《闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物、制备方法及其用途.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物、制备方法及其用途.pdf（11页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、10申请公布号CN104130307A43申请公布日20141105CN104130307A21申请号201410375051222申请日20140731C07J63/00200601A61K31/58200601A61P31/16200601A61P31/22200601A61P31/1420060171申请人南京大学地址210093江苏省南京市栖霞区仙林大学城仙林大道163号72发明人黄蓉吴俊艺吴俊华74专利代理机构江苏银创律师事务所32242代理人何震花54发明名称闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物、制备方法及其用途57摘要本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及闭。
2、花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物、制备方法及其在制备抗病毒药物上的用途。本发明合成了一个新的闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物，并公开了其制备方法。药理学实验表明，本发明的闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物具有抗病毒的作用，具有开发抗病毒药物的价值。51INTCL权利要求书2页说明书8页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书8页10申请公布号CN104130307ACN104130307A1/2页21一种具有式III所示结构的闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物及其药学上可接受的盐2如权。
3、利要求1所述的闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物的制备方法，其特征为1闭花木酮CLEISTANONEI与1,2二溴乙烷反应得到闭花木酮CLEISTANONE的O溴乙基衍生物II；2闭花木酮CLEISTANONE的O溴乙基衍生物II与吡咯烷发生取代反应制得闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III，。3如权利要求2所述的闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物的制备方法，其特征为权利要求书CN104130307A2/2页31将440MG化合物闭花木酮CLEISTANONEI溶于10ML苯，向溶液中加入004G的四丁基溴化铵，3760G的1,2二。
4、溴乙烷和6ML的50氢氧化钠溶液；混合物在25摄氏度搅拌24H；24H之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取两次，合并有机相溶液；然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤3次，再用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩去除溶剂得到产物粗品；产物粗品用硅胶柱层析纯化，流动相为石油醚/丙酮1001，V/V，收集黄色集中洗脱带即得到闭花木酮CLEISTANONE的O溴乙基衍生物II的黄色固体。2将273MG的闭花木酮CLEISTANONE的O溴乙基衍生物溶于20ML乙腈当中，向其中加入345MG的无水碳酸钾，84MG的碘化钾和1420MG的吡咯烷，混合物加热回流8H；反应结束后将反应液倒入冰水中，用等量二。
5、氯甲烷萃取三次，合并有机相；依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品；产物粗品用硅胶柱层析纯化，流动相为石油醚/丙酮1001，V/V，收集淡黄色集中洗脱带即得到闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III的淡黄色胶状固体。4如权利要求1所述的闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III及其药学上可接受的盐在抗病毒药物中的应用。5如权利要求4所述的闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III及其药学上可接受的盐在抗病毒药物中的应用，其特征在于所述病毒为甲型流感病毒。6如权利要求4所述的闭花木酮CLE。
6、ISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III及其药学上可接受的盐在抗病毒药物中的应用，其特征在于所述病毒为单纯疱疹病毒。7如权利要求4所述的闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III及其药学上可接受的盐在抗病毒药物中的应用，其特征在于所述病毒为呼吸道合胞病毒。8如权利要求6所述的闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III及其药学上可接受的盐在制备抗病毒药物中的应用，其特征在于所述单纯疱疹病毒为单纯疱疹病毒1型或者单纯疱症病毒2型。9如权利要求8所述的闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III及其药学上可接受的盐在制备抗病毒药物中的应用，其。
