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1、10申请公布号CN102363800A43申请公布日20120229CN102363800ACN102363800A21申请号201110363710722申请日20111116C12P21/0620060171申请人海南大学地址570228海南省海口市人民大道58号72发明人段振华常虹成长玉74专利代理机构西安弘理专利事务所61214代理人李娜54发明名称一种超声波酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法57摘要本发明提供一种超声波辅助酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法，先将鱼鳔粉碎为鱼鳔粉末；再向鱼鳔粉末中加入PH值为60的磷酸盐缓冲液和胰蛋白酶，搅拌均匀，得到鱼鳔溶液；然后将鱼鳔溶液在水浴中酶解，再将鱼鳔。
2、溶液进行超声处理进行酶解，超声处理后继续在恒温水浴中酶解；酶解结束后，灭酶、冷却、过滤得到上清液；将上清液用10000DA超滤膜超滤，超滤后的溶液经冷冻干燥，得到鱼鳔抗氧化寡肽。本发明制备的抗氧化寡肽对人体的自由基有很好的清除作用，能起到防止衰老，炎症，以及动脉硬化而引发的心脑血管疾病，也可以作为一种营养添加剂应用于食品中。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页CN102363818A1/1页21一种超声波酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法，其特征在于，包括以下操作步骤步骤1，将鱼鳔粉碎为鱼鳔粉末；步骤2，向鱼鳔粉末中加入PH值为60的磷酸盐缓冲液和胰。
3、蛋白酶，搅拌均匀，得到鱼鳔溶液；其中，鱼鳔粉末质量为磷酸盐缓冲液质量的6，胰蛋白酶质量为鱼鳔粉末质量的1620；步骤3，先将鱼鳔溶液在50恒温水浴中酶解510MIN，再将鱼鳔溶液超声处理进行酶解，控制超声功率110220W，超声时间19MIN，超声温度3065，超声处理后继续在50的恒温水浴中酶解3090MIN；酶解结束后，灭酶、冷却、过滤得到上清液；步骤4，将上清液用10000DA超滤膜超滤，超滤后的溶液经冷冻干燥，得到鱼鳔抗氧化寡肽。2根据权利要求1所述制备抗氧化寡肽的方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲液由摩尔浓度为02MOL/L的磷酸二氢钠水溶液和摩尔浓度为02MOL/L的磷酸氢二钠水溶液混。
4、合而成，磷酸二氢钠水溶液与磷酸氢二钠水溶液的体积比为877123。权利要求书CN102363800ACN102363818A1/4页3一种超声波酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法技术领域0001本发明涉及一种鱼鳔酶解制备抗氧化寡肽的方法，特别涉及一种超声波酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法。背景技术0002鱼鳔，又名鱼泡、鱼肚、鱼白、压胞，是鱼体重要的比重调节器官，生活在海水上层和中层的硬骨鱼类，大多数都有鳔，鱼鳔的体积约占身体的5左右，其形状有卵圆形、圆锥形、心脏形、马蹄形等等。鱼鳔的主要营养成分为高级胶原蛋白、粘多糖、多种维生素及钙、锌、铁、硒等多种微量元素，其中蛋白质含量一般在80以上，而脂肪含量较。
5、低，是理想的高蛋白低脂肪食品。鱼鳔中含有多种无机元素，尤其微量元素ZN、CU、FE、SE含量极为丰富，这些微量元素对保持健康起着重要作用。0003鱼鳔中的营养成分含量因种类不同而变化，以不同鱼鳔的脂肪含量变化最大，蛋白质含量的变化最小。氨基酸的分析结果显示，甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、脯氨酸、精氨酸和天冬氨酸等6种氨基酸构成了鱼鳔蛋白质的优势氨基酸。除了甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和天冬氨酸4种氨基酸在不同鱼鳔中的含量差异最大外，大多数氨基酸的含量变化不大。现代中医药学认为，鱼鳔味甘性平，有滋阴养血、止血、补肾固精的功能。本草求原载鱼鳔可“养精脉，定手战，固精。”鱼鳔还有良好的保健作用，可促进精囊分泌果。
