抗炎及改善血液循环功能的配方，从而可制备用于预防或治疗心脑血管疾病、癌症、前列腺增生、延缓衰老等疾病的软胶囊、滴丸、液体剂等可接受的制剂及其制备方法。
背景技术：番茄红素(Lycopene)是类胡萝卜素的一种，作为一种天然色素存在于自然界许多植物，呈红色，因最早发现于番茄而得名。从1995年至今，数百篇文献涉及番茄红素的功能研究和临床疗效，涉及的生理功能较多，充分肯定了番茄红素的抗氧化功能和预防前列腺增生、前列腺癌的功效。因此将番茄红素应用于保健食品中，在国外已很多，主要是用于延缓衰老、前列腺癌等。有关番茄红素的专利很多，如“含番茄红素的制品(俄)，含β-胡萝卜素、番茄红素、和叶黄素的组方用于食品、药品和化妆品”(德)，“含番茄红素等天然产物的增效混合物”(英)，“含番茄红素、月见草油和南瓜籽油的食品补充剂”(法)，“含番茄红素、多不饱和脂肪酸和抗氧剂的食品补充剂”(法)等。在油脂中番茄红素生物利用度较高。脂肪是影响番茄红素在肠道吸收地重要因素之一。
辅酶Q10(可简称为Co Q10，如果包括同系物时，则简称为Co Q，IUPAC-IUB-CBN名称为Ubiquinone-10，药品名称为Ubibecarenone)，最初是由牛的心肌线粒体中分离得到。存在于以人类为主的许多高级动植物线粒体的内膜中，是组成呼吸链的必要成分。20岁时，体内辅酶Q10达到最高值，20岁以后逐渐降低。目前市场上的辅酶Q10制剂存在生物利用度差异大、个体差异大等缺陷，寻找新的辅酶Q10制剂技术和/或配方，以提高生物利用度，降低个体差异的影响是当前开发中面临的重要课题。
γ-亚麻酸，英文名γ-Linolenic acid或Gamma-Linolenic acid简称GLA，学名为全顺式-6、9、12-十八碳三烯酸。属于n-6或ω-6型脂肪酸(6-Fatty acids)。γ-亚麻酸是一种多不饱和脂肪酸，具有熔点低、不溶于水，易溶于非极性溶剂的特性。一般可认为γ-亚麻酸是人体必需的脂肪酸，也是人体合成对生命有重要意义的前列腺素的前体，对机体的抗病防衰老有着显著的积极效果，γ-亚麻酸在人体内可以未酯化的形式存在或以酯化的形式参与胆固醇、甘油三酯和磷脂的组成成分，是生物膜的重要组分。
γ-亚麻酸在国外的应用，含γ-亚麻酸的保健品在发达国家大多数的天然食品店里都可以买得到，也是保健和预防医师一直很重视和推荐的保健品(药品)。在欧美等地极受消费者的欢迎。主要用作经前综合征、皮疹、消炎、心脑血管疾病、抗癌等。
α-亚麻酸，英文名α-Linolenic acid，学名为全顺式-9、12、15-十八碳三烯酸。α-亚麻酸是一种多不饱和脂肪酸，具有熔点低、不溶于水，易溶于非极性溶剂的特性。置空气中易氧化，聚合而成坚硬膜层。属于n-3或ω-3型脂肪酸(3-Fatty acids)。一般可认为α-亚麻酸是人体必需的脂肪酸。
上世纪70年代美国科学家注意到一个有趣的现象，生活于阿拉斯加的爱斯基摩人每天都摄食大量的脂肪，但他们的心脏病和癌症的发病率都很低。分析揭示原因在于他们摄入的脂肪中含有优质的n-3或ω-3型脂肪酸，美国心肺研究所(the National Heart Lung Institute)证实每天摄取微量的(1克)n-3型脂肪酸可使心血管疾病的发病率减低40％之多。
