药物制剂 本发明涉及包含具有pH依赖性溶解性的碱性药物活性成分的新的口服药物制剂，所述药物制剂在酸性pH(优选低于pH3)下抑制碱性药物活性成分从制剂中的释放，并且优选在胃肠道中的宽pH范围内提供药物活性成分的基本上不pH依赖性控制释放；制备所述制剂的方法；和所述制剂在医药中的应用。
有效的控释药物制剂是理想的药物产品，因为其使得能够：将药物治疗最优化；有机会既降低用药频率，又将不良副作用降到最低程度。然而，设计这样的控释系统并不是一件容易的事情，特别是当药物制剂是打算用于口服给药并且必须通过胃肠道时更是如此，因为，除了其它特征以外，胃肠道沿着其长度表现出相当大的pH值变化。
与更为中性的环境相比，许多表现出碱性特征的药物在低pH值下发生离子化并，并且溶解性在该pH范围显著增强。在胃肠道中的这种pH依赖性溶解性表现可导致可变的药物释放特性以及平行发生的体内生物利用度问题。
一些设法克服碱性药物的pH依赖性溶解性问题的尝试已经有所描述。这些方法包括使用在低pH值下不溶解的肠溶聚合物来阻止药物在低pH环境中的释放[参见例如US 4968508，和A.Streubel等人，J.Controlled Release，67，101-110(2000)]，或者加入低分子量有机酸以在制剂基质内产生酸性微环境pH，从而使药物的溶解度保持恒定[参见例如K.E.Gabr.，Eur.J.Pharm.Biopharm.，38(6)，199-202(1992)，和V.K.Thoma与Th.Zimmer，Pharm.Ind.51(1)，98-101(1989)]。在还包含中性聚合物的药物制剂中掺入表现出pH依赖性溶解性的阴离子聚合物(例如藻酸钠)，在低pH下会产生不溶性胶凝作用特性，从而导致强地扩散屏障，推理其是阻止药物在低pH下释放的主要机制[US 4792452；和P.Timmins等人，PharmaceuticalDevelopment and Technology，2(1)，25-31(1997)]。其它方法涉及使用带电荷的聚合物来影响药物释放，这是通过与药物产生离子相互作用[参见C.Caramella等人，Pharm.Res.14(11)，531(1997)，H.Y.Park等人，Drug Delivery，513-18(1998)，N.Caram-Lelham，Ph.D.thesis，Uppsala University(1996)]或者影响这些聚合物的胶凝和膨胀特性[参见K.M.Picker，Drug Dev.and Ind.Pharmacy，25(3)339-346(1999)]来实现的。其中所使用的制剂通常是基于一类聚合物。
Baveja等人，Int JPharmaceutics 39，39-45(1987)中公开，当非离子聚合物(HPMC)与阴离子聚合物(NaCMC)混合时，释放可以被阻止。Ranga Rao等人，Drug Dev Ind Pharmacy，14，2299(1988)中公开，甲基纤维素和NaCMC的混合物可以产生不同的释放特性。λ-角叉采胶和活性成分的混合物公开在WO 99/21586中。
已经报道了产生不依赖于pH的释放特性的联合方法[参见WO96/26717、WO 99/29305和WO 99/39698]。所有这三篇专利都公开了包含三种具有典型的不同水溶解性和膨胀性的聚合物的三组分基质制剂，可改变制剂的组成来调节这些特性，从而实现可调节的释放速度。其中两种组分涉及具有显著的pH依赖性溶解性的胶凝性聚合物例如藻酸钠，和具有低的或不显著的pH依赖性溶解性的胶凝性聚合物如羟甲基丙基纤维素(HPMC)或聚氧化乙烯。第三种组分涉及肠溶包衣聚合物，例如甲基丙烯酸共聚物(WO 96/26717)；EUDRAGITL或S，其是特别类型的甲基丙烯酸聚合物(WO 99/29305)；或水溶性聚合物，例如乙基纤维素(WO 99/39698)。然而，这些方法通常没有具体锁定的碱性药物，并且依赖于肠溶包衣类型或水不溶性聚合物例如甲基丙烯酸聚合物，或pH依赖性胶凝性聚合物例如藻酸钠来阻止药物在低pH环境中的释放，至少在某些部分是如此。
本发明提供了包含τ-角叉菜胶、一种或多种中性胶凝性聚合物和碱性药物活性成分的口服药物制剂；所述制剂能够抑制碱性药物活性成分在酸性pH(优选在pH3以下；特别优选约pH1)下从制剂中的释放。
基本上不依赖于pH的释放是指释放速度在pH1被显著阻止，而在pH 6.8略有增加或不受影响，这样碱性药物活性成分在任何一个时刻的释放就具有较小的pH依赖性。
本发明还提供了含有τ-角叉菜胶、一种或多种中性胶凝性聚合物和碱性药物活性成分的口服药物制剂。
τ-角叉菜胶优选以15％重量以上的水平存在于本发明制剂中。τ-角叉菜胶优选是天然来源的。一种药物等级的τ-角叉菜胶(得自FMCBiopolymer)具有不低于5厘泊(cps)，优选为5-10cps的粘度(将1.5％溶液温热至82℃，然后在75℃用装配有#1转轴的Brookfield LV粘度计以30rpm的转速旋转来测量粘度)。一种技术等级的τ-角叉菜胶(得自Fluka Biochemica)具有不低于14mPa.s的粘度，其中所述浓度是这样测定的：将0.3％水溶液加热至20℃，然后用与Lauda恒温器C3和Hakke Mess-System III一起使用的Haake型落球式粘度计，并且使用密度为7.8g/cm3的镀金不锈钢球来测定粘度。
中性胶凝性聚合物是单一的具有胶凝性质和基本上不依赖于pH的溶解性的中性可侵蚀聚合物，或者是一种以上这样的聚合物的混合物。中性胶凝性聚合物优选以10％重量以上，但是。更优选20％重量以上的水平存在于制剂中。{“可侵蚀”和“侵蚀”是指单独或联合的溶解或崩解。溶解可通过混合来促进，而崩解则可以通过与固体物质的机械相互作用来促进。}
合适的中性胶凝性聚合物包括聚氧化乙烯(PEO)、PEO家族的衍生物和成员(例如聚乙二醇(PEG)，优选以固态形式天然存在，具有合适的分子量或粘度)。因此，中性胶凝性聚合物是例如聚氧化乙烯或聚乙二醇。
如果使用单一的中性胶凝性聚合物，PEO优选具有≥4百万(4M)的MW(例如4百万-8百万的MW)，这与1650-5500mPa.s(或1650-5500cps；在25℃，使用装配有No.2转轴的Brookfield RVF粘度计以2rpm测量1％水溶液)的水溶液粘度范围相对应。合适的PEO的其它实例包括MW为约5百万(5M)的PEO，这与5500-7500mPa.s的水溶液粘度范围相对应，或MW为约8百万(8M)的PEO，这与10000-15000mPa.s的水溶液粘度范围相对应。这个范围包括在25℃测量的，在USP 24/NF 19，2000edition，pp.2285-2286中引用于该聚合物的典型溶液粘度(以cps为单位)。因此，PEO可具有4百万-8百万的MW。
如果将PEG用做单一的中性胶凝性聚合物，其优选具有高分子量，例如约20000的MW，这与2700-3500mPa.s(或2700-3500cps)的水溶液粘度范围相对应，其中所述粘度是用50％水溶液(w/w)，在20℃，用毛细管粘度计(Ubbelohde或等同仪器)测量的。[参考：欧洲药典第3版，2000，Supplement，pp.908-909.]