7、特征在于所述单纯疱疹病毒1型为单纯疱疹病毒1型的SM44株。10如权利要求8所述的一种具有式III所示结构的闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物及其药学上可接受的盐在抗病毒药物中的应用，其特征在于所述单纯疱疹病毒2型为单纯疱症病毒2型333株。权利要求书CN104130307A1/8页4闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物、制备方法及其用途技术领域0001本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物、制备方法及其用途。背景技术0002单纯疱疹病毒1型HERPESSIMPLEXVIRUS，HSV1和单纯疱疹病。
8、毒2型HERPESSIMPLEXVIRUS，HSV2属于疱疹科病毒，HSV1和HSV2不仅引起口唇或生殖粘膜疱疹，同时也是引起脑炎、肝炎、全身严重感染甚至宫内感染的重要病原。0003呼吸道合胞病毒RESPIRATORYSYNCYTIALVIRUS，RSV主要引起呼吸系统感染，在婴幼儿、老年以及免疫缺陷人群引起严重肺炎，是人类上呼吸道感染的重要病原之一。0004甲型流感病毒INFLUENZAAVIRUS，FLUA属于正粘科病毒，在人类和其他生物每年都有小范围的流行，引起上呼吸系统感染。大流行时，可引起严重呼吸系统感染，甚者引起肺炎、脑炎甚至死亡。0005上述三种病毒的治疗目前已有的药物存在毒性大。
9、、安全性低的问题，从天然产物中寻找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的潜在药物最有重要价值。0006本发明涉及的化合物闭花木酮CLEISTANONE是一个2011年发表VANTRINHTHITHANHETAL,2011CLEISTANONEATRITERPENOIDFROMCLEISTANTHUSINDOCHINENSISWITHANEWCARBONSKELETONVOLUME2011,ISSUE22,PAGES41084111,AUGUST2011的化合物，我们对化合物闭花木酮CLEISTANONE进行了结构修饰，获得了一个新的闭花木酮CLEISTANONE的O四。
10、氢吡咯基乙基衍生物，并对其抗病毒活性进行了评价，其具有抗病毒活性。发明内容0007本发明公开了一个闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物，其结构为0008说明书CN104130307A2/8页50009本发明闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III可通过下面方法制备00101闭花木酮CLEISTANONEI与1,2二溴乙烷反应得到闭花木酮CLEISTANONE的O溴乙基衍生物II；00112闭花木酮CLEISTANONE的O溴乙基衍生物II与吡咯烷发生取代反应制得闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III。00120013进一步的闭花木酮C。
11、LEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III的制备方法为00141将440MG化合物闭花木酮CLEISTANONEI溶于10ML苯，向溶液中加入004G说明书CN104130307A3/8页6的四丁基溴化铵，3760G的1,2二溴乙烷和6ML的50氢氧化钠溶液；混合物在25摄氏度搅拌24H；24H之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取两次，合并有机相溶液；然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤3次，再用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩去除溶剂得到产物粗品；产物粗品用硅胶柱层析纯化，流动相为石油醚/丙酮1001，V/V，收集黄色集中洗脱带即得到闭花木酮CLEISTANONE的O溴乙基衍生。
12、物II的黄色固体。00152将273MG的闭花木酮CLEISTANONE的O溴乙基衍生物溶于20ML乙腈当中，向其中加入345MG的无水碳酸钾，84MG的碘化钾和1420MG的吡咯烷，混合物加热回流8H；反应结束后将反应液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有机相；依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品；产物粗品用硅胶柱层析纯化，流动相为石油醚/丙酮1001，V/V，收集淡黄色集中洗脱带即得到闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III的淡黄色胶状固体。0016本发明公开的化合物可以制成药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。
