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1、10申请公布号CN104147008A43申请公布日20141119CN104147008A21申请号201410379252X22申请日20140804A61K31/439200601A23L1/29200601A61P31/04200601A61P1/1220060171申请人湖南农业大学地址410128湖南省长沙市芙蓉区农大路1号72发明人孙志良邬静74专利代理机构长沙市融智专利事务所43114代理人袁靖54发明名称钩吻生物碱单体的应用方法57摘要本发明公开了一种钩吻生物碱单体的应用方法，属于兽药、动物保健品及保健饲料等技术领域，具体涉及钩吻生物碱单体在制备兽药、动物保健品和保健饲料中的。
2、应用。该单体能降低断奶仔猪黄白痢发病率，对兽药、动物保健品和保健饲料的开发将产生重大影响，为钩吻的综合利用开辟了新领域。51INTCL权利要求书1页说明书3页附图2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页附图2页10申请公布号CN104147008ACN104147008A1/1页21钩吻生物碱单体的应用方法，其特征在于，用于制备激活猪AHR受体活性的制剂。2根据权利要求1所述的钩吻生物碱单体的应用方法，其特征在于，所述的钩吻生物碱单体包括钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素寅、钩吻素卯、钩吻素辰、钩吻素丙、钩吻素丁和钩吻素戊中的一种或几种。3根据权利要求2所述的钩吻生。
3、物碱单体的应用方法，其特征在于，所述的钩吻生物碱单体包括钩吻素子、钩吻素甲中的一种或两种。4根据权利要求1或2或3所述的钩吻生物碱单体的应用方法，其特征在于，所述的激活猪AHR受体活性的制剂为单方制剂或复方制剂。5钩吻生物碱单体的应用方法，其特征在于，用于制备治疗断奶仔猪黄白痢的兽药、动物保健品或动物保健饲料。6根据权利要求5所述的钩吻生物碱单体的应用方法，其特征在于，所述的钩吻生物碱单体包括钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素寅、钩吻素卯、钩吻素辰、钩吻素丙、钩吻素丁和钩吻素戊中的一种或几种。7根据权利要求6所述的钩吻生物碱单体的应用方法，其特征在于，所述的钩吻生物碱单体包括钩吻素子、钩吻素甲中的一种。
4、或两种。8根据权利要求5或6或7所述的钩吻生物碱单体的应用方法，其特征在于，所述的兽药和动物保健品为单方制剂或复方制剂。9根据权利要求8所述的钩吻生物碱单体的应用方法，其特征在于，所述的兽药和动物保健品的剂型为口腔速溶药膜、口服液、片剂、粉剂、胶囊或注射剂。10根据权利要求5或6或7所述的钩吻生物碱单体的应用方法，其特征在于，所述的动物保健饲料是在基础日粮中添加0105WT的钩吻素子和钩吻素甲的一种或两种。权利要求书CN104147008A1/3页3钩吻生物碱单体的应用方法技术领域0001本发明属于兽药、动物保健品和保健饲料技术领域，具体涉及钩吻生物碱单体在制备兽药、动物保健品和保健饲料中的应。
5、用。背景技术0002钩吻为马钱科植物胡蔓藤的全草，又名断肠草，野葛、毒根、大茶药等，味苦、微辛,性热,有大毒，主要分布在浙江、福建、广东、广西、湖南、贵州、云南等地。我国对于钩吻的应用历史十分悠久，神农本草记载钩吻“主金疮、乳痛、中恶风、咳逆上气，鬼”；民间因其毒性大，一直外用为主，能消肿拔毒、杀虫止痒；钩吻对人的毒性很大，被认为是世界上最毒的植物之一，据报道，人内服钩吻茎叶10G或根28G或嫩芽1038个即能引起中毒。然而，小剂量的钩吻却对一些动物却有促进生长的作用，如唐本草云“人或畜食其叶皆死,羊食则大肥,猪食之能治热性病”；本草纲目曾载“人误食钩吻叶者致死，而羊食钩吻则大肥”；广东中兽医。
