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1、10申请公布号CN104306428A43申请公布日20150128CN104306428A21申请号201410481903622申请日20140919A61K36/42420060171申请人宁波中药制药有限公司地址315806浙江省宁波市北仑区元宝山路525号72发明人董玲燕赵丽娟杨盛鑫何敏菲方明74专利代理机构宁波诚源专利事务所有限公司33102代理人袁忠卫54发明名称一种从绞股蓝中提取纯化绞股蓝皂苷的方法57摘要本发明涉及到一种从绞股蓝中提取纯化绞股蓝皂苷的方法，将绞股蓝药材粉粹、过筛，乙醇提取，提取液过滤浓缩至无醇；将浓缩液稀释通过大孔树脂吸附，用水洗脱至澄清后，再用乙醇溶液洗脱，。
2、将洗脱液浓缩至无醇；再将浓缩液用有机溶剂萃取后，浓缩干燥，与此同时回收有机溶剂。本发明中工艺简单、技术合理、经济适用，通过吸附与液液萃取相结合技术获得高纯度的产品，是一种适应中小型企业生产，降低生产设备要求，减少生产成本的生产工艺。51INTCL权利要求书1页说明书4页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页10申请公布号CN104306428ACN104306428A1/1页21一种从绞股蓝中提取纯化绞股蓝皂苷的方法，其特征在于包括如下步骤1将绞股蓝原料粉碎成粗粉，将绞股蓝粉和提取溶剂按重量比为136的比例混合，搅拌均匀后回流提取进行真空浓缩；2将步骤1的浓缩。
3、液稀释，稀释至原料与稀释后溶液的重量比为112，通过大孔树脂柱吸附至饱和后先用水洗脱，除杂，至水洗液澄清，再采用以体积浓度为6580的乙醇洗至洗脱液无色后，收集洗脱液减压回收乙醇并浓缩；3将步骤2所得的浓缩液稀释，稀释至原料与稀释后溶液的重量比为123，再加入与原料重量比为112的有机溶剂进行绞股蓝皂苷的萃取，反复萃取，萃取液合并浓缩，回收有机溶剂后真空干燥，得绞股蓝皂苷。2根据权利要求1所述的从绞股蓝中提取纯化绞股蓝皂苷的方法，其特征在于所述步骤1的提取溶剂为体积百分比浓度为6575的乙醇。3根据权利要求1所述的从绞股蓝中提取纯化绞股蓝皂苷的方法，其特征在于所述步骤1中绞股蓝粉和提取溶剂搅拌。
4、均匀后在温度8085下回流提取3次，每次12小时，并在真空压力为0070095MPA的条件下，将滤液浓缩至无醇。4根据权利要求1所述的从绞股蓝中提取纯化绞股蓝皂苷的方法，其特征在于所述步骤2的具体步骤为将浓缩液稀释，用大孔树脂吸附饱和，上柱流速为12BV/H，将吸附至饱和的树脂先用水洗脱，洗脱速度为12BV/H，除杂，至水洗液澄清，再采用乙醇溶液洗脱，洗脱速度为12BV/H，收集一定体积洗脱液，将洗脱液于5570下进行减压浓缩，减压浓缩过程中抽真空压力为0070095MPA，将洗脱液浓缩至无醇。5根据权利要求1所述的从绞股蓝中提取纯化绞股蓝皂苷的方法，其特征在于所述步骤2中浓缩液稀释至原料与稀。
5、释后的溶液体积重量比为112。6根据权利要求1所述的从绞股蓝中提取纯化绞股蓝皂苷的方法，其特征在于所述步骤2中大孔树脂型号为D101、D130、AB8中的任意一种。7根据权利要求1所述的从绞股蓝中提取绞股蓝皂苷的方法，其特征在于所述步骤3中的有机溶剂为正丁醇、乙酸乙酯或正丁醇、乙酸乙酯的组合溶液。8根据权利要求1所述的从绞股蓝中提取绞股蓝皂苷的方法，其特征在于所述正丁醇、乙酸乙酯的组合溶液的体积配比为1051。9根据权利要求18任意一项权利要求所述的从绞股蓝中提取绞股蓝皂苷的方法，其特征在于所述绞股蓝原料粉碎成1020目筛。10根据权利要求9所述的从绞股蓝中提取绞股蓝皂苷的方法，其特征在于所述。