其它合适的胶凝性聚合物包括具有适宜高粘度的纤维素衍生物，例如羟丙基甲基纤维素(HPMC)或羟乙基纤维素(HEC)(但优选HPMC)(例如“HPMC 10000cps”、“HPMC 15000cps”、“HH型HEC”或“H型HEC”)。当使用单一的中性聚合物时，羟丙基甲基纤维素例如“HPMC 10000cps”和“HPMC 15000cps”分别具有7500-14000mPa.s(或7500-14000cps)和11250-21000mPa.s(或11250-21000cps)的表观粘度，其中所述粘度是这样测量的：在20℃，使用以干燥物质为基准计算的2％(w/w)水溶液，用毛细管粘度计(Ubbelohde或等同仪器)测量。一类羟乙基纤维素聚合物，例如得自HerculesIncorporated(Aqualon)的“Natrosol 250Pharma，HH型”典型地表现出了约20,000mPa.s的Brookfield粘度，其中所述粘度是用Brookfield Synchro-Lectric Model LVF仪器在下述条件下测量的：1％溶液浓度，转轴no.4，转速30rpm，因数200，25℃(参见NatrosolPhysical and Chemical Properties booklet，33.007-E6(1993)，p.21)。
当使用中性胶凝性聚合物的混合物时，该混合物可例如包含两种或两种以上的PEO、两种或两种以上的HPMC、PEO和HPMC或PEO和PEG的混合物或掺合物。例如，可将MW为4百万、5百万或8百万的PEO可以与MW为1百万的PEO、MW 400,000的PEO、MW 100,000的PEO或MW 6000的PEG混合。
或者，中性胶凝性聚合物(例如PEO)可以与非胶凝性中性聚合物(例如低MW的PEG，例如MW低于10000的PEG)联合使用。在这样的联合使用中，低MW PEG的实例包括MW 8000的PEG(与260-510mPa.s的粘度范围相对应)或MW 6000的PEG(与200-270mPa.s的粘度范围相对应)。
两种或两种以上的HPMC等级的混合物或掺合物可包括较低粘度(非胶凝性)和较高粘度(胶凝性)等级。例如，按照前面所定义的方法，分别具有40-60mPa.s、11.3-21.0mPa.s和4.8-7.2mPa.s的表观粘度的“HPMC 50 cps”、“HPMC 15cps”和“HPMC 6cps”可以作为混合物与“HPMC 10000cps”或“HPMC 15000cps”联合使用。
当本发明制剂是片剂时，两种或两种以上相同种类但MW不同的聚合物可以产生更好的侵蚀控制。依据本发明，当单独使用或以混合物形式使用时，PEO的MW越高，制备制剂所需的聚合物就越少。
本发明的确切制剂取决于所选的胶凝性聚合物的分子量和分子量分布，以及所用的每一种聚合物的质量。
在本发明的一个方面，中性胶凝性聚合物是MW为约4百万的PEO、MW为约20000或更高的PEG或具有约7500cps或更高表观粘度(如上所述测量的)的纤维素衍生物。
中性胶凝性聚合物(例如PEO、PEG或HPMC；特别是PEO或HPMC；或者它们彼此之间的混合物或两种或更多种PEO或HPMC的混合物)与τ-角叉菜胶的比例优选为20∶80-80∶20(尤其是40∶60-60∶40，例如约50∶50)。
碱性药物活性成分具有一个或多个pKa优选为1-12(例如1-10(尤其是1-7))的碱性基团，还任选具有pKa大于10的一个或多个碱性基团。因此，碱性药物活性成分可具有一个或多个pKa值，但至少有一个优选为1-12(例如1-10(尤其是1-7))。在这些碱性药物活性成分中，pKa为1-12(例如1-10)的碱性基团的实例包括羟基胺，仲胺或叔胺，或伯酰胺或仲酰胺。
合适的碱性药物活性成分优选具有低到中等大小的水溶解度(例如在25℃和pH 7.0条件下，水溶解度可最高达50mg/ml(尤其是0.001-20mg/ml))，并且在低pH(例如pH 1-6(尤其是pH 1-2))下带有一个或多个正电荷(取决于药物活性成分中碱性基团的数量和pKa)。
合适的碱性药物活性成分是例如具有心血管活性的化合物(例如肽或类肽凝血酶抑制剂)。肽凝血酶抑制剂具有低于1000的分子量，具有1、2、3或4个肽键，并表现出pH依赖性溶解性。它们包括按属类描述的，并且更具体地描述于Claesson在Blood Coagul.Fibrin.5，411，(1994)中发表的综述性文章中的肽凝血酶抑制剂(及其前药)，以及在下述专利中描述的那些：美国专利4,346,078；国际专利申请WO 97/23499，WO 97/02284，WO97/46577，WO98/01422，WO93/05069，WO93/11152，WO95/23609，WO95/35309，WO96/25426，WO94/29336，WO93/18060和WO95/01168；和欧洲专利出版物623596，648780，468231，559046，641779，185390，526877，542525，195212，362002，364344，530167，293881，686642，669317和601459。肽凝血酶抑制剂(或其前药)尤其包括伊诺加群、美拉加群{HOOC-CH2-RCgl-Aze-Pab-H；甘氨酸，N-[2-[2-[[[[4-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]氨基]羰基]-1-氮杂环丁烷基]-1-环己基-2-氧代乙基]-，[2R-[2S]]-}}和H376/95{ximelagatran；EtO2C-CH2-RCgl-Aze-Pab-OH；参见WO 97/23499的实施例17；甘氨酸，N-[1-环己基-2-[2-[[[[4-(羟基亚氨基)氨基甲基]苯基]甲基]氨基]羰基]-1-氮杂环丁烷基]-2-氧代乙基}-，乙酯，[S-(R*，S*)]-}。
在另一个方面，肽凝血酶抑制剂(或其前药)包括伊诺加群、美拉加群、H376/95、Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)和Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)。
在另一个方面，本发明提供了本文所述的制剂，其中所述碱性药物活性成分是：
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe){化合物A}；
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe){化合物D}；
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe){化合物E}；
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OH){化合物F}；
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(OH){化合物G}；
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEI){化合物H}。
化合物G可通过类似于下文所述的制备化合物F和Hd方法制得。
在另一个方面，本发明提供了药物制剂，其中所述碱性药物活性成分是：
1.4-({3-[7-(3，3-二甲基-2-氧代丁基)-9-氧杂-3，7-二氮杂二环[3.3.1]壬-3-基]丙基}氨基)苄腈(该化合物在下文中称为化合物B)；
2.2-{7-[3-(4-氰基苯氨基)丙基]-9-氧杂-3，7-二氮杂二环-[3.3.1]壬-3-基}乙基氨基甲酸叔丁酯；
3.2-{7-[4-(4-氰基苯基)丁基]-9-氧杂-3，7-二氮杂二环-[3.3.1]壬-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯；或
4.2-{7-[(2S)-3-(4-氰基苯氧基)-2-羟基丙基]-9-氧杂-3，7-二氮杂二环[3.3.1]壬-3-基}乙基氨基甲酸叔丁酯(该化合物在下文中称为化合物C)；
这些化合物已经被描述于WO01/28992中。
在另一个方面，所述碱性药物活性成分是美托洛尔或其盐(例如其琥珀酸盐或酒石酸盐)。
本发明制剂可包含：加工添加剂、稳定剂、增塑剂、着色剂、滑润剂(例如硬脂基富马酸钠)、粘合剂、填充剂或表面活性剂或其它常用于药物制剂的赋形剂。
在一个特别的方面，本发明制剂包含滑润剂(例如硬脂基富马酸钠)。
在本发明的另一个方面，τ-角叉菜胶与碱性药物活性成分的摩尔比为3∶1-1∶3。
在另-个方面，本发明药物制剂包含15-80％的τ-角叉菜胶。
在另一个方面，本发明药物制剂包含15-80％的一种或多种中性胶凝性聚合物。
在另一个方面，本发明药物制剂包含1-50％的碱性药物活性成分。
在另一个方面，本发明药物制剂包含0-10％(尤其是1-10％)的加工添加剂、稳定剂、增塑剂、着色剂、滑润剂、粘合剂、填充剂或其它常用于药物制剂的赋形剂。
据信，在酸性pH下，抑制碱性药物活性成分从制剂中释放(尤其是基本上不依赖于pH的控制释放)的机制如下。在低pH时，因为处于强的离子化状态，预计碱性药物活性成分将具有较高的溶解度，并由此预计会表现出从任何中性基质中快速释放的特性。其理论解释是，在酸性pH和τ-角叉菜胶存在下，在带负电荷的τ-角叉菜胶与带正电荷的药物之间存在离子吸引力，这种吸引力阻止了药物的释放并由此带来更为恒定的释放特性。在较高pH时，因为药物的离子化不强或根本不离子化，所以预计会表现出从任何中性基质中缓慢释放的特性。其理论解释是，上面所提到的离子相互作用并不显著，并且释放特性主要受用于制剂中的中性胶凝性聚合物和阴离子聚合物的联合膨胀、胶凝和侵蚀特性的控制。
本发明制剂的最终膨胀、胶凝和侵蚀特性与象胶凝性聚合物的分子量和分子量分布以及阴离子聚合物这样的特性有关，并且也与阴离子聚合物的pH依赖性水解速度有关。因此，通过调节胶凝性聚合物的特性(例如分子量或分子量分布)、存在于制剂中的τ-角叉菜胶的量和/或胶凝性聚合物与τ-角叉菜胶之间的比例，就可以获得碱性药物活性成分的不同释放速度。
本发明制剂可以作为固体剂型提供(例如片剂、胶囊、丸剂或在适宜容器中分散的粉剂或复合制剂的形式(例如在片剂、胶囊或小药囊中给药的包衣丸剂))。
在一个方面，本发明提供了含有20-500mg(尤其是40-60mg)碱性药物活性成分(例如H376/95；或化合物A、B或C)的片剂。
