复合溶菌酶LYSOAMIDASE喷雾剂及制备方法.pdf

本发明涉及复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂及制备方法。本发明公开的复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂含有0.1％～1.0％活性成分Lysoamidase、0.1～10.0％抗氧剂和0.1～10.0％抗氧增效剂，并以pH为3.0－9.0缓冲液为溶剂。本发明配方解决了复合溶菌酶Lysoamidase在水溶液中的稳定性问题，提供的喷雾剂剂型使用方便、抗菌效果明显、质量稳定。

1、  复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂，其特征在于该喷雾剂含有0.1％～1.0％活性成分Lysoamidase、0.1～10.0％抗氧剂和0.1～10.0％抗氧增效剂，并以pH为3.0-9.0缓冲液为溶剂。

2、  根据权利要求1所述的复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂，其特征在于其中所述的抗氧剂选自含硫化合物、烯二醇类、氨基酸类抗氧剂。

3、  根据权利要求2所述的复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂，其特征在于其中所述的抗氧剂选自硫脲、硫代甘油、5-硫代-D-葡萄糖、生育酚、苹果酸钠、维生素C棕榈酸酯、L-谷胱甘肽、L-半胱氨酸L-蛋氨酸、L-亮氨酸和牛白蛋白。

4、  根据权利要求1所述的复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂，其特征在于其中所述的抗氧增效剂选自金属螯合剂、有机酸类和氨基酸类化合物。

5、  根据权利要求4所述的复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂，其特征在于其中所述的抗氧增效剂选自二乙胺四乙酸钠盐、二乙胺四乙酸钙盐、琥珀酸、富马酸、酒石酸、枸橼酸、甘氨酸、半胱氨酸和色氨酸。

6、  根据权利要求1所述的复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂，其特征在于其中所述的pH3.0-9.0缓冲液选自磷酸二氢钠+磷酸氢二钠缓冲液、磷酸氢二钠+柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠+磷酸二氢钾缓冲液、Tris+盐酸缓冲液、磷酸二氢钾+氢氧化钠缓冲液、甘氨酸+氢氧化钠缓冲液和碳酸钠+碳酸氢钠。

7、  根据权利要求1所述的复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：
(1)配制pH3.0-9.0缓冲液；
(2)在缓冲液中加入复合溶菌酶Lysoamidase，复合溶菌酶与缓冲液的重量体积比约为1∶100-1000w/v，搅拌使之溶解，均匀分散；
(3)加入抗氧剂、抗氧增效剂及其他辅料，充分搅拌使其溶解；
(4)过滤，分装入灭菌完全的喷雾剂容器，低温4-6℃保存。

