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乳酸左旋氧氟沙星粉针剂及制备方法
技术领域
本发明涉及药物制备技术领域。具体涉及乳酸左旋氧氟沙星粉针剂及制备方法。
背景技术
氧氟沙星是第三代喹诺酮类抗菌药。喹诺酮类抗菌药具有抗菌谱广，抗菌活性强，给药方便，与常用抗菌药物无交叉耐药性，生产不需粮食，价格比疗效相当的抗生素低廉，对轻、中、重各类感染均有良好疗效等特点。氧氟沙星具有第三代喹诺酮类抗菌药物的特性，对多数肠杆菌科的细菌如肺炎克雷白杆菌、变形杆菌属、伤寒沙门氏菌属、志贺杆菌、部分绿脓杆菌、淋球菌、大肠杆菌等具有较强的抗菌活性，对部分葡萄球菌、肺炎链球菌、衣原体等也有良好的抗菌作用。作为氧氟沙星的更新换代产品左氧氟沙星，它的作用机理同其它的喹诺酮类一样，是通过抑制细菌的DNA螺旋酶而起作用。它的体外抗菌活性为消旋体氧氟沙星的2倍，为右旋体的8-128倍，并且该药物对细菌及哺乳动物异构酶II抑制作用有明显选择性，两者之差达1400倍，从而明显提高了临床用药的安全性，尤其是中枢神经系统的毒性低于氧氟沙星。对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和部分厌氧菌有较大的抗菌作用。体内抗菌活性表明，对大肠杆菌有效性为氧氟沙星的15倍，对金葡菌及绿脓杆菌的有效性分别为环丙沙星的3倍和1倍。该药体外试验表明，它的抗菌谱广，临床使用耐药性良好。左氧氟沙星具有良好的药代动力学特性，该药口服吸收快，生物利用度为100％，口服或静脉注射2种给药途径可替换使用，为临床顺贯疗法提供了好的依据。该药主要以药物原形经尿液排出体外，代谢物少且无活性，半衰期较长为6-8小时，体内分布广泛，穿透性强，在组织与体液内的药物浓度较高，较抗菌所需MIC值高数倍。
虽然左氧氟沙星的口服吸收较快，但重症病人还是需要用注射剂来快速控制病情。左氧氟沙星的水溶性较差，将左氧氟沙星制成乳酸盐后，水溶性有所改变，这为注射剂奠定了基础。乳酸左氧氟沙星注射液疗效确切，毒副作用较低，受到市场的好评，但注射液不利于贮藏和运输，稳定性难以保证。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于改进现有的乳酸左旋氧氟沙星的剂型，提供一种制备简便、纯度高、质量稳定、副作用低、便于储存运输的粉针剂。
本发明公开的乳酸左旋氧氟沙星粉针剂是将乳酸左旋氧氟沙星水溶液经脱色、除菌过滤后用乙醇或丙酮冲析结晶、灌装后获得的无菌粉末制剂。采用高压液相检测，无菌粉末中右旋异构体含量低于0.5％。
本发明乳酸左旋氧氟沙星粉针剂具体通过下述步骤制得：
1.乳酸左旋氧氟沙星无菌粉制备
将乳酸左旋氧氟沙星加入存有3～4.5倍蒸馏水的反应器中，搅拌溶解，加入活性炭，脱色过滤，用50％乙醇或丙酮溶液洗涤碳饼，滤液经粗滤、精滤，抽至无菌结晶锅内，搅拌下加入25～35倍无水乙醇或丙酮，先室温结晶，后冷却过滤，用适量无水乙醇洗涤晶体，100℃干燥，得乳酸左旋氧氟沙星无菌粉，收率为65～75％；
2.乳酸左旋氧氟沙星分装
在100级洁净区域中，称取乳酸左旋氧氟沙星无菌粉，于层流罩下分别封装入10ml模制抗生素瓶中，按无水物计算，每瓶含左旋氧氟沙星0.1g。
乳酸左旋氧氟沙星原料中，含有微量的乳酸右旋氧氟沙星，在原料质量标准中必须控制乳酸右旋氧氟沙星小于1.0％。尽管右旋异构体含量较低，但注射剂本身使用的剂量较小，使得药物有效剂量不足，影响治疗效果，并可能增加副作用。在水针剂中未见有控制右旋异构体的报道。本发明通过在粉针剂制备过程中增加用溶媒冲析结晶，利用乳酸左旋氧氟沙星与右旋异构体在溶剂中的溶解度差异，获得纯度更高的乳酸左旋氧氟沙星无菌粉末。表1即为采用本发明方法获得的左旋结晶粉末与未精制前原料的右旋异构体含量比较，结果显示，结晶后右旋异构体含量明显降低。
表1溶媒结晶前后左、右旋成分含量比较

  序号           溶媒结晶前     溶媒结晶后(本发明方法)乳酸左氧(％)乳酸右氧(％)乳酸左氧(％)乳酸右氧(％)    1    98.77    0.63    99.98    0.39    2    98.45    0.66    99.97    0.38    3    98.54    0.65    99.99    0.39    4    98.36    0.68    99.98    0.40    5    98.75    0.62    100.01    0.36    6    98.44    0.67    99.98    0.39
