伤口止血消炎用无菌干粉喷剂及生产方法 【技术领域】
本发明涉及一种具有抗菌、止血、消炎和对伤口具有保护作用的伤口用无菌干粉喷剂及生产方法。
背景技术
由于医疗技术的发展及人类生活水平的提高，人类的一些传染性疾病在不断下降和得到控制。但是，随着人类活动量的加大、活动速度的加快和加剧，因运动造成的伤害不断增多，伤害程度也不断加大。迄今治疗外伤的方法仍有许多不尽人意的地方。西医疗法主要是以物理治疗即手术缝合、固定再辅以抗菌药物的治疗。中医则以活血化瘀、消肿止痛为主。由于传统中药的生产、制造、保存、使用均存在许多不卫生的地方，使得传统中药在外伤使用上受到更多的局限。传统中医药中有许多抗菌消炎、活血化瘀，对伤口愈合、肉芽生长、疤痕消除等外伤具有综合治疗作用的中草药或天然药物。如云南著名的特产药材—三七、滇重楼、独钉子、茵芋等，也有著名的云南白药、云南红药、复方青蒿搽剂等，民间医生也在与自然的斗争中发明了许多有效的方剂。在小伤口上，目前使用最多的是各种各样的创可贴，但创可贴用在较大伤口上则存在诸多不便，效果也不理想，如换药时易将伤口损伤等。因此，有必要根据对现有药物的分析和现有医疗方法的研究，结合中西医的优势和现代生物医学的运用，研制一种专门针对面积较大地外伤、烧伤及不便包扎的伤口的无菌干粉喷剂。
【发明内容】
本发明正是为解决上述问题而提出了一种伤口止血消炎用无菌干粉喷剂及其生产方法。
发明原理为：在所用药物或其提取物具有抗菌、止血、止痛、止痒、消炎、活血化瘀等综合功效，能使伤口迅速止血、愈合、避免留下疤痕的基础上，配入具有生物亲和性高、对伤口愈合有辅助作用，能随伤口愈合使自身被吸收的高分子天然辅料或合成辅料，制成医药上可接受的制剂，使之能够随药物喷在伤口上，吸收部分渗出液，分散、铺开并形成一层保护膜，以便在伤口愈合过程中辅助伤口愈合，最后被组织吸收消化。
本发明通过下列技术方案实现：一种伤口止血消炎用无菌干粉喷剂，其内容物中的药物为具有止血和消炎作用的天然药或其有效部位或单体，其特征在于每喷用含有伤口止血、消炎药物0.01～0.2g，余量为具有生物亲和性高、对伤口愈合有辅助作用，能随伤口愈合使自身被吸收的高分子天然辅料或合成辅料，制成医药上可以接受的药剂。
所述药物为具有止血和消炎作用的天然药或其有效部位或单体，具体是重楼、黄芩、三七、大黄藤、黄连、黄柏、紫草、鱼腥草、冬凌草、大黄、地榆、青蒿、艾蒿、积雪草、茜草、大蓟、小蓟、芦荟、茵芋、断血流、槐花中的一种或几种天然药物，或者为云南白药、云南红药、复方青蒿搽剂、紫雪膏(丹)、金黄散、三黄膏、生肌玉红膏、人参败毒散、四黄膏中的一种或几种消炎止血生肌药物或其提取物。
所述辅料选用具有生物亲和性高、对伤口愈合有辅助作用、随伤口愈合自身被吸收的高分子天然或合成辅料，具体是甲壳素(几丁质)、植物胶、明胶、纤维素衍生物、聚乙烯醇(PVA)、聚乳酸中的一种或几种。所述辅料中加入当归油、艾蒿油、青蒿油、云木香油、香附油、香橼油、豆蔻油、香豆素、香兰素中的一种或几种香料。
本发明提供的伤口止血消炎用无菌干粉喷剂的生产方法为：将原辅料经过过滤、灭菌、无菌超微化处理、无菌分装等工序制得，其中干粉喷剂内容物——超细无菌粉的制备为：
一、冻干法：
在1万级的条件下，将药物溶解于适量注射用水，加入注射用水稀释至所需体积，并注意使其完全溶解，补加注射用水至最终所需体积。过滤，滤液经过滤纸及0.4μm的滤膜粗滤等处理后，在100级的条件下，用0.2μm以下的滤膜过滤。精滤液送入冷冻真空干燥机，快速冷至-30℃～-40℃，2～3小时，逐步缓慢升温至35℃～45℃(约需10小时)。取出制品，在无菌条件下加入无菌辅料，研细混匀，进行气流式(或其他)无菌超微化粉碎。可制得所需的均匀的超细无菌半成品。