复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂及制备方法
技术领域
本发明属于药物制剂技术领域。具体涉及复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂及制备方法。
背景技术
Lysoamidase是从一种单胞杆菌的培养液中得到的一种新型的医用或兽用抗菌酶类外用药物，具有很强的细菌溶解和蛋白溶解能力。Lysoamidase粉末易吸潮，无嗅、无味。易溶于水，在乙醇和氯仿中不溶解。Lysoamidase由90％的多糖和10％的蛋白构成(多糖带负电，有众多以N-乙酰葡糖胺，N-乙酰甘露糖醛和N-乙酰半乳糖醛酸三者构成的单元结构组成。蛋白部分由近20种不同的蛋白组成，其中有溶菌蛋白，如磷酸(酯)酶和蛋白酶)。Lysoamidase原有的主要剂型为冻干粉，可作为外科局部用药，用药方式主要有：填塞伤口，冲洗伤口，漱口，湿敷。医学和生物学实验证实：Lysoamidase中有些溶菌酶具有蛋白水解活性，可以清除伤口腐烂组织，使化脓伤口的坏死部分迅速脱落，同时具有促进免疫力和加速上皮形成的作用，在水解金黄色葡萄球菌过程中起主要作用的肽链内切酶就是这样一种具有蛋白酶活性的溶菌酶。在适当条件下，Lysoamidase干粉可保存3年。
Lysoamidase能破坏对抗生素有抗性的革兰氏阳性菌(如：葡萄球菌、链球菌)的细胞壁，对金黄色葡萄球菌最有效。Lysoamidase和多粘菌素B复合，可以对革兰氏阴性菌有更广的抗菌作用，例如：坏死梭杆菌、拟杆菌、大肠杆菌、恶臭假单胞菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、普通变性菌、变性杆菌。
Lysoamidase在临床实验过程中，主要用于化脓性瘘、乳腺炎、手术后前腹壁及下肢伤口以及由对抗生素有抗性的致病葡萄球菌导致的急性软组织化脓(如蜂窝组织炎、脓肿、化脓性组织炎)。对上述所有情况，Lysoamidase都显示出很好的效果：与由传统药物治疗的对照组相比，治疗时间缩短了2倍。临床试验中，将Lysoamidase和多粘菌素B复合用于口腔疾病地治疗，同样显现出溶菌、去腐和生新作用。化脓性伤口和烧伤，有化脓炎症的皮肤病(毛囊炎、疖病、其他形式的脓皮病)，术后创伤、烫伤、营养性溃疡，乳腺炎和子宫内膜炎，牙周组织和口腔疾病、牙髓炎、牙周炎、中央骨髓炎、口腔黏膜空洞，咽喉痛、鼻咽疾病。
但是由于Lysoamidase在水溶液中不稳定，使得对于它的制剂开发受到限制，应用也受到影响。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于解决复合溶菌酶Lysoamidase在水溶液中的稳定性问题，提供一种使用方便、抗菌效果明显、质量稳定的Lysoamidase喷雾剂。
本发明公开的复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂含有0.1％～1.0％活性成分Lysoamidase、0.05～10.0％抗氧剂和0.05～10.0％抗氧增效剂，并以pH为3.0-9.0缓冲液为溶剂。
其中抗氧剂主要选自含硫化合物、烯二醇类、氨基酸类等抗氧剂，包括：硫脲、硫代甘油、5-硫代-D-葡萄糖、生育酚、苹果酸钠、维生素C棕榈酸酯、L-谷胱甘肽、L-半胱氨酸L-蛋氨酸、L-亮氨酸和牛白蛋白等，具有先于药物氧化，抑制游离基连锁反应的作用。
抗氧增效剂选自金属螯合剂、有机酸类和氨基酸类化合物，具有与痕量金属催化剂络合，或者降低溶液的pH值从而降低氧化电势，或者降低溶液中氧的稳定性及含量的作用。包括：二乙胺四乙酸钠盐、二乙胺四乙酸钙盐、琥珀酸、富马酸、酒石酸、枸橼酸、甘氨酸、半胱氨酸和色氨酸等。
pH3.0-9.0缓冲液选自磷酸二氢钠+磷酸氢二钠缓冲液、磷酸氢二钠+柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠+磷酸二氢钾缓冲液、Tris+盐酸缓冲液、磷酸二氢钾+氢氧化钠缓冲液、甘氨酸+氢氧化钠缓冲液和碳酸钠+碳酸氢钠等。缓冲液中含有的可溶性无机盐离子如K⁺、Ca²⁺、Na⁺、PO₄^3-等，具有增强药物的抑菌活性，相当于激活剂的作用。
根据喷雾剂的使用部位不同，在制剂中还可以添加其他辅助成分，如稀释剂、调味剂等。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂的制备方法。
