清除植物材料上的微生物的方法.pdf

本发明公开了一种能有效清除Pseudomonas syringae pv.actinidiae（Psa）细菌细胞的载菌量的方法，其中，Pseudomonas syringae pv.actinidiae是猕猴桃细菌性溃疡的病原体，是一种能攻击所有猕猴桃物种和变种的极端致命的细菌。本发明描述的方法适用于猕猴桃属的不同植物，并且特别地，适用于潜在感染Psa的猕猴桃花粉。该方法需要在同一植物样品上进行涉及抗菌作用的两个阶段处理：阶段1）中，使潜在感染Psa的植物样品在一给定的时间段内处于特定的温度；阶段2）中，在阶段1）后，在特定的环境条件（温度和相对空气湿度）下，将特定浓度臭氧应用于同一植物样品上。

1.  一种清除猕猴桃的细菌性溃疡病原体Pseudomonas syringae pv.actinidiae（PSA）细菌细胞的载菌量的方法，该方法可应用于猕猴桃属的不同植物，其涉及依次使用两个阶段来对猕猴桃属植物进行抗菌处理：在第一阶段中，使植物样品在一给定的时间段内处于特定的温度下；在第二阶段中，使同一样品处于特定浓度的臭氧及特定的环境参数（温度和相对空气湿度）下。

2.  根据权利要求1所述的方法，其中涉及Pseudomonas syringae pv.actinidiae的抗菌处理，其中，Pseudomonas syringae pv.actinidiae是能导致被称为猕猴桃溃疡病的植物疾病的植物病原细菌。

3.  根据权利要求1和2所述的方法，其中涉及依次使用温度和臭氧来对猕猴桃属植物的花粉进行抗菌处理。

4.  根据权利要求1、2和3所述的方法，其中使所述猕猴桃属的植物材料（花粉）处于温度42℃下30分钟。

5.  根据权利要求1、2、3和4所述的方法，其中使所述猕猴桃属的植物材料（花粉）在温度为5℃且最大相对湿度为35%时，处于0.05ppm的特定浓度臭氧下4小时。

6.  根据权利要求1、2、3、4和5所述的方法，其中，如前文所述，依次使用温度和臭氧，并且处于上述的参数中。

7.  根据权利要求1、2、3、4、5和6所述的方法，其中所述依次应用（温度和臭氧）的处理在一限定的环境中进行，在该限制的环境中能控制多个不同的参数（空气的%相对湿度、温度、臭氧浓度、气流速度）。

清除植物材料上的微生物的方法
技术领域
本发明涉及一种能有效清除Pseudomonas syringae pv.actinidiae（Psa）细菌细胞的载菌量的方法，其中，Pseudomonas syringae pv.actinidiae是猕猴桃细菌性溃疡的病原体，是一种能攻击所有猕猴桃物种和变种的极端致命的细菌。
所描述的方法适用于不同的猕猴桃属（Genus Actinidiae）植物，用于防止所述细菌出现和蔓延所带来的严重后果；特别地，本方法可应用于潜在地被Psa感染的猕猴桃花粉。
发明内容
本发明技术涉及不同策略方法的使用，用于防御抵抗Pseudomonas syringae pv.actinidiae（Psa），包括单独和/或联合采用以下的策略：
a）提供适当的营养，并刺激猕猴桃植物的内源性防御（提供氨基酸、腐殖酸钾、磷酸、硫酸）（Mazzaglia et al.,2011）；b）使用铜盐来保护猕猴桃的不同物候期（Fratarcangeli et al.,2010;Quattrucci et al.,2010）；c）通过使用天然拮抗剂（解淀粉芽孢杆菌，D747菌株）的方法来防御猕猴桃细菌性溃疡病原体的感染，该菌株是迄今为止在欧洲共同体中注册用于防治Psa的唯一农作物保护产品，其能定殖（colonize）并保护猕猴桃植株的器官，抵抗这种细菌（http://www.intrachem.it/home.cfm?lang=it&section=3&news=15）。
因此，本发明的目的在于确定一种能用于猕猴桃属植物以清除Psa细菌细胞的载菌量的方法，该方法通过使用臭氧，结合杀菌活性，并在随后使用温度来进行。
附图说明
图1：图中显示了作为本发明目的方法的应用。
在该原型中，一潜在感染PSA的猕猴桃花粉样品放置在容器中，容器装配有一臭氧生成器1、冷却器2、风扇3、散热器（radiator）4、低温探针5、高温探针6、用于阻止花粉粘在容器内突出部分的保护活板7、用试管进行测试的开口8、加入花粉及处理后收集花粉的托盘9。
在步骤的第一阶段，在容器内的猕猴桃花粉上吹空气，花粉经受42℃的温度30分钟。在第二阶段，用特定浓度（0.05ppm）的臭氧（O₃）处理4小时，温度5℃，最大相对湿度35%。
具体实施方式
用于潜在感染PSA的猕猴桃花粉样品的步骤。
以下将详细描述说明本发明的特征及优势：本方法涉及猕猴桃细菌性溃疡病原体 Pseudomonas syringae pv.actinidiae（Psa）细菌细胞的载菌量的清除，本方法应用于猕猴桃属的植物，特别地，应用于潜在感染Psa的花粉样品，这里仅通过示例代表本发明众多不同领域的应用。
该步骤涉及两个阶段。
阶段1：非化学步骤，在该步骤中使猕猴桃花粉在一给定的时间段（30分钟）处于特定的温度（42℃），期间在该样品上方吹空气。事实上，使猕猴桃花粉处于特定的温度并保持一给定的时间，其意义在于在处理过的猕猴桃花粉样品上实施抑菌作用。
阶段2：已经经历过阶段1，并且在样品上方继续吹空气，采用无色无味的物质（臭氧）处理该样品。在一给定时间段（4小时）内以及一特定环境条件下：温度5℃，相对空气湿度不大于35%，使用特定浓度（0.05ppm）的臭氧。
如果单独应用于同一植物样品上，则两个阶段（1和2）的抑菌效果将减弱。
以上的方法中，考虑到其他对于该步骤的成功来说是很重要的参数（处理时间、在臭氧中的温度和%相对湿度），依次应用两个阶段提高了温度和臭氧的杀菌作用。
关于花粉样品的处理，可以发展自组织系统（ad hoc system），例如，在种植到户外前，采用该系统来处理大量的冷冻新鲜的猕猴桃藤（young actinidia vines）。
参考文献
MAZZAGLIA A.,RENZI M.,TARATUFOLO M.C.,ROSSETTI A.,BALESTRA G.M.(2011).Tecniche di campo e nutrizione contro il cancro del kiwi.L'Informatore Agrario10,64-66;
FRATARCANGELI L,ROSSETTI A,MAZZAGLIA A,BALESTRA G.M.(2010).Il ruolo delrame nella lotta al cancro batterico del kiwi.INFORMATORE AGRARIO,vol.8;p.52-55,ISSN:0020689;
QUATTRUCCI A,RENZI M,ROSSETTI A,RICCI L,TARATUFOLO C,MAZZAGLIA A,BALESTRA G.M.(2010).Cancro batterico del kiwi verde:nuove strategie di controllo.L’informatore agrario16:53-58.INFORMATORE AGRARIO,vol.16;p.53-58,ISSN:0020-0689.