将本发明方法获得的粉针剂与乳酸左旋氧氟沙星水注射液进行稳定性对照试验，经24个月的考查发现本发明制剂中右旋异构体和有关物质的量均明显低于水注射剂，且右旋异构体和有关物质的增量亦明显少于水注射剂，见表2。
表2注射用乳酸左旋氧氟沙星与乳酸左旋氧氟沙星注射液稳定性比较(单位：％)  时间       注射用乳酸左旋氧氟沙星            乳酸左旋氧氟沙星注射液  含量  有关物质  右旋体  外观色  含量  有关物质  右旋体  溶液色  0月  100.6  0.015  0.401  类白色  100.10  0.023  0.421  淡黄色  3月  100.3  0.023  0.451  类白色  99.78  0.053  0.551  淡黄色  6月  100.1  0.048  0.446  类白色  98.67  0.102  0.587  淡黄色  12月  99.99  0.050  0.462  类白色  98.10  0.178  0.665  黄色  24月  99.86  0.061  0.495  类白色  98.01  0.276  0.785  黄色
对用本发明方法获得的粉针剂进行乙醇残留量试验、溶血试验、过敏试验和血管刺激性试验，均未检测到任何副反应，证明本发明制剂安全。
本发明乳酸左旋氧氟沙星粉针剂较现有水针剂具有下述显著优点：
(1)本发明采用溶媒结晶法，有利于提高其活性成分的纯度，使对人体无益的右旋成分含量降低；
(2)制成固体粉末，使其稳定性提高；
(3)利于储藏和运输过程中保证质量；
(4)操作简便，工艺条件温和，成本低廉，适合工业化生产；
(5)利于临床剂量的调配；
(6)本品副作用低，容易被病人普遍接受；
(7)本品水溶性较好，注射剂能快速控制重症病人病情，能满足临床重症病人治疗的需要。
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
图1流动相空进样
图2千分之一检测限
图3酸破坏(右旋异构体)
图4碱破坏(右旋异构体)
图5氧化破坏(右旋异构体)
图6预试溶液(右旋异构体)
图7右旋异构体检查
实施例1
将乳酸左旋氧氟沙星170g加入存有595ml蒸馏水的2L反应器中，搅拌溶解15min，加入3.6g活性炭，搅拌30min过滤，并用2×85ml50％乙醇水溶液洗涤炭饼，滤液经粗滤，精滤，抽至无菌室结晶锅内，搅拌下加入5.1L无水乙醇，先室温结晶，后冷却过滤，用适量无水乙醇洗涤晶体2次，100℃干燥，得乳酸左旋氧氟沙星无菌粉约120g，收率71％。右旋体含量0.39％，有关物质含量0.06％。
实施例2
将乳酸左旋氧氟沙星100g加入存有300ml蒸馏水的1L反应器中，搅拌溶解15min，加入3.0g活性炭，搅拌30min过滤，并用2×60ml 30％丙酮水溶液洗涤炭饼，滤液经粗滤，精滤，抽至无菌室结晶锅内，搅拌下加入2.8L丙酮，先室温结晶，后冷却，过滤，用适量丙酮洗涤晶体2次，100℃干燥，得乳酸左旋氧氟沙星无菌粉约75g，收率75％。右旋体含量0.1％，有关物质含量0.03％。
实施例3注射用乳酸左氧氟沙星中乙醇残留量的测定
1)色谱条件
仪器：岛津GC-14B
检测器：FID检测器
色谱柱：玻璃填充柱(2m×4mm，填料：Porapak QS 80/100目)
柱温：130℃
进样口温度：160℃
检测器温度：260℃
进样量：1μl
2)测定法
精密称取乙醇适量，加水定量稀释制成每1ml中含乙醇0.5mg的溶液，作为对照品液；另取本品约0.5g，精密称定，用水溶解并稀释至5ml，作为供试品溶液。精密吸取上述两种溶液1μl，照有机溶剂残留量测定法(中国药典2000年版二部附录VIII P第一法)，在上述色谱条件下，依法进行测定，理论塔板数按乙醇计不得低于1000，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
3)线性试验
精密称取乙醇适量，加水定量稀释制成每1ml中约含乙醇2mg的溶液，作为线性储备液，精密吸取该储备液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml和8.0ml，分别置于10ml量瓶内，加水稀释至刻度，摇匀，加上储备液(共6个浓度点)作为测定溶液，照上述测定法依法测定，记录色谱图。以进样浓度为横坐标，以测得的乙醇峰面积为纵坐标进行线性回归分析，结果如下：
乙醇：A＝601727C-37421  r＝0.9997
4)精密度试验
