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1、10申请公布号CN104147587A43申请公布日20141119CN104147587A21申请号201410385003122申请日20140805A61K38/00200601A61K35/28200601A61P37/04200601A61K31/714200601A61K31/525200601A61K31/51200601A61K31/455200601A61K31/441520060171申请人河北科恒生物科技有限公司地址071800河北省保定市清苑县环城北路72发明人袁向红王洪亮李海峰王庆学王国维王晨枫刘彦政吴昊54发明名称禽用免疫增强剂VB肽的生产方法57摘要一种禽用免疫增。
2、强剂VB肽的生产方法，包括步骤S1、原料清洗；S2、原料破碎；S3、原料冻融；S4、原料一次过滤；S5、原料二次过滤；S6、加入维生素B，制作维生素B2盐溶液；S7、除菌分装。使用本发明提供的禽用免疫增强剂VB肽的生产方法所制造的VB肽属于生物药物多肽与蛋白质类药物，属于机体本身固有的成份，因此，在使用时高效安全，对动物及人类安全、无毒副作用。本发明生产的禽用免疫增强剂VB肽能够将供体的某一些特异性和非特异性细胞免疫功能，转移给受体，扩大受体的免疫反应。能触发和调节细胞免疫功能，攻击体内病毒等外来物。活化巨噬细胞，增强协同参与免疫反应的巨噬细胞识别、结合、吞噬和消化抗原的能力。51INTCL权。
3、利要求书1页说明书6页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书6页附图1页10申请公布号CN104147587ACN104147587A1/1页21一种禽用免疫增强剂VB肽的生产方法，其特征在于，包括步骤一、以鸡的脾脏为原料使用09的NACL对其进行清洗，对原料过滤后进行封装并冷冻15小时25小时备用；步骤二、采用胶体磨粗磨后将原料置于09的NACL溶液内稀释进行精细磨；步骤三、将精细磨后的原料溶液封装并对其进行冻融操作至少八次；步骤四、将冻融后的原料溶液的PH值调至3550之间，并对该溶液进行一次过滤；步骤五、将一次过滤后的原料溶液的PH值调至6575之间。
4、，并对该溶液进行二次过滤；步骤六、将二次过滤后的原料溶液进行超滤处理，在超滤后的原料溶液内加入复合维生素B；其具体操作步骤为制作维生素B2盐溶液，即将0708G的维生素B2溶于100ML的09的NACL中助溶；向5L超滤后的原料液体中依次加入0304G的维生素B1、57G的烟酰胺、0708G的右旋泛酸钙、0506G的维生素B6以及00020003G的维生素B12；再将维生素B2盐溶液加入至上述溶液内，并加入580620ML75的乙醇、3040G的苯甲酸钠、45G的糖精钠并以蒸馏水为填充溶液将全部的原料溶液加满至5862L制成成品溶液；步骤七、对成品溶液进行022微米的除菌分装。2根据权利要求1。
5、所述的禽用免疫增强剂VB肽的生产方法，其特征在于，采用HCL、NAOH对原料溶液进行酸碱度的调节。3根据权利要求1所述的禽用免疫增强剂VB肽的生产方法，其特征在于，采用加压袋式过滤器对原料溶液进行一次过滤，采用10M的滤袋进行二次过滤，采用超滤机6000道尔顿进行超滤。权利要求书CN104147587A1/6页3禽用免疫增强剂VB肽的生产方法技术领域0001本发明涉及动物药品技术领域，具体的是一种禽用免疫增强剂VB肽的生产方法。背景技术0002近年来，养鸡业中普遍存在着免疫接种后传染病仍然暴发流行、特异性抗体达不到理想水平以及用药量加大而达不到理想治疗效果的情况，造成上述问题的重要原因之一就是。
6、禽类免疫功能下降引起的。0003引起免疫功能下降的因素如母源抗体干扰、营养缺乏、免疫抑制性疾病的影响、饲料中霉菌毒素含量超标、应激因素及激素药物、烷化消毒剂的应用等，而这些因素是生产中常见的。要有效的解决这一问题，就必须激活免疫系统，促进巨噬细胞摄取、处理和传递抗原，调节和增强T/B细胞的反应能力、增加T/B细胞的数量及促进其发育成熟，使鸡在接种疫苗后能获得高水平的免疫应答反应。然而，目前化学药物类免疫增强剂都不同程度地存在着毒副作用、药物残留和阶段性用药达不到理想效果的弊端。发明内容0004有鉴于此，本发明提供了一种禽用免疫增强剂VB肽的生产方法，以解决上述问题。0005为实现上述目的，本发。