13、。0017药效学实验表明，本发明的闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III具有较好的抗病毒作用。本发明的药学上可接受的盐与其化合物具有同样的药效。0018闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物的体外实验表明，化学物III具有很强的抗HSV1、HSV2、RSV和FLUA的活性，因此本发明的化学物III有望被用于制备新型抗病毒药物。0019以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。具体实施方式0020实施例1化合物闭花木酮CLEISTANONE的制备0021化合物闭花木酮CLEISTANONEI。
14、的制备方法参照VANTRINHTHITHANH等人发表的文献VANTRINHTHITHANHETAL,2011CLEISTANONEATRITERPENOIDFROMCLEISTANTHUSINDOCHINENSISWITHANEWCARBONSKELETONVOLUME2011,ISSUE22,PAGES41084111,AUGUST2011的方法。00220023实施例2闭花木酮CLEISTANONE的O溴乙基衍生物II的合成0024将化合物I440MG，100MMOL溶于10ML苯，向溶液中加入四丁基溴化铵TBAB004G，1,2二溴乙烷3760G，2000MMOL和6ML的50氢氧化钠。
15、溶液。混合物在25摄氏度搅拌24H。24H之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取两次，合并有机相溶液。说明书CN104130307A4/8页7然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤3次，再用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化流动相为石油醚/丙酮1001，V/V，收集黄色集中洗脱带即得到化合物II的黄色固体344MG，63。00251HNMR500MHZ,DMSOD6504S,1H,482S,1H,394D,J265HZ,1H,387D,J265HZ,2H,357S,2H,240D,J140HZ,1H,239D,J140HZ,1H,227S,1H,2。
16、21S,1H,215S,1H,182S,1H,162S,2H,157D,J33HZ,1H,154D,J33HZ,1H,150D,J12HZ,1H,147D,J12HZ,1H,139D,J153HZ,2H,134D,J153HZ,1H,126DD,J326,137HZ,4H,113D,J180HZ,2H,105S,6H,098S,1H,088S,12H,078S,3H,074S,1H。002613CNMR125MHZ,DMSOD621659S,15450S,10523S,7463S,6985S,5971S,5255S,5121S,4792S,4410S,4225S,4173S,4064S,401。
17、6S,3888S,3865S,3721S,3623S,3334D,J11HZ,3296S,2991S,2718S,2603S,2423S,2396S,2077S,1848S,1798S,1693S。0027HRMSESIM/ZMHCALCDFORC32H52BRO25473151；FOUND547315900280029实施例3闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III的合成0030将化合物II273MG，05MMOL溶于20ML乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾345MG，25MMOL，碘化钾84MG，05MMOL和吡咯烷1420MG，20MMOL，混合物加热回流8H。反应结束。
18、后将反应液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有机相。依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化流动相为石油醚/丙酮1001，V/V，收集淡黄色集中洗脱带即得到闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物III的淡黄色胶状固体1853MG,69。00311HNMR500MHZ,DMSOD6508S,1H,489S,1H,443S,1H,359S,2H,262S,2H,258S,4H,249S,1H,244S,1H,235S,1H,225S,1H,222S,1H,188S,1H,185163M,6H,1611。
19、52M,4H,144D,J137HZ,3H,132DD,J194,117HZ,4H,121D,J11HZ,2H,111S,6H,095S,1H,093S,12H,086078M,4H003213CNMR125MHZ,DMSOD621653S,15442S,10513S,7459S,6674说明书CN104130307A5/8页8S,5964S,5567S,5413S,5247S,5014S,4783S,4504S,4322S,4170S,4056S,4009S,3979S,3860S,3716S,3621S,3427S,3287S,2883S,2713S,2513S,2483S,2419S,2。
