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1、10申请公布号CN104159602A43申请公布日20141119CN104159602A21申请号201380012817422申请日2013030861/608,39820120308US61/697,73020120906USA61K39/08200601A61K39/05200601A61K39/11620060171申请人诺华股份有限公司地址瑞士巴塞尔72发明人S布法力B宝德纳D欧哈根M辛格74专利代理机构上海专利商标事务所有限公司31100代理人余颖54发明名称加强疫苗的含佐剂制剂57摘要本发明通过在TDAP疫苗中包含TLR激动剂的方式改进了TDAP疫苗。该激动剂可提供更强的保护。
2、、更持久的保护和/或可降低达到特定免疫应答所需的抗原量。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014090586PCT国际申请的申请数据PCT/EP2013/0546722013030887PCT国际申请的公布数据WO2013/132041EN2013091251INTCL权利要求书2页说明书37页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书37页附图1页10申请公布号CN104159602ACN104159602A1/2页21一种免疫原性组合物,所述组合物包括白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳类毒素、铝盐佐剂和TLR激动剂,所述组合物包括相对于白喉类毒。
3、素过量的破伤风类毒素以LF单位计量。2如权利要求1所述的组合物,所述TLR激动剂是TLR4激动剂或TLR7激动剂。3如前述权利要求中任一项所述的组合物,所述TLR激动剂吸附至所述铝盐佐剂。4如前述权利要求中任一项所述的组合物,所述类毒素中的1、2或3种吸附至所述铝盐佐剂。5如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中AL浓度小于或等于05MG/ML。6如前述权利要求中任一项所述的组合物,所述铝盐是氢氧化铝。7如前述权利要求中任一项所述的组合物,所述TLR激动剂是本文中式“K”的化合物或其药学上可接受的盐。8如前述权利要求中任一项所述的组合物,所述TLR激动剂是化合物K2。9如前述权利要求中任一项所。
4、述的组合物,所述TLR激动剂包含至少一个吸附部分,所述吸附部分使该激动剂吸附至不溶性金属盐。10如权利要求9所述的组合物,所述吸附部分是磷酸盐/酯或膦酸盐/酯。11如前述权利要求中任一项所述的组合物,所述TLR激动剂具有说明书中定义的式C、D、E、F、G、H、I、II、J或K,或者是3DMPL。12如前述权利要求中任一项所述的组合物,所述TLR激动剂是参考文献13中定义的化合物1至102之一,或其药学上可接受的盐。13如前述权利要求中任一项所述的组合物,所述组合物包括组氨酸缓冲剂。14一种免疫原性组合物,所述组合物包括白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳类毒素和水包油乳液佐剂,所述组合物包括相对于。
5、白喉类毒素过量的破伤风类毒素以LF单位计量。15如权利要求14所述的组合物,所述乳液包括角鲨烯和/或聚山梨酯80。16如权利要求14或15所述的组合物,所述乳液中至少80数量的油滴直径小于220NM。17如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中白喉类毒素浓度小于或等于4LF/ML。18如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中破伤风类毒素浓度小于或等于9LF/ML。19如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中百日咳类毒素浓度小于或等于4G/ML。20如前述权利要求中任一项所述的组合物,所述组合物还包含三价灭活的脊髓灰质炎病毒抗原组分。21如前述权利要求中任一项所述的组合物,所述组合物的PH是61。