当本发明制剂作为片剂提供时，将该片剂优选这样制备，根据胃肠道的各个部分，使所有的碱性药物活性成分以离子化或非离子化的形式在约20小时例如18-22(或20-26小时)的期间内释放。
在另一个方面，本发明提供了制备本发明制剂的方法，所述方法包括将τ-角叉菜胶、一种或多种中性胶凝性聚合物和碱性药物活性成分混合，并任选将所述混合物(优选在滑润剂{例如硬脂基富马酸钠，以商品名PRUVTM销售}存在下)压制成片剂。
片剂可例如通过直接压片或湿法制粒技术来制备。
对于直接压片技术，将碱性药物活性成分与胶凝性聚合物和τ-角叉菜胶以及如果需要的话另外的赋形剂充分混合。将滑润剂(例如硬脂基富马酸钠)过筛，并加到τ-角叉菜胶混和物中，然后进一步混合。之后将所得混合物压成片剂。
至于湿法制粒技术，将碱性药物活性成分与胶凝性聚合物和τ-角叉菜胶充分混合。然后可用下列物质将所得混合物湿润：溶解于适宜溶剂(例如乙醇或水)中的合适的粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮(PVP))的溶液；或合适的溶剂(例如乙醇或水)；使用标准或改进的制粒法(例如喷雾制粒法)将所得混合物制粒。将所得颗粒干燥(例如在烘箱中于合适的温度(例如约50℃)干燥合适的时间(例如20-24小时))后，把颗粒磨碎(例如干法或湿法研磨)，与滑润剂(例如硬脂基富马酸钠、硬脂酸镁或滑石粉)混合，然后将所得组合物压成片剂。可以用干燥的颗粒装填胶囊(例如用明胶制成的胶囊)。
在另一个方面，本发明提供了用于制备上述制剂的方法。
凝血酶活性化合物及其前药可用于治疗和/或预防动物包括人血液和/或组织中的血栓形成和血凝固性过高。已知血凝固性过高可以导致血栓-栓塞疾病。可提及的与血凝固性过高和血栓-栓塞疾病有关的病症包括遗传或获得性活性蛋白C抗性，例如因子V-突变(因子VLeiden)，和遗传或获得性抗凝血酶III、蛋白C、蛋白S、肝素辅因子II缺乏。已知与血凝固性过高和血栓-栓塞疾病有关的其它病症包括循环抗磷脂抗体(Lupus抗凝血剂)、高胱氨酸血、肝素引起的血小板减少症和纤维蛋白溶解缺损，以及凝血综合症(例如播散性血管内凝血(DIC))和一般性血管损伤(例如由于手术所导致的血管损伤)。
在另外一个方面，本发明提供了用于治疗(治疗和预防)，例如用作药物(例如用于治疗心血管病症如血栓栓塞的药物)的上述制剂。
本发明制剂可用于制备在治疗上使用的药物。
在另一个方面，本发明提供了在患有所述病症或有患所述病症危险的温血动物中治疗心血管病症(例如血栓栓塞)的方法，包括给需要这样治疗的动物施用治疗有效量的本发明组合物。
一些肽凝血酶抑制剂或其前药可以用下述方法制备。
一般操作
TLC是用硅胶进行的。手性HPLC分析是用具有5cm保护柱的46mm×250mm Chiralcel OD柱进行的。柱温保持在35℃。使用的1.0mL/分钟的流速。在228nm使用Gilson 115UV检测器。流动相由乙烷、乙醇和三氟乙酸组成，并且对于每种化合物列出了合适的比例。一般是将产物溶解在最小量的乙醇中，并用流动相稀释。
在下述制备中，LC-MS/MS是用装配有的CTC-PAL注射器和5Tm，4×100mm Thermo Quest，Hypersil BDS C18柱的HP-1100仪器进行的。使用API-3000(Sciex)MS检测器。流速是1.2mL/分钟，并且流动相(梯度)由10-90％乙腈与90-10％4mM乙酸铵组成，二者都含有0.2％甲酸。否则，低分辨率质谱(LRMS)是用Micromass ZQ光谱仪以ESI posneg开关离子模式(质量范围m/z 100-800)记录的；高分辨率质谱(HRMS)是用Micromass LCT光谱仪以ES负离子化模式(质量范围m/z 100-1000)记录的，使用亮氨酸脑啡肽(C28H37N5O7)作为内质量标准。
1H NMR光谱是用四甲基硅烷作为内标记录的。
制备Ph(3-Cl)(5-OCHF)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe){化合物A}
(i)3-氯-5-甲氧基苯甲醛
在25℃，将在THF(200mL)中的3，5-二氯苯甲醚(74.0g，419mmol)滴加到在THF(100mL)内的金属镁(14.2g，585mmol，用0.5N HCl预洗涤过)中。加入完成后，滴加1，2-二溴乙烷(3.9g，20.8mmol)。将所得深棕色混合物加热回流3小时。将该混合物冷却至0℃，然后一次性加入N，N-二甲基甲酰胺(60mL)。将该混合物用乙醚(3×400mL)和6N HCl(500mL)分配。将合并的有机萃取液用盐水(300mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤然后真空浓缩，获得了油状物。通过快速硅胶色谱(2×)纯化，用己烷∶EtOAc(4∶1)洗脱，获得了本小标题化合物(38.9g，54％)，其为黄色油状物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.90(s，1H)，7.53(s，1H)，7.38(s，1H)，7.15(s，1H)，3.87(s，3H).
(ii)3-氯-5-羟基苯甲醛
将3-氯-5-甲氧基苯甲醛(22.8g，134mmol；见上面步骤(i))在CH2Cl2(250mL)中的溶液冷却至0℃。用15分钟滴加三溴化硼(15.8mL，167mmol)。将反应混合物搅拌2小时后，缓慢地加入水(50mL)。然后用Et2O(2×100mL)萃取该溶液。将有机层合并，干燥(Na2SO4)，过滤然后真空浓缩。通过快速硅胶色谱纯化，用己烷∶EtOAc(4∶1)洗脱，获得了本小标题化合物(5.2g，25％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.35(s，1H)，7.20(s，1H)，7.10(s，1H)，3.68(s，1H)
(iii)3-氯-5-二氟甲氧基苯甲醛
将3-氯-5-羟基苯甲醛(7.5g，48mmol；见上面步骤(ii))在2-丙醇(250mL)和30％的KOH(100mL)中的溶液加热至回流。在搅拌下向该反应混合物中通入CHClF2 2小时。将该反应混合物冷却，用1N HCl酸化，用EtOAc(2×100mL)萃取。将该有机相用盐水(100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤然后真空浓缩。通过快速硅胶色谱纯化，用己烷∶EtOAc(4∶1)洗脱，获得了本小标题化合物(4.6g，46％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 9.95(s，1H)，7.72(s，1H)，7.52(s，1H)，7.40(s，1H)，6.60(t，JH-F＝71.1Hz，1H)
(iv)Ph(3-Cl)(5-OCHF)-(R，S)CH(OTMS)CN
将3-氯-5-二氟甲氧基苯甲醛(4.6g，22.3mmol；见上面步骤(iii))在CH2Cl2(200mL)中的溶液冷却至0℃。加入ZnI2(1.8g，5.6mmol)和三甲基甲硅烷基氰化物(2.8g，27.9mmol)，让该反应混合物升至室温，搅拌15小时。在真空条件下将该混合物部分浓缩，获得了本小标题化合物，为液体，其不用进一步纯化和特征确定而直接用于步骤(v)。
(v)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(NH)OEt
将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OTMS)CN(6.82g，假定是22.3mmol；见上面步骤(iv))滴加到HCl/EtOH(500mL)中。将该反应混合物搅拌15小时，然后在真空条件下将该混合物部分浓缩，获得了本小标题化合物，为液体，其不用进一步纯化和特征确定而直接用于步骤(vi)。
(vi)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt
将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(NH)OEt(6.24g，假定是22.3mmol；见上面步骤(v))溶解在THF(250mL)中，加入0.5M H2SO4(400mL)，在40℃将该反应物搅拌65小时，冷却，然后在真空条件下部分浓缩以除去大部分THF。然后将该反应混合物用Et2O(3×100mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤，真空浓缩，获得了本小标题化合物，为固体，其不用进一步纯化和特征确定而直接用于步骤(vii)。
(vii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH
在室温，将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt(6.25g，假定是22.3mmol；见上面步骤(vi))在2-丙醇(175mL)和20％KOH(350mL)中的溶液搅拌15小时。然后在真空条件下将该反应部分浓缩以除去大部分2-丙醇。将剩余混合物用1M H2SO4酸化，用Et2O(3×100mL)萃取，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩，获得了固体。通过快速硅胶色谱纯化，用CHCl3∶MeOH∶NH4OH(6∶3∶1)洗脱，获得了本小标题化合物的铵盐。然后将该铵盐溶解在EtOAc(75mL)与H2O(75mL)的混合物中，用2N HCl酸化。分离出有机层，用盐水(50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，然后真空浓缩，获得了小标题化合物(3.2g，从步骤(iv)至(vii)为57％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 7.38(s，1H)，7.22(s，1H)，7.15(s，1H)，6.89(t，JH-F＝71.1Hz，1H)，5.16(s，1H)
(viii)Ph(3-Cl)(5-OCHFo)-(R)CH(OH)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCHF(S)CH(OAc)C(O)OH(b)