6、糖，为精子提供能量；能促进胃肠的消化吸收，提高食欲，防治厌食、消化不良、腹胀、便秘；能增加肌肉组织的韧性和弹力，增强体力，消除疲劳；能滋润皮肤，使皮肤细腻光滑；能增强脑力和神经系统功能，促进生长发育，提高思维和智力，维持腺体正常分泌，并可防止智力减迟，神经传导迟缓，反应迟钝，产后乳汁分泌不足，老年性痴呆，健忘、失眠等，能提高机体抵抗力和免疫力，抗疲劳，抑制肿瘤生长。0004鱼鳔现在的加工应用主要有鱼鳔干制品的加工，其方法是从鱼腹内摘下鱼鳔，清洗干净，然后用明矾溶液浸渍后剥膜，石灰水浸泡去脂，清洗，沥水后干燥。这种加工方法生产的鱼鳔附加值低，并且有明显的地域化特点，主要集中在沿海地区，而内地少有。
7、食用，这制约了鱼鳔的销售。0005申请号2008100918450，申请日2008330，公开号CN101545001A，公开日2009930，申请人为段振华申请了一项专利，介绍了一种鱼鳔寡肽溶液的制备方法1将尖鱼肚干品进行清洗破碎处理；2用尖鱼肚5倍重的饮用水浸泡550MIN后，超声波处理1080MIN；3按固液比110160补入饮用水，用高速组织捣碎机进行捣碎和打浆处理5MIN；4将制备的浆液进行恒温酶解，酶量比为1117，在温度4060、PH值5080、酶量为0109条件下，酶解39H，酶解完毕在80100灭酶处理815MIN；5高速离心酶解液，取上清液过滤后装瓶、封口，高速离心机的转速。
8、为400020,000RPM，离心时间为515MIN；6用高压蒸汽灭菌器对瓶装溶液进行灭菌处理，灭菌温度100135，灭菌时间2050MIN，冷却后即制备成鱼鳔寡肽溶液。此方法制备出的是只用于补充氨基酸的普通寡肽。而目前使用鱼鳔酶解制备抗氧化肽的技术还没有见报道，本专利主要通过控说明书CN102363800ACN102363818A2/4页4制鱼鳔的酶解条件生产出具有抗氧化性的寡肽。发明内容0006本发明提供一种超声波酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法，制备的是抗氧化寡肽，不仅能够用于补充氨基酸，而且还能清除自由基。0007本发明所采用的技术方案为，一种超声波酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法，包括以下操。
9、作步骤0008步骤1，0009将鱼鳔粉碎为鱼鳔粉末；0010步骤2，0011向鱼鳔粉末中加入PH值为60的磷酸盐缓冲液和胰蛋白酶，搅拌均匀，得到鱼鳔溶液；其中，鱼鳔粉末质量为磷酸盐缓冲液质量的6，胰蛋白酶质量为鱼鳔粉末质量的1620；0012步骤3，0013先将鱼鳔溶液在50恒温水浴中酶解510MIN，再将鱼鳔溶液超声处理进行酶解，控制超声功率110220W，超声时间19MIN，超声温度3065，超声处理后继续在50的恒温水浴中酶解3090MIN；酶解结束后，灭酶、冷却、过滤得到上清液；0014步骤4，0015将上清液用10000DA超滤膜超滤，超滤后的溶液经冷冻干燥，得到鱼鳔抗氧化寡肽。00。
10、16其中，磷酸盐缓冲液由摩尔浓度为02MOL/L的磷酸二氢钠水溶液和摩尔浓度为02MOL/L的磷酸氢二钠水溶液混合而成，磷酸二氢钠水溶液与磷酸氢二钠水溶液的体积比为877123。0017本发明的有益效果是，应用超声波酶解鱼鳔蛋白质，提高了酶解效率，提高了酶解过程中肽的释放量，缩短了酶解过程中所需要的时间，操作简单，生产周期短，并且本发明制备的抗氧化寡肽对人体的自由基有很好的清除作用，能起到防止衰老，炎症，以及动脉硬化而引发的心脑血管疾病，也可以作为一种营养添加剂应用于食品中。具体实施方式0018实施例10019将鱼鳔剪成小块，放入粉碎机粉碎成60目的鱼鳔粉末；称取24G鱼鳔粉末，向鱼鳔粉末中加。
11、入400ML400GPH值为60的磷酸盐缓冲液其中，磷酸盐缓冲液由3508ML摩尔浓度为02MOL/L的磷酸二氢钠水溶液和492ML摩尔浓度为02MOL/L的磷酸氢二钠水溶液混合而成和0384G胰蛋白酶，搅拌均匀，得到鱼鳔溶液；将鱼鳔溶液在50恒温水浴中酶解5MIN，再将鱼鳔溶液超声处理进行酶解，控制超声功率220W，超声时间5MIN，超声温度40，超声处理后继续在50的恒温水浴中酶解45MIN；酶解结束后，将水浴温度升高到100进行灭酶，灭酶后冷却至室温，过滤得到上清液，用微量凯式定氮法测得上清液的蛋白质含量为602MG/ML；最后将上清液用10000DA超滤膜超滤，超滤后的溶液经在20，0。