二、喷干法：
在1万级的条件下，将药物溶解于适量注射用水，加入注射用水稀释至所需体积，再加入可溶于水的辅料，并注意使其完全溶解，补加注射用水至最终所需体积。过滤，滤液经过滤纸及0.4μm的滤膜粗滤等处理后，在100级的条件下，用0.2μm以下的滤膜过滤。精滤液送入无菌型喷干机进行无菌喷雾干燥操作，控制药液浓度在5％以下、并控制流速，可制得无菌超细粉(粒径在0.01μm～10.0μm)。若再加辅料则，取出制品，在无菌条件下加入无菌辅料，研细混匀，进行气流式(或其他)无菌超微化粉碎。可制得所需的均匀的超细无菌半成品。
本发明提供的伤口止血消炎用无菌干粉喷剂经实验表明：
1、稳定性：在常温下可放置2年，产品稳定可靠，各项指标均合格，完全符合要求；
2、刺激性：用豚鼠做刺激性实验，刺激性为0级，即无明显变化；
药物有效部位或单体的一般分离提取：
成药或药材，打成粗粉，用50％~80％的乙醇8、6、6倍量热回流提取1小时三次，合并提取液，浓缩致50％的量，用0.1％溶液量的活性炭脱色，滤液过短(10~15cm)的硅胶柱除杂一次，浓缩致15％~25％的量，5~10℃放置过夜，超滤过滤，真空浓缩致干，可得有效部位(收率一般在2～12％)。
分离单体：有效部位，用干法或湿法上柱，在硅胶柱上分离，用下列溶剂：石油醚(沸点60～80℃)，石油醚-苯混合物，苯、苯-乙酸乙酯混合物、氯仿-甲醇混合物洗脱流份，收接流份，生物法追踪活性，活性部分真空浓缩致干，干燥物用相应的溶剂重结晶，得单体。
根据有效成分的理化性质，可选用超临界(SC-CO2)提取方法提取。溶剂可选用CO2、CO2夹带乙醇、CO2夹带甲醇等，萃取温度45～65℃，萃取压力30～50Mpa，解析压力8～14Mpa，解析温度42～67℃。优点在于方法属于洁净生产，提取物中残留溶剂少。严格控制条件和夹带溶剂的量可以得到不同的有效部位直至单体。
实施例1
云南白药抗菌消炎有效部位的提取及无菌粉的制备
步骤一、云南白药有效成分的分离：
取云南白药散1公斤，用70％的乙醇8、6、6倍量热回流提取1小时三次，合并提取液，浓缩致50％的量，用0.1％溶液量的活性炭脱色，短(10cm)的硅胶柱除杂一次，浓缩致20％的量，5~10℃放置过夜，超滤过滤，真空浓缩致干，可得云南白药抗菌止血消炎的有效部位约70g(收率一般在～7％)；
步骤二、云南白药提取物无菌超细粉的制备：
在1万级的条件下，将上述提取的云南白药抗菌止血消炎的有效部位50g溶解于500ml注射用水，并注意使其完全溶解。过滤，滤液经过滤纸及0.4μm的滤膜粗滤等处理后，在100级的条件下，用0.2μm以下的滤膜过滤。精滤液送入冷冻真空干燥机，快速冷至-30℃～-40℃，2～3小时，逐步缓慢升温至35℃～45℃(约需10小时)。取出制品，在无菌条件下加入无菌辅料甲壳素200g，研细混匀，进行气流式(或其他)无菌超微化粉碎。可制得所需的均匀的超细无菌半成品；
步骤三、云南白药提取物无菌干粉喷剂的制备：
在无菌条件下，将上述云南白药提取物无菌超细粉，按每粒0.2g封装在胶囊(或泡眼型/或条杆型)的喷剂药物容器中，即可得云南白药提取物无菌干粉喷剂1350个，每个喷剂含有效提取物0.052g，一次用完。
实施例2
滇重楼提取物无菌干粉喷剂的制备
步骤一、滇重楼有效成分的分离：
取滇重楼1公斤，打粗粉，用78％的乙醇8、6、6倍量热回流提取1小时三次，合并提取液，浓缩致50％的量，用0.1％溶液量的活性炭脱色，短(15cm)的硅胶柱抽滤除杂一次，浓缩致15％的量，5~10℃放置过夜，超滤过滤，滤液待用；