6、绞股蓝原料为绞股蓝根茎。权利要求书CN104306428A1/4页3一种从绞股蓝中提取纯化绞股蓝皂苷的方法技术领域0001本发明涉及到天然化合物的提纯、分离及纯化，具体指一种从绞股蓝根茎原料中提取纯化绞股蓝皂苷的方法。背景技术0002绞股蓝GYNOSTEMMAPENTAPHYLLUM又名七叶胆、五叶参、七叶参等，是葫芦科绞股蓝属多年生草质藤本植物。分布于印度、斯里兰卡、尼泊尔、缅甸、中南半岛、马来西亚、菲律宾、朝鲜和日本等地区，在我国分布于西南地区，其中以云南分布最广、资源最丰富、种类最多，多数分布于海拔10002000M。绞股蓝多为苦含甘，咀嚼清爽，全草可入药，药理研究证明，绞股蓝无毒副作用。
7、，经临床试验证明，其对传染性肝炎、肾盂肾炎、慢性支气管炎、胃肠炎等有一定的疗效，并具有显著降血脂、降血糖、平衡血压、抗癌、抗疲劳、抗缺氧、抗热、抗衰老、促进细胞新陈代谢、强壮补益、提高免疫功能、镇痛、催眠的作用。0003绞股蓝含有皂苷、黄酮、多糖、维生素、菇类、有机酸、生物碱、蛋白质等有效成分。绞股蓝皂苷是绞股蓝的主要有效成分之一，目前已分离出绞股蓝皂苷有84种，毒理研究表明绞股蓝皂苷无毒性，同时还有美容、减肥、增进食欲等保健功能，可做成保健茶、饮料、食品附加剂等系列滋补健康品。0004绞股蓝皂苷的常规提取方法有浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、索氏提取法，以及近年来研究和开发的超声提取法、。
8、微波提取、酶辅助提取、超临界流体萃取等新技术。目前在皂苷的规模化生产中采用的基本上是常规提取工艺，该方法操作简单，设备要求低。关于绞股蓝总苷提取分离方法的研究和改进，目前报道的有两类即“通法”提取，用适当浓度的乙醇或甲醇提取药材，乙醚或石油醚脱脂后，再以水饱和正丁醇或乙酸乙酯进行液液萃取，得到绞股蓝总苷；另一方法为“大孔吸附树脂法”，即将药材水提液过滤，滤液通过大孔吸附树脂柱，再依次用不同浓度的有机试剂洗脱，制得绞股蓝总苷。但是目前根据报道提取绞股蓝皂苷相对采用的方法比较单一，绞股蓝皂苷的得率低，纯度低，没有形成一系列完整的提取分离方法，来应用到工业化生产中。0005为解决上述绞股蓝皂苷提取的。
9、技术问题，目前绞股蓝总苷的提取方法有水提法、有机溶剂提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法、酶法提取等方法，具体的专利申请可参见申请号为2013104709366和2012101252551的专利申请，但上述这些方法绞股蓝总苷的提取收率都不高，而且绞股蓝中有效成分的提取生产成本偏高，提取工艺技术都待进一步改善。另外，如一申请号为2010101050118的中国发明专利申请一种绞股蓝总皂苷的提取方法，利用碱液煮沸提取及树脂层析法从绞股蓝中提取高纯度的绞股蓝皂苷，解决了绞股蓝所含皂苷极性大、色素不易分离的问题，但通过在弱碱性介质中加热浸提，再利用树脂树和活性炭脱色，工艺复杂，生产成本高，因此需要。