在心血管健康方面，α-亚麻酸是一种血液稀释剂，能预防血凝块形成，美国四个机构联合对15000所做的试验证实，富含n-3型脂肪酸对心血管健康有相当不错的效果。病理学家对40具尸检表明，腹部组织里的n-3型脂肪酸总含量与冠状动脉粥样硬化而造成的窄化程度有直接的关系。澳大利亚联邦科学及工业研究协会(Australia’s Commonwealth Scientific and IndustrialResearch Organazation)所进行的动物试验表明喂食n-3型脂肪酸的动物不易患心率不齐之症。荷兰有一项长期追踪研究表明，每天摄入一定量的n-3型脂肪酸的中风发作率药明显降低。普通番茄红素和辅酶Q10生物利用度低，难于起到稳定的疗效，更难于到达前列腺。番茄红素和辅酶Q10在油脂中的生物利用度较高，脂肪是影响番茄红素和辅酶Q10在肠道吸收的重要因素之一。
发明内容：本发明在于提供一种番茄红素和辅酶Q10与亚麻酸复合后，生物活性相互协同提高、生物利用度也大大提高，尤其是有利于到达一般生物活性物质难于达到的前列腺组织，从而有利于更好地发挥番茄红素和辅酶Q10治疗效果(如对前列腺增生的治疗作用等)的含番茄红素和辅酶Q10的制剂及其制备方法。
5、本发明的技术方案为：该制剂产品本质含有番茄红素、辅酶Q10、γ-亚麻酸、α-亚麻酸功效成分，其余量为辅料。将番茄红素、辅酶Q10、γ-亚麻酸、α-亚麻酸等有效成分的按一定比例组成配方，如下： 番茄红素 0.5％-40％
辅酶Q10 0.7％-50％
γ-亚麻酸 0.3％-70％
α-亚麻酸 0.3％-70％
制成的成品每次使用的剂量中含番茄红素2.5-20mg、辅酶Q103.5-25mg、γ-亚麻酸1.5-150mg、α-亚麻酸1.5-150mg，余量为药用辅料。除亚麻酸之外，其他溶剂基质为油酸、亚油酸等单和/或多不饱和脂肪酸等植物食用或药用油中的一种或几种组成。根据需要，药液里可以加入调香剂(如肉桂油等)。本发明的产品可以制成软胶囊、滴丸、液体剂等可接受得制剂。
本发明提供一种口服后生物活性高、吸收较好、药品稳定性好、使用方便的番茄红素辅酶Q10亚麻酸复合产品。
本发明产品的药效：
1、产品稳定性：制成的各种产品稳定性好，亚麻酸氧化率低；
2、抗氧化、清除体内自由基等功效；
3、改善衰老症状；
4、改善尿频、排尿困难等症状；
5、提高生物利用度：
具体实施方式：为清楚地说明本发明的可能组合，提供以上实施例，但绝不是为了限制本发明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。
实施例1、复方番茄红素辅酶Q10软胶囊
处方(1000粒)：
番茄红素 5g
辅酶Q10 7g
α-亚麻酸(含α-亚麻酸24％)： 160g
γ-亚麻酸(含γ-亚麻酸20％) 330g
工艺：
在氮气保护下，将配方量的α-亚麻酸和γ-亚麻酸混合，加入番茄红素和辅酶Q10，充分搅拌、溶解、过滤、脱气，送至填充机上方的罐内，待用；同时准备好软胶囊充填机上方保温明胶罐中的胶皮用的明胶溶液，待用；在30万级、21℃～25℃、RH％：39～41％的条件下，开动旋转模压机压丸，把制成的软胶囊洗净，在28±2℃下干燥19～27小时，分装、包装即得复方番茄红素辅酶Q10软胶囊500mg(粒内容物重)的红色软胶囊成品1000粒。
实施例2、复方番茄红素辅酶Q10软胶囊
处方(10万粒)：
番茄红素 0.6kg
辅酶Q10 1kg
α-亚麻酸(含α-亚麻酸83％)： 9kg
γ-亚麻酸(含γ-亚麻酸7％) 40kg：
工艺：
同实施例1(略)。得500mg内容物的红色软胶囊成品10万粒。
实施例3、复方番茄红素辅酶Q10软胶囊