步骤二、滇重楼提取物无菌超细粉的制备：
将上述的待用液在100级的条件下，用0.2μm以下的滤膜过滤。精滤液送入无菌型喷干机进行无菌喷雾干燥操作，可制得无菌粉约40g(收率～4％)。取出全部无菌粉，在无菌条件下加入无菌辅料甲壳素100g、羟丙基纤维素5g和青蒿油1ml，研细混匀，进行气流式(或其他)无菌超微化粉碎。可制得所需的均匀的超细无菌半成品；
步骤三、滇重楼提取物无菌干粉喷剂的制备：
在无菌条件下，将上述提取物超细无菌半成品，每粒按0.13g封装在胶囊(或泡眼型/或条杆型)的干粉喷剂药物容器中，即可得滇重楼提取物无菌干粉喷剂1000个，每个喷剂含有效提取物0.04g，一次用完。
实施例3
三七提取物无菌干粉喷剂的制备
步骤一、三七有效成分的分离：
取三七芦头1公斤，打粗粉，用60％的乙醇浸润，用超临界(SC-CO2)提取方法提取。溶剂可选用CO2、CO2夹带10％甲醇，萃取温度45～65℃，萃取压力30～50Mpa，解析压力8～14Mpa，解析温度42～67℃。在CO2夹带甲醇提取部分获得三七提取物约157g(收率～16％)；
步骤二、三七提取物无菌超细粉的制备：
将上述的提取物溶于2000ml注射用水，在100级的条件下，用0.2μm以下的滤膜过滤。精滤液送入无菌型喷干机进行无菌喷雾干燥操作，可制得无菌粉约132g(收率～84％)。取出全部无菌粉，在无菌条件下加入无菌辅料甲壳素100g、聚乳酸45g和当归油2ml，研细混匀，进行气流式(或其他)无菌超微化粉碎。可制得所需的均匀的超细无菌半成品262g；
步骤三、三七提取物无菌干粉喷剂的制备：
在无菌条件下，将上述提取物超细无菌半成品，每粒按0.25g封装在胶囊(或泡眼型/或条杆型)的干粉喷剂药物容器中，即可得三七提取物无菌干粉喷剂1048个，每个喷剂含有效提取物0.126g，一次用完。
实施例4
血竭提取物无菌干粉喷剂的制备
步骤一、血竭有效成分的分离：
取血竭1公斤，用80％的乙醇8、6、6倍量热回流提取1小时三次，合
并提取液，浓缩致50％的量，用0.1％溶液量的活性炭脱色，短(10cm)的硅胶柱抽滤除杂一次，浓缩致25％的量，10℃放置过夜，超滤过滤，滤液待用；
步骤二、血竭提取物无菌超细粉的制备：
将上述的待用液在100级的条件下，用0.2μm以下的滤膜过滤。精滤液送入无菌型喷干机进行无菌喷雾干燥操作，可制得无菌粉约300g(收率～30％)。取出全部无菌粉，在无菌条件下加入无菌辅料甲壳素1500g、明胶35g和香兰素1g，研细混匀，进行气流式(或其他)无菌超微化粉碎。可制得所需的均匀的超细无菌半成品1762g；
步骤三、血竭提取物无菌干粉喷剂的制备：
在无菌条件下，将上述提取物超细无菌半成品，每粒按0.1g封装在胶囊(或泡眼型/或条杆型)的干粉喷剂药物容器中，即可得滇重楼提取物无菌干粉喷剂17620个，每个喷剂含有效提取物0.017g，一次用完。
产品药学研究及功效：
1、喷剂的稳定性
实施例1、2、3、4四个样品在室温下避光保管，放置1、2、3、6个月，经初步检查，每喷的喷气量基本不变，有效成分经检验也未发生变化。因此，初步认为该吸入剂的各种处方均可达到1年左右的保质期。
2、喷剂的止血愈伤作用