将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(3.2g，12.7mmol；见上面步骤(vii))和脂肪酶PS“Amano”(～2.0g)在乙酸乙烯酯(125mL)与MTBE(125mL)中的混合物加热回流48小时。将该反应混合物冷却，经由Celite过滤，用EtOAc洗涤滤饼。将该滤液真空浓缩，然后通过快速硅胶色谱纯化，用CHCl3∶MeOH∶浓NH4OH(6∶3∶1)洗脱，获得了本小标题化合物(a)和(b)的铵盐。将盐形式的化合物(a)溶于H2O，用2N HCl酸化，用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空浓缩，获得了本小标题化合物(a)(1.2g，37％)。
对于本小标题化合物(a)
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.38(s，1H)，7.22(s，1H)，7.15(s，1H)，6.89(t，JH-F＝71.1H2，1H)，5.17(s，1H)
(ix)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
在0℃，将PyBOP(2.8g，5.3mmol)和可力丁(1.3g，10.6mmol)加到Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(1.1g，4.4mmol；见上面步骤(viii))和H-Aze-Pab(Teoc)(见国际专利申请WO 00/42059，2.6g，5.7mmol)在DMF(50mL)内的溶液中。在0℃将该反应搅拌2小时，然后在室温搅拌15小时。将该反应混合物真空浓缩，通过快速硅胶色谱纯化(3×)，首先用CHCl3∶EtOH(9∶1)洗脱，然后用EtOA∶EtOH(20∶1)洗脱，最后用CH2Cl2∶CH3OH(95∶5)洗脱，获得了本小标题化合物(1.0g，37％)，为白色固体。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋转异构体混合物)δ7.79-7.85(d，J＝8.7Hz，2H)，7.15-7.48(m，5H)，6.89 and 6.91(t，JH-F＝71.1Hz，1H)，5.12 and 5.20(s，1H)，4.75-4.85(m，1H)，3.97-4.55(m，6H)，2.10-2.75(m，2H)，1.05-1.15(m，2H)，0.09(s，9H)MS(m/z)611(M+1)+
(x)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe，Teoc)
将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.40g，0.65mmol；见上面步骤(ix))溶解在20mL乙腈中，加入0.50g(6.0mmol)O-甲基羟基胺盐酸盐。将该混合物在70℃加热2小时。将溶剂蒸发，将残余物在水与乙酸乙酯之间分配。将水相用乙酸乙酯萃取两次以上，将合并的有机相用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，然后蒸发。产量：0.41g(91％)。
1H-NMR(400MHz；CDCl3)：δ7.83(bt，1H)，7.57(bs，1H)，7.47(d，2H)，7.30(d，2H)，7.20(m，1H)，7.14(m，1H)，7.01(m，1H)，6.53(t，1H)，4.89(s，1H)，4.87(m，1H)，4.47(m，2H)，4.4-4.2(b，1H)，4.17-4.1(m，3H)，3.95(s，3H)，3.67(m，1H)，2.68(m，1H)，2.42(m，1H)0.97(m，2H)，0.01(s，9H).
(xi)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)
将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe，Teoc)(0.40g，0.62mmol；见上面步骤(x))溶解在5mL TFA中，然后让其反应30分钟。将TFA蒸发，将残余物在乙酸乙酯与NaHCO3(水溶液)之间分配。将水相用乙酸乙酯萃取两次以上，将合并的有机相用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，然后蒸发。将产品从水/乙腈中冻干出来。不需要纯化。产量：0.28g(85％)。
1H-NMR(600MHz；CDCl3)：δ7.89(bt，1H)，7.57(d，2H)，7.28(d，2H)，7.18(m，1H)，7.13(m，1H)，6.99(m，1H)，6.51(t，1H)，4.88(s，1H)，4.87(m，1H)，4.80(bs，2H)，4.48(dd，1H)，4.43(dd，1H)，4.10(m，1H)，3.89(s，3H)，3.68(m，1H)，2.68(m，1H)，2.40(m，1H).
13C-NMR(125MHz；CDCl3)：(羰基和/或脒碳，旋转异构体)δ172.9，170.8，152.7，152.6
HRMS C22H23ClF2N4O5(M-H)-计算值495.1242，实测值495.1247
制备化合物D(Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe))
(i)2，6-二氟-4[(甲基亚磺酰基](甲硫基)甲基)苄腈
在氩气氛下，将(甲基亚磺酰基)(甲硫基)甲烷(7.26g，0.0584mol)溶解在100mL无水THF中，然后冷却至-78℃。在搅拌下滴加丁基锂的己烷溶液(16mL 1.6M，0.0256mol)。将该混合物搅拌15分钟。同时，在氩气氛下将3，4，5-三氟苄腈(4.0g，0.025mmol)在100mL无水THF中的溶液冷却至-78℃，用35分钟经由套管将前面的溶液加到后面的溶液中。30分钟后，移去冷却浴，当反应物达到室温时，将其倒入400mL水中。将THF蒸发，然后将剩余的水层用乙醚萃取三次。将合并的乙醚相用水洗涤，干燥(Na2SO4)，蒸发。产量：2.0g(30％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.25(m，2H)，5.01(s，1H，非对映体)，4.91(s，1H，非对映体)，2.88(s，3H，非对映体)，2.52(s，3H，非对映体)，2.49(s，3H，非对映体)，2.34(s，3H，非对映体)，1.72(宽，1H)
(ii)2，6-二氟-4-甲酰基苄腈
将2，6-二氟-4[(甲基亚磺酰基](甲硫基)甲基)苄腈(2.17g，8.32mmol；见上面步骤(i))溶解在90mLTHF中，加入3.5mL浓硫酸。将该混合物在室温放置3天，然后倒入450mL水中。用EtOAc萃取三次，随后将合并的有机相用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤两次，干燥(Na2SO4)，蒸发。产量：1.36g(9 8％)。通过13C NMR确认甲酰基的位置。在162.7ppm的得自氟化碳的信号表明了预期的偶合模式，两个偶合常数分别在260Hz和6.3Hz，这与从氟原子的ipso和meta偶联相对应。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.35(s，1H)，7.33(m，2H)
(iii)2，6-二氟-4-羟基甲基苄腈
将2，6-二氟-4-甲酰基苄腈(1.36g，8.13mmol；见上面步骤(ii))溶解在25mL甲醇中，然后在冰浴中冷却。将在搅拌下分批加入硼氢化钠(0.307g，8.12mmol)，将反应物放置65分钟。将溶剂蒸发，然后将残余物在乙酸乙酯与碳酸氢钠水溶液之间分配。再将有机层用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，蒸发。粗产物很快结晶，并且不用进一步纯化就可以直接使用。产量：1.24g(90％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.24(m，2H)，4.81(s，2H)，2.10(宽，1H)
(iv)甲磺酸4-氰基-2，6-二氟苄基酯
在搅拌下，将三乙胺(0.81g，8.1mmol)加到2，6-二氟-4-羟基甲基苄腈(1.24g，7.32mmol；见上面步骤(iii))和甲磺酰氯(0.93g，8.1mmol在60mL二氯甲烷内的冰冷却溶液中。在0℃反应3小时后，将混合物用1M HCl洗涤两次，用水洗涤一次，干燥(Na2SO4)，蒸发。该产物不用进一步纯化就可以直接使用。产量：1.61g(89％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.29(m，2H)，5.33(s，2H)，3.07(s，3H)
(v)4-叠氮基甲基-2，6-二氟苄腈
将甲磺酸4-氰基-2，6-二氟苄基酯(1.61g，6.51mmol；见上面步骤(iv))和叠氮化钠(0.72g，0.0111mol)在10mL水与20mLDMF中的混合物于室温搅拌过夜。然后将其倒入200mL水中，用乙醚萃取三次。将合并的乙醚相用水洗涤5次，干燥(Na2SO4)，蒸发。为了进行NMR测定，取少量样本蒸发，产物结晶出来。将其余产物小心地蒸发但不能使其完全变干。基于NMR和分析HPLC，假定的产率(理论上1.26g)几乎是定量的。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.29(m，2H)，4.46(s，2H)
(vi)4-氨甲基-2，6-二氟苄腈
本反应按照描述在J.Chem.Res.(M)(1992)3128中的方法进行。将硼氢化钠(0.834g，0.0221mol)在20mL水中的溶液加到520mg10％Pd/C(含50％水份)在20mL水内的悬浮液中。有一些气体释放出来。将4-叠氮基甲基-2，6-二氟苄腈(1.26g，6.49mmol；见上面步骤(v))溶解于50mL THF中，用15分钟加到在冰浴上的所述含水混合物中。将该混合物搅拌4小时，然后加入20mL 2M HCl，经由硅藻土过滤该混合物。用水洗涤硅藻土，将合并的水相用EtOAc洗涤，然后用2M NaOH碱化。用二氯甲烷萃取三次，将合并的有机相用水洗涤，干燥(Na2SO4)，蒸发。产量：0.87g(80％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.20(m，2H)，3.96(s，2H)，1.51(宽，2H)