处方(1000粒)：
番茄红素 20g
辅酶Q10 8g
α-亚麻酸(含α-亚麻酸12.3％)： 140g
γ-亚麻酸(含γ-亚麻酸82.8％) 335g：
工艺：
同实施例1(略)。得每粒含500mg内容物的红色软胶囊成品1000粒。
实施例4：复方番茄红素辅酶Q10滴丸
配方：(1000粒)：
番茄红素 5g
辅酶Q10 25g
α-亚麻酸(含α-亚麻酸77.1％)： 10g
γ-亚麻酸(含γ-亚麻酸64.6％) 10g：
PEG-6000 700g
工艺：
将PEG-6000置于不锈钢锅中，于油浴加热至90-100℃，待全部熔融后，加入αγ亚麻酸的混合液和番茄红素和辅酶Q10，搅拌均匀，转移至储液瓶中，密闭并保温在80-90℃，调节滴液定量阀，由上往下，滴入10-15℃的液状石蜡中，置石灰缸里干燥。得复方番茄红素辅酶Q10滴丸，每粒含有效成分50mg的红色滴丸成品。(每次服用10丸)
实施例5：复方番茄红素辅酶Q10滴丸
配方：(1000粒)：
番茄红素 10g
辅酶Q10 10g
α-亚麻酸(含α-亚麻酸16.1％)： 40g
γ-亚麻酸(含γ-亚麻酸8.6％) 60g：
PEG-6000 800g
工艺
同实施例4(略)。得红色滴丸成品。(每次服用10丸)
实施例6、复方番茄红素辅酶Q10脂肪乳口服液
配方：(1000粒)：
番茄红素 5g
辅酶Q10 25g
α-亚麻酸(含α-亚麻酸8.3％) 1800g
γ-亚麻酸(含γ-亚麻酸4.7％) 1800g
甘油 650g
大豆磷脂 380g
制备工艺：在100级的条件下，在氮气保护下，将大豆磷脂加入无盐水10000ml，再加入αγ亚麻酸油液、番茄红素、辅酶Q10，搅拌至溶，加入甘油，补加无盐水至25000ml。于70-80℃用组织打碎机制得粗乳。将粗乳迅速冷却至20℃以下，再用两步高压乳匀机乳化，即得细分散的亚微乳(脂肪乳)。送入分装机，按每瓶10ml分装，扎盖、包装、检验、合格、的成品。可制得2500支10ml之规格的复方脂肪乳口服液成品。
产品药学研究及功效：
一、产品的稳定性
实施例1、2、3、4、5、6六个样品在室温下避光保管，放置1、2、3、6、12个月，按时检查，每样品得外观基本不变，有效成分经检验也未发生变化。过氧化值不变。因此，初步认为各种产品及各种处方均可达到1年左右的保质期。
稳定性试验结果：样品 样品含量、鉴别 1月 2月 3月 6月 12月例1例2例3例4例5例6 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格 合格
结果表明该发明制备的样品，经过初步稳定性考察，产品质量基本稳定，可达一年以上。
二、抗衰老、抗氧化、清除体内自由基等功效
(一)降脂
材料
1.动物：SD大鼠，体重180-230g，合格证号“云动管B04”。
2.药品与试剂：
复方番茄红素辅酶Q10软胶囊 实施例1制得的样品 代号FLQ
胆固醇：上海化学试剂分装，批号：950517
胆盐：苏州东医用生化制品厂生产，批号：960101
丙基硫氧嘧啶片：广州市桥制药厂生产，批号：900523
猪油：市售
非诺贝特片：江苏泰兴制药厂生产，批号：960816
3.仪器：Mooarch1000型全自动生化仪(美国产)
方法
1.高脂乳化剂制备
将胆固醇、丙基硫氧嘧啶片研成粉末。按10％胆固醇、2％胆盐、1％丙基硫氧嘧啶、20％猪油量用蒸馏水配制成脂肪乳剂(W/V)。冰箱保存，用时放置热水浴中融化。