本发明所述方法包括下列步骤：
(1)配制pH3.0-9.0缓冲液；
(2)在缓冲液中加入复合溶菌酶Lysoamidase，复合溶菌酶与缓冲液的重量体积比约为1∶100-1000w/v，搅拌使之溶解，均匀分散；
(3)加入抗氧剂、抗氧增效剂及其他辅料，充分搅拌使其溶解；
(4)过滤，分装入灭菌完全的喷雾剂容器，低温4-6℃保存。
喷雾剂用药量小，剂量大小可伸缩易控制，给药方便，而且不同于气雾剂，不加入抛射剂，不需压力容器，工艺简单，符合环保要求。
用喷雾剂对体表、粘膜及腔道给药，既能应用于局部治疗，又能应用于全身治疗。鼻腔、口腔及其他腔道粘膜的毛细血管丰富，药物被吸收后，直接进入血液循环，可免受胃肠道中酶的破坏和肝脏对药物的首过作用，有利于生物利用度提高。
本发明的Lysoamidase喷雾剂是根据口腔卫生学原理设计，有效成分通过局部病灶喷涂渗入内部组织，具有超细状喷雾，渗透力强可直接作用于创面，药效持久集中，见效快。能有效抑杀引起咽喉炎、扁桃体炎、口腔溃疡、牙龈炎、牙周炎、冠周炎、龈乳头炎的金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、大肠球菌、白色念球菌、真菌厌氧菌等细菌，杀菌率高。该制剂具有特异性抑杀口腔中有害细菌，保护有益菌群，长期使用不会产生耐药性；同时安全无毒，对粘膜无刺激，长期频繁使用无任何副作用；还具有杀菌消炎，抵抗各种感染，提高机体免疫力，加速创口愈合，组织修复的功能。
用本发明复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂与头孢类药物进行抗菌比较试验，结果显示本发明复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂的抑菌效果优于目前上海用量最大的第一代头孢类药物头孢氨苄。
稳定性试验表明，本发明复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂制剂产品能够稳定贮存1年，而未加抗氧剂的制剂1月效价就有明显降低，1年时没有任何抑菌活性。
具体实施方式
实施例1
Lysoamidase       50,000IU(约300mg)
维生素C棕榈酸酯   1.5g
酒石酸            0.28g
薄荷脑            0.1g
阿斯巴甜          0.15g
苹果酸钠          0.5g
配制0.01M，PH8.0的磷酸缓冲液(100ml)(磷酸二氢钠+磷酸氢二钠)；加入复合溶菌酶Lysoamidase(50,000IU)，搅拌使之溶解，均匀分散；加入维生素C棕榈酸酯、苹果酸钠、酒石酸、薄荷脑和阿斯巴甜，搅拌加速溶解，使成稳定的体系，过滤分装入灭菌完全的喷雾剂容器，低温4-6℃保存。
实施例2
Lysoamidase            50,000IU(300mg)
硫    脲               3.8g
二乙胺四乙酸钠盐       0.5g
柠檬油                 0.18g
甜叶菊素               0.15g
配制PH6.8的磷酸缓冲液100ml(磷酸氢二钠+磷酸二氢钾)；加入复合溶菌酶Lysoamidase，搅拌使之溶解，均匀分散；加入硫脲、二乙胺四乙酸钠盐、柠檬油和甜叶菊素，制成溶液，搅拌加速溶解，使成稳定的体系，过滤，分装入灭菌完全的喷雾剂容器，低温4-6℃保存。
实施例3
Lysoamidase        50,000IU
L-谷胱甘肽         2.5g
枸橼酸             1.2g
玫瑰油             0.28g
甜叶菊素           0.3g
牛白蛋白           0.5g
配制PH5.0的Tris缓冲液100ml(Tris+盐酸缓冲液)；加入复合溶菌酶Lysoamidase，搅拌使之溶解，均匀分散；加入L-谷胱甘肽、枸橼酸、玫瑰油、甜叶菊素和牛白蛋白，制成溶液，搅拌加速溶解，使成稳定的体系，过滤，分装入灭菌完全的喷雾剂容器，低温4-6℃保存。
实施例4  Lysoamidase喷雾剂抗菌试验
Lysoamidase抗菌药物敏感试验：
对于大肠埃希氏菌(ATCC52922)最小抑菌浓度：0.0625mg/ml
对于铜绿假单胞菌(ATCC27853)最小抑菌浓度：0.0625mg/ml
实施例5  稳定性试验