取线性试验项下3号溶液作为供试溶液，依法连续进样6次，计算平均校正因子的相对标准偏差(RSD)，结果见下表3。  进样次数    乙醇峰面积    1    979531    2    966536    3    983104    4    971564    5    982588    6    968852    均值    975362    RSD    0.74％
5)回收率试验
供试品批号：020101(未检出)
试验方法：
取本品约0.1g，精密称定，用水溶解，精密加入线性储备溶液2ml，4ml，6ml，用水稀释至10ml，摇匀，作为供试品溶液。照上述测定法进行测定。结果见表4。编号  样品中乙醇量  (mg/ml)  加入量  (mg/ml)  测得量  (mg/ml)  加样回收率  (％)平均回收率(％)    1    0    0.404    0.39    96.53  100.66    2    0    0.404    0.41    101.48    3    0    0.404    0.42    103.96    4    0    0.808    0.83    102.72  100.66    5    0    0.808    0.82    101.48    6    0    0.808    0.79    97.77    7    0    1.212    1.19    98.18  98.18    8    0    1.212    1.18    97.36    9    0    1.212    1.20    99.01
6)最低检测限
取线性项下的最低浓度作为储备液，用水以不同比例稀释后测定，以信噪比为3∶1时的浓度为最低检测限，具体如下：
乙醇：2.1ng
7)样品测定
按测定法项的要求依法测定，其结果见表5：  批号  称样量(g)  乙醇(％)  020101  0.4753  未检出  020102  0.4955  未检出  020103  0.4864  未检出
实施例4  右旋异构体高效液相测定方法确定
1)高效液相色谱仪——岛津LC-10ATvp泵，岛津SPD-10Avp紫外检测器，色谱柱为Luna 5μC18(2)250×4.6mm(DM)，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2)波长的选择
取样品用流动相配制成每1ml中约含5μg溶液，在200-400nm波长范围内乳酸左氧氟沙星在293nm波长附近有最大吸收，故选择293nm波长作为右旋异构体检查的检测波长。
3)流动相的选择
右旋异构体检查中选择L-苯丙氨酸和硫酸铜为手性流动相添加剂，其中，L-苯丙氨酸为配合剂，硫酸铜为配合离子。试验表明L-苯丙氨酸可使左、右旋异构体获得良好分离。参照乳酸左氧氟沙星局版标准WS-576(X-508)-99选择甲醇∶手性溶液(取L-苯丙氨酸0.33g，硫酸铜0.25g，加水1000ml溶解后，摇匀，即得)(13∶87)为流动相。
4)流动相进样，见图1。
5)千分之一检测限
取本品适量，加流动相配制成每1ml含左氧氟沙星1μg的溶液，取该溶液10μl注入色谱仪，记录色谱圈，见图2。试验结果表明此浓度下样品能被检出。
6)酸、碱、氧化破坏试验
①酸破坏试验
取本品12mg置10ml容量瓶中，加1mol/L盐酸1ml，置沸水浴中加热0.5小时，取出，放冷，加流动相定容取该溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图3。
②碱破坏试验
取本品12mg置10ml容量瓶中，加1mol/L，氢氧化钠1ml，置沸水浴中加热0.5小时，取出，放冷，加流动相定容，取该溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图4。
③氧化破坏试验
取本品12mg置10ml容量瓶中，加10％双氧水1ml，置沸水浴中加热0.5小时，取出，放冷，加流动相定容，取该溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图5。
④结论(见表7)  破坏条件   相邻杂质峰出峰时间(min)  主峰出峰时间(min)结论  酸破坏    9.6    13.9    12.2主峰与各杂质能较好分离，系统专属性良好  碱破坏    5.3    15.4    12.9  氧化破坏    10.9    14.9    12.4
7)右旋异构体检查方法的确定