6、至79。22一种在对象中产生免疫应答的方法,所述方法包括给予所述对象如前述权利要求中任一项所述的组合物。23如权利要求22所述的方法,所述对象先前在儿童时接种过DTP疫苗。24一种免疫原性组合物,所述组合物包括无细胞百日咳组分,其中百日咳类毒素、丝权利要求书CN104159602A2/2页3状血细胞凝集素和百日咳杆菌粘附素的质量比为112。25如权利要求24所述的组合物,所述百日咳类毒素是PT9K/129G双突变体。26如权利要求24或25所述的组合物,所述组合物是单位剂型,且每单位剂量包括4G百日咳类毒素、4GFHA和8G百日咳杆菌粘附素。27如权利要求2426中任一项所述的组合物,所述组合。
7、物还包含白喉类毒素和破伤风类毒素。28如权利要求2427中任一项所述的组合物,所述组合物还包含铝盐佐剂。29如权利要求28所述的组合物,所述组合物包含吸附至所述铝盐的TLR激动剂。权利要求书CN104159602A1/37页4加强疫苗的含佐剂制剂0001本申请要求美国临时申请61/608,3982012年3月8日提交和61/697,7302012年9月6日提交的权益,这两项申请的全部内容通过引用纳入本文以用于所有目的。技术领域0002本发明涉及用于白喉、破伤风和百日咳的加强疫苗领域。背景技术0003目前有两种可用的青少年DTP加强疫苗BOOSTRIXTM和ADACELTM1。两种疫苗都含有白喉。
8、类毒素、破伤风类毒素和无细胞百日咳抗原。它们也可与灭活的脊髓灰质炎病毒联用BOOSTRIXPOLIOTM和ADACELPOLIOTM。所有这些疫苗均包括铝盐佐剂。0004总的来说,这些疫苗被称作TDAP疫苗,与儿童DTAP疫苗相对。一个共同特征是,相对于儿童疫苗,其抗原剂量较低,例如BOOSTRIXTM的白喉类毒素含量比INFANRIXTM产品低10倍,ADACELTM比DAPTACELTM低75倍。而且,抗原组分的比例也不同。具体而言,INFANRIXTM产品中白喉类毒素与破伤风类毒素的比例为251,而BOOSTRIXTM产品中为12,DAPTACELTM中为31而ADACELTM产品中为1。
9、25。因此,这些加强疫苗中的白喉类毒素剂量显著减少,包括绝对量和相对于破伤风类毒素含量的相对量。一些百日咳组分也不同于儿童疫苗中所见的水平,但儿童和青少年疫苗中的脊髓灰质炎病毒抗原水平是一致的。基于公共信息,组合物如下所示000500060007注00081PA剂量显示百日咳类毒素的量,然后FHA,然后百日咳杆菌粘附素G。00092ADACEL的PA组分也包含5G的2型和3型菌毛。00103IPV剂量表示1型,然后2型,然后3型的量以DU计量。说明书CN104159602A2/37页50011本发明的目的在于提供其他改良的适用于人的TDAP疫苗,在先前已接受儿童免疫的成人、青少年和年龄在四岁以。
10、上的儿童中作为加强疫苗使用。发明内容0012在第一方面,通过在现有的TDAP疫苗中包括TLR激动剂,本发明改进了现有的TDAP疫苗。该激动剂可提供更强的保护、更持续的保护和/或可降低达到特定免疫应答所需的抗原量。0013在第二方面,通过在现有的TDAP疫苗中加入水包油乳液作为佐剂,本发明改进了现有的TDAP疫苗。该乳液可相对于已知的TDAP疫苗再次提高保护。0014对于第一方面,本发明提供了一种免疫原性组合物,所述组合物包括白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳类毒素、铝盐佐剂和TLR激动剂,所述组合物包括相对于白喉类毒素过量的破伤风类毒素以LF单位计。0015理想情况下所述TLR激动剂是TLR4激。
11、动剂或TLR7激动剂。优选地,所述TLR激动剂和/或至少一种毒素吸附至所述铝盐佐剂。0016通过包括TLR激动剂,能够使组合物中含有比已知疫苗低的抗原量和/或铝量,但同时具有相当的免疫原性。0017理想情况下所述组合物具有一种或多种以下特征0018AL浓度小于或等于05MG/ML;0019白喉类毒素浓度小于或等于4LF/ML;0020破伤风类毒素浓度小于或等于9LF/ML;和/或0021百日咳类毒素浓度小于或等于4G/ML。0022例如,当免疫原性组合物是用于向患者给药的单位剂型如05ML体积时,其可具有一种或多种以下特征0023AL含量小于或等于0255MG;0024白喉类毒素含量小于或等于。