7、明提供如下技术方案0006一种禽用免疫增强剂VB肽的生产方法，包括步骤0007S1、原料清洗，以鸡的脾脏为原料使用09的NACL对其进行清洗，对原料过滤后进行封装并冷冻15小时25小时备用；0008S2、原料破碎，采用胶体磨粗磨后将原料置于09的NACL溶液内稀释进行精细磨；0009S3、原料冻融，将精细磨后的原料溶液封装并对其进行冻融操作至少八次；0010S4、原料一次过滤，将冻融后的原料溶液的PH值调至3550之间，并对该溶液进行一次过滤；0011S5、原料二次过滤，将一次过滤后的原料溶液的PH值调至6575之间，并对该溶液进行二次过滤；0012S6、加入维生素B，将二次过滤后的原料溶液进。
8、行超滤处理，在超滤后的原料溶液内加入复合维生素B；0013其具体操作步骤为0014制作维生素B2盐溶液，即将0708G的维生素B2溶于100ML的09的NACL中助溶；0015向5L超滤后的原料液体中依次加入0304G的维生素B1、57G的烟酰胺、0708G的右旋泛酸钙、0506G的维生素B6以及00020003G的维生素B12；0016再将维生素B2盐溶液加入至上述溶液内，并加入580620ML75的乙醇、3040G说明书CN104147587A2/6页4的苯甲酸钠、45G的糖精钠并以蒸馏水为填充溶液将全部的原料溶液加满至5862L制成成品溶液；0017S7、除菌分装，对成品溶液进行022微。
9、米的除菌分装。0018优选地，采用HCL、NAOH对原料溶液进行酸碱度的调节。0019优选地，采用加压袋式过滤器对原料溶液进行一次过滤，采用10M的滤袋进行二次过滤，采用超滤机6000道尔顿进行超滤。0020本发明提供的禽用免疫增强剂VB肽的生产方法制成的禽用免疫增强剂VB肽其成品中包含有重量配比多肽物质，多肽含量7580MG/ML、每毫升含有B族维生素，维生素B1054066MG、维生素B201080132MG、烟酰胺1MG、右旋泛酸钙012MG、维生素B6009MG、维生素B1200004MG、苯甲酸钠6MG，糖精钠07MG。0021使用本发明提供的禽用免疫增强剂VB肽的生产方法所制造的V。
10、B肽属于生物药物多肽与蛋白质类药物，属于机体本身固有的成份，因此，在使用时高效安全，对动物及人类安全、无毒副作用。附图说明0022为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。0023图1为本发明一种实施例中禽用免疫增强剂VB肽的生产方法的流程图。具体实施方式0024下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施。
11、例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。0025请参考图1，图1为本发明一种实施例中禽用免疫增强剂VB肽的生产方法的流程图。0026本发明提供了一种禽用免疫增强剂VB肽的生产方法，包括步骤S1、原料清洗，以鸡的脾脏为原料使用09的NACL对其进行清洗，对原料过滤后进行封装并冷冻15小时25小时备用；S2、原料破碎，采用胶体磨粗磨后将原料置于09的NACL溶液内稀释进行精细磨；S3、原料冻融，将精细磨后的原料溶液封装并对其进行冻融操作至少八次；S4、原料一次过滤，将冻融后的原料溶液的PH值调至355。
12、0之间，并对该溶液进行一次过滤；S5、原料二次过滤，将一次过滤后的原料溶液的PH值调至6575之间，并对该溶液进行二次过滤；S6、加入维生素B，将二次过滤后的原料溶液进行超滤处理，在超滤后的原料溶液内加入复合维生素B；其具体操作步骤为制作维生素B2盐溶液，即将0708G的维生素B2溶于100ML的09的NACL中助溶；向5L超滤后的原料液体中依次加入0304G的维生素B1、57G的烟酰胺、0708G的右旋泛酸钙、0506G的维生素B6以及00020003G的维生素B12；再将维生素B2盐溶液加入至上述溶液内，并加入580620ML说明书CN104147587A3/6页575的乙醇、3040G的。