取本品，加流动相制成每1ml中含左氧氟沙星1mg的溶液，作为供试品溶液；另取氧氟沙星对照品，用流动相制成每1ml中含0.02mg的溶液，作为预试溶液，照高效色谱法(中国药典2000年版二部附录VD)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇∶手性溶液(取L-苯丙氨酸0.33g，硫酸铜0.25g，加水1000ml溶解后，摇匀，即得)(13∶87)为流动相，检测波长为293nm，调节流速使左旋异构体保留时间在12分钟左右。取预试溶液10μl注入液相色谱仪(图6)，各组分出峰顺序依次为氧氟沙星的左旋异构体和右旋异构体，调节仪器灵敏度，使主峰高约为满量程的40-50％，理论塔板数按左氧氟沙星峰计算应不低于2500，左、右旋异构体之间的分离度应大于1.5。再取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍，供试品溶液的色谱图中右旋异构体峰面积不得大于总峰面积的0.5％。
8)三批样品的右旋异构体的测定
取本品三批，按上述方法测定，结果见表8及图7。
表8三批样品的右旋异构体检查结果批号  1#    2#    3#右旋异构体(％)  0.419(图7)    0.395    0.387
实施例5  稳定性试验
一、样品采源
1.供试品来源：由上海新亚药业有限公司提供
2.样品批号：010401、010402、010403
二、考察项目：
1.试验目地：对注射用乳酸左氧氟沙星进行影响因素试验(45001x强光照射下，60℃高温及RH 92.5％高湿下)，加速试验、长期试验考察，以确定其生产、包装、贮存条件及有效期。
2.考察项目及方法
(1)外观颜色观察判断实验前后样品外观颜色的变化。
(2)澄明度、溶液颜色、酸度、右旋异构体、有关物质、水分、含量(百分含量、标示含量)测定均参照申报资料中的测定方法进行考察试验。
三、实验方法
1.影响因素试验  取本品(批号：010402)，分别置于强光照射(45001x)、60℃高温及RH92.5％高湿(开口)条件下放置10天，于5、10天时分别取样测定，并于0天同批样品数据比较，实验结果见表9。
表9  注射用乳酸左氧氟沙星影响因素试验考察结果(批号：010402)  放置  条件  时间  (天)外观色泽    澄明度溶液颜色    酸度    右旋异    构体(％)  有关物  质(％) 水分 (％)  百分含  量(％)  标示量(％)类白色或淡黄色结晶性粉末    符合    规定A≤0.1    4.5-5.5    ≤0.5  ≤0.5 ≤6.0  ≥98.5  90.0-110.0  0类白色结晶性粉末    符合    规定0.055    5.22    0.395  0.029 4.22  100.8  96.76  光照  45001x  5类白色结晶性粉末    符合    规定0.055    5.22    0.413  0.100 4.20  100.5  96.44  10类白色结晶性粉末    符合    规定0.055    5.19    0.459  0.161 4.16  100.3  96.33  高温  60℃  5类白色结晶性粉末    符合    规定0.054    5.24    0.417  0.049 4.17  100.4  96.44  10类白色结晶性粉末    符合    规定0.055    5.21    0.444  0.058 4.14  100.1  96.22  高湿RH  92.5％  5淡黄色结晶性粉末    符合    规定0.055    5.20    0.390  0.092 6.33  101.0  97.59  10淡黄色结晶性粉末    符合    规定0.057    5.17    0.428  0.259 6.73  98.65  95.11
以上结果表明：各影响因素条件下的样品，在放置5、10天后，与0天结果比较，除高湿(RH 92.5％)条件下有关物质有所增加、水分超限、含量(10天)略有下降及光照(4500k)条件下有关物质有所增加外其他无明显变化。
2.加速试验  三批样品(批号：010401、010402、010403，模拟市售包装)，放置在干燥器上部，下部放相对湿度为75％的溶液，将干燥器移至恒温箱中，调节温度至40℃，放置6个月，于0、1、2、3、6个月分别取样测定，并与0个月同批样品数据比较，试验结果见表10。