6、常用草药记载“钩吻，常定期对猪羊服本药，可以健胃，杀虫，催肥”；广西中药志记载“当猪胃纳不良时,用以饲喂,能增进食欲”；因此，猪羊食用钩吻不但无毒，而且还有令其毛泽光润，增肥和放瘟之效。已有的一些研究证实了钩吻具有抗炎、镇痛、镇静，催眠、提高机体免疫力和抗应激等功效。0003钩吻中的主要的活性成分为生物碱，包括钩吻素子KOUMINE、钩吻素甲GELIEMINE、钩吻素寅KOUMINICINE、钩吻素卯KOUMINIDINE、钩吻素辰KOUNIDINE、钩吻素丙SEMPERVIRINE、钩吻素丁KOUMICINE和钩吻素戊KOUMIDINE等40多种单体成分，其中钩吻素子和钩吻素甲含量较高，而钩。
7、吻素寅毒性最大。而钩吻素子和钩吻素甲在制备兽药、动物保健品和保健饲料方面的应用鲜见报道。发明内容0004本发明的目的是提供一种钩吻生物碱单体在制备兽药、动物保健品和保健饲料上的新应用。0005钩吻生物碱单体的应用方法，用于制备激活猪AHR受体活性的制剂。0006所述的钩吻生物碱单体包括钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素寅、钩吻素卯、钩吻素辰、钩吻素丙、钩吻素丁和钩吻素戊中的一种或几种。0007所述的钩吻生物碱单体优选包括钩吻素子、钩吻素甲中的一种或两种。0008所述的激活猪AHR受体活性的制剂为单方制剂或复方制剂。0009钩吻生物碱单体的应用方法，用于制备治疗断奶仔猪黄白痢的兽药、动物保健品或动物保健。
8、饲料。0010所述的钩吻生物碱单体包括钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素寅、钩吻素卯、钩吻素辰、钩吻素丙、钩吻素丁和钩吻素戊中的一种或几种。0011所述的钩吻生物碱单体优选包括钩吻素子、钩吻素甲中的一种或两种。0012所述的兽药和动物保健品为单方制剂或复方制剂。说明书CN104147008A2/3页40013所述的兽药和动物保健品的剂型为口腔速溶药膜、口服液、片剂、粉剂、胶囊或注射剂。0014所述的动物保健饲料是在基础日粮中添加0105WT优选02WT的钩吻素子和钩吻素甲的一种或两种。0015本发明中所涉及的钩吻生物碱单体是由天然植物钩吻中提取的，可以与其他活性成分形成复方制剂，或是其他辅料形成单方制。
9、剂。0016本发明中的钩吻生物碱单体作为猪AHR芳香烃受体的配体显著的激活了猪AHR，而AHR激活可以反向调节NFKB介导的炎症通路，这可能是降低断奶仔猪黄白痢发病率的主要原因，这些发现对兽药及动物保健品的开发将产生重大影响，为钩吻的综合利用开辟新领域。0017本发明的优点00181采用的是钩吻生物碱单体对于猪、羊、鸡等畜禽安全性更好，其毒性较低。00192钩吻生物碱单体通过激活AHR，进而反向调节NFKB介导的炎症通路。钩吻生物碱单体不仅可以抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀、蛋清致小鼠足肿胀和小鼠腹腔毛细血管通透性增加，减轻急性炎症反应；还显著抑制了断奶仔猪黄白痢发病率。00203由于钩吻生物碱单体。
10、来自于天然植物钩吻中的有效成分，副作用小，具备良好的应用前景。00214本发明公开了钩吻生物碱单体作为兽药及动物保健品，具有安全，高效，副作用小，可口服、可注射等优点。附图说明0022图1为钩吻素子、钩吻素甲对猪AHR活性的影响图；0023图2钩吻素子、钩吻素甲对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响图；0024图3钩吻素子、钩吻素甲对蛋清所致小鼠足肿胀的影响图；0025图4钩吻素子、钩吻素甲对毛细血管通透性增强的影响图；0026图5钩吻素子、钩吻素甲对断奶仔猪黄白痢的发病率的影响图；0027图6钩吻素子、钩吻素甲对断奶仔猪死亡率的影响图。具体实施方式0028以下结合具体实施例对上述方案进一步说明。应理。