13、苯甲酸钠、45G的糖精钠并以蒸馏水为填充溶液将全部的原料溶液加满至5862L制成成品溶液；S7、除菌分装，对成品溶液进行022微米的除菌分装。0027基于上述方案，本发明的具体操作为0028将鸡的脾脏剪摘后用09的NACL清洗23遍，用纱布过滤，分装入小塑料袋，置于冰柜冷冻2小时，胶体磨粗磨1次之后，加入2倍量09的NACL溶液循环精磨匀浆2次。之后倒入加盖密封的物料瓶中冻融8次，之后用滴管加入适量的HCL，用棍搅匀，调PH值到3550，用加压袋式过滤器粗滤1次液体接入大塑料桶后换50M滤袋粗滤第1次，压力为2公斤约02MP，将粗滤后的液体倒入大塑料桶中，用滴管加入适量的NAOH，用搅拌棍搅匀。
14、，调PH值到70，换10M的滤袋，将调完PH值的液体倒入压滤器内细滤，细虑之后上超滤机6000道尔顿进行超滤。0029加入复合维生素B将0792G的维生素B2溶于100ML的09的NACL中助溶，向5L超滤完的液体中依次加入复合维生素B的组方成分维生素B1396G；烟酰胺6G；右旋泛酸钙072G；维生素B6054G；维生素B1200024G；再将维生素B2的盐溶液加入多肽溶液中，加入75乙醇600ML，苯甲酸钠36G，糖精钠42G，加蒸馏水至6L，022微米除菌分装。0030本发明的有益效果00311鸡脾脏提取的多肽物质0032能够将供体的某一些特异性和非特异性细胞免疫功能，转移给受体，扩大受。
15、体的免疫反应。0033能触发和调节细胞免疫功能，使未接触过抗原的细胞致敏，T淋巴细胞分化增殖为效应T细胞，发生增效反映，变成致敏淋巴细胞和释放具有免疫活性的淋巴因子，攻击体内病毒等外来物。0034活化巨噬细胞，增强协同参与免疫反应的巨噬细胞识别、结合、吞噬和消化抗原的能力。0035能提高体内白介素II、干扰素等人多种细胞因子在体内的生成，调整多项免疫指标、作用于免疫系统的多个环节、纠正机体失衡的免疫、使免疫功能低下或亢进得到调整。0036具有保护机体骨髓造血干细胞的生殖功能，防止因某些射线和药物等因素造成骨髓干细胞有丝分裂指数的下降，增强和调解机体的细胞免疫和骨髓造血功能。0037在本发明中加。
16、入的物质具体有0038维生素B1维生素B1又称硫胺素或抗神经炎维生素，在体内，维生素B1以辅酶形式参与糖的分解代谢，有保护神经系统的作用；还能促进肠胃蠕动，增加食欲。0039维生素B2维生素B2又叫核黄素，为体内黄酶类辅基的组成部分黄酶在生物氧化还原中发挥递氢作用，当缺乏时，就影响机体的生物氧化，使代谢发生障碍。主要参与的生化反应有呼吸链能量产生，氨基酸、脂类氧化，嘌呤碱转化为尿酸，芳香族化合物的羟化，蛋白质与某些激素的合成，铁的转运、储存及动员，参与叶酸、吡多醛、尼克酸的代谢等。0040烟酰胺烟酰胺是辅酶I和辅酶II的组成部分，成为许多脱氢酶的辅酶。缺乏时可影响细胞的正常呼吸和代谢而引起糙皮。
17、病。本品胃肠道易吸收，吸收后分布到全身组织，经肝脏代谢，仅少量以原形自尿液排出。用于补充营养及治疗舌炎、皮炎等。说明书CN104147587A4/6页60041右旋泛酸钙是辅酶A的成分，参与碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢作用，是人体和动物维持正常生理机能不可缺少的微量物质。0042维生素B6维生素B6又名吡哆醇，主要以磷酸吡多醛PLP形式参与近百种酶反应。多数与氨基酸代谢有关包括转氨基、脱羧、侧链裂解、脱水及转硫化作用。0043维生素B12又名钴胺素，作为甲基转移酶的辅因子，参与蛋氨酸、胸腺嘧啶等的合成；保护叶酸在细胞内的转移和贮存。0044基于上述生产方法生产的禽用免疫增强剂VB肽的生产方法。