表10  注射用左氧氟沙星加速试验考察结果  批号  时  间  (月)外观色泽澄明度溶液颜色酸度右旋异构体(％)  有关物  质(％)水分(％)百分含量(％)  标示量(％)类白色或淡黄色针状结晶性粉末符合规定≤YG-34.5-5.5≤0.5  ≤0.5≤6.0≥98.5  90.0-  110.0  010401    0类白色针状结晶性粉末符合规定＜YG-35.30  0.401  0.0154.20100.6  96.53    1类白色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.37    0.432    0.030  4.34  100.3    96.06    2类白色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.39    0.444    0.058  4.45  100.1    95.81    3淡黄色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.40    0.462    0.067  4.50  99.72    95.38    6淡黄色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.43    0.495    0.104  4.62  99.36    94.92  010402    0类白色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.22    0.395    0.029  4.22  100.8    96.76    1类白色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.30    0.428    0.036  4.35  100.5    96.36    2类白色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.33    0.414    0.063  4.47  100.1    95.88    3淡黄色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.35    0.466    0.073  4.52  99.77    95.49    6淡黄色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.38    0.503    0.107  4.63  99.43    95.06 010403    0类白色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.17    0.387    0.020  4.15  101.0    97.29    1类白色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.25    0.409    0.039  4.29  100.6    96.75    2类白色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.25    0.414    0.058  4.41  100.2    96.27    3淡黄色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.28    0.462    0.061  4.46  99.92    95.92    6淡黄色针状结晶性粉末符合规定  ＜YG-3    5.27    0.505    0.109  4.57  99.39    95.31
以上结果表明：加速试验6个月后，与0个月结果比较，除有关物质有所增加外，其他无明显变化，本品质量稳定。
3.长期试验考察三批样品(批号：010401、010402、010403，模拟市售包装)，于温度25℃，相对湿度RH 60％放置，分别于3，6，9，12，18，24等个月时定期取样测定，并与0个月同批样品数据比较，试验结果见表11。