2.复方番茄红素辅酶Q10软胶囊对大鼠高脂模型血清脂质的影响
用上述SD大鼠40只，随机分为(1)正常对照组(2)模型对照组(3)FLQ小剂量组(4)FLQ大剂量组，每组10只大鼠，雌雄各半。分组后动物每天上午(1)组ig给蒸馏水，(2)(3)(4)组ig给等体积的高脂乳剂；下文(3)(4)组分别ig145mg/kg、290mg/kg，(1)(2)组给蒸馏水，连续20d。末次给药后，动物禁食16h，大鼠眼眶静脉丛取血，分离血清，用酶法测定血清胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、载脂蛋白A(APOA)、载脂蛋白B(APOB)。结果见表。
结果
由表可见，FLQ高剂量组能显著降低高脂模型大鼠血中的TC(P＜0.05)，低剂组也有降低趋势；对两组TG降低显著(P＜0.01)；对HDL-C、LDL-C、APOA、APOB无显著影响。
FLQ 组别 TC (mmol/L) TG (mmol/L) HDL-C (mmol/L) LDL-C (mmol/L) APOA (mmol/L) APOB (mmol/L) 正常对照组 1.37±1.02 0.92±0.29 0.99±0.25 0.18±0.18 0.379±0.010 0.052±0.042 模型对照组 2.67±0.33 0.85±0.22 1.12±0.38 1.10±0.19 0.373±0.011 0.050±0.012 非诺贝特 2.62±0.25 0.74±0.13 1.14±0.21 1.30±0.31 0.384±0.016 0.049±0.017 模型+ 高剂量组 2.30±0.26* 0.51±0.23** 1.09±0.23 0.92±0.29 0.381±0.018 0.057±0.005 模型+ 低剂量组 2.45±0.28 0.54±0.20** 1.04±0.29 1.23±0.22 0.363±0.005 0.051±0.005
模型对照组与正常对照组比较：ΔP＜0.05 ΔΔP＜0.01
给药组与模型对照组比较： *P＜0.05 **P＜0.01
(二)FLQ对衰老动物模型的促智作用研究
1材料
1.1实验动物 ICR小鼠，体重20±2g，雌雄各半，由云南省天然药物药理重点实验室提供，动物合格证编号为：滇实动证第00205号。
1.1.2药物及试剂
1.1.2.1供试品 实施例2制得的样品(代号FLQ)。临用时，用1％羧甲纤维素钠配制成5％、10％和20％的混悬液。
1.1.2.2对照品 脑康胶囊，临用时，用1％的羧甲纤维钠配制成5％的混悬液。
1.2实验方法和结果
先将小鼠分为空白对照组和衰老模型组。衰老模型组小鼠每天眼球后注射D-半乳糖0.12mg/g，连续一月[1]。小鼠造型后根据需要再分若干小组。实验时小鼠随机作如下分组：(1)空白对照组(动物不造型)，灌胃N.S。(2)造型对照组(动物造型)，灌胃N.S。(3)阳性药对照组，动物造型、灌胃脑康胶囊溶液(0.5g/kg，为临床二倍成人剂量)。(4)-(6)组为FLQ低、中、高剂量组，分别灌胃5％、10％和20％的FLQ溶液(用药量分别为临床2、5和10倍的成人剂量)。各组小鼠灌胃容积均为10ml/kg，每日一次，连续两周。于末次给药后作下列各项指标测定。
1.2.1 FLQ对衰老模型小鼠的学习和记忆维持的影响