12、2LF;0025破伤风类毒素含量小于或等于45LF;和/或0026百日咳类毒素含量小于或等于2G。0027对于方面,本发明提供了一种免疫原性组合物,所述组合物包括白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳类毒素和水包油乳液佐剂,所述组合物包括相对于白喉类毒素过量的破伤风类毒素以LF单位计。0028理想情况下所述组合物具有一种或多种以下特征0029白喉类毒素浓度小于或等于4LF/ML;0030破伤风类毒素浓度小于或等于9LF/ML;和/或0031百日咳类毒素浓度小于或等于4G/ML。0032例如,当免疫原性组合物是用于向患者给药的单位剂型如05ML体积时,其可具有一种或多种以下特征0033白喉类毒素含量小。
13、于或等于2LF;0034破伤风类毒素含量小于或等于45LF;和/或0035百日咳类毒素含量小于或等于2G。说明书CN104159602A3/37页60036对于全部两个方面,本发明的组合物除白喉类毒素、破伤风类毒素和百日咳类毒素外均可包括抗原,例如其可包括灭活的脊髓灰质炎病毒IPV组分。0037铝盐0038TLR激动剂可吸附至不溶性铝盐以形成吸附的复合物作为TDAP免疫原的佐剂。此类铝盐在疫苗中应用已久。0039可用的铝盐包括但不限于氢氧化铝和磷酸铝佐剂。这类盐描述于例如参考文献2的第8和第9章以及参考文献3的第4章。优选在本发明中使用含有氢氧根离子的铝盐,原因在于这些氢氧根离子易于进行配体交。
14、换。因此,优选的用于吸收TLR激动剂的盐是氢氧化铝和/或羟基磷酸铝。这些盐具有表面羟基部分,所述表面羟基部分能易于进行与含磷基团例如磷酸盐/酯、膦酸盐/酯的配体交换,以提供稳定吸附。最优选氢氧化铝佐剂。0040一般称为“氢氧化铝”的佐剂通常是羟基氧化铝盐通常至少部分为晶体。可采用红外IR光谱将式ALOOH代表的羟基氧化铝与其它铝化合物如氢氧化铝ALOH3区别开,具体区别是1070CM1处存在吸收条带和30903100CM1处存在强肩参考文献2的第9章。半峰高处衍射带的宽度WHH反映了氢氧化铝佐剂的结晶程度,结晶不佳的颗粒因晶体尺寸较小而显示更强的谱线增宽。表面积随WHH的增加而增加,WHH值较。
15、大的佐剂显示较强的吸附抗原能力。氢氧化铝佐剂呈典型的纤维形貌如电子透射显微照片所见的,例如直径为约2NM的针状颗粒。氢氧化铝佐剂的PI通常约11,即在生理PH下佐剂本身具有表面正电荷。据报道,PH74时氢氧化铝佐剂的吸附容量为1826毫克蛋白质/毫克AL3。0041一般称为“磷酸铝”的佐剂通常是羟基磷酸铝,也常常含有少量硫酸盐即羟基磷酸硫酸铝。其可通过沉淀获得,沉淀期间的反应条件和浓度影响磷酸根取代所述盐中羟基的程度。羟基磷酸盐中PO4/AL摩尔比通常在0312之间。羟基磷酸盐因存在羟基而有别于严格的ALPO4。例如,3164CM1的IR光谱带例如,当加热至200时表明存在结构性羟基参考文献2。
16、的第9章。0042磷酸铝佐剂的PO4/AL摩尔比通常为03至12,优选为08至12,更优选为09501。磷酸铝通常是无定形的,尤其是羟基磷酸盐。典型的佐剂是PO4/AL摩尔比为084至092的无定形羟基磷酸铝,包含06MGAL/ML。磷酸铝通常是颗粒如在透射电子显微镜照片上观察到的板状形态,主要颗粒在50NM范围内。任意抗原吸附后颗粒直径一般是0520M如约510M。据报道,PH74时磷酸铝佐剂的吸附容量为0715MG蛋白质/MGAL3。0043磷酸铝的零电点PZC与磷酸根取代羟基的程度逆相关,且这种取代程度可根据用于通过沉淀制备盐的反应条件和反应物浓度而变化。也通过改变溶液中游离磷酸根离子的。
