澳洲茄胺硫酸盐及其制备方法和在医药上的应用 技术领域
本发明涉及澳洲茄胺硫酸盐及其制备方法和在医药上的应用。
背景技术
国内外已有龙葵、澳洲茄和黄果茄的化学成分，澳洲茄胺的检测方法和具有抗S180、抗炎、升高血糖等作用的报导，但尚未发现澳洲茄胺硫酸盐、澳洲茄胺硫酸盐的制备方法和澳洲茄胺硫酸盐在医药上的应用的相关信息。
发明内容
本发明提供一种抗癌、平喘、抗炎药效活性强，长效毒副作用小，溶解性强，性质稳定，生产方法简便，纯度高、药效活性强的澳洲茄胺硫酸盐及其制备方法，和将这一新的化合物做为一类抗癌、平喘、抗炎药物的新药源在医药上的应用，以取代疗效差、毒副作用大、生产方法复杂、产品质量差不能进入国际市场的现有医药，造福于人类。
本发明澳洲茄胺硫酸盐的制备原理是将无抗癌、平喘、抗炎活性化合物α-澳洲茄碱、β-澳洲茄碱、γ-澳洲茄碱、边缘茄碱的混合物水解，将与糖结合的生物碱——澳洲茄碱分子中具有抗癌、抗炎作用的3-羟基由结合状态变成游离状态，并以药效活性基团的形式存在于分子之中，使分子产生抗癌、抗炎活性，达到将无药效活性成分的混合物全部转化成药效活性单体澳洲茄胺地目的。但该单体的抗癌活性相对较弱，20μg/ml对HeLa细胞抑制率(离体实验)仅40％～42％；对人体肝癌SMMC7701细胞、肺癌MC1446细胞、白血病HL60细胞几乎无抑制作用，此外，也无平喘作用；本发明的突出特点在于用强极化分子药效活性基团，增强其分子药效活性，将分子中第六环上的仲氨基与硫酸成盐来强化其分子母体结构上的决定抗癌活性强弱的药效活性基团，使其分子保持并增强3-羟基的抗癌、抗炎的药效活性；澳洲茄胺转变成澳洲茄胺硫酸盐后其药效活性增强，20μg/ml对HeLa细胞抑制率(离体实验)达100％；澳洲茄胺成盐后，使之形成3-羟基和第六环上的仲氨盐基两个活性基团共存于同一分子中，由于两个活性基团相互作用，使其分子又产生新的药效活性，增强了对肝癌、肺癌、白血病的抗癌药效活性同时还增加了平喘作用：5～20μg/ml对人体肝癌SMMC7701干细胞、肺癌NCI446干细胞、胃癌SGC7901干细胞抑制率为100％；10～20μg/ml对白血病HL60干细胞抑制率＞75％；注射给药12～24mg/kg对小鼠移植性肿瘤抑制率54～72％；灌胃给药100～200mg/kg对小鼠移植性肿瘤抑制率40～68％；50～75mg/kg灌胃给药能明显对抗组织胺诱发的豚鼠哮喘P＜0.05。
其反应如下：
1、本发明的目的是提供一种澳洲茄胺硫酸盐
澳洲茄胺硫酸盐的分子结构：
分子式为：C27H45NSO6，分子量：511.6，
理化性质：澳洲茄胺硫酸盐为白色针状晶体，溶于水，难溶于乙醚、乙醇。
2、本发明的另一目的是提供澳洲茄胺硫酸盐的制备方法
本发明的澳洲茄胺硫酸盐是以茄科植物龙葵(Solanum Nigrum L)、澳洲茄(Solanum aviculare parst)和黄果茄(Solanum xanthocar pum Schrad，etwendl)的生果或其全草为原料，提取澳洲茄胺，再以澳洲茄胺为原料制备澳洲茄胺硫酸盐，其制备方法如下：
(1)原料处理及粗总生物碱的提取
将龙葵、澳洲茄或黄果茄的生果或其全草经筛选后，粉碎压汁固液分离得果汁、果渣，用2～6％的醋酸水溶液浸取果渣，固液重量比1∶1，浸取2～3次，固液分离得浸液，合并果汁及浸液，放置沉降，取上清液加热至沸除去上浮物，过滤冷却，将滤液放置沉降，取上清液加热至80～85℃时加浓氨水或NaOH、Na2CO3、KOH的水溶液至pH8～9，冷却沉降除上清液，对下浊液离心固液分离，得膏状粗总生物碱；
(2)粗总生物碱的精制
用2～6％醋酸水溶液溶解膏状粗总生物碱，固液重量比1∶10～30，加热至沸除去上浮物，过滤冷却沉降，取上清液加热至80～85℃时，加浓氨水或碱的水溶液至pH8～9，冷却沉降除上清液，对下浊液离心固液分离得膏状总生物碱，在80～100℃下恒温干燥、粉碎得龙葵、澳洲茄或黄果茄中的总生物碱，其主要成分为α、β、γ-澳洲茄碱、边缘茄碱四种生物碱的混合物；
(3)粗澳洲茄胺的提取
用含3～10％盐酸的80～95％乙醇溶液溶解总生物碱，固液重量比1∶30～40，水解加热回流2～3小时，冷却过滤，用95％乙醇、水，洗至中性，干燥得澳洲茄胺盐酸盐，用含3～10％NaOH的95％乙醇溶液溶解澳洲茄胺盐酸盐，加热回流1～2小时，热过滤，冷却吸滤洗至中性，干燥得粗澳洲茄胺；