11、解，这些实施例是用于说明本发明而不限于限制本发明的范围。实施例中采用的实施条件可以根据实验的条件做进一步的调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。0029实施例10030将猪AHR质粒和荧光素酶报告基因质粒共转染进HEPG2细胞，构建猪AHR激活检测系统。将转染成功的细胞，培养后分为4个组，每组3个平行样，分别加入DMSO、10NM二噁英AHR激活剂、10NM钩吻素子、10NM钩吻素甲，作用24H，加入荧光素底物反应后，用荧光检测仪测定荧光强度。从图1可以看出，二噁英、钩吻素子、钩吻素甲与DMSO相比，均可以显著激活AHR受体，但钩吻素子、钩吻素甲对于猪AHR受体的激活效果要低于二噁英。。
12、JENSEN等在研究中发现可以通过激活AHR，进而反向调节NFKB介导的炎症通路，达到有效说明书CN104147008A3/3页5抑制炎症反应的效果BRENDAAJENSEN,REBECCAJLEEMAN,JENNIFERJSCHLEZINGERANDDAVIDHSHERRARYLHYDROCARBONRECEPTORAHRAGONISTSSUPPRESSINTERLEUKIN6EXPRESSIONBYBONEMARROWSTROMALCELLSANIMMUNOTOXICOLOGYSTUDYJENVIRONHEALTH,2116。由此可以看出钩吻素子和钩吻素甲可能可以通过激活AHR达到防治畜禽。
13、炎症反应的效果。0031实施例20032对钩吻生物碱单体中钩吻素子、钩吻素甲防治研究效果的研究选取昆明雄性小鼠，随机分成4组，分别为对照组、钩吻素子组、钩吻素甲组和吲哚美辛组抗炎阳性组，每组10只小鼠。灌胃给药，对照组灌胃等体积的生理盐水，每天1次，给药3天，末次给药45分钟后涂二甲苯于小鼠右耳005ML/只。25MIN后脱颈处死，将双耳剪下，用直径8MM打孔器打孔，电子天平上称重，以左耳和右耳的重量差为肿胀度，进行统计分析；给药60MIN后于小鼠右后足拓皮下注射10蛋清溶液01ML，30MIN后，用毛细管放大装置左右足拓容积，以两足拓容积差值作为肿胀度；灌胃给药每天1次,连续7天，最后一次给。
14、药后30MIN，以2的伊文思蓝生理盐水溶液尾静脉注射01ML/10G。同时腹腔注射06的冰醋酸02ML/只，25MIN后处死，用生理盐水5ML冲洗腹腔，将冲洗液1000转/MIN离心10MIN，取上清液用可见紫外分光光度计在波长590NM处读取光密度OD值。由图2、3、4可以得出钩吻素子、钩吻素甲对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀、蛋清致小鼠足肿胀以及小鼠腹腔毛细血管通透性均有显著增强作用，减轻了急性炎症反应。0033实施例30034在一个规模化猪场，选取三个批次的断奶仔猪，每个批次分为三个组，分别饲喂基础日粮、基础日粮02钩吻素子、基础日粮02钩吻素甲，连续饲喂15D，统计仔猪黄白痢的发病率及死亡率，由图5,6可以看出钩吻素子、钩吻素甲可以显著的降低断奶仔猪黄白痢的发病率和死亡率。0035实施例13仅是本发明的较佳实施实例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容、依据本发明的技术实质对以上实施实例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。说明书CN104147008A1/2页6图1图2图3图4图5说明书附图CN104147008A2/2页7图6说明书附图CN104147008A。