17、浓度更多磷酸根更多酸性PZC或加入缓冲剂如组氨酸缓冲剂使PZC碱性更强来改变PZC。本发明所用的磷酸铝的PZC通常为40至70,更优选为50至65,例如约为57。0044在溶液中,磷酸铝佐剂和氢氧化铝佐剂都易于形成直径为110M的稳定多孔聚集体4。0045包含吸附至铝盐的TLR激动剂的组合物还可包括缓冲剂例如,磷酸盐或组氨酸说明书CN104159602A4/37页7或TRIS缓冲剂。然而,当该组合物包括磷酸盐缓冲剂时,优选所述缓冲剂中磷酸根离子的浓度应低于50MM,例如小于40MM、小于30MM、小于20MM、小于10MM或小于5MM,或115MM。组氨酸缓冲剂优选例如是150MM、525MM。
18、或约10MM。0046由于可用于本发明的吸附性铝盐的不溶性,包含吸附的TLR激动剂的组合物一般会是具有浑浊外观的悬浮液。这能够遮蔽污染性细菌的生长,因而本发明的组合物可包括防腐剂例如硫柳汞或2苯氧乙醇。组合物优选应基本不含如小于10G/ML含汞物质,如硫柳汞。更优选不含汞的组合物。也可使用不含防腐剂的组合物。0047组合物可包括氢氧化铝和磷酸铝的混合物,而TLR激动剂可吸附至这两种盐之一或二者。0048给予患者的组合物中AL的浓度优选小于05MG/ML,例如小于或等于04MG/ML、小于或等于03MG/ML、小于或等于02MG/ML、小于或等于01MG/ML等。因为含TLR激动剂能够改善铝盐的。
19、佐剂效应,从而本发明优选允许较低量的AL/剂量,因而本发明的组合物可优选包含10至250G的AL/单位剂量。目前的TDAP疫苗包括至少330GAL/剂量。浓缩形式的本发明的组合物可具有的AL浓度是10至500G/ML,例如10300G/ML、10200G/ML或10100G/ML。0049通常,TLR激动剂与AL的重量比会低于51,例如低于41、低于31、低于21或低于11。因此,例如,对于AL3浓度为05MG/ML的组合物,TLR激动剂的最大浓度会是25MG/ML。但也可使用较高或较低的水平。质量低于AL的TLR激动剂是最普遍的,例如,每剂量中含有100G的TLR激动剂和02MGAL等。例如。
20、,FENDRIX产品中每个剂量包括50G的3DMPL和05MGAL。0050优选地在组合物中至少50以质量计例如大于或等于60、大于或等于70、大于或等于80、大于或等于85、大于或等于90、大于或等于92、大于或等于94、大于或等于95、大于或等于96、大于或等于97、大于或等于98、大于或等于99或甚至100的TLR激动剂吸附在铝盐上。0051TLR激动剂0052在其第一方面,本发明的组合物包括TLR激动剂,即可使TOLL样受体促效的化合物。最优选地,TLR激动剂是人TLR的激动剂。所述TLR激动剂能够激活TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TL。
21、R9或TLR11中的任意一种;优选其能够激活人TLR4或人TLR7。0053可通过标准试验来测定针对任何特定TOLL样受体的激动剂活性。公司如茵姆基因公司IMGENEX和英杰公司INVIVOGEN供应稳定地共同转染了人TLR基因和NFB的细胞系,加上合适的报告基因以供检测TLR激活通路。其为灵敏的、宽工作范围动力学而设计,并且能够用于高通量筛选。此类细胞系中通常存在一种或两种特异性TLR的组成型表达。也可见参考文献5。多种TLR激动剂是本领域已知的,例如参考文献6描述了某些脂肽分子是TLR2激动剂,参考文献7至10各自描述了TLR7的小分子激动剂种类,而参考文献11和12描述了用于治疗疾病的T。
22、LR7和TLR8激动剂。0054本发明所用的TLR激动剂理想情况下包括至少一个吸附部分。TLR激动剂中所包括的此类部分使其能够吸附至不溶性铝盐例如,通过配体交换或任意其它合适的机制并改善其免疫原性性质13。含磷的吸附部分是尤其有用的,所以吸附部分可包含磷酸盐说明书CN104159602A5/37页8/酯、膦酸盐/酯、次磷酸盐/酯、亚磷酸盐/酯、次亚磷酸盐/酯PHOSPHINITE等。0055优选地,所述TLR激动剂包括至少一种膦酸盐/酯基团。0056因此,在优选的实施方式中,本发明的组合物包括含膦酸盐酯基团的TLR激动剂更优选TLR7激动剂。膦酸盐酯基团可使所述激动剂吸附至不溶性铝盐13。00。