(4)澳洲茄胺的精制
将粗澳洲茄胺溶于甲醇、乙醇或氯仿中至饱和溶液，用活化后的硅胶G与粗澳洲茄胺溶液混合，调成不流动的膏状物，在80～90℃下恒温干燥，冷却后装入层析柱内，振实，用氯仿、或氯仿∶甲醇体积比10∶1～2、或氯仿∶乙醇∶丙酮体积比3∶1∶2之一进行洗脱得洗脱液，检验洗脱结束后，对洗脱液常压或减压蒸馏浓缩，将浓缩液冷却结晶过滤干燥后，粉碎至0.1～1.0微米粉末得澳洲茄胺；
(5)用澳洲茄胺制备澳洲茄胺硫酸盐
将澳洲茄胺溶于95％乙醇中加热至沸，固液重量比1∶20-40，搅拌下向热澳洲茄胺乙醇溶液中缓缓加入10～50％的硫酸水溶液，至pH＝1，冷却结晶，吸滤用乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺硫酸盐。
制备方法(4)中检验是否洗脱结束用1～5％SbCl3的无水乙醇或氯仿溶液为显色剂，其判定是在滤纸上或硅胶G簿层层析板上检验。具体操作为：用毛细管取一定时刻刚流出的洗脱液，点于滤纸或硅胶G板上，烘干，将1～5％SbCl3溶液均匀喷于点样的滤纸或硅胶G板上，烘干，如出现红色斑点说明洗脱尚未结束，如无红色斑点说明洗脱完全，应停止洗脱。
用本发明制备方法得到的澳洲茄胺硫酸盐为白色针状晶体，澳洲茄胺硫酸盐纯度＞97％。本发明原料来源丰富廉价，制备方法采用醋酸作提取溶剂成本低，制备工艺及设备简便，生产周期短，产品纯度高、药效活性强。
3、本发明的又一目的是提供澳洲茄胺硫酸盐在抗癌、平喘、抗炎医药上的应用
经药效学实验和临床试验证明，澳洲茄胺硫酸盐具有如下作用：
(1)抗癌作用
药效学实验结果证明，澳洲茄胺硫酸盐8～30mg/kg腹腔注射给药对小鼠移植性实体型肿瘤抑制率为60～72％；灌胃给药对小鼠移植性实体型肿瘤抑制率为40～68％；澳洲茄胺硫酸盐5～20μg/ml，对人体肝癌SMMC7701干细胞、肺癌NCI446干细胞、胃癌SGC7901干细胞、HeLa干细胞抑制率均为100％；10～20μg/ml时，对人体白血病HL60干细胞抑制率为60～80％。抗癌机制实验证明，澳洲茄胺硫酸盐的抗癌作用机理是，能显著下调癌细胞C-myc基因和H-ras基因表达，抑制细胞增殖诱导细胞分化；能显著下调癌细胞hTRT基因的表达，抑制端粒酶活性，抑制癌细胞生长；能阻断其DNA从G1期向S期转化，抑制DNA合成从而起到抗癌作用。临床试验结果证明，注射给药澳洲茄胺硫酸盐浓度为1.0mg/ml，20～30ml/次；口服用药胶囊、片剂，剂量100mg/粒(片)，2粒(片)/日，对肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、白血病用药10日为一疗程，有60％的患者在1～2个疗程内得到明显疗效，配合手术用药效果更佳。
(2)平喘作用
药效学实验结果证明，澳洲茄胺硫酸盐腹腔注射10～30mg/kg，灌胃给药50～100mg/kg能明显对抗组织胺诱发的豚鼠哮喘P＜0.05，能显著对抗卵清蛋白引起的豚鼠支气管痉挛P＜0.01；1×10-6mol/ml能显著扩张豚鼠支气管平滑肌P＜0.01。临床试验结果证明，澳洲茄胺硫酸盐注射给药1.0mg/ml，30～50ml/次，2次/日；口服用药胶囊或片剂，剂量100mg/粒(片)，2粒(片)/次，2次/日，有85～98％的重患在20～40分钟内哮喘症状消失或明显减轻，肺活量增大，哮鸣音消失，呼吸趋于正常，7日/疗程，用药1～2个疗程生活可自理，此外，对血压、心脏也有所改善。
(3)抗炎作用
药效学实验结果证明，澳洲茄胺硫酸盐注射给药10～30mg/kg，灌胃给药60～200mg/kg能显著对抗角叉菜胶引起的小鼠足肿胀P＜0.01；能显著对抗大鼠棉球肉芽肿P＜0.001。临床试验结果证明，澳洲茄胺硫酸盐注射给药1.0mg/ml，30～50ml/次，2次/日；口服用药胶囊或片剂，剂量100mg/粒(片)，2次/日，2粒(片)/次，对肺炎、肺结核、乳腺炎、扁桃体炎、咽炎、气管炎用药3日内白细胞明显减少，炎症明显消失，有85～98％的患者用药1～3个疗程各项检测指标趋向正常。
澳洲茄胺硫酸盐是一种具有显著抗癌、平喘、抗炎作用的中药一类新药源，其用途主要做为治疗以下疾病的医药制造：
1、抗癌药物的制造
(1)治疗肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、白血病等针剂的制造。
