2α，23-二羟基乌苏酸用于制备抗炎药物的用途 技术领域 本发明涉及医药领域，公开了2α，23-二羟基乌苏酸的医药新用途，即用于制备抗炎药物的用途。
背景技术
2α，23-二羟基乌苏酸全称2α，3β，23-三羟基乌苏烷型-28-酸，俗称2α，23-二羟基乌苏酸，英文名为2α，3β，23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid(简称DHUA)，结构式如下，是一种存在于榄仁及Centella asiatica、Rhocloclenclron japonicum等植物中的有效成分。未见报道用于治疗疾病，更未见有抗炎作用的报道，也没有在临床上应用。
R1 R2
ursolic acid(UA)(乌苏酸) H CH3
2α，3β，23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid(DHUA)(2α，23-二羟基乌苏酸) OH CH2OH
【发明内容】
本课题组发现了2α，23-二羟基乌苏酸(DHUA)的医药新用途，特别是其可以用于制备抗炎药物的用途。
本课题组经过对DHUA进行的药理学研究中发现其具有极强的抗炎活性，可用于治疗各种炎症。
可用如下方法制备DHUA：将1.1kg干燥榄仁叶剪碎，加乙醇回流提取两次，每次1小时。蒸发浓缩后加水稀释，依次用石油醚、氯仿萃取得32.0克氯仿提取物(TCCE)。TCCE用石油醚-乙酸乙酯经硅胶柱(100-200目)进一步分离得到不同部分。其中一部分先后用石油醚-乙酸乙酯(1∶4-0∶100)和乙酸乙酯-乙醇(6∶4-1∶4)进行硅胶柱层析(200-300目)，所得组分(1∶4洗脱物)用乙酸乙酯重结晶得70mg 2α，23-二羟基乌苏酸(DHUA)。
用于临床治疗时可将DHUA与药学上可接受的载体混合制成不同的剂型。药学上可接受的载体是指一种或几种惰性的、非毒性的固体或液体填充物、稀释剂、助剂等，它们不逆向与活性化合物或病人发生作用。所说不同剂型可以是片剂、胶囊、丸剂、栓剂、软胶囊、口服液、混悬剂、注射液等药剂学上常用的剂型。
口服用药片和胶囊含有传统的赋形剂如填充物、稀释剂、润滑剂、分散剂以及粘合剂。可按照本领域中熟知的方法进行制备。
以上活性剂的剂量将因配方而异。一般地，临床上用于抗炎的用量每次为10-100mg·kg-1，根据不同病情及剂型也可超过该剂量范围。
【附图说明】
图1是2α，23-二羟基乌苏酸对TPA诱导的耳肿胀程度的影响(A：对照(TPA)，B：2α，23-二羟基乌苏酸，C：地塞米松**P＜0.01vs对照)
图2是2α，23-二羟基乌苏酸对髓过氧化物酶(MPO)活力的影响(A：对照(TPA)，B：2α，23-二羟基乌苏酸，C：地塞米松 **P＜0.01vs对照)
以下通过实施例对本发明作进一步描述。
【具体实施方式】
实施例1
DHUA对TPA诱导的小鼠急性耳肿胀的局部抗炎作用
将ICR小鼠随机分为空白组(丙酮)、TPA组、阳性对照组(吲哚美辛)和给药组。小鼠右耳两面各涂致炎液[含10％(g·mL-1)TPA(佛波酯)/丙酮]10μl，DHUA溶于等体积地丙酮中，并在TPA涂于鼠耳后立即涂抹相同部位。6h后颈椎脱臼处死动物，右耳相同部位用打孔机取耳组织(直径6mm)，右耳片分别精密称重，按下式计算肿胀抑制百分率：肿胀抑制百分率＝{1-[(耳片重量给药组-耳片重量丙酮组)/(耳片重量TPA组-耳片重量丙酮组)]}×100％。
表1榄仁叶提取物对TPA诱导的小鼠急性耳肿胀局部抗炎作用
组别 剂量 耳片重量a I.R.b
(mg/耳) (mg)
空白组(丙酮) - 7.7±0.6d -
对照组(TPA) - 20.5±2.0 -
DHUA 0.3 13.2±2.6d 54.4
吲哚美辛 0.3 12.9±2.7d 57.0
a平均值±S.D.，n＝6；b肿胀抑制百分率；dP＜0.01与对照组比较
结果表明，2α，23-二羟基乌苏酸具有很强的抗炎作用，其对抗急性炎症反应的效果与吲哚美辛相近。
实施例2
DHUA对TPA诱导的小鼠慢性耳部炎症的抗炎作用
将ICR小鼠随机分为TPA组、阳性对照组(地塞米松0.05mg/耳)和给药组[DHUA(0.3mg/耳)]。小鼠右耳两面各涂致炎液[含10％(g·mL-1)TPA(佛波酯)/丙酮]10μl，随后立即将药物涂于相同部位，每天两次，间隔6h，连续三天，第四天涂抹一次即可。6h后颈椎脱臼处死动物，右耳相同部位用打孔机取耳组织(直径6mm)，右耳片分别精密称重，按下式计算肿胀抑制百分率：肿胀抑制百分率＝{1-[(耳片重量给药组-耳片重量丙酮组)/(耳片重量TPA组-耳片重量丙酮组)]}×100％。结果见图1。
另取耳片样品置于HTAB中冻存，待测髓过氧化物酶。髓过氧化物酶(MPO)活力检测：耳片样品置于0.75ml含有0.5％HTAB的PBS(80mM磷酸钠缓冲液，pH5.4)，匀浆，转移至离心管内。加入少量HTAB，12,000×g离心，吸取上清夜(30μl)滴入96孔板内，加入含有0.017％过氧化氢的PBS，反应体系内加入含有18.4mM TMB·HCl的8％的二甲基甲酰胺溶液启动反应，37℃孵浴3min，冰浴，加入1.46M乙酸钠(pH3.0)终止反应。630nm处测定OD值。结果见图2。
图1和图2显示：DHUA能显著抑制小鼠耳肿胀。0.3mg/耳剂量下，DHUA的肿胀抑制率达94.8％。DHUA在嗜中性粒细胞渗透性方面呈现出强抑制作用，MPO酶活抑制率为90.9％。