1.2.1.1跳台试验 仿文献方法[2]，先将小鼠放入跳台反应箱内适应环境3分钟，然后给反应箱底的铜栅通以36V交流电，动物受到电击后，往往会跳至平台，以避伤害性刺激。由于平台窄小，不便停留，迫使其再次或多次跳至铜栅，但受到电击后又会迅速地跳回平台，如此训练5分钟，记录每鼠受到电击的次数，以此作为该鼠的学习成绩。24小时后重作测试。试验时，先将小鼠放在平台上，记录小鼠第一次跳下平台的时间(潜伏期)和3分钟内因跳下平台而受电击的次数(即错误次数)，以此作为记忆维持的指标。结果见表1。
表1 FLQ对衰老模型小鼠学习记忆的影响(跳台法)x±SD，n＝20组别剂量(g/kg.d) 学习成绩 记忆维持 5min错误次数 跳台潜伏期(秒) 5min错误次数空白对照组造型对照阳性药对照F低剂量L中剂量Q高剂量N.S 10mlN.S 10ml0.50.51.02.0 3.2±1.2** 4.8±1.3 3.7±1.2** 3.6±1.4** 3.8±1.3** 3.5±1.0** 82.6±14.6** 50.4±12.2 63.2±15.5**ΔΔ 70.1±15.6** 78.7±17.6** 85.0±19.0** 3.9±1.5** 8.9±2.6 5.5±1.7**ΔΔ 5.3±1.7**ΔΔ 4.3±1.6** 5.2±2.1**Δ
注：与造型对照组比较：*：P＜0.05 **：P＜0.01。
与空白对照组比较：Δ：P＜0.05； ΔΔ：P＜0.01
以上结果显示，FLQ显著延长小鼠跳台潜伏期，同时明显减少跳台的错误次数(P＜0.01)。
1.2.1.2矩型迷宫试验 取造型合格小鼠一批，按上述试验进行分组及给药(或N.S)。给药至第11天，禁食12小时后作迷宫取食训练。小鼠放入起步区，经矩形迷宫到达目标区。途中走错，帮助其纠正。达目标区后让其进食5分钟。每天如此练习10次，连续三天。第四天(即给药的第十四天)正式实验。各组选取灵活性较一致的小鼠20只，记录小鼠从起步区到达目标区的时间以及中途走错的次数[3]。连续作两次，两次数据合并取平均值作为小鼠的学习成绩。动物继续
给药，一周后重复上述试验，所得数据即表示记忆的维持，结果见表2：
表2 FLQ对衰老模型小鼠学习记忆的改善作用(迷宫法)x±SD n ＝20组别 剂量 学习期到达目标区 记忆维持到达目标区 (g/kg.d) 所需时间(秒) 错误次数 所需时间(秒) 错误次数空白对照组造型对照组阳性药对照 N.S 10ml N.S 10ml 0.531.1±6.3**46.8±10.238.8±7.0*3.5±1.2**4.9±1.63.0±1.1**39.9 ± 3.9±1.5**9.8** 5.9±1.452.5±9.8 3.4±0.8**39.1 ±5.2**FLQ 低剂量 中剂量 高剂量 0.5 40.0±6.2*ΔΔ 3.1±0.8** 43.4 ± 3.7±1.2** 6.8** 1.0 37.6±7.1**ΔΔ 3.1±0.8** 40.3 ± 3.8±0.8** 6.6** 2.0 34.2±5.2** 2.5±1.1** 37.7 ± 2.9±0.8** Δ 4.6** Δ
注：与造型对照组比较：*：P＜0.05 **：P＜0.01。
与空白对照组比较：Δ：P＜0.05； ΔΔ：P＜0.01
以上结果显示，FLQ明显提高衰老模型小鼠走迷宫的学习成绩，减少记忆维持期走迷宫发生的错误次数，即增强小鼠对记忆的保持效应。
1.2.2 FLQ对衰老模型小鼠血清MDA和SOD含量以及脑组织内单胺类神经递质含量的影响