(2)治疗肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、白血病等口服制剂的制造。
2、平喘药物的制造
(1)治疗免疫性哮喘针剂的制造。
(2)治疗免疫性哮喘口服制剂的制造。
3、抗炎药物的制造
(1)治疗肺炎、肺结核、气管炎、扁桃体炎、乳腺炎、咽炎等针剂的制造。
(2)治疗肺炎、肺结核、气管炎、扁桃体炎、乳腺炎、咽炎等口服制剂的制造。
附图说明
图1是本发明澳洲茄胺硫酸盐的制备工艺流程图。
图2是本发明实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的紫外吸收光谱图。
图3是本发明实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的DSC图。
图4是本发明实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的红外光谱图。
图5是本发明实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的质子核磁共振谱图。
图6是本发明实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的重水交换质子核磁共振谱图。
图7是本发明实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的二维1H-1H质子相关核磁共振谱图。
图8是本发明实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的反转门控去偶13C核磁共振谱图。
图9是本发明实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的13C DEPT核磁共振谱图。
图10是本发明实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的二维13C-1H异核相关核磁共振谱图。
图11是本发明实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的LCQ正、负离子电喷雾质谱图。
图12是本发明实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的X-射线衍射图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例、试验例对本发明作进一步描述，但本发明并不限于实施例，本专业的普通技术人员作某些修改，均在本发明保护范围内。
实施例1 以龙葵为原料制备澳洲茄胺硫酸盐
参照图1，以龙葵生果制备澳洲茄胺硫酸盐的制备方法如下：
(1)称取500kg10月中旬至10月下旬采收的龙葵生果去除杂物，用磨浆机粉碎固液分离得果汁、果渣，将龙葵果渣用3％醋酸水溶液浸取2次，固液重量比1∶1，固液分离得浸液，合并果汁及浸液，放置沉降，取上清液加热至沸，除去上浮绿色胶体物，过滤冷却，将滤液放置沉降，取上清液加热至80℃时加浓氨水至pH8，冷却沉降除去上清液，对下浊液经离心固液分离得膏状龙葵粗总生物碱。
(2)用3％的醋酸水溶液溶解膏状龙葵粗总生物碱，固液重量比1∶30，加热至沸除去上浮绿色胶体物，过滤冷却沉降，取上清液加热至80℃时，加浓氨水至pH8，冷却沉降，使之沉淀完全除上清液，对下浊液沉淀物离心固液分离得膏状龙葵总生物碱，在80～100℃下恒温干燥、粉碎得龙葵总生物碱。
(3)将龙葵总生物碱溶于含5％盐酸的95％乙醇溶液中，固液重量比1∶40，加热至全溶吸滤，滤液水浴加热至沸，水解2小时，冷却吸滤，水洗至中性，用80％乙醇洗涤3次后干燥得澳洲茄胺盐酸盐，将澳洲茄胺盐酸盐加热溶于含3％NaOH的95％乙醇溶液中，加热至沸回流1小时，热过滤，冷却结晶，吸滤，水洗至中性，干燥得粗澳洲茄胺片状结晶。
(4)将粗澳洲茄胺用95％乙醇溶解至饱和溶液，向溶液中加入经活化的硅胶G，时时搅拌至不流动膏状物止，经80～90℃恒温干燥冷却后，振动下装于不锈钢层析柱中，振实，用氯仿、甲醇10∶2混液洗脱，流速1ml/秒，用SbCl3无水乙醇溶液为显色剂，用滤纸上斑点显色反应判断洗脱是否结束，当无红色斑点反应时，停止洗脱，对洗脱液常压蒸馏浓缩至有少许结晶析出，放出浓缩液冷却结晶吸滤，滤液再蒸馏浓缩冷却结晶吸滤，反复操作，合并结晶干燥粉碎至0.1～1.0微米的粉末，得澳洲茄胺。