(vii)2，6-二氟-4-叔丁氧基羰基氨基甲基苄腈
将4-氨基甲基-2，6-二氟苄腈(0.876g，5.21mmol；见上面步骤(vi))溶解在50mL THF中，然后加入在10mL THF中的二碳酸二叔丁酯(1.14g，5.22mmol)。将该混合物搅拌3.5小时。将THF蒸发，将残余物在水与EtOAc之间分配。将有机层用0.5M HCl和水洗涤3次，干燥(Na2SO4)，蒸发。该产物不用进一步纯化就可以直接使用。产量：1.38g(99％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.21(m，2H)，4.95(宽，1H)，4.43(宽，2H)，1.52(s，9H)
(viii)Boc-Pab(2，6-二F)(OH)
在室温，将2，6-二氟-4-叔丁氧基羰基氨基甲基苄腈(1.38g，5.16mmol；见上面步骤(vii))、羟基胺盐酸盐(1.08g，0.0155mol)和三乙胺(1.57g，0.0155mol)在20mL乙醇中的混合物搅拌36小时。将溶剂蒸发，将残余物在水与二氯甲烷之间分配。将有机层用水洗涤，干燥(Na2SO4)，蒸发。该产物不用进一步纯化就可以直接使用。产量：1.43g(92％)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.14(m，2H)，4.97(宽，1H)，4.84(宽，2H)，4.40(宽，2H)，1.43(s，9H)
(ix)Boc-Pab(2，6-二F)×HOAc
本反应按照由Judkins等人在Synth.Comm.(1998)4351中描述的方法进行。在5atm压力下，将在100mL乙酸中的Boc-Pab(2，6-二F)(OH)(1.32g，4.37mmol；见上面步骤(viii))、乙酸酐(0.477g，4.68mmol)和442mg 10％Pd/C(含有50％水份)氢化3.5小时。经由硅藻土将该混合物过滤，用乙醇洗涤，蒸发。将残余物从乙腈和水以及几滴乙醇中冻干出来。本小标题产物不用进一步纯化就可以直接使用。产量：1.49g(99％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.45(m，2H)，4.34(s，2H)，1.90(s，3H)，1.40(s，9H)(x)Boc-Pab(2，6-二F)(Teoc)
将2-(三甲基甲硅烷基)乙基对硝基苯基碳酸酯(1.67g，5.89mmol)加到Boc-Pab(2，6-二F)×HOAc(1.56g，5.49mmol；见上面步骤(ix))在100mL THF和1mL水内的溶液中。用5分钟滴加碳酸钾(1.57g，0.0114mol)在20mL水中的溶液。将该混合物搅拌过夜。将THF蒸发，将残余物在水与二氯甲烷之间分配。将水层用二氯甲烷萃取，将合并的有机相用碳酸氢钠水溶液液洗涤两次，干燥(Na2SO4)，然后蒸发。通过快速硅胶色谱纯化，用庚烷/EtOAc＝2/1洗脱，获得了1.71g(73％)纯化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.43(m，2H)，4.97(宽，1H)，4.41(宽，2H)，4.24(m，2H)，1.41(s，9H)，1.11(m，2H)，0.06(s，9H)
(xi)Boc-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)
将Boc-Pab(2，6-二F)(Teoc)(1.009g，2.35mmol；见上面步骤(x))溶解在50mL用HCl(气体)饱和的EtOAc中。将该混合物放置10分钟，蒸发，溶解在18mL DMF中，然后在冰浴上冷却。依次加入Boc-Aze-OH(0.450g，2.24mmol)、PyBOP(1.24g，2.35mmol)和二异丙基乙胺(1.158g，8.96mmol)。将该反应混合物搅拌2小时，然后倒入350mL水中，用EtOAc提取三次。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。然后蒸发。通过快速硅胶色谱纯化，用庚烷∶EtOAc(1∶3)洗脱，获得了1.097g(96％)所需化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.46(m，2H)，4.65-4.5(m，3H)，4.23(m，2H)，3.87(m，1H)，3.74(m，1H)，2.45-2.3(m，2H)，1.40(s，9H)，1.10(m，2H)，0.05(s，9H)
(xii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)
将Boc-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)(0.256g，0.500mmol；见上面步骤(xi))溶解在20mL用HCl(气体)饱和的EtOAc中。将该混合物放置10分钟，蒸发，溶解在5mL DMF中。依次加入Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.120g，0.475mmol；见上面制备A(viii))、PyBOP(0.263g，0.498mmol)，最后加入二异丙基乙胺(0.245g，1.89mmol)。将该反应混合物搅拌2小时，然后倒入350mL水中，用EtOAc萃取3次。将该有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，蒸发。通过快速硅胶色谱纯化，用EtOAc洗脱，获得了0.184g(60％)所需的本小标题化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋转异构体混合物)δ7.55-7.45(m，2H)，7.32(m，1H，主要旋转异构体)，7.27(m，1H，次要旋转异构体)，7.2-7.1(m，2H)，6.90(t，1H，主要旋转异构体)，6.86(t，1H，次要旋转异构体)，5.15(s，1H，主要旋转异构体)，5.12(m，1H，次要旋转异构体)，5.06(s，1H，次要旋转异构体)，4.72(m，1H，主要旋转异构体)，4.6-4.45(m，2H)，4.30(m，1H，主要旋转异构体)，4.24(m，2H)，4.13(m，1H，主要旋转异构体)，4.04(m，1H，次要旋转异构体)，3.95(m，1H，次要旋转异构体)，2.62(m，1H，次要旋转异构体)，2.48(m，1H，主要旋转异构体)，2.22(m，1H，主要旋转异构体)，2.10(m，1H，次要旋转异构体)，1.07(m，2H)，0.07(m，9H)
(xiii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(Ome，Teoc)
将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)(64mg，0.099mmol；见上面步骤(xii))与O-甲基羟基胺盐酸盐(50mg，0.60mmol)在4mL乙腈中的混合物在70℃加热3小时。将溶剂蒸发，将残余物在水与EtOAc之间分配。将水层用EtOAc萃取3次，将合并的有机相用水洗涤，干燥(Na2SO4)，然后蒸发。该产物不用进一步纯化就可以直接使用。产量：58mg(87％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.90(bt，1H)，7.46(m，1H)，7.25-6.95(m，5H)，6.51，t，1H)，4.88(s，1H)，4.83(m，1H)，4.6-4.5(m，2H)，4.4-3.9(m，4H)，3.95(s，3H)，3.63(m，1H)，2.67(m，1H)，2.38(m，1H)，1.87(宽，1H)，0.98(m，2H)，0.01，s，9H)
(xiv)Ph(3-Cl)(S-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe)
将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(OMe，Teoc)(58mg，0.086mmol；见上面步骤(xiii))溶解在3mL TFA中，在冰浴上冷却，然后让其反应2小时。将TFA蒸发，将残余物溶解在EtOAc中。将有机层用碳酸钠水溶液和水洗涤两次，干燥(Na2SO4)然后蒸发。将该残余物从水和乙腈中冻干出来，获得了42mg(92％)本标题化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.95(bt，1H)，7.2-7.1(m，4H)，6.99(m，1H)，6.52(t，1H)，4.88(s，1H)，4.85-4.75(m，3H)，4.6-4.45(m，2H)，4.29(宽，1H)，4.09(m，1H)，3.89(s，3H)，3.69(m，1H)，2.64(m，1H)，2.38(m，1H)，1.85(宽，1H)
13C-NMR(100MHz；CDCl3)：(羰基和/或脒碳)δ172.1，169.8，151.9APCI-MS：(M+1)＝533/535m/z
制备化合物E(Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe))
(i)甲磺酸(2-一氟乙基)酯
在0℃、氮气氛下，将三乙胺(23.7g，234mmol)和甲磺酰氯(10.7g，93.7mmol)加到2-氟乙醇(5.0g，78.0mmol)在CH2Cl2(90mL)内的磁搅拌着的溶液中。将该混合物在0℃搅拌1.5小时，用CH2Cl2(100mL)稀释，用2N HCl(100mL)洗涤。将水层用CH2Cl2(50mL)萃取，将合并的有机层用盐水(75mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，真空浓缩，获得了本小标题化合物(9.7g，88％)，为黄色油状物，其不用进一步纯化就可直接使用。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.76(t，J＝4Hz，1H)，4.64(t，J＝4Hz，1H)，4.52(t，J＝4Hz，1H)，4.43(t，J＝4Hz，1H)，3.09(s，3H).