表11  注射用左氧氟沙星加速试验考察结果  批号    时    间    (月)外观色泽澄明度溶液颜色 酸度   右旋异   构体(％)    有关物    质(％)  水分  (％)  百分含  量(％)  标示量(％)类白色或淡黄色结晶性粉末符合规定A≤0.1 4.5-5.5    ≤0.5    ≤0.5  ≤6.0  ≥98.5    90.0-    110.0  010401    0类白色结晶性粉末符合规定0.056 5.30    0.401    0.015  4.20  100.6    96.53    3类白色结晶性粉末符合规定0.056 5.35    0.451    0.023  4.32  100.3    96.13    6淡黄色结晶性粉末符合规定0.058 5.38    0.446    0.048  4.48  99.92    95.59    9淡黄色结晶性粉末符合规定0.057 5.38    0.462    0.085  4.54  99.56    95.19    12淡黄色结晶性粉末符合规定0.056 5.42    0.495    0.091  4.61  99.41    94.93  010102    0类白色结晶性粉末符合规定0.055 5.22    0.395    0.029  4.22  100.8    96.76    3类白色结晶性粉末符合规定0.056 5.28    0.416    0.109  4.33  100.5    96.41    6淡黄色结晶性粉末符合规定0.055 5.33    0.465    0.053  4.48  99.85    95.61    9淡黄色结晶性粉末符合规定0.057 5.34    0.487    0.090  4.56  99.61    95.30    12淡黄色结晶性粉末符合规定0.056 5.37    0.492    0.102  4.61  99.39    95.04 010403    0类白色结晶性粉末符合规定0.056 5.17    0.387    0.020  4.15  101.0    97.29    3类白色结晶性粉末符合规定0.056 5.24    0.444    0.021  4.28  100.6    96.79    6淡黄色结晶性粉末符合规定0.054 5.25    0.473    0.048  4.46  100.0    96.00    9淡黄色结晶性粉末符合规定0.058 5.27    0.466    0.080  4.51  99.74    95.70    12淡黄色结晶性粉末符合规定0.055 5.32    0.493    0.103  4.56  99.48    95.40
以上结果表明，长期留样12个月后，与0月数据比较，除有关物质有所增加外，其他无明显变化，本品质量稳定。
四、结论：
1.通过影响因素试验(除高湿(RH 92.5％)条件下有关物质有所增加、水分超限、含量(10天)略有下降及光照(45001x)条件下有关物质有所增加)、加速试验6个月(除有关物质有所增加)、长期试验12个月考察(除有关物质有所增加)，样品均无明显变化，说明样品质量稳定。
2.由加速试验6个月、长期试验12个月考察结果表明，模拟市售包装模制瓶(10ml模制瓶)对样品无影响。
实施例6  溶血试验
一、试验目的
通过供试品与血液直接接触，观察供试品是否引起体外溶血和凝聚。
二、试验材料
1.供试品：
品名：注射用乳酸左氧氟沙星
规格：0.19/瓶
批号：(1)02-01-01  (2)02-01-02  (3)02-01-03
生产单位：上海新亚药业有限公司
2.供试液配制
取1瓶(0.1g/瓶)加3.5ml灭菌注射用水，溶解后，加氯
化钠注射液稀释至50ml，混匀后供测试。
三、试验方法
1.2％兔血红细胞混悬液的制备
取家兔心脏血，置有玻璃珠的容器内，振摇数分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加生理盐水，摇匀，离心，倾去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水洗涤3-4次，至离心后上清液不显红色为止，然后按所得红细胞体积，用生理盐水稀释成2％混悬液。当天使用，用时摇匀。
2.试验步骤
取试管若干，分为供试品3组、阴性及阳性对照各一组，每组2管，按表12依次加样，摇匀后，迅速置恒温水浴内。保持37℃，观察4小时(10:30-14:30)。
表12组别                     供试品1  2  3  4  5  阴性对照  阳性对照2％红细胞混悬液(ml)2.5  2.5  2.5  2.5  2.5    2.5    2.5生理盐水(ml)2.0  2.1  2.2  2.3  2.4    2.5    -蒸馏水(ml)-  -  -  -  -    -    2.5                                      37℃水浴保温30分钟供试液(ml)0.2  0.4  0.3  0.2  0.1    -     -