10、对绞股蓝皂苷的提取和纯化工艺作进一步的改进。发明内容说明书CN104306428A2/4页40006本发明所要解决的一个技术问题是针对现有技术的现状提供一种工艺流程短、皂苷得率高、纯度高的从绞股蓝中提取纯化绞股蓝皂苷的方法。0007本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为该从绞股蓝中提取纯化绞股蓝皂苷的方法，其特征在于包括如下步骤00081将绞股蓝原料粉碎成粗粉，将绞股蓝粉和提取溶剂按重量比为136的比例混合，搅拌均匀后回流提取进行真空浓缩；00092将步骤1的浓缩液稀释，稀释至原料与稀释后溶液的重量比为112，通过大孔树脂柱吸附至饱和后先用水洗脱，除杂，至水洗液澄清，再采用以体积浓度为658。
11、0的乙醇洗至洗脱液无色后，收集洗脱液减压回收乙醇并浓缩；00103将步骤2所得的浓缩液稀释，稀释至原料与稀释后溶液的重量比为123，再加入与原料重量比为112的有机溶剂进行绞股蓝皂苷的萃取，反复萃取，萃取液合并浓缩，回收有机溶剂后真空干燥，得绞股蓝皂苷。0011进一步地，所述步骤1的提取溶剂为体积百分比浓度为6575的乙醇。0012进一步地，所述步骤1中绞股蓝粉和提取溶剂搅拌均匀后在温度8085下回流提取3次，每次12小时，并在真空压力为0070095MPA的条件下，将滤液浓缩至无醇。0013进一步地，所述步骤2的具体步骤为将浓缩液稀释，用大孔树脂吸附饱和，上柱流速为12BV/H，将吸附至饱和。
12、的树脂先用水洗脱，洗脱速度为12BV/H，除杂，至水洗液澄清，再采用乙醇溶液洗脱，洗脱速度为12BV/H，收集一定体积洗脱液，将洗脱液于5570下进行减压浓缩，减压浓缩过程中抽真空压力为0070095MPA，将洗脱液浓缩至无醇。0014进一步地，所述步骤2中浓缩液稀释至原料与稀释后的溶液体积重量比为112。0015进一步地，所述步骤2中大孔树脂型号为D101、D130、AB8中的任意一种。0016进一步地，所述步骤3中的有机溶剂为正丁醇、乙酸乙酯或正丁醇、乙酸乙酯的组合溶液。0017进一步地，所述正丁醇、乙酸乙酯的组合溶液的体积配比为1051。0018进一步地，所述绞股蓝粉碎成1020目筛。0。
13、019作为优选，所述绞股蓝原料为绞股蓝根茎0020与现有技术相比，本发明的优点在于只采用了一次树脂纯化和一次萃取，即达到纯化效果，其损失小且过柱的收率能达到85以上，同时还具有如下有益效果00211、增大了绞股蓝总苷的收率，使提取物的收率提高30以上；00222、减少了制备绞股蓝总苷的提取时间和提取次数，能使提取时间控制在1小时，提取次数控制在2次，从而极大地缩短了生产周期；00233、减少提取绞股蓝总苷的溶剂用量，降低生产成本；00244、本发明的制备方法有利于大规模产业化生产。具体实施方式0025以下通过实施例对本发明作进一步说明。说明书CN104306428A3/4页50026实施例10。
14、0271提取0028将绞股蓝根茎粉碎成粗粉，过10目筛，取100KG粗粉至于提取罐中，将绞股蓝粉和浓度为65的乙醇按重量比为14的比例混合，搅拌均匀后在80温度下回流提取3次，每次15小时，将提取液过滤除去料渣后合并，合并后的滤液于55下进行减压浓缩，减压浓缩过程中抽真空压力为007MPA，将滤液浓缩至无醇。00292树脂纯化0030将步骤1的浓缩液稀释，将浓缩液稀释至绞股蓝根茎与稀释后溶液的重量比为11后，用型号为D101的大孔树脂吸附饱和，上柱流速为1BV/H，将吸附至饱和的树脂先用水洗脱，除杂，至水洗液澄清，洗脱速度为2BV/H，再采用浓度为65的乙醇溶液洗脱，洗脱速度为1BV/H，收集。