(5)将上述澳洲茄胺溶于95％乙醇，固液重量比1∶30，加热至沸搅拌下缓缓加50％硫酸至结晶沉淀完全，使溶液至pH＝1，充分冷却吸滤，用乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺硫酸盐216g，经高效液相色谱法测定纯度为98.9％。
实施例2 以黄果茄为原料制备澳洲茄胺硫酸盐
取500kg黄果茄生果，按实施例1(1)-(4)制备方法得澳洲茄胺，称取澳洲茄胺182g，用95％乙醇将其全部溶解固液重量比1∶30，加热至沸搅拌下缓缓加入36％硫酸水溶液至酸性，放置充分冷却，使结晶析出吸滤，用95％乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺硫酸盐254g，经高效液相色谱法测定纯度为97.4％。
实施例3 以澳洲茄为原料制备澳洲茄胺硫酸盐
取500kg澳洲茄生果，按实施例1(1)-(4)制备方法得澳洲茄胺，称取澳洲茄胺100g，用3000ml95％乙醇加热溶解至沸，趁热搅拌下缓缓加入40％硫酸水溶液，放置冷却过夜吸滤，用95％乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺硫酸盐103g，经高效液相色谱法测定纯度为98.1％。
试验例1：用薄层层析法检验实施例所得澳洲茄胺硫酸盐为同一种单体化合物
具体操作如下：将5％澳洲茄胺硫酸盐样品溶液用毛细管分别点于硅胶GF254板原点上，干燥后可用三种展开剂将澳洲茄胺硫酸根的盐展开：苯∶甲醇(4∶3)；苯∶甲醇∶丙酮(2∶1∶2)；氯仿∶乙醇∶丙酮(3∶1∶2)，在紫外光下λ＝254nm均出现一个斑点，证明样品都是同一种化合物。
试验例2：用高效液相色谱法测定实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的纯度
精确称取一定量澳洲茄胺硫酸盐标准样(含量已标定的样品)和本发明所得被测样，用40倍重量体积比的3％NaOH95％乙醇溶液混合，加热回流2小时，冷却加2倍体积的水，用2倍总体积的氯仿萃取3次，合并萃取液，用苯定量稀释至刻度，得澳洲茄胺硫酸盐的标准溶液和相应被测样溶液，在wBondapaK18(30CM×3.9mmi.d.)用甲醇-0.01Mtris缓冲溶液(75∶25)柱流动相，流速2ml/min，温度25℃，在UV205检测，在15min处有最大吸收，测得澳洲茄胺硫酸盐纯度＞97％。
试验3：澳洲茄胺硫酸盐的化学结构测试分析
经中国科学院长春分院分析测试中心应化所测试部测试，实施例所得澳洲茄胺硫酸盐的紫外吸收光谱图、DSC图、红外光谱图、质子核磁共振谱图、重水交换质子核磁共振谱图、二维1H-1H质子相关核磁共振谱图、反转门控去偶13C核磁共振谱图、13C DEPT核磁共振谱图、二维13C-1H异核相关核磁共振谱图、LCQ正负离子电喷雾质谱图、X-射线衍射图，分别见图2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12。试验结果经谱图解析、全结构归属证明实施例所得为澳洲茄胺硫酸盐。谱图解析、全结构归属“分析测试报告”见说明书后附件。
实施例4 胶囊剂的制造
分别精确称取纯度＞97％的澳洲茄胺硫酸盐43.0g，淀粉粒110.0g于溶器中分别混均，得1000粒一个处方量的澳洲茄胺硫酸盐胶囊内含物，将2#蓝白胶囊放于每次可进行400粒的胶囊板上，称取60.0g胶囊内含物，装于固定在胶囊板上的胶囊中，封囊。按上述处方配料生产3个处方量，其合格率在99.25～99.62％，得澳洲茄胺硫酸盐胶囊3000粒，铝塑封板，装盒，得300盒胶囊剂。
实施例5 冻干粉针剂的制造
将澳洲茄胺硫酸盐在无菌下经微粒处理至0.1～1.0微米的微粒，精确称取24.5g，加无菌注射蒸馏水溶解至24500ml为1000瓶的处方量(含工业损耗量)，将其分装于1000个注射安瓶内，每瓶24ml，经冻干处理，封瓶，装盒，得冻干粉注射剂100盒(每盒10支)。
实施例6 粉针剂的制造