(ii)3-氯-5-一氟乙氧基苯甲醛
在室温、氮气氛下，向3-氯-5-羟基苯甲醛(8.2g，52.5mmol；见上面制备A(ii))和碳酸钾(9.4g，68.2mmol)在DMF(10mL)内的溶液中滴加甲磺酸(2-一氟乙基)酯(9.7g，68.2mmol；见上面步骤(i))在DMF(120mL)中的溶液。将该混合物在100℃加热5小时，然后在室温搅拌过夜。将该反应冷却至0℃，倒入用冰冷却的2N HCl中，用EtOAc萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤然后真空浓缩。将该棕色油状物通过硅胶色谱纯化，用己烷∶EtOAc(4∶1)洗脱，获得了本小标题化合物(7.6g，71％)，为黄色油状物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.92(s，1H)，7.48(s，1H)，7.32(s，1H)，7.21(s，1H)，4.87(t，J＝4Hz，1H)，4.71(t，J＝3Hz，1H)，4.33(t，J＝3Hz，1H)，4.24(t，J＝3Hz，1H).
(iii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OTMS)CN
在0℃、氮气围下，将三甲基甲硅烷基氰化物(7.4g，75.0mmol)滴加到3-氯-5-一氟乙氧基苯甲醛(7.6g，37.5mmol；见上面步骤(ii))和碘化锌(3.0g，9.38mmol)在CH2Cl2(310mL)内的溶液中。将该混合物在0℃搅拌3小时，然后在室温搅拌过夜。将该反应用H2O(300mL)稀释，分离出有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空浓缩，获得了本小标题化合物(10.6g，94％)，为棕色油状物，其不用进一步纯化或特征确定就可直接使用。
(iv)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OH)C(O)OH
将浓盐酸(100mL)加到Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OTMS)CN(10.6g，5.8mmol；见上面步骤(iii))中，然后在将该溶液在100℃3小时。冷却至室温后，再将该反应进一步冷却至0℃，用3N NaOH(～300mL)缓慢碱化，然后用Et2O(3×200mL)洗涤。将水层用2N HCl(80mL)酸化，用EtOAc(3×300mL)萃取。将合并的EtOAc萃取液干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空浓缩，获得了本小标题化合物(8.6g，98％)，为淡黄色固体，其不用进一步纯化就可直接使用。
Rf＝0.28(90∶8∶2 CHCl3∶MeOH∶浓NH4OH)
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.09(s，1H)，7.02(s，1H)，6.93(s，1H)，5.11(s，1H)，4.77-4.81(m，1H)，4.62-4.65(m，1H)，4.25-4.28(m，1H)，4.15-4.18(m，1H).
(v)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(S)CH(OAc)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(b)
在氮气氛下，将Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(8.6g，34.5mmol；见上面步骤(iv))和脂肪酶PS″Amano″(4.0g)在乙酸乙烯酯(250mL)和MTBE(250mL)中的溶液于70℃加热3天。将该反应冷却至室温，通过经由Celite进行过滤来将酶除去。用EtOAc洗涤滤饼，将滤液真空浓缩。通过硅胶色谱纯化，用CHCl3∶MeOH∶Et3N(90∶8∶2)洗脱，获得了本小标题化合物(a)的三乙胺盐，为黄色油状物。此外，还获得了本小标题化合物(b)的三乙胺盐(4.0g)。将本小标题化合物(b)的盐溶解在H2O(250mL)中，用2N HCl酸化，然后用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机萃取液干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空浓缩，获得了本小标题化合物(b)(2.8g，32％)，为黄色油状物。
本小标题化合物(b)的数据：
Rf＝0.28(90∶8∶2CHCl3∶MeOH∶浓NH4OH)
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.09(s，1H)，7.02(s，1H)，6.93(s，1H)，5.11(s，1H)，4.77-4.81(m，1H)，4.62-4.65(m，1H)，4.25-4.28(m，1H)，4.15-4.18(m，1H).
(vi)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)
在0℃、氮气氛下，将HAze-Pab(OMe)·2HCl(1.43g，4.27mmol，见国际专利申请WO 00/42059)、PyBOP(1.89g，3.68mmol)和DIPEA(1.06g，8.23mmol)加到Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(818mg，3.29mmol；见上面步骤(v))在DMF(30mL)内的溶液中。将该反应在0℃搅拌2小时，然后在室温搅拌过夜。将该混合物真空浓缩，将残余物用硅胶色谱纯化两次，首先用CHCl3∶EtOH(15∶1)洗脱，然后用EtOAc∶EtOH(20∶1)洗脱，获得了本标题化合物(880mg，54％)。
Rf＝0.60(10∶1 CHCl3∶EtOH)
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋转异构体的复合混合物)δ7.58-7.60(d，J＝8Hz，2H)，7.34(d，J＝7Hz，2H)，7.05-7.08(m，2H)，6.95-6.99(m，1H)，5.08-5.13(m，1H)，4.77-4.82(m，1H)，4.60-4.68(m，1H)，3.99-4.51(m，7H)，3.82(s，3H)，2.10-2.75(m，2H).
13C-NMR(150MHz；CD3OD)：(羰基和/或脒碳)δ173.3，170.8，152.5.
APCI-MS：(M+1)＝493m/z.
制备化合物F(Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH))
(i)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH，Teoc)
将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.148g，0.24mmol；见上面制备D步骤(ix))溶解在9mL乙腈中，然后加入0.101g(1.45mmol)羟基胺盐酸盐。将该混合物在70℃加热2.5小时，经由Celite过滤，然后蒸发。该粗产物(0.145g；75％纯度)不用进一步纯化就可以直接用于下一步骤。
(ii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH，Teoc)(0.145g，0.23mmol；见上面步骤(i))溶解在0.5mL CH2Cl2和9mLTFA中。让该反应进行60分钟。将TFA蒸发，然后将残余物用制备HPLC纯化。将所要的级份合并，冻干(2×)，获得了72mg(两个步骤的产率为62％)本标题化合物。
MS(m/z)482(M-1)-；484(M+1)+
1H-NMR(400MHz；CD3OD)：δ7.58(d，2H)，7.33(m，3H)，7.15(m，2H)，6.89(t，1H主要旋转异构体)，6.86(t，1H次要旋转异构体)，5.18(s，1H主要旋转异构体；和m，1H次要旋转异构体)，5.12(s，1H次要旋转异构体)，4.77(m，1H主要旋转异构体)，4.42(m，2H)，4.34(m，1H主要旋转异构体)，4.14(m，1H主要旋转异构体)，4.06(m，1H次要旋转异构体)，3.95(m，1H次要旋转异构体)，2.66(m，1H次要旋转异构体)，2.50(m，1H主要旋转异构体)，2.27(m，1H主要旋转异构体)，2.14(m，1H次要旋转异构体)
13C-NMR(100MHz；CD3OD)：(羰基和/或脒碳，旋转异构体)δ172.4，172.3，172.0，171.4 152.3，152.1
制备化合物H(Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH))
(i)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
将Boc-Aze-Pab(Z)(见国际专利申请WO 97/02284，92mg，0.197mmol)溶解在10mL用HCl(气体)饱和的EtOAc中，然后让其反应10分钟。将溶剂蒸发，将残余物依次与Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(50mg，0.188mmol)、PyBOP(109mg，0.209mmol)和二异丙基乙胺(96mg，0.75mmol)在2mL DMF中混合。将该混合物搅拌2小时，然后倒入50mL水中，用EtOAc萃取3次。将合并有机相用水洗涤，干燥(Na2SO4)，蒸发。将该粗产物用快速硅胶色谱纯化，用EtOAc∶MeOH(9∶1)洗脱。产量：100mg(87％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋转异构体混合物)δ7.85-7.75(m，2H)，7.45-7.25(m，7H)，7.11(m，1H，主要旋转异构体)，7.08(m，1H，次要旋转异构体)，7.05-6.9(m，2H)，6.13(bt，1H)，5.25-5.05(m，3H)，4.77(m，1H，被CD3OH信号部分隐藏)，4.5-3.9(m，7H)，2.64(m，1H，次要旋转异构体)，2.47(m，1H，主要旋转异构体)，2.25(m，1H，主要旋转异构体)，2.13(m，1H，次要旋转异构体)
(ii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
将羟基胺盐酸盐(65mg，0.94mmol)和三乙胺(0.319g，3.16mmol)在8mL THF中混和，然后在40℃超声1小时。加入Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)(96mg，0.156mmol；见上面步骤(i))和8mL以上的THF。将该混合物在40℃搅拌4.5天。将溶剂蒸发，通过制备RPLC纯化粗产物，用CH3CN∶0.1M NH4OAc(40∶60)洗脱。产量：30mg(38％)。纯度：99％。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋转异构体混合物)δ7.6-7.55(m，2H)，7.35-7.3(m，2H)，7.12(m，1H，主要旋转异构体)，7.09(m，1H，次要旋转异构体)，7.05-6.9(m，2H)，6.15(多个三重峰，1H)，5.15(m，1H，次要旋转异构体)，5.13(s，1H，主要旋转异构体)，5.08(s，1H，次要旋转异构体)，4.77(m，1H，主要旋转异构体)，4.5-4.2(m，5H)，4.08(m，1H，主要旋转异构体)，3.97(m，1H，次要旋转异构体)，2.66(m，1H，次要旋转异构体)，2.50(m，1H，主要旋转异构体)，2.27(m，1H，主要旋转异构体)，2.14(m，1H，次要旋转异构体).