23、57本发明可用的TLR激动剂可包括单一吸附部分,或可包括超过一个例如2至15个吸附部分。化合物通常会包含1、2或3个吸附部分。0058本发明可用的含磷TLR激动剂可由式A1表示00590060其中0061RX和RY独立地选自H和C1C6烷基;0062X选自共价键、O和NH;0063Y选自共价键、O、CO、S和NH;0064L是接头,例如,选自C1C6亚烷基、C1C6亚烯基、亚芳基、杂亚芳基、C1C6亚烷基氧基和CH2POQCH2P,其各自任选地被1至4个取代基取代,所述取代基独立地选自卤素、OH、C1C4烷基、OPOOH2和POOH2;0065各P独立地选自1、2、3、4、5和6;0066Q选。
24、自1、2、3和4;0067N选自1、2和3;并且0068A是TLR激动剂部分。0069在一个实施方式中,式A1的TLR激动剂如下RX和RY是H;X是O;L选自C1C6亚烷基和CH2POQCH2P,其各自任选地被1至2个卤素原子取代;P选自1、2和3;Q选自1和2;且N是1。因此,在这些实施方式中,所述吸附部分包括磷酸盐/酯基团。0070在其它实施方式中,式A1的TLR激动剂如下RX和RY是H;X是共价键;L选自C1C6亚烷基和CH2POQCH2P,其各自任选地被1至2个卤素原子取代;P选自1、2或3;Q选自1或2;且N是1。因此,在这些实施方式中,所述吸附部分包含膦酸盐/酯基团。0071式A1。
25、中有用的“A”部分包括但不限于任意下述化合物的基团,如本文中定义或如参考文献413和1448中公开0072说明书CN104159602A6/37页900730074在一些实施方式中,所述TLR激动剂部分“A”的分子量低于1000DA。在一些实施方式中,式A1的TLR激动剂的分子量低于1000DA。0075优选的TLR激动剂是水溶性的。因此,其在PH7、25、1个大气压强下与水在水性缓冲剂中混合时能够形成均匀溶液,以获得浓度为至少50G/ML的溶液。因此,术语“水溶性的”排除了在这些条件下仅微溶的物质。0076可用的TLR激动剂包括如下文中更详细描述的具有式C、D、E、F、G、H、I、II、J或。
26、K的那些。其他有用的TLR激动剂是参考文献13中定义的化合物1至102。优选的TLR7激动剂具有式K,如下文鉴定的化合物K2。这些可用作K2的盐,说明书CN104159602A7/37页10例如K2的精氨酸盐。0077优选的TLR4激动剂是单磷酰脂质AMPL的类似物,如下文中详述。例如,有用的TLR4激动剂是3DMPL。0078本发明的组合物可包括超过一种TLR激动剂。这两种激动剂彼此不同,并且各自能够靶向相同的TLR或不同的TLR。两种激动剂均可吸附至铝盐。0079式C、D、E和HTLR7激动剂0080所述TLR激动剂可以是式C、D、E和H的任何化合物008100820083其中0084AP。
27、3选自H、C1C6烷基、CF3,和CH2POQCH2POS与YLXPOORXORY;且P4选自H、C1C6烷基、C1C6烷芳基和YLXPOORXORY;前提是P3和P4中至少一个是YLXPOORXORY,0085BP5选自H、C1C6烷基和YLXPOORXORY;P6选自H、C1C6烷基其各自任选地被选自C1C4烷基和OH的1至3个取代基取代以及YLXPOORXORY;且P7选自H、C1C6烷基、CH2POQCH2POS、NHC1C6烷基和YLXPOORXORY;前提是P5、P6和P7中至少一个是YLXPOORXORY;0086CP8选自H、C1C6烷基、C1C6烷氧基、NHC1C6烷基,其各。
28、自任选地被OH和YLXPOORXORY取代;P9和P10各自独立地选自H、C1C6烷基、C1C6烷氧基、NHC1C6烷基其各自任选地被OH和C1C6烷基取代以及YLXPOORXORY;前提是P8、P9或P10中至少一个是YLXPOORXORY;说明书CN104159602A108/37页110087DP16和各P18各自独立地选自H、C1C6烷基和YLXPOORXORY;P17选自H、C1C6烷基、芳基、杂芳基、C1C6烷基芳基、C1C6烷基杂芳基、C1C6烷基芳基YLXPOORXORY和YLXPOORXORY,其各自任选地被选自C1C6烷基或杂环基的1至2个取代基取代,前提是P16、P17或。