将澳洲茄胺硫酸盐在无菌下经微粒处理至0.1～1.0微米，精确称取24.5g为1000瓶1个处方量(含工业损耗量)，将其以每瓶24mg装于1000个注射安瓶内，无菌封瓶，装盒，得澳洲茄胺硫酸盐粉针剂100盒，10瓶/盒，合格率≥99.84％。
附件：
中国科学院长春分院分析检测中心应化所测试部
分析测试报告
一、分子式、分子量、化学结构式
数据1(一)、对照品澳洲茄胺
分子式：C27H43NO2
分子量：413.64
结构式：
(二)被测样澳洲茄胺硫酸盐的碱基化学结构式
二、紫外吸收光谱
数据2 仪器：美国Cary 1E紫外-可见分光光度计
溶剂：甲醇
条件：试液浓度分别为11μg/ml、12μg/ml，扫描宽度190-600nm
1.紫外吸收光谱
a.对照品紫外吸收光谱
b.检测样品紫外吸收光谱
2.对照品测定数据：
λmax＝203nm，吸收系数为：E1cm1%=412]]>
3.检测样品测定数据：
λmax＝204nm，吸收系数为：E1cm1%=418]]>
4.解析：UV中存在K带吸收，表明化合物中含有双键结构。
三、DSC实验
数据3 仪器型号：PE公司DSC 7型
测试条件：50～300℃，以5℃/min升温
1.对照品
a.DSC图
b.熔点：199.5℃
2.检测样品
a.DSC图
b.未观察到明显的熔点
四、红外吸收光谱(IR)
数据4 仪器型号：美国BIO-RAD公司FTS-135型付立叶变换红外光谱仪
测试条件：采用KBr压片法
1.红外光谱图
a.对照品红外光谱图
b.检测样品红外光谱图
2.检测样品红外光谱测试数据表：
频率(cm-1) 强度 振动类型 基团归属
3380，3302 vs，br νOH -OH
2943 vs νasCH3 -CH3
2931 s，sh νasCH2 -CH2
2872 s νsCH3 -CH3
2846 s νsCH2 -CH2
2759 s νNH2+ ＞NH2+
1656 m νC＝C C＝C
1606，1594 m-ms δNH2+ ＞NH2+
1464
1453 sh，s，ms δasCH3，δCH2 -CH3，-CH2-
1432
1378 ms δsCH3 -CH3
1351 m δOH -OH
1297，1181
1154，1252 m ωCH2 -CH2-
1195 m νC-N C-N
1132，1095 νasC-O-C C-O-C，C3-OH
1064，1054 ms νOPC-O(H)
1022，983 s 环振动吸收 六元环，五元环
961，921，900 m ρCH3，νsC-O-C -CH3，-C-O-C
836 m νipC-O(H) C3-OH
800 vw ΓNH2+ ＞NH2+
795 w γ＝CH ＞C＝CH-
739 vw ΓCH2 -CH2CH2-
619 m γOH -OH
注：强度： vs：极强， s：强， m：中等， w：弱
3.解析结果：
a.3380和3302cm-1的极强宽吸收来源于氢键结合的羟基伸缩振动，1351cm-1为其弯曲振动吸收带，以619cm-1开始的宽吸收区是OH面外弯曲振动，1132～1054cm-1和836cm-1分别为C3-OH上的C-O异相和同相伸缩振动，这些均证明甾环上C3-OH的存在。
b.2943和2872cm-1分别为CH3的反对称和对称伸缩振动，2931和2846cm-1分别为CH2的反对称和对称伸缩振动，而1464、1453和1432cm-1则是CH3的反对称变角振动和CH2剪式振动，1378cm-1为CH3的对称变角振动，同时1297～1252cm-1区间的吸收峰可归属为CH2的非平面摇摆振动，961～900cm-1范围重叠着CH3的面内摇摆振动，这些都证实了-CH3，-CH2-的存在，而且由于739和783cm-1的极弱CH2平面摇摆振动的出现进一步说明-CH2-CH2-和孤立CH2的存在。
c.2759cm-1的强峰是NH2+的伸缩振动特征峰，1606和1594cm-1为其变角振动，再加上1195cm-1的C-N伸缩振动和800cm-1的极弱NH2+非平面变角振动的存在，表明样品分子中存在＞NH2+。
d.1651cm-1的中等强度吸收带是C＝C伸缩振动，795cm-1的弱峰是双键上CH非平面变角振动，可以表示分子中有＞C＝CH-的存在。
e.在1132～1054cm-1和961～900cm-1两个区间内还分别存在C-O-C的反对称和对称伸缩振动，1022和983cm-1的强吸收带可能与五元环和六元环的环振动吸收有关。