13C-NMR(100MHz；CD3OD)：(羰基和/或脒碳，旋转异构体混合物)δ172.8，172.2，171.4，159.1，158.9，154.2.
APCI-MS：(M+1)＝497/499m/z
缩写
Ac＝乙酰基
APCI＝常压化学电离(关于MS)
API＝常压电离(关于MS)
aq.＝含水的
Aze(&(S)-Aze)＝(S)-氮杂环丁烷-2-羧酸酯(除非另有说明)
Boc＝叔丁氧基羰基
br＝宽的(关于NMR)
CI＝化学电离(关于MS)
d＝天
d＝双峰(关于NMR)
DCC＝二环己基碳二亚胺
dd＝双双峰(关于NMR)
DIBAL-H＝氢化二异丁基铝
DIPEA＝二异丙基乙胺
DMAP＝4-(NN-二甲基氨基)吡啶
DMF＝N，N-二甲基甲酰胺
DMSO＝二甲亚砜
DSC＝示差扫描量热法
DVT＝深度静脉血栓形成
EDC＝1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
eq＝当量
ES＝电子喷雾
ESI＝电子喷雾界面
Et＝乙基
ether＝乙醚
EtOAc＝乙酸乙酯
EtOH＝乙醇
Et2O＝乙醚
HATU＝O-(氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐
HBTU＝[N，N，N’，N’-四甲基]-O-(苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐
HCl＝盐酸、氯化氢气体或盐酸盐(根据含量)
Hex＝己烷
HOAc＝乙酸
HPLC＝高效液相色谱法
LC＝液相色谱法
m＝多重峰(关于NMR)
Me＝甲基
MeOH＝甲醇
min.＝分钟
MS＝质谱
MTBE＝甲基叔丁基醚
NMR＝核磁共振
OAc＝乙酸酯基
Pab＝对脒基苄基氨基
H-Pab＝对脒基苄基胺
Pd/c＝披钯炭
Ph＝苯基
PyBOP＝(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷子基脲六氟磷酸盐
q＝四重峰(关于NMR)
QF＝氟化四丁基铵
rt/RT＝室温
s＝单峰(关于NMR)
t＝三重峰(关于NMR)
TBTU＝[N，N，N’，N’-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)脲四氟硼酸盐]
TEA＝三乙胺
Teoc＝2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基
TEMPO＝2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基自由基
TFA＝三氟乙酸
TGA＝热重量分析
THF＝四氢呋喃
TLC＝薄层色谱
UV＝紫外
前缀正-、仲-、异-、叔-以及叔-具有其通常含义。
实施例1-5和8-14举例说明了本发明。给出实施例6和7仅是为了比较，它们并不构成本发明的部分。在实施例和附图中，括号里所给出的比例是指中性胶凝性聚合物与τ-角叉菜胶的比例，而并没有考虑碱性药物活性成分或任何其它可能存在的成分。在附图中：
附图1：H376/95从具有不同τ-角叉菜胶与PEO，4M组成比例的混合物中的释放。片剂是在pH 1分析2小时，其余时间是在pH 6.8进行分析。
附图2：H376/95从具有一定组成比例(20∶80)的不同分子量的PEO与τ-角叉菜胶的混合物中的释放。片剂是在pH 1分析2小时，其余时间是在pH 6.8进行分析。
附图3：H376/95从具有一定组成比例(80∶20)的不同分子量的PEO与τ-角叉菜胶的混合物中的释放。片剂是在pH 1分析2小时，其余时间是在pH 6.8进行分析。
附图4：H376/95从具有不同τ-角叉菜胶与HPMC，10000cps组成比例的混合物中的释放。片剂是在pH 1分析2小时，其余时间是在pH 6.8进行分析。
附图5：H376/95从具有一定组成比例(50∶50)的PEO，4M与τ-角叉菜胶的混合物中的释放。片剂是在不同的人工介质中分析24小时。
附图6：H376/95从中性胶凝性聚合物PEO 4M中的释放，其是在不同的人工介质中分析的。
附图7：H376/95从阴离子聚合物τ-角叉菜胶中的释放，其是在不同的人工介质中分析的。
附图8：在pH 1和6.8，H376/95从具有一定组成比例(50∶50)的τ-角叉菜胶与PEO，4M的混合物中的释放。片剂是在不同的人工介质中分析24小时。
附图9：在pH 1和6.8，化合物A从具有一定组成比例(50∶50)的τ-角叉菜胶与HPMC，10,000cps的混合物中的释放。片剂是在不同的人工介质中分析24小时。
附图10：化合物B从以比例(50∶50)和(80∶20)与中性聚合物PEO，4M混合的τ-角叉菜胶中的释放。片剂是在pH 1分析2小时，其余时间是在pH 6.8进行分析。
附图11：化合物B从以比例(50∶50)与中性聚合物HPMC，10,000cps混合的τ-角叉菜胶中的释放。片剂是在pH 1分析2小时，其余时间是在pH 6.8进行分析。
实施例1
本实施例表明了H376/95从具有不同PEO，4M与τ-角叉菜胶组成比例的混合物中的释放。将片剂在pH 1分析2小时，其余时间在pH 6.8进行分析。
PEO，4M∶τ-角叉菜胶比例 (80∶20) (50∶50) (20∶80)
H376/95 55.5mg 55.5mg 55.5mg
聚氧化乙烯，4M 160.0mg 100.0mg 40.0mg
τ-角叉菜胶 40.0mg 100.0mg 160.0mg
硬脂基富马酸钠 2.5mg 2.5mg 2.5mg
片剂重量 253mg 253mg 253mg
通过直接压片来制备片剂。将活性成分、PEO，4M和τ-角叉菜胶充分混合，然后将滑润剂硬脂基富马酸钠经由0.7mm筛加到其中。另外进行最终的混合，然后在单冲压片机中，用9mm冲头压缩混合物。将片剂在含有0.1M HCl、pH1的溶解浴，UPS II(50rpm，37℃，人工介质)中分析2小时。然后，将片剂转移到具有0.1M磷酸盐缓冲液、pH 6.8的溶解浴中，并进一步分析。分析结果显示于附图1中。(50∶50)制剂在1-6.8的pH范围内表现出基本上不依赖pH的释放特性。另外还可以推断出，通过将阴离子聚合物τ-角叉菜胶以不同比例与中性胶凝性聚合物PEO，4M混和，可以调整在具有不同pH的介质中的释放速度。
实施例2
本实施例表明了H376/95从具有一定组成比例(20∶80)的不同分子量的PEO与τ-角叉菜胶的混合物中的释放。将片剂在pH 1分析2小时，其余时间在pH 6.8进行分析。
PEO 4M或8M∶τ-角叉菜胶比例 (20∶80)
H376/95 50.5mg
聚氧化乙烯 40.0mg
τ-角叉菜胶 160.0mg
硬脂基富马酸钠 2.5mg
片剂重量 253mg
按照实施例1制备和分析片剂。分析结果显示于附图2中，并且表明，使用较高分子量的中性胶凝性聚合物可以在中性pH下提供较为缓慢的释放速度。在低pH下的释放没有受到影响，这是因为在制剂中包含了足量的阴离子聚合物所致。
实施例3
本实施例表明了H376/95从具有一定组成比例(80∶20)的不同分子量的PEO与τ-角叉菜胶的混合物中的释放。将片剂在pH 1分析2小时，其余时间在pH 6.8进行分析。
PEO1M或4M∶τ-角叉菜胶比例 (80∶20)
H376/95 50.5mg
聚氧化乙烯 160.0mg
τ-角叉菜胶 40.0mg
硬脂基富马酸钠 2.5mg
片剂重量 253mg
按照实施例1制备和分析片剂。附图3显示了在中性pH下，使用较高分子量的胶凝性聚合物是怎样能够降低释放速度的。同时，与附图2所示的实施例相比，由于τ-角叉菜胶的使用量较小，所以在pH1的释放阻止效果并不明显。
实施例4
本实施例表明了H376/95从具有不同τ-角叉菜胶与HPMC，10000cps组成比例的混合物中的释放。将片剂在pH 1分析2小时，其余时间在pH 6.8进行分析。
HPMC∶τ-角叉菜胶比例 (80∶20) (50∶50) (20∶80)
H376/95 55.5mg 55.5mg 55.5mg
HPMC，10,000cps 160.0mg 100.0mg 40.0mg
τ-角叉菜胶 40.0mg 100.0mg 160.0mg
硬脂基富马酸钠 2.5mg 2.5mg 2.5mg
片剂重量 253mg 253mg 253mg