29、P18中至少一个包含YLXPOORXORY部分;0088RX和RY独立地选自H和C1C6烷基;0089RC、RD和RH各自独立地选自H和C1C6烷基;0090XC选自CH和N;0091RE选自H、C1C6烷基、C1C6烷氧基、COC1C6烷基、卤素和CH2POQCH2P;0092XE选自共价键、CRE2RE3和NRE4;0093RE2、RE3和RE4独立地选自H和C1C6烷基;0094XH1XH2选自CRH2RH3、CRH2RH3CRH2RH3、COCRH2RH3、COCRH2RH3、CRH2RH3CO、NRH4CO、CONRH4、CRH2RH3SO2和CRH2CRH2;0095RH2、RH3。
30、和RH4各自独立地选自H、C1C6烷基和P18;0096XH3选自N和CN;0097X选自共价键、O和NH;0098Y选自共价键、O、CO、S和NH;0099L选自共价键C1C6亚烷基、C1C6亚烯基、亚芳基、杂亚芳基、C1C6亚烷基氧基和CH2POQCH2P,其各自任选地被1至4个取代基取代,所述取代基独立地选自卤素、OH、C1C4烷基、OPOOH2和POOH2;0100M选自0或1;0101各P独立地选自1、2、3、4、5和6;0102Q选自1、2、3和4;且0103S选自0和1。0104式GTLR8激动剂0105所述TLR激动剂可以是式G化合物01060107其中0108P11选自H、C。
31、1C6烷基、C1C6烷氧基、NRVRW和YLXPOORXORY;0109P12选自H、C1C6烷基、任选被CONRVRW取代的芳基和YLXPOORXORY;0110P13、P14和P15独立地选自H、C1C6烷基、C1C6烷氧基和YLXPOORXORY;0111前提是P11、P12、P13、P14或P15中至少一个是YLXPOORXORY;说明书CN104159602A119/37页120112RV和RW独立地选自H、C1C6烷基或与其所连接的氮原子一同形成4至7元杂环;0113XG选自C、CH和N;0114代表任选的双键,其中若是双键则XG是C;且0115RG选自H和C1C6烷基;0116X。
32、选自共价键、O和NH;0117Y选自共价键、O、CO、S和NH;0118L选自共价键C1C6亚烷基、C1C6亚烯基、亚芳基、杂亚芳基、C1C6亚烷基氧基和CH2POQCH2P,其各自任选地被1至4个取代基取代,所述取代基独立地选自卤素、OH、C1C4烷基、OPOOH2和POOH2;0119各P独立地选自1、2、3、4、5和6,且0120Q选自1、2、3和4。0121式I和IITLR7激动剂80122所述TLR激动剂可以是式I或式II化合物01230124其中0125Z是NH2或OH;0126X1是亚烷基、经取代的亚烷基、亚烯基、经取代的亚烯基、亚炔基、经取代的亚炔基、亚碳环基、经取代的亚碳环基。
33、、杂亚碳环基、或经取代的杂亚碳环基;0127L1是共价键、亚芳基、经取代的亚芳基、杂亚碳环基、经取代的杂亚碳环基、亚碳环基、经取代的亚碳环基、S、SO、SO2、NR5或O0128X2是共价键、亚烷基或经取代的亚烷基;0129L2是NR5、NR5CO、O、S、SO、SO2或共价键;0130R3是H、烷基、经取代的烷基、杂烷基、经取代的杂烷基、烯基、经取代的烯基、芳基、经取代的芳基、芳基烷基、经取代的芳基烷基、杂环基、经取代的杂环基、杂环基烷基或经取代的杂环基烷基;0131Y1和Y2各自独立地是共价键、O或NR5;或Y1R1和Y2R2各自独立地是ONCR6R7;0132R1和R2各自独立地是H、烷。
34、基、经取代的烷基、碳环基、经取代的碳环基、杂环基、经取代的杂环基、烯基、经取代的烯基、炔基、经取代的炔基、芳基烷基、经取代的芳基烷基、杂环基烷基、经取代的杂环基烷基、亚烷基COOR5、经取代的说明书CN104159602A1210/37页13亚烷基COOR5、亚烷基OCOR5、经取代的亚烷基OCOR5、亚烷基OCOOR5或经取代的亚烷基OCOOR50133R4是H、卤素、OH、O烷基、O亚烷基OCOOR5、OCOOR5、SH或NHR5;0134R5、R6和R7各自独立地是H、烷基、经取代的烷基、碳环基、经取代的碳环基、杂环基、经取代的杂环基、烯基、经取代的烯基、炔基、经取代的炔基、芳基烷基、经。