取小鼠一批，分组及给药剂量和方法同上述1.2.1实验。但给药(或N.S)时间为两个疗程(28天)，于末次给药后一小时从股动脉取血并取小鼠全脑。按南京建成生物工程研究所提供的测试盒所述方法分别测定各组小鼠血清中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量[4]。用萤光分光光度法测定小鼠脑组织中单胺类神经递质的含量。操作方法及结果如下：
血清丙二醛(MDA)的含量测定，按下表操作 标准管标准空白管 测定管测定空白管10nmol/m标准品(ml) 0.1无水乙醇(ml) 0.1测试样品(ml) 0.1 0.1试剂一(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1
混匀(摇动几下试管架)试剂二(ml) 3 3 3 3试剂三(ml) 1 1 150％冰醋酸(ml) 1
旋涡混匀器混匀，试管口用保鲜薄膜扎紧，刺一小孔，于95℃水浴40分钟，取出后流水冷却，然后离心(4000rpm)10分钟，取上清液，532nm处1cm光径，蒸馏水调零比色，测各管吸收光度值，再按下列计算血清中MDA的含量：
血清超氧化物歧化酶(SOD)的活力测定，按下表操作 试剂 测定管 对照管 1号试剂(ml) 1.00 1.0 样品(ml) 0.03 蒸馏水(ml) 0.50 0.5+0.03 2号试剂(ml) 0.1 0.1 3号试剂(ml) 0.1 0.1 4号试剂(ml) 0.1 0.1
用旋涡混匀器充分混匀，置37℃恒温水浴40分钟 显色剂(ml) 2 2
混匀，10分钟后倒入1cm光径比色杯中，蒸馏水调零，于波长550nm处比色，按下式计算SOD活力(nu/ml)
结果见表3：
表3 FLQ对小鼠血浆MDA和SOD的影响x±SD组别 给药剂量 (g/kg.d) n MDA(nmol/ml) SOD(nu/ml)空白对照 N.S 10ml 20 7.2±0.8** 87.8±21.0**模型对照 N.S 10ml 20 10.5±1.0 37.5±15.0阳性药对 0.5 20 7.9±0.8** 50.8±11.5**ΔΔFLQ低剂量 0.5 20 7.6±0.9** 55.1±10.4**ΔΔ中剂量 1.0 20 7.4±0.8** 57.6±13.2**ΔΔ高剂量 2.0 20 7.2±1.0** 68.0±12.6**ΔΔ
注：与造型对照组比较：*：P＜0.05 **：P＜0.01。
与空白对照组比较：Δ：P＜0.05； ΔΔ：P＜0.01
以上结果显示FLQ能明显减少血浆脂质过氧化产物MDA的含量和提高血浆超氧化物歧化酶(SOD)的活性。
三、改善衰老症状
具有老年斑、活动后易缺氧的75岁以上老年人自愿受试者10例，口服本发明产品(实施例2所得的红色软胶囊)，连续5个月后，经检查，受试者血液流变学改善，血脂过氧化值下降，老年斑减轻或消退，耐缺氧能力提高，运动或活动后喘气现象明显减轻，精神状况明显改善。
四、改善尿频、排尿困难等前列腺增生症状
经医院确诊为前列腺增生的70岁以上老年人25例自愿口服本发明产品(实施例2所得红色软胶囊)，连续服用2个月后尿频、排尿困难等前列腺增生症状出现明显改善，比服用没有加辅酶Q10的疗程短见效快。
五、提高生物利用度：与普通制剂相比，本品中番茄红素和辅酶Q10的生物利用度可提高30-55％、血浆中番茄红素和辅酶Q10含量水平提高2倍以上。