12、43BAR条件下冷冻干燥得到鱼鳔抗氧化寡肽。说明书CN102363800ACN102363818A3/4页50020上述胰蛋白酶由无锡杰能科生物有限公司生产。0021测得产物清除DPPH自由基的能力为7411，清除羟自由基的能力是7658，清除ABTS溶液的能力为7754。0022实施例20023将鱼鳔剪成小块，放入粉碎机粉碎成60目的鱼鳔粉末；称取24G鱼鳔粉末，向鱼鳔粉末中加入400ML400G的PH值为60的磷酸盐缓冲液其中，磷酸盐缓冲液由3508ML摩尔浓度为02MOL/L的磷酸二氢钠水溶液和492ML摩尔浓度为02MOL/L的磷酸氢二钠水溶液混合而成和0384G胰蛋白酶，搅拌均匀，得。
13、到鱼鳔溶液；将鱼鳔溶液在50恒温水浴中酶解10MIN，再将鱼鳔溶液超声处理进行酶解，控制超声功率220W，超声时间9MIN，超声温度30，超声处理后继续在50的恒温水浴中酶解45MIN；酶解结束后，将水浴温度升高到100进行灭酶，灭酶后冷却至室温，过滤得到上清液，用微量凯式定氮法测得上清液的蛋白质含量为613MG/ML；最后将上清液用10000DA超滤膜超滤，超滤后的溶液经在20，043BAR条件下冷冻干燥得到鱼鳔抗氧化寡肽。0024上述胰蛋白酶由无锡杰能科生物有限公司生产。0025测得产物清除DPPH自由基的能力为7113，清除羟自由基的能力是7236，清除ABTS溶液的能力为7261。00。
14、26实施例30027将鱼鳔剪成小块，放入粉碎机粉碎成60目的鱼鳔粉末；称取24G鱼鳔粉末，向鱼鳔粉末中加入400ML400G的PH值为60的磷酸盐缓冲液其中，磷酸盐缓冲液由3508ML摩尔浓度为02MOL/L的磷酸二氢钠水溶液和492ML摩尔浓度为02MOL/L的磷酸氢二钠水溶液混合而成和048G胰蛋白酶，搅拌均匀，得到鱼鳔溶液；将鱼鳔溶液在50恒温水浴中酶解10MIN，再将鱼鳔溶液超声处理进行酶解，控制超声功率220W，超声时间7MIN，超声温度45，超声处理后继续在50的恒温水浴中酶解30MIN；酶解结束后，将水浴温度升高到100进行灭酶，灭酶后冷却至室温，过滤得到上清液，用微量凯式定氮法。
15、测得上清液的蛋白质含量为60MG/ML；最后将上清液用10000DA超滤膜超滤，超滤后的溶液经在20，043BAR条件下冷冻干燥得到鱼鳔抗氧化寡肽。0028上述胰蛋白酶由无锡杰能科生物有限公司生产。0029测得产物清除DPPH自由基的能力为6836，清除羟自由基的能力是6792，清除ABTS溶液的能力为6901。0030实施例40031将鱼鳔剪成小块，放入粉碎机粉碎成60目的鱼鳔粉末；称取24G鱼鳔粉末，向鱼鳔粉末中加入400ML400G的PH值为60的磷酸盐缓冲液其中，磷酸盐缓冲液由3508ML摩尔浓度为02MOL/L的磷酸二氢钠水溶液和492ML摩尔浓度为02MOL/L的磷酸氢二钠水溶液混。
16、合而成和0384G胰蛋白酶，搅拌均匀，得到鱼鳔溶液；将鱼鳔溶液在50恒温水浴中酶解8MIN，再将鱼鳔溶液超声处理进行酶解，控制超声功率110W，超声时间1MIN，超声温度65，超声处理后继续在50的恒温水浴中酶解90MIN；酶解结束后，将水浴温度升高到100进行灭酶，灭酶后冷却至室温，过滤得到上清液，用微量凯式定氮法测得上清液的蛋白质含量为596MG/ML；最后将上清液用10000DA超滤膜超滤，超滤后的溶液经在20，043BAR条件下冷冻干燥得到鱼鳔抗氧化寡肽。说明书CN102363800ACN102363818A4/4页60032上述胰蛋白酶由无锡杰能科生物有限公司生产。0033测得产物清除DPPH自由基的能力为6423，清除羟自由基的能力是6452，清除ABTS溶液的能力为6503。0034本发明将超声波应用于酶解，充分利用了超声波的空化作用使溶液中的微粒剧烈振动，产生猛烈的碰撞使溶液温度升高，起到了很好的搅拌作用，加速了化学反应，提高了酶解效率，提高酶解过程中肽的释放量，缩短了酶解过程所需要的时间。说明书CN102363800A。