一种从白芷中分离纯化异欧前胡素和欧前胡素的方法.pdf

本发明提供了一种从白芷提取物中分离纯化异欧前胡素和欧前胡素的方法。白芷药材粉碎，加入石油醚，回热回流将提取，液过滤、减压浓缩得白芷浸膏；将白芷浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为C18色谱柱，流动相为超临界流体，改进剂为甲醇。本发明不使用对环境有危害的有机溶剂，生产过程绿色环保，所得产品无有害物质残留；二氧化碳回收利用容易，能耗低，生产成本低。

1.  一种从白芷提取物中分离纯化异欧前胡素和欧前胡素的方法，其特征是，步骤为：
步骤1：白芷药材粉碎，加入石油醚，回热回流将提取液过滤、减压浓缩得白芷浸膏；
步骤2：将白芷浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为C18色谱柱，流动相为超临界流体，改进剂为甲醇，分离过程由紫外检测器检测，根据检测信号收集目标组分馏分。

2.  根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤1中石油醚与药材的比例是3：1～10：1，最优为6：1。

3.  根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤1提取的次数为3次，每次回流时间为0.5-5小时，最优为2小时。

4.  根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤2中过滤所用滤膜为0.45μm滤膜。

5.  根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤2中超临界流体为超临界二氧化碳。

6.  根据权利要求5所述的方法，其特征是，超临界二氧化碳的压力为10~15MPa，最优为12MPa。

7.  根据权利要求5所述的方法，其特征是，超临界二氧化碳的流速为1-10倍柱体积/分钟，最优为4倍柱体积/分钟。

8.  根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤2中色谱柱温度为35~50°C，最优为35°C。

9.  根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤2中改进剂甲醇的比例为0%~10%，最优为1.15%。

一种从白芷中分离纯化异欧前胡素和欧前胡素的方法
技术领域
本发明属于化工与制药领域，具体是涉及一种从白芷提取物中分离纯化异欧前胡素和欧前胡素的方法。
背景技术
白芷为常用中药，具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的作用，临床上广泛用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带和疮疡肿痛等症。香豆素为白芷中的主要活性成分，其中含量较高的有欧前胡素和异欧前胡素，这二种物质也是白芷及其制剂质量控制的主要指标。
白芷中香豆素类成分的传统分离纯化方法，多采用乙醚、石油醚等溶剂提取，硅胶柱层析法纯化，该法步骤繁杂、有机溶剂消耗量大、产品中溶剂残留多。近年来，又有采用高速逆流色谱分离纯化白芷中的香豆素类成分，虽然其适用范围广、不需要固态载体、对样品的前处理要求低，但其溶剂系统选择难度大，也存在有机溶剂消耗量大、产品中溶剂残留多等缺点，难以实现绿色清洁生产。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简便、分离量大、综合成本低、绿色环保的从白芷中快速纯化制备异欧前胡素和欧前胡素的方法，通过一步分离纯化即可从白芷提取物中得到高纯度异欧前胡素和欧前胡素单体化合物。
本发明的方案如下：
一种从白芷提取物中分离纯化异欧前胡素和欧前胡素的方法，步骤为：
步骤1：白芷药材粉碎，加入石油醚，回热回流将提取。液过滤、减压浓缩得白芷浸膏。
步骤2：将白芷浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为C18色谱柱，流动相为超临界流体，改进剂为甲醇。分离过程由紫外检测器检测，根据检测信号收集目标组分馏分。
前面所述的方法，优选的方案是，步骤1中石油醚提取石油醚与药材的比例是3：1～10：1，最优为6：1；提取的次数为3次，每次回流时间为0.5-5小时，最优为2小时。
前面所述的方法，优选的方案是，步骤2中过滤所用滤膜为0.45 μm滤膜。
前面所述的方法，优选的方案是，步骤2中超临界流体为超临界二氧化碳，超临界二氧化碳的压力为10~15MPa，最优为12MPa；超临界二氧化碳的流速为1-10倍柱体积/分钟，最优为4倍柱体积/分钟。
前面所述的方法，优选的方案是，步骤2中色谱柱温度为35~50°C，最优为35°C。
前面所述的方法，优选的方案是，步骤2中改进剂甲醇的比例为0%~10%，最优为1.15%。
本发明一种从白芷中分离纯化异欧前胡素和欧前胡素的方法，具有如下优势：
（1）所得到的白芷提取物中有效成分含量高（从图1可以看出）。
（2）不需要像已有技术一样对样品进行多次分离纯化，只需要一个分离步骤即可得到两种高纯度化合物，经过一步分离纯化就可以得到异欧前胡素和欧前胡素。
（3）纯化过程中使用超临界二氧化碳，不使用对环境有危害的有机溶剂，生产过程绿色环保，所得产品无有害物质残留。
（4）二氧化碳回收利用容易，能耗低，生产成本低。
（5）方法操作简单，易于自动化控制，效率高，工艺周期短。
附图说明
图1是实施例1超临界流体色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图详细说明本发明的技术方案，但保护范围不被此限制。实施例中所用设备或原材料皆可从市场获得。所用试剂均为分析纯，购自天津试剂四厂，所用二氧化碳为高纯二氧化碳。
实施例1
称取白芷500克，用粉碎机粉碎，放入玻璃容器中，加入3000ml石油醚，加热回流提取3次，每次回流2小时，合并提取液，过滤、减压浓缩得白芷浸膏。
将白芷浸膏用甲醇溶解，经过滤（所用滤膜为0.45μm滤膜）后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为C18色谱柱，色谱柱温度为35°C。流动相为超临界二氧化碳，流速为4倍柱体积/分钟，压力为12MPa。改进剂为甲醇，其比例为1.15%。分离过程由紫外检测器检测，检测波长为220nm，根据检测信号收集目标组分馏分，分别得到异欧前胡素和欧前胡素。
图1是所得产物超临界流体色谱图。由此可知，所得产物纯度很高。
实施例2
称取白芷500克，用粉碎机粉碎，放入玻璃容器中，加入4000ml石油醚，加热回流提取3次小时，每次回流1小时，合并提取液，过滤、减压浓缩得白芷浸膏。
将白芷浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为C18色谱柱，色谱柱温度为42°C。流动相为超临界二氧化碳，流速为3.5倍柱体积/分钟，压力为13MPa。改进剂为甲醇，其比例为1.35%。分离过程由紫外检测器检测，检测波长为220nm，根据检测信号收集目标组分馏分，分别得到异欧前胡素和欧前胡素。
实施例3
称取白芷500克，用粉碎机粉碎，放入玻璃容器中，加入2200ml石油醚，加热回流提取3次小时，每次回流3小时，合并提取液，过滤、减压浓缩得白芷浸膏。
将白芷浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为C18色谱柱，色谱柱温度为38°C。流动相为超临界二氧化碳，流速为2.5倍柱体积/分钟，压力为11MPa。改进剂为甲醇，其比例为0.95%。分离过程由紫外检测器检测，检测波长为220nm，根据检测信号收集目标组分馏分，分别得到异欧前胡素和欧前胡素。
经HPLC面积归一化法分析测试，实施例1-3所得到的各个组分的纯度很高，均在98%以上。
经NMR、MS鉴定。图1中A为异欧前胡素，B为欧前胡素，其化学结构如下：