f.红外光谱证实检测样品碱基与对照品结构一致。
五、1H核磁共振(1H NMR)
数据5 仪器：Unity-400核磁共振谱仪
溶剂：对照品：氘代氯仿(CDCl3)，参考标准δTMS＝0.00
检测样品：氘代甲醇(CD3OD)，参考标准δTMS＝0.00
(一)、一维1H核磁共振实验
1.1H核磁共振实验
a.对照品1H核磁共振谱及谱图
b.检测样品1H核磁共振谱及谱图
c.检测样品重水交换1H核磁共振谱图
2.检测样品1H核磁共振测定数据列表
峰序号化学位移(δ)多重性 偶合常数 质子数 相应质子
1 5.35 d 5.2 1 ＝CH-
2 4.88 br 3 NH，-OH，HCl
3 4.62 dm 6.0 1 ＞CH-
4 3.39 m 1 ＞CH-
5 3.30 m CH3OD
6 3.05 dd 12.4，2.9 1 ＞CH-
7 2.87 t 12.4 1 ＞CH-
8 2.36 m 1 ＞CH-
9 2.30～1.19 m 21 ＞CH-，-CH2-
10 1.17 d 7.2 3 -CH3
11 1.15～1.05 m 2 -CH2-
12 1.04 s 3 -CH3
13 0.98 d 6.8 3 -CH3
14 0.86 s 3 -CH3
(二)、二维1H-1H相关核磁共振实验(1H-1H COSY)
1. 检测样品二维1H-1H相关NMR谱图
2. 检测样品二维1H-1H相关NMR实验数据列表
序号 化学位移(δ) 相关峰位移(δ) 交叉峰强度
1 5.35 2.00 m
2 4.62 2.10，1.92 m，ms
3 3.39 2.20，1.46 ms，w
4 3.05 2.87 s
5 2.87 3.05 s
6 2.36 1.17 s
7 2.20 3.39，1.14 ms，s
8 2.08 1.40 s
9 1.94 1.52 s
10 1.80 1.45，1.22，1.08 s
(三)、质子NMR谱解析
1.由一维质子NMR谱峰相对积分面积计算，检测样品共有44个质子组成，与澳洲茄胺盐 化学分子式中质子数相符。
2.低场δ5.35为一个质子贡献，与高场δ2.00处存在交叉信息，δ5.35化学位移峰归属于烯碳质子贡献，与其相关峰δ2.00归属于H18。
3.δ4.62裂分为多重峰，且与δ2.10和δ1.92相偶合，又落在氧碳质子区，对应于1个质子贡献，因此，该质子碳邻接电负性较强的氧原子，又受邻位质子偶合，归属于H8质子贡献。
4.高场δ0.86和δ1.04为强单峰，且分别对应于3个质子贡献，分别归属于H29和H27甲基质子贡献。
5.高场δ1.17和δ0.98裂分为两条谱线，且J值在7Hz左右，分别对应于3个质子，归属于H26、H28甲基质子贡献。
6.δ4.88强峰在重水交换谱中减弱、加宽、位移，归属为化合物中活泼质子贡献。
7.1H-1H COSY谱中δ2.87和δ3.05存在强相关信息，而δ2.87裂分为三重峰，J＝12.4Hz，δ3.05则为dd裂分，两峰分别对应于1个质子，且两峰都落在中场区，分析质子碳接于N原子，两峰归属于潜手性碳两同碳质子贡献。
8.检测样品受 成盐效应的影响，除部分峰位置有移动外，其他峰型与对照品基本一致。
六、13C核磁共振谱(13C NMR)
数据6 仪器：Unity-400核磁共振谱仪
溶剂：对照品：氘代氯仿(CDCl3)，参考标准δCDCl3＝77.00
检测样品：氘代甲醇(CD3OD)，参考标准δCD3OD＝49.30
(一)、一维13C核磁共振实验
1.13C核磁共振实验
a.对照品13C NNE(反转门控去偶，以下同)核磁共振谱
b.对照品13C DEPT核磁共振谱
c.检测样品13C NNE核磁共振谱
d.检测样品13C DEPT核磁共振谱
2.检测样品13C NMR测定数据列表
峰序 化学位移(δ) 多重性 C数目 相应C类型
1 142.66 s 1 ＞C＝
2 122.33 d 1 -CH＝
3 100.54 s 1 ＞C＜
4 85.11 d 1 ＞CH-
5 72.63 d 1 ＞CH-
6 63.29 d 1 ＞CH-
7 57.94 d 1 ＞CH-
8 51.79 d 1 ＞CH-
9 46.96 t 1 -CH2-
10 43.28 t 1 -CH2-
11 43.14 d 1 ＞CH-
12 42.43 s 1 ＞C＜
13 40.64 t 1 -CH2-