取健康家兔4只，W：2.0～2.2kg，雌雄各半，分为两组，将背部两侧去毛约5×10cm2，一块脱毛区作轻度皮损试验，分为给药区和对照区。给药区给药1次(～0.1mg)，对照区喷一次空白。取健康家兔4只，W：2.0～2.2kg，雌雄各半，分为两组，将背部两侧去毛约5×10cm2，一块脱毛区作正常皮肤试验，分为给药区和对照区。给药区给药1次(～0.1mg)，对照区喷一次空白。给药前用针头脱毛区皮肤上划出“#”形擦伤，直径2cm，以刺伤表皮，不伤真皮，有轻度出血为度。用药方法和正常皮肤一样，另一侧作对照。另一块脱毛区作重度损伤试验，给药前用针头脱毛区皮肤上划出“#”形擦伤，直径3cm，以刺伤真皮，有较多出血为度。用药方法和正常皮肤一样，另一侧作对照。给药区给药1次(～0.1mg)，对照区喷一次空白。给药后，分别记录1h、24h、48h给药部位出现的红斑、出血及伤口愈合的情况。
结果见表1：
结果 1h 24h 48h
组别 红斑 出血 伤口愈合 红斑 出血 伤口愈合 红斑 出血 伤口愈合
对照组 轻 红 渗血 未 红 未 未 红 未 未
重 红 出血 未 红 渗血 未 红 未 未
试验组 轻 红 未 未 红 未 未 未 未 基本愈合
重 红 渗血 未 红 未 未 微红 未 未
结果表明：试验品具有较好的止血、消炎及伤口愈合作用。
3、喷剂的抗炎作用
用Whttle法，小鼠30只，随机分成3组，每组10只，小鼠背部两侧去毛约4cm2，连续在去毛部位给药两次，中间间隔30min，每次喷(实施例1)完(～0.052g)，给药1h后，小鼠尾静脉注射0.5％伊文思兰0.2ml/只后及时腹腔注射0.7％醋酸0.2ml/10g，15min后处死小鼠，腹腔注射生理盐水5ml轻揉后抽取腹腔液，离心，上清液于620nm处测定光密度值，计算并比较组间差异显著性，结果见表2。
结论：该喷剂有较好的抗炎作用，与空白组比较有非常显著的差异。
4、喷剂的刺激性试验
取健康家兔4只，W：2.0～2.2kg，雌雄各半，分为两组，将背部两侧
表2
组别 体重 剂量(mg/Kg) 光密度值 抑制率
空白组 20±1.1 等体积 0.28±0.05
阿司匹林 20±1.3 200 0.11±0.03 60.9％
喷剂组 20±1.2 52 0.10±0.02 71.1％
表3 皮肤刺激反应评分标准
红斑 积分 水肿 积分
无红斑 0 无水肿 0
勉强可见 1 轻微水肿 1
明显红斑 2 皮肤隆起轮廓清楚 2
中度到严重红斑 3 水肿隆起1mm并范围扩大 3
紫色红斑有焦痂 4
表4 皮肤刺激强度评分标准
平均分值 评价
0～0.49 无刺激性
0.5～2.99 轻度刺激性
3.0～5.99 中度刺激性
6.0～8.0 强烈刺激性
去毛约5×10cm2，一块脱毛区作正常皮肤试验，分为给药区和对照区。给药区给药1次(～0.1mg)，对照区喷一次空白。另一块脱毛区作损伤皮肤刺激性试验，给药前用针头脱毛区皮肤上划出“#”形擦伤，直径2cm，以刺伤表皮，不伤真皮，有轻度出血为度。用药方法和正常皮肤一样，另一侧作对照。给药区给药1次(～0.1mg)，对照区喷一次空白。给药24h后，分别记录1h、24h、48h、72h给药部位出现的红斑和出血的情况，按表3评分并评价刺激程度。
表5 喷剂对正常皮肤刺激的平均反应值
组别 动物数 积分总和 平均反应值
1h 24h 48h 72h 1h 24h 48h 72h
空白 4 4 3 0 0 1 0.75 0 0
实验组 4 3 3 0 0 0.8 0.8 0 0
结果：从表5可以看出喷剂对正常皮肤的刺激与空白无明显差异。
表6 喷剂对损伤皮肤刺激的平均反应值
组别 动物数 积分总和 平均反应值
1h 24h 48h 72h 1h 24h 48h 72h
空白 4 4 3 0 0 1 0.75 0 0
实验组 4 4 2 0 0 1 0.65 0 0
结果：从表5可以看出喷剂对损伤皮肤的刺激与空白无明显差异。