四、结论：无溶血和凝聚现象。
实施例7  过敏试验
试验目的：观察动物重复注射受试物后所产生的过敏反应情况。
受试物：
品名：注射用乳酸左氧氟沙星；规格：0.1g/瓶；批号：02-01-03生产单位：上海新亚药业有限公司
溶液配制：
致敏液：取1瓶加25ml氯化钠注射液，溶解后，供测试。
供试液：取1瓶加25ml氯化钠注射液，溶解后，供测试。
对照物：
1.阴性对照物：
品名：氯化钠注射液；规格：250ml；批号：9711112
生产单位：上海长征制药厂
溶液配制：
致敏液：氯化钠注射液
供试液：氯化钠注射液
2.阳性对照物：
品名：牛血清白蛋白
规格：生化试剂
批号：011205
生产单位：丽珠东风生物技术有限公司
溶液配制：
致敏液：取牛血清白蛋白适量，用氯化钠注射液溶解并稀释制成每1ml含10mg的溶液
供试液：取牛血清白蛋白适量，用氯化钠注射液溶解并稀释制成每1ml含10mg的溶液
试验动物：
名称：豚鼠；性别：♂；体重：250-300℃
来源：松联实验动物养殖场；合格证号：SCXK(沪2002-0012)
试验方法：
取健康豚鼠18只，分为受试物3组，阴性、阳性对照物各1组、分别连续3次间日腹腔注射致敏液0.5ml/只，然后将豚鼠分为两部分，各3只，分别于第一次注射后14日及21日自静脉注射供试液1.0ml/只，观察注射后15分钟内动物的过敏反应情况，并继续观察24小时。
结果：
表13阴性对照组  标记    注射前体重(g)       首次注射后症状    第14天  21天体重(g)  头    298    310均未见过敏反应  背    298    317  尾    272    305  头背    254              305  头尾    250              298  白    256              317
表14阳性对照组  标记  注射前体重(g)    首次注射后症状第14天  21天体重(g)  头    250    283竖毛、呼吸困难、啰音  背    259    290竖毛、呼吸困难、抽搐  尾    251    287虚脱、瘫痪  头背    250           301啰音、抽搐  头尾    250    315啰音、抽搐、竖毛  白           254           398死亡
表15受试物组  标记  注射前体重(g)        首次注射后    症状  第14天    21天体重(g)  头    283    315均未见过敏反应  背    270    301  尾    270    290  头背    260              308  头尾    250              319  白    255              295
结论：本品经豚鼠过敏试验，未见过敏反应。
实施例8  血管刺激性试验
试验目的：
观察动物静脉注射一定量受试物后所产生的血管刺激反应情况。
受试药物：
品名：注射用乳酸左氧氟沙星；规格：0.1g/瓶
提供单位：上海新亚药业有限公司；批号：02-01-03
配制：取1瓶(0.1g/瓶)加20ml氯化钠注射液，溶解后，供测试。
对照物：
品名：氯化钠注射液；规格：250ml/瓶；
生产单位：上海长征制药厂；批号：9711112
试验动物：
名称：新西兰兔；性别：雌性；体重：2.0-2.5kg
来源：陈行兔场；许可证号：医动字第02-53-1号
试验方法：
取上述健康动物3只，左耳和右耳分别每日1次耳缘静脉注射受试物和对照物各5.0ml/kg，连续3次。于末次给药后24小时肉眼观察家兔耳缘静脉，然后处死动物，每耳由进针点起每隔1.5厘米取一段共3段耳缘静脉(取材宽度为0.5厘米)作病理切片观察，看有无组织变性或坏死等显著刺激反应，以第3段(近心端)的病理切片结果进行结果判定。
试验结果：(第3段)表16           组别           受试物(右侧耳)         对照物(左侧耳)           兔号    1    2    3    1    2    3  病理  检查    出血    (-)    (-)    (-)    (-)    (-)    (-)    炎细胞浸润    (-)    (-)    (-)    (-)    (-)    (-)    组织变性坏死    (-)    (-)    (-)    (-)    (-)    (-)
肉眼观察：家兔耳缘静脉注射受试物或对照物后均未见有充血、红肿现象。
结论：本品经家兔血管刺激性试验，未见有刺激性反应。