14 38.78 t 1 -CH2-
15 38.09 s 1 ＞C＜
16 33.52 t 1 -CH2-
17 33.40 t 1 -CH2-
18 33.32 t 1 -CH2-
19 33.09 d 1 ＞CH-
20 32.56 t 1 -CH2-
21 29.68 d 1 ＞CH-
22 29.19 t 1 -CH2-
23 22.19 t 1 -CH2-
24 20.15 q 1 -CH3
25 18.95 q 1 -CH3
26 16.84 q 1 -CH3
27 15.18 q 1 -CH3
(二)、二维13C-1H相关核磁共振实验(13C-1H HETCOR)
1. 检测样品二维13C-1H相关NMR谱图
2. 检测样品二维13C-1H相关NMR实验数据
序号 13C化学位移(δ) 相关1H化学位移(δ) 相关峰强度
1 122.33 5.35 s
2 85.11 4.62 s
3 72.63 3.39 s
4 63.29 1.91 s
5 57.94 1.20 s
6 51.79 0.99 s
7 46.96 2.87，3.05 w
8 43.28 2.21 s
9 43.14 2.36 s
10 40.64 1.80，1.21 w
11 38.78 1.84 w
12 33.52 1.87 ms
13 33.40 2.00 s
14 33.32 1.70 s
15 33.09 1.80 w
16 32.56 1.78 w
17 29.68 1.87 s
18 29.19 1.75 w
19 22.19 1.58 w
20 20.15 1.04 s
21 18.95 0.98 s
22 16.84 0.86 s
23 15.18 1.17 s
(三)、13C核磁共振谱解析
1.一维13C NMR谱明晰27条谱线，无重叠现象，DEPT谱呈现23条质子碳峰，甲基碳(CH3)4个，仲碳原子(-CH2-)10个，伯碳(CH)9个，与澳洲茄胺盐酸盐化学结构式中C原子个数和类型一致。
2.低场烯碳区只有两条谱线，δ142.66为一季碳，δ122.33为质子烯碳贡献，因此化合物中含有-CH＝C＜结构。
3.最高场四条谱线，同为甲基碳贡献，与质子NMR谱分析一致，该化合物中含有4个甲基。
4.较低场δ100.54为季碳，由取代基效应可知，该季碳邻接两个以上电负性较强的氮、氧原子，因此归属于C2碳贡献。
5.δ42.43和δ38.09同为季碳，由化合物特性可知，这两个季碳都为环节点碳，其节点碳质子分别被-CH3取代，由于双键对β位碳去屏蔽效应，δ38.09应归属于C21，δ42.43归属于C10碳贡献。
6.δ72.63位移峰落在氧碳区，13C-1H异核二维相关谱中该峰与质子δ3.39存在强偶合信息，由此可知，该碳邻接氧原子，归属于C24碳贡献。
7.δ63.29、δ57.94、δ51.79落在氧碳区，但13C-1H二维相关谱中上述三峰分别与较高场质子δ1.91、δ1.20及δ0.99相关，且三个峰同为d裂分，因此上述三个峰应为环节点碳贡献。
8.δ85.11落在氧碳区较低场，且多重性为d，相关质子峰为δ4.62，该峰应归属于邻接氧原子的环节点碳，即C8碳贡献。
七、全结构归属
数据7 1. 澳洲茄胺盐 碱基部分骨架原子标号化学结构式
2. 化学结构-NMR谱全归属
序号 13C化学位移(δ) 1H相关化学位移(δ) 结构标号
1 142.66 20
2 122.33 5.35 19
3 100.54 2
4 85.11 4.62 8
5 72.63 3.39 24
6 63.29 1.91 9
7 57.94 1.20 11
8 51.79 0.99 13
9 46.96 2.87，3.05 4
10 43.28 2.21 25
11 43.14 2.36 16
12 42.43 10
13 40.64 1.80，1.21 22
14 38.78 1.84 15
15 38.09 21
16 33.52 1.87 17
17 33.40 2.00 18
18 33.32 1.70 7
19 33.09 1.80 12
20 32.56 1.78 23
21 29.68 1.87 5
22 29.19 1.75 6
23 22.19 1.58 14
24 20.15 1.04 27
25 18.95 0.98 28