20、395S,2070S,1839S,1792S,1487S0033HRMSESIM/ZMHCALCDFORC36H60NO25384624；FOUND5384628。00340035实施例4闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物抗病毒活性0036一实验例闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物对疱疹病毒的作用研究00371细胞株与病毒株0038人胚肾细胞HEK293，为HSV1、HSV2病毒敏感细胞购自美国CLONTECH公司；单纯疱疹病毒1型HSV1SM44株、单纯疱症病毒2型HSV2333株引自中国CDC病毒病研究所。00392细胞毒性测定0040参照文献汪受传。
21、，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；2412527的方法，将各样品以2倍比做系列稀释205，然后按稀释顺序横向接种于96板孔中的HEK293上，每孔100UL，每稀释度纵向重复3孔A、B、C行，平行设微孔板D的16孔为细胞对照，712孔不接种细胞为空白对照，显微镜下每日观察CPE，连续观察7D，中性红染色，在540NM波长测定OD值，将实验组与细胞对照组OD值相比计算细胞存活率，用REEDMUENCH方法计算药物半数细胞中毒浓度TD50。00414抑毒试验0042参照文献汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研究，南京。
22、中医药大学学报，2008；2412527的方法，将样品按稀释顺序2314横向接种于96板孔中的单层细胞上，每孔100UL，每稀释度纵向重复4孔，微孔板的A、B、C行加含100个TCID50的病毒100UL作为试验组，D行补充等容量细胞维持液为不同浓度药物对照，平行设F行作为病毒对照，E行的112作为细胞对照。37、5CO2培养，每日观察CPE，连续观察4D。病毒对照出现90以上CPE时，加1中性红染色，用酶标仪在波长说明书CN104130307A6/8页9540NM波长读取A值，各组A值去除病毒对照组A值，将各试验组与细胞对照组A值相比，获得细胞存活率，用REEDMUENCH方法计算半数抑毒浓。
23、度IC50，最终将TD50和IC50相比获得抑毒指数TI。00435结果0044样品TD50的测定对照组细胞显微镜下观察贴壁生长致密、形态良好。闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物的TD50在HEK293为2317。0045抑毒实验对照组细胞贴壁致密、形态良好。镜下观察发现，HSV1、HSV2病毒对照组分别在第3D、3D出现90以上的CPE，HSV1和HSV2在HEK293CPE则以肿胀、多细胞融合HSV1致多个细胞融和成大泡，而HSV2致融合为小泡、变圆、脱落为主要特征。0046将上述实验板用1中性红染色、用酶标仪测450NMA值，各组A值减掉病毒对照组A值后，各实验组A值。
24、与细胞对照组A值相比获得IC50，IC50与TD50相比获得闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物的TI抑制HSV1、HSV2在HEK293细胞发生CPE，IC50分别为21247、21029，TI分别为6303、1391。0047结论闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物具有显著的抗疱疹科病毒包括HSV1、HEV2的作用，而且安全性高，因此闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物在治疗疱疹病毒感染疾病中具有广泛的应用背景。0048二实验例闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物对呼吸道合胞病毒RSV的作用研究00491闭花木酮CLE。
25、ISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物的配置将闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物溶于细胞维持液含2新生牛血清的MEM，GIBICO公司产品中备用。00502细胞株与病毒株0051人胚肾细胞HEK293，RSV病毒敏感细胞购自美国CLONTECH公司；呼吸道合胞病毒RSVLONG株引自中国CDC病毒病研究所。00523细胞毒性测定0053参照文献汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；2412527的方法，将样品以2倍比做系列稀释205，然后按稀释顺序横向接种于96板孔中的HEK293上，每孔100UL，每稀。
26、释度纵向重复3孔A、B、C行，平行设微孔板D的16孔为细胞对照，712孔不接种细胞为空白对照，显微镜下每日观察CPE，连续观察7D，中性红染色，在540NM波长测定OD值，将实验组与细胞对照组OD值相比计算细胞存活率，用REEDMUENCH方法计算药物半数细胞中毒浓度TD50。00544抑毒试验0055参照文献汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；2412527的方法，将样品按稀释顺序2213横向接种于96板孔中的单层细胞上，每孔100UL，每稀释度纵向重复4孔，微孔板的A、B、C行加含100个TCID50的病毒100UL作为。