18、分别在鸡、鸭、鹅三种禽类做实验效果0045一、复合VB肽口服液对禽免疫器官发育的影响0046试验一0047将200只21日龄的健康海兰褐鸡随机分成2组，每组100只，1组为实验组，按照每只鸡01ML/只剂量，每天饮用本免疫增强剂一次，连续15日龄，2组为对照组，不用药。分别于饮药后第5D、10D、15D每组各随机取10只鸡测定免疫器官系数。结果表明实验组免疫器官指数显著高于对照组P005；法氏囊皱襞显著大于对照组，胸腺小叶面积显著高于对照组P005，脾脏淋巴细胞数量显著高于对照组P005。实验组雏鸡的胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官的重量和指数明显增高，对鸡免疫器官发育有明显的促进作用。0048试。
19、验二将100只10日龄的健康麻鸭随机分成2组，每组50只，1组为实验组，按照每只鸭01ML/只剂量，每天饮用本免疫增强剂一次，连续15日龄，2组为对照组，不用药。分别于饮药后第5D、10D、15D每组各随机取10只鸭测定免疫器官系数。结果表明实验组免疫器官指数显著高于对照组P005；法氏囊皱襞显著大于对照组，胸腺小叶面积显著高于对照组P005，脾脏淋巴细胞数量显著高于对照组P005。实验组雏鸭的胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官的重量和指数明显增高，对麻鸭免疫器官发育有明显的促进作用。0049试验三将80只10日龄的健康四川白鹅随机分成2组，每组40只，1组为实验组，按照每只鸭01ML/只剂量，每天。
20、饮用本免疫增强剂一次，连续15日龄，2组为对照组，不用药。分别于饮药后第5D、10D、15D每组各随机取10只鹅测定免疫器官系数。结果表明实验组免疫器官指数显著高于对照组P005；法氏囊皱襞显著大于对照组，胸腺小叶面积显著高于对照组P005，脾脏淋巴细胞数量显著高于对照组P005。实验组雏鹅的胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官的重量和指数明显增高，对鹅的免疫器官发育有明显的促进作用。0050二、复合VB肽免疫增强剂对哈德氏腺中免疫细胞的数量的影响0051实验一0052150只1日龄海兰褐鸡随机分成3组，每组50只，分别005用药组、01用药组和对照组，其中005用药组和01用药组分别在饮水中按005。
21、和01的浓度每天饮用复合VB肽免疫增强剂，连续用药。并于饮药后24天、36天、48天每组各随机取10只鸡的哈德氏腺制成组织切片，进行组织学观察，统计鸡哈德氏腺中免疫细胞的数量。结果表明两用药组鸡哈德氏腺中免疫细胞数明显高于对照组，005用药组中免疫细胞数量较1用药组中免疫细胞的数量要少一些，说明鸡哈德氏腺产生免疫细胞的数量与中草药说明书CN104147587A5/6页7免疫增强剂的浓度有关。0053试验二005490只1日龄麻鸭随机分成3组，每组30只，分别005用药组、01用药组和对照组，其中005用药组和01用药组分别在饮水中按005和01的浓度每天饮用复合VB肽免疫增强剂，连续用药。并于。
22、饮药后24天、36天、48天每组各随机取10只鸭的哈德氏腺制成组织切片，进行组织学观察，统计鸡哈德氏腺中免疫细胞的数量。结果表明两用药组鸭哈德氏腺中免疫细胞数明显高于对照组，005用药组中免疫细胞数量较1用药组中免疫细胞的数量要少一些，说明鸭哈德氏腺产生免疫细胞的数量与中草药免疫增强剂的浓度有关。0055试验三005690只1日龄四川白鹅鸭随机分成3组，每组30只，分别005用药组、01用药组和对照组，其中005用药组和01用药组分别在饮水中按005和01的浓度每天饮用复合VB肽免疫增强剂，连续用药。并于饮药后24天、36天、48天每组各随机取10只鹅的哈德氏腺制成组织切片，进行组织学观察，统。
23、计鹅哈德氏腺中免疫细胞的数量。结果表明两用药组鹅哈德氏腺中免疫细胞数明显高于对照组，005用药组中免疫细胞数量较1用药组中免疫细胞的数量要少一些，说明鹅哈德氏腺产生免疫细胞的数量与中草药免疫增强剂的浓度有关。0057三、复合VB肽免疫增强剂对禽白细胞吞噬能力和T淋巴细胞动态变化的影响0058试验一0059将12日龄海兰褐鸡90只，随机分成3组，每组30只，即试验I组、试验II组和对照组。I组在饮水中按01浓度添加复合VB肽口服液；II组在饮水中按005的浓度添加复合VB肽口服液；对照组鸡自由饮水，不加任何药物成分，在第22、32、42、52、62日龄时翅下静脉采血，涂片，镜检。结果表明01浓度。