35、取代的芳基烷基、杂环基烷基或经取代的杂环基烷基。0135式JTLR2激动剂140136所述TLR激动剂可以是式J化合物01370138其中0139R1是H、COC7C18烷基或COC1C6烷基;0140R2是C7C18烷基;0141R3是C7C18烷基;0142L1是CH2OCO、CH2O、CH2NR7CO或CH2OCONR7;0143L2是OCO、O、NR7CO或OCONR7;0144R4是L3R5或L4R5;0145R5是NR72、OR7、POOR72、COOR7、NR7COL3R8、NR7COL4R8、OL3R6、CONR7L3R8、CONR7L4R8、SO2OR7、OSO2OR7、C1。
36、C6烷基、C6芳基、C10芳基、C14芳基、包含选自O、S和N的1至3个杂原子的5至14元环杂芳基,包含选自O、S和N的1至3个杂原子的C3C8环烷基或5至6元环杂环烷基,其中R5的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基各自未经取代,或者R5的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基各自被独立地选自OR9、OL3R6、OL4R6、OR7和COOR7的1至3个取代基取代;0146L3是C1C10亚烷基,其中L3的C1C10亚烷基未经取代,或者L3的C1C10亚烷基被1至4个R6基团取代,或者L3的C1C10亚烷基被相同碳原子上的两个C1C6烷基基团取代,所述两个C1C6烷基基团和其连接的碳原子一同形成C3C8环烷。
37、基;0147L4是CR7R7POQCR10R10P或CR11R11CR7R7POQCR10R10P,其中各R11是C1C6烷基基团,所述C1C6烷基基团与其相连的碳原子一同形成C3C8环烷基;0148各R6独立地选自卤素、C1C6烷基、被12个羟基基团取代的C1C6烷基、OR7、NR72、COOH、CONR72、POOR72、C6芳基、C10芳基和C14芳基;0149各R7独立地选自H和C1C6烷基;0150R8选自SR7、COOH、POOR72和包含选自O和N的1至3个杂原子的5至6元杂环烷基;0151R9是苯基;说明书CN104159602A1311/37页140152各R10独立地选自H。
38、和卤素;0153各P独立地选自1、2、3、4、5和6,以及0154Q是1、2、3或4。0155优选地,R5是POOR72、NR7COL3POOR72、NR7COL4POOR72、OL3POOR72、CONR7L3POOR72或CONR7L4POOR72。0156在J的一些实施方式中,R1是H。在J的其它实施方式中,R1是COC15烷基;0157在J的一些实施方式中IL1是CH2OCO且L2是OCO、O、NR7CO或OCONR7;或者II或L1是CH2O且L2是OCO、O、NR7CO或OCONR7;或者IIIL1是CH2NR7CO且L2是OCO、O、NR7CO或OCONR7;或者IVL1是CH2。
39、OCONR7且L2是OCO、O、NR7CO或OCONR7。0158在J的一些实施方式中IL1是CH2OCO且L2是OCO;或者IIL1是CH2O且L2是O;或者IIIL1是CH2O且L2是NHCO;或者IVL1是CH2OCONH且L2是OCONH。0159在J的一些实施方式中,IR2是C11烷基且R3是C11烷基;或者IIR2是C16烷基且R3是C16烷基;或者IIIR2是C16烷基且R3是C11烷基;或者IVR2是C12烷基且R3是C12烷基;或者VR2是C7烷基且R3是C7烷基;或者VIR2是C9烷基且R3是C9烷基;或者VIIR2是C8烷基且R3是C8烷基;或者VIIIR2是C13烷基且。