26 16.84 0.86 29
27 15.18 1.17 26
八、质谱
数据8 仪器：LCQ电喷雾质谱仪
条件：LCQ电喷雾离子源，喷雾电压2kV，雾化气为氮气N2，金属毛细管温度
200℃，甲醇溶解，流动注入泵进样，进样速度5μl。
1.LCQ质谱图
a.对照品的LCQ电喷雾质谱图
b.检测样品的LCQ电喷雾质谱图
2.检测样品质谱测定数据(EI-MS数据)：
m/z 相对丰度(％)
414 100.0
396 16.5
271 12.3
253 11.4
3.裂解途径：
4.解析：
a.图中样品与对照品的准分子离子峰相同，且其碎裂规律相一致。其中样品的正离子电喷雾质谱中的m/z414峰为样品失去HCl的准分子离子峰，与对照品的准分子离子峰相同。
b.m/z396峰为准分子离子峰的脱水峰，m/z271峰为m/z396峰离子失去得到的碎片峰，m/z253离子为m/z271离子进一步脱去一分子水的碎片峰。
九、X-射线衍射实验
数据9 仪器型号：D/max-IIB-型X-射线衍射仪
测试条件：CuKα辐射源，工作电压40kV，工作电流20mA。
1.X-射线衍射图
a.对照品X-射线衍射图
b.检测样品X-射线衍射图
2.2θ数据列表
a.对照品数据表
b.检测样品数据表
十、综合解析：
数据10 1.由澳洲茄胺盐 化学分子式计算不饱和度为7。
2.澳洲茄胺盐 样品与对照品的准分子离子峰相同，且其碎裂规律相一致。其
中样品的正离子电喷雾质谱中的m/z414峰为样品失去HCl的准分子离子峰，
与对照品的准分子离子峰相同。证明化合物中碱基部分的分子量为414。
3.一维1H NMR谱峰相对面积可得，检测样品共有44个质子组成，与澳洲茄胺盐
化学分子式中质子数相符。13C NMR定量实验和13C DEPT NMR实验结果
表示，该化合物共有27个碳原子，吸收共振峰相互无重叠形象，其中-CH3碳
峰4条，CH2碳峰10条，叔碳峰9条，季碳峰4条，证明该化合物由27个碳
组成，与澳洲茄胺盐 中碳原子个数一致。
4.IR谱中2943和2872cm-1分别为CH3的反对称和对称伸缩振动，2931和2846cm-1
分别为CH2的反对称和对称伸缩振动，而1464、1453和1432cm-1则是CH3的
反对称变角振动和CH2剪式振动，1378cm-1为CH3的对称变角振动，同时
1297～1252cm-1区间的吸收峰可归属为CH2的非平面摇摆振动，961～900cm-1范
围重叠着CH3的面内摇摆振动，这些都证实了-CH3，-CH2-的存在，而且由于
739和783cm-1的极弱CH2平面摇摆振动的出现进一步说明-CH2-CH2-和孤立
CH2的存在。
5.IR谱中3380和3302cm-1的极强宽吸收来源于氢键结合的羟基伸缩振动，
1351cm-1为其弯曲振动吸收带，以619cm-1开始的宽吸收区是OH而外弯曲振
动，1132～1054cm-1和836cm-1分别为C3-OH上的C-O异相和同相伸缩振动，这
些均证明甾环上C3-OH的存在。
6.质子NMR谱中δ4.88强峰在重水交换谱中减弱、加宽、位移。证明该峰为＞NH、
-OH以及HCl等活泼质子贡献。
7.质子NMR谱中δ4.61裂分为多重峰，且与δ2.10和δ1.92相偶合，又落在氧碳质
子区，对应于1个质子贡献，因此，该质子碳邻接电负性较强的氧原子，又受
邻位质子偶合，归属于OCH质子贡献。
8.13C NMR实验表明本品中只含有两条双键碳峰，UV谱λmax为204nm，构成单
烯结构。
9.13C NMR谱δ42.43和δ38.09同为季碳，由化合物特性可知，这两个季碳都为环
节点碳，其节点碳质子分别被-CH3取代，由于双键对β位碳去屏蔽效应，δ38.09
应归属于C21，δ42.43归属于C10碳贡献。
10.13C NMR谱最高场四条谱线，同为甲基碳贡献，与质子NMR谱分析一致，该
化合物中含有4个甲基。较低场δ100.54为季碳，由取代基效应可知，该季碳邻
接两个以上电负性较强的氮、氧原子，因此归属于＞C-O碳贡献。
11.IR谱中2759cm-1的强峰是NH2+的伸缩振动特征峰，1606和1594cm-1为其变
角振动，再加上1195cm-1的C-N伸缩振动和800cm-1的极弱NH2+非平面变角振
动的存在，表明样品分子中存在NH2+。
12.综合各谱分析，检测样品为对照品的盐 化合物。检测样品化学结构式为：