24、组效果最好，优于005组，对照组效果最差；复合VB肽口服液能够显著提高动物机体单核细胞、嗜酸性粒细胞的活性，提高白细胞的吞噬能力。E玫瑰花环试验结果显示，01浓度组T淋巴细胞花环形成率与对照组比较差异极显著P001，005浓度组淋巴细胞花环形成率与对照组比较差异显著P005，01浓度组与005浓度组在22、32、42日龄比较差异不显著，在52、62日龄比较差异显著P005，复合VB肽免疫增强剂可明显增加鸡T淋巴细胞的数量。其中以01浓度组花环形成率最高，005浓度次之。0060试验二0061将10日龄麻鸭90只，随机分成3组，每组30只，即试验I组、试验II组和对照组。I组在饮水中按01浓度添。
25、加复合VB肽口服液；II组在饮水中按005的浓度添加复合VB肽口服液；对照组麻鸭自由饮水，不加任何药物成分，在第22、32、42、52、62日龄时翅下静脉采血，涂片，镜检。结果表明01浓度组效果最好，优于005组，对照组效果最差；复合VB肽口服液能够显著提高动物机体单核细胞、嗜酸性粒细胞的活性，提高白细胞的吞噬能力。E玫瑰花环试验结果显示，01浓度组T淋巴细胞花环形成率与对照组比较差异极显著P001，005浓度组淋巴细胞花环形成率与对照组比较差异显著P005，01浓度组与005浓度组在22、32、42日龄比较差异不显著，在52、62日龄比较差异显著P005，复合VB肽免疫增强剂可明显增加麻鸭T。
26、淋巴细胞的数量。其中说明书CN104147587A6/6页8以01浓度组花环形成率最高，005浓度次之。0062实验三0063将10日龄四川白鹅90只，随机分成3组，每组30只，即试验I组、试验II组和对照组。I组在饮水中按01浓度添加复合VB肽口服液；II组在饮水中按005的浓度添加复合VB肽口服液；对照组鹅自由饮水，不加任何药物成分，在第22、32、42、52、62日龄时翅下静脉采血，涂片，镜检。结果表明01浓度组效果最好，优于005组，对照组效果最差；复合VB肽口服液能够显著提高动物机体单核细胞、嗜酸性粒细胞的活性，提高白细胞的吞噬能力。E玫瑰花环试验结果显示，01浓度组T淋巴细胞花环形。
27、成率与对照组比较差异极显著P001，005浓度组淋巴细胞花环形成率与对照组比较差异显著P005，01浓度组与005浓度组在22、32、42日龄比较差异不显著，在52、62日龄比较差异显著P005，复合VB肽免疫增强剂可明显增加鸡T淋巴细胞的数量。其中以01浓度组花环形成率最高，005浓度次之。0064四、复合VB肽口服液免疫增强剂对鸡的新城疫抗体水平的影响0065实验0066选取1日龄罗斯308白羽肉鸡1万羽，分成2组，每组5000羽，在7日龄、21日龄免疫接种新城疫LASOTA疫苗，其中5000羽定为免疫增强剂组在7日龄接种疫苗的同时，6、7、8日龄使用复合VB肽口服液；另外一组5000羽对。
28、照组在接种疫苗同时不使用任何药物；在21日龄加强免疫接种新城疫LASOTA疫苗其中1万羽在21日龄接种疫苗的同时，20、21、22日龄使用复合VB肽口服液；另外一组5000羽对照组在接种疫苗同时不使用任何药物；实验结果每次免疫7D后，采集血清测定新城疫抗体效价。首免后各组随机取20只鸡血凝抑制试验HI检测新城疫抗体，免疫增强剂组55LOG2，对照组为36LOG2；二免7D后各组随机取20只鸡血凝抑制试验HI检测新城疫抗体，免疫增强剂组79LOG2，对照组为56LOG2。0067复合VB肽口服液免疫增强剂对鸡的新城疫抗体水平有明显的提升作用。0068通过各项实验表明，本发明生产的禽用免疫增强剂VB肽对禽免疫器官发育、哈德氏腺中免疫细胞数量、禽白细胞吞噬能力和T淋巴细胞数量以及鸡新城疫抗体效价等各项指标均有明显的改善效果。0069对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。说明书CN104147587A1/1页9图1说明书附图CN104147587A。