按照实施例1制备和分析片剂。在不同溶解介质中的分析结果显示于附图4中。(50∶50)制剂再次表现出了在1-6.8pH范围内基本上不依赖于pH的释放特性。可以推断，通过将各种其它中性胶凝性聚合物—在本实施例中是HPMC，10,000cps以不同比例与阴离子聚合物τ-角叉菜胶混和，同样可以调整释放速度。
实施例5
本实施例表明了H376/95从具有一定组成比例(50∶50)的PEO，4M与τ-角叉菜胶的混合物中的释放。将片剂在不同介质中分析24小时。
PEO，4M∶τ-角叉菜胶比例 (50∶50)
H376/95 50.5mg
聚氧化乙烯，4M 100.0mg
τ-角叉菜胶 100.0mg
硬脂基富马酸钠 2.5mg
片剂重量 253mg
依据实施例1，通过直接压片来制备片剂。在溶解浴(USP装置2，片剂放在沿着流动方向的篮子1里)中进行分析，其中在每种介质0.1MHCl和含有5％乙醇(EtOH)的pH 6.8的0.1M磷酸盐缓冲液中将3个片剂分析24小时，加入乙醇是为了提高药物溶解性。附图5所示的结果清楚地表明，当使用相等份数的PEO 4M和τ-角叉菜胶时，可制得具有不依赖于pH的释放特性的片剂。
[1定制的由金属丝构成的带网眼的四角形篮子，在一个其上面狭窄的侧面上焊接在钢杆末端上。该钢杆穿过溶解容器的盖子，通过两个聚四氟乙烯螺帽固定在距离容器的中央3.2cm处。篮子底部下边缘调节为在桨上面1cm处。该篮子与位于其边缘的测试片剂一起沿着流动方向。]
实施例6
本实施例表明了在没有τ-角叉菜胶存在的情况下，H376/95从中性胶凝性聚合物PEO 4M中的释放，并且是在不同人工介质中的进行分析的。
H376/95 50.5mg
聚氧化乙烯，4M 200.0mg
硬脂基富马酸钠 2.5mg
片剂重量 253mg
依据实施例1，通过直接压片来制备片剂。在不同的溶解浴中分别进行分析。将在含有0.1M HCl的容器中的片剂分析2小时。当使用0.1M磷酸盐缓冲液作为溶解介质时，将片剂分析20小时。附图6中的结果显示，在pH 1的释放速度显著大于在pH 6.8的释放速度，这表明，对于具有pH依赖性溶解性的碱性药物，单独使用中性聚合物不足以产生不依赖于pH的释放特性。
实施例7
本实施例表明了在没有中性胶凝性聚合物存在的情况下，H376/95从阴离子聚合物τ-角叉菜胶中的释放，并且是在不同人工介质中的进行分析的。
H376/95 50.5mg
τ-角叉菜胶 200.0mg
硬脂基富马酸钠 2.5mg
片剂重量 253mg
依据实施例1，通过直接压片来制备片剂。按照实施例6类似的方式，在不同的溶解浴中分别进行分析。图7显示了与在pH 6.8的释放相比，在pH 1的释放速度是怎样减慢的。当使用任何其它我们已经作为基质聚合物测试过的均聚物时，这种效果没有显示出来。
实施例8
本实施例表明了化合物A从具有一定组成比例(50∶50)的PEO 4M与τ-角叉菜胶的混合物中的释放。将片剂在不同的人工介质中分析24小时。
重量(mg)
化合物A 50.0
τ-角叉菜胶(Fluka) 100.0
PEO，4M(Union Carbide) 100.0
PRUVTM 2.5
用手将活性成分与聚合物和润滑剂混和。将该混合物直接压成片剂。
实施例9
本实施例表明了化合物A从具有一定组成比例(50∶50)的HPMC，cps与τ-角叉菜胶的混合物中的释放。将片剂在不同的人工介质中分析24小时。
重量(mg)
化合物A 50.0
τ-角叉菜胶(Fluka) 100.0
HPMC，10000cps 100.0
PRUVTM 2.5
用手将活性成分与聚合物和润滑剂混和。将该混合物直接压成片剂。
评价化合物A从实施例8和9的片剂中的累积释放
在37℃，使用USP溶解装置2(桨+篮子1)50rpm在900ml介质中测试两个单独片剂的药物释放。所用的溶解介质是0.1M盐酸(pH 1)和含有5％乙醇的0.1M磷酸钠缓冲液(pH 6.8)，其中加入乙醇是为了提高药物溶解性。已证实了加入乙醇不会显著影响这些组合物的释放速度。使用C Technologies纤维光学系统进行在线定量测定，当使用0.1M HCl作为溶解介质时，采用235nm的分析波长，当使用改进的磷酸盐缓冲液pH 6.8作为溶解介质时，采用250nm的分析波长。使用350nm作为两种介质的参照波长。
[1定制的由金属丝构成的带网眼的四角形篮子，在一个其上面狭窄的侧面上焊接在钢杆末端上。该钢杆穿过溶解容器的盖子，通过两个聚四氟乙烯螺帽固定在距离容器的中央3.2cm处。篮子底部下边缘调节为在桨上面1cm处。该篮子与位于其边缘的测试片剂一起沿着流动方向。]
实施例10
本实施例表明了化合物B从具有一定组成比例(50∶50)的PEO 4M与τ-角叉菜胶的混合物中的释放。 重量(mg) 量(％) 化合物B 41.0 16 τ-角叉菜胶(Fluka) 104.0 41(“50”) PEO，4M(Union Carbide) 104.0 41(“50”) PRUV 2.5 1
依据实施例9制备片剂。释放数据显示在附图10中。
实施例11
本实施例表明了化合物B从具有一定组成比例(80∶20)的PEO 4M与τ-角叉菜胶的混合物中的释放。 重量(mg) 量(％) 化合物B 41.0 16 τ-角叉菜胶(Fluka) 41.8 17(“20”) PEO，4M(Union Carbide) 167.2 66(“80”) PRUV 2.5 1
依据实施例9制备片剂。释放数据显示在附图10中。
实施例12
本实施例表明了化合物B从具有一定组成比例(50∶50)的HPMC，10000cps与τ-角叉菜胶的混合物中的释放。 重量(mg) 量(％) 化合物B 41.0 16 τ-角叉菜胶(Fluka) 104.0 41(“50”) HPMC，10000cps(60SH) 104.0 41(“50”) PRUV 2.5 1
依据实施例9制备片剂。释放数据显示在附图11中。
实施例13
化合物C与HPMC，10000cps的直接压片
将活性物质与赋形剂在搅打桶中混和。用硬脂基富马酸钠润滑该混合物，使用压片机(exenterpress)压成片剂。 重量 量 化合物C 50mg 16.2％ HPMC，10000cps 255.0mg 82.8％ 硬脂基富马酸钠 2.5mg 1.0％
释放速度数据 时间 (分钟) 在缓冲液pH 1.1 中的％释放 在缓冲液pH 6.8 中的％释放 0 0 0 15 - - 30 8 - 45 - - 60 13 7 120 20 12 180 26 - 240 31 19 360 40 25 480 48 31 600 55 36 720 61 41 840 66 45 960 71 49 1080 75 53 1200 79 56
化合物C与比例为50∶50的HPMC，10000cps和τ-角叉菜胶的直接压片
将活性物质与赋形剂在搅打桶中混和。用硬脂基富马酸钠润滑该混合物，使用压片机(exenterpress)压成片剂。 重量 量 化合物C 50mg 16.2％ HPMC，10000cps 127.0mg 41.4％ τ-角叉菜胶(Fluka) 127.0mg 41.4％ 硬脂基富马酸钠 3.0mg 1.0％
释放速度数据 时间 (分钟) 在缓冲液pH 1.1 中的％释放 在缓冲液pH 6.8 中的％释放 0 0 - 15 - - 30 3 - 45 - - 60 4 4 120 7 8 180 10 - 240 12 16 360 17 27 480 22 38 600 27 51 720 32 63 840 37 75 960 41 87 1080 46 94 1200 50 97
释放速度是如下所述测定的。在37℃，使用USP溶解装置2(桨+篮子1)以50rpm在900ml介质中测试3个单独片剂的药物释放。所用的溶解介质是0.1M盐酸(pH1)和0.1M磷酸钠缓冲液(pH6.8)。使用C Technologies纤维光学系统进行在线定量测定，当使用0.1MHCl作为溶解介质时，采用220nm的分析波长，当使用磷酸盐缓冲液pH6.8作为溶解介质时，采用260nm的分析波长。使用350nm作为两种介质的参照波长。
[1定制的由金属丝构成的带网眼的四角形篮子，在一个其上面狭窄的侧面上焊接在钢杆末端上。该钢杆穿过溶解容器的盖子，通过两个聚四氟乙烯螺帽固定在距离容器的中央3.2cm处。篮子底部下边缘调节为在桨上面1cm处。该篮子与位于其边缘的测试片剂一起沿着流动方向。]
实施例14 重量 量 化合物D 100mg 20％ HPMC，10000cps 200mg 40％ τ-角叉菜胶(Fluka) 200mg 40％ 硬脂基富马酸钠 5mg 1％
该制剂是如实施例13所述制得的。