27、试验组，D行补充等容量细胞维持液为不同浓度药物对照，平行设F行作为病毒对照，E行的112作为细胞对照。37、5CO2培养，每日观察CPE，连续观察4D。病毒对照出现90以上CPE时，加1中性红染色，用酶标说明书CN104130307A7/8页10仪在波长540NM波长读取A值，各组A值去除病毒对照组A值，将各试验组与细胞对照组A值相比，获得细胞存活率，用REEDMUENCH方法计算半数抑毒浓度IC50，最终将TD50和IC50相比获得抑毒指数TI。00565结果0057样品TD50的测定对照组细胞显微镜下观察贴壁生长致密、形态良好。闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物对HEK。
28、293的TD50为2353。0058抑毒实验对照组细胞贴壁致密、形态良好。镜下观察发现，RSV病毒对照组在第2D出现90以上的CPE，RSV在HEK293CPE以折光性增强、变圆、脱落、破碎为主要特征。0059而抑毒试验各组细胞，按照样品稀释梯度，梯度规律出现CPE0060将上述实验板用1中性红染色、用酶标仪测450NMA值，各组A值减掉病毒对照组A值后，各实验组A值与细胞对照组A值相比获得IC50，IC50与TD50相比获得TI抑制RSV在HEK293细胞发生CPE，IC50为21286，TI为6436。0061结论闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物具有显著的抗副粘科病毒。
29、呼吸道合胞病毒RSV的作用，可以用来制备抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV药物。0062三实验例闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物对甲型流感病毒的作用研究00631细胞株与病毒株狗肾细胞MDCK，流感病毒敏感细胞引自中国CDC病毒病研究所；流感病毒甲型FLUA1995AII32094地方株引自中国CDC病毒病研究所。00642细胞毒性测定0065参照文献汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；2412527的方法，将各样品以2倍比做系列稀释215，然后按稀释顺序横向接种于96板孔中的MDCK上，每孔100UL，每稀释度纵。
30、向重复3孔A、B、C行，平行设微孔板D的16孔为细胞对照，712孔不接种细胞为空白对照，显微镜下每日观察CPE，连续观察7D，中性红染色，在540NM波长测定OD值，将实验组与细胞对照组OD值相比计算细胞存活率，用REEDMUENCH方法计算药物半数细胞中毒浓度TD50。00663抑毒试验0067参照文献汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；2412527的方法，将样品按稀释顺序横向接种于96板孔中的单层细胞上，每孔100UL，每稀释度纵向重复4孔，微孔板的A、B、C行加含100个TCID50的病毒100UL作为试验组，D行补充等容量细。
31、胞维持液为不同浓度药物对照，平行设F行作为病毒对照，E行的112作为细胞对照。37、5CO2培养，每日观察CPE，连续观察4D。病毒对照出现90以上CPE时，加1中性红染色，用酶标仪在波长540NM波长读取A值，各组A值去除病毒对照组A值，将各试验组与细胞对照组A值相比，获得细胞存活率，用REEDMUENCH方法计算半数抑毒浓度IC50，最终将TD50和IC50相比获得抑毒指数TI。00684结果0069样品TD50的测定对照组细胞显微镜下观察贴壁生长致密、形态良好。闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物的TD50在MDCK为2476。0070抑毒实验对照组细胞贴壁致密、形态良。
32、好。镜下观察发现，FLUA在MDCKCPE说明书CN104130307A108/8页11以折光性增强、坏死、破碎为主要特征。0071而抑毒试验各组细胞，按照样品稀释梯度，梯度规律出现CPE，将上述实验板用1中性红染色、用酶标仪测450NM的A值，各组A值减掉病毒对照组A值后，各实验组A值与细胞对照组A值相比获得IC50，IC50与TD50相比获得TI抑制FLUA在MDCK细胞发生CPE，IC50为21157，TI为1122。0072结论闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物对甲型流感病毒具有很强的抑制作用，而且安全，因此闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物在治。
33、疗甲型流感病毒感染疾病中具有广泛的应用背景。0073实施例5本发明所涉及闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物片剂的制备0074取20克闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物或者其药学上可接受的盐当中的一种，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。0075实施例6本发明所涉及闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物胶囊的制备0076取20克闭花木酮CLEISTANONE的O四氢吡咯基乙基衍生物或者其药学上可接受的盐当中的一种，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000粒。说明书CN104130307A11。