15、体积为3倍柱体积的洗脱液，最后将洗脱液于55下进行减压浓缩，减压浓缩过程中抽真空压力为007MPA，将洗脱液浓缩至无醇，其过柱的收率能达到85。00313液液萃取0032将步骤2所得的浓缩液稀释至绞股蓝根茎与稀释后溶液的重量比为12后，再加入与绞股蓝根茎重量比为11的正丁醇进行绞股蓝皂苷的萃取，反复萃取3次，萃取液合并浓缩，回收正丁醇后真空干燥，得到高纯度绞股蓝皂苷545KG，绞股蓝皂苷质量百分比为981。0033实施例200341提取0035将绞股蓝根茎粉碎成粗粉，过15目筛，取200KG粗粉至于提取罐中，将绞股蓝粉和浓度为75的乙醇按重量比为13的比例混合，搅拌均匀后在85温度下回流提取3。
16、次，每次2小时，将提取液过滤除去料渣后合并，合并后的滤液于60下进行减压浓缩，减压浓缩过程中抽真空压力为0095MPA，将滤液浓缩至无醇。00362树脂纯化0037将步骤1的浓缩液稀释，将浓缩液稀释至绞股蓝根茎与稀释后溶液的重量比为12后，用型号为D130的大孔树脂吸附饱和，上柱流速为2BV/H，将吸附至饱和的树脂先用水洗脱，除杂，至水洗液澄清，洗脱速度为1BV/H，再采用浓度为80的乙醇溶液洗脱，洗脱速度为2BV/H，收集体积为4倍柱体积的洗脱液，最后将洗脱液于70下进行减压浓缩，减压浓缩过程中抽真空压力为009MPA，将洗脱液浓缩至无醇，其过柱的收率能达到90。00383液液萃取0039将。
17、步骤2所得的浓缩液稀释至绞股蓝根茎与稀释后溶液的重量比为13后，再加入与绞股蓝根茎重量比为12的乙酸乙酯进行绞股蓝皂苷的萃取，反复萃取3次，萃取液合并浓缩，回收正丁醇后真空干燥，得到高纯度绞股蓝皂苷531KG，绞股蓝皂苷质量百分比为987。0040实施例300411提取0042将绞股蓝根茎粉碎成粗粉，过20目筛，取300KG粗粉至于提取罐中，将绞股蓝粉和浓度为65的乙醇按重量比为16的比例混合，搅拌均匀后在82温度下回流提取3次，每次18小时，将提取液过滤除去料渣后合并，合并后的滤液于70下进行减压浓缩，减压说明书CN104306428A4/4页6浓缩过程中抽真空压力为008MPA，将滤液浓缩。
18、至无醇。00432树脂纯化0044将步骤1的浓缩液稀释，将浓缩液稀释至绞股蓝根茎与稀释后溶液的重量比为12后，用型号为AB8的大孔树脂吸附饱和，上柱流速为2BV/H，将吸附至饱和的树脂先用水洗脱，除杂，至水洗液澄清，洗脱速度为1BV/H，再采用浓度为70的乙醇溶液洗脱，洗脱速度为2BV/H，收集体积为5倍柱体积的洗脱液，最后将洗脱液于65下进行减压浓缩，减压浓缩过程中抽真空压力为008MPA，将洗脱液浓缩至无醇，其过柱的收率能达到95。00453液液萃取0046将步骤2所得的浓缩液稀释至绞股蓝根茎与稀释后溶液的重量比为12后，再加入与绞股蓝根茎重量比为11的正丁醇与乙酸乙酯的组合液进行绞股蓝皂苷的萃取，其中正丁醇与乙酸乙酯的体积配比为11，经反复萃取3次，萃取液合并浓缩，回收正丁醇与乙酸乙酯的组合液后真空干燥，得到高纯度绞股蓝皂苷547KG，绞股蓝皂苷质量百分比983。说明书CN104306428A。