40、R3是C13烷基;或者IXR2是C12烷基且R3是C11烷基;或者XR2是C12烷基且R3是C12烷基;或者XIR2是C10烷基且R3是C10烷基;或者XIIR2是C15烷基且R3是C15烷基。0160在J的一些实施方式中,R2是C11烷基且R3是C11烷基。0161在J的一些实施方式中,L3是C1C10亚烷基,其中L3的C1C10亚烷基未经取代或被1至4个R6基团取代。0162在J的一些实施方式中L4是CR7R7POQCR10R10P;各R10独立地选自H和F;且P各自独立地选自2、3和4。0163在J的一些实施方式中,各R6独立地选自甲基、乙基、异丙基、异丁基、CH2OH、OH、F、NH2。
41、、COOH、CONH2、POOH2和苯基。0164在J的一些实施方式中,各R7独立地选自H、甲基和乙基。0165TLR4激动剂0166本发明的组合物可包括TLR4激动剂,且最优选是人TLR4的激动剂。TLR4由先天性免疫系统的细胞表达,包括常规的树突细胞和巨噬细胞15。经由TLR4的触发诱导使用MYD88和TRIF依赖通路的信号级联反应,分别导致NFB和IRF3/7激活。TLR4激活通常诱导大量IL12P70生成并显著增强TH1型细胞和体液免疫应答。0167多种有用的TLR4激动剂是本领域已知的,其中许多是内毒素或脂多糖LPS的类似物。例如,所述TLR4激动剂可以是0168I3DMPL即3O去。
42、酰化的单磷酰基脂质A;也称为3去氧酰化单磷酰基脂质A或3O去酰化4单磷酰基脂质A。该内毒素的单磷酰基脂质A部分的衍生物含有葡糖胺还原性末端的3位脱酰化位点。其已由明尼苏达沙门菌SALMONELLAMINNESOTA说明书CN104159602A1412/37页15的无庚糖突变体制备,并且在化学上类似于脂质A但缺少酸不稳定性的磷酰基基团和碱不稳定性的酰基基团。3DMPL的制备最初在参考文献16中有描述,并且该产品已被科雷莎公司CORIXACORPORATION生产并出售。其存在于GSK公司的“AS04”佐剂中。更多详细情况请见参考文献17至20。0169II吡喃葡糖基脂质AGLA21或其铵盐01。
43、700171III氨基烷基氨基葡糖苷磷酸衍生物,如RC529或CRX5242224。RC529和CRX524具有如下结构,区别在于其R2基团01720173IV含有连接于含磷酸无环主链的脂质的化合物,如TLR4拮抗剂E556425,26说明书CN104159602A1513/37页1601740175V如参考文献27中定义的式I、II或III的混合物,或其盐,如化合物ER803058、ER803732、ER804053、ER804058、ER804059、ER804442、ER804680、ER803022、ER804764或ER804057。ER804057也被称为E6020,其具有如下结构。
44、01760177而ER803022具有如下结构01780179VI参考文献28所公开的多肽配体中的一种。0180本发明可采用任何这些TLR4激动剂。说明书CN104159602A1614/37页170181本发明的组合物可包括吸附所述TLR4激动剂的铝盐。具有吸附性质的TLR4激动剂通常包含含磷部分,该部分可以与铝盐上的表面基团例如表面羟基基团进行配体交换,尤其是具有表面羟基基团的盐。因此,有用的TLR4激动剂可包括磷酸盐/酯、膦酸盐/酯、次膦酸盐/酯、亚膦酸盐/酯、次亚膦酸盐/酯PHOSPHINITE、磷酸盐/酯等。优选的TLR4激动剂包括至少一种磷酸盐/酯基团13,例如上文所列激动剂I至V。
45、。0182用于本发明的优选TLR4激动剂是3DMPL。其可吸附至磷酸铝佐剂、氢氧化铝佐剂或两者的混合物29。01833DMPL可以是酰基化不同的相关分子如具有3、4、5或6个酰基链,它们的长度可以不同的混合物的形式。两个葡糖胺也称为2脱氧2氨基葡萄糖单糖在其2位即2和2位碳上N酰基化,3位上也有O酰基化。连接至碳2的基团具有下式NHCOCH2CR1R1。连接至碳2的基团具有下式NHCOCH2CR2R2。连接至碳3的基团具有下式OCOCH2CR3R3。代表性结构为01840185基团R1、R2和R3各自独立地是CH2NCH3。N值优选为8至16,更优选为9至12,最优选为10。0186基团R1、。
46、R2和R3各自独立地是AH;BOH;或COCOR4,其中R4是H或CH2MCH3,其中M值优选为8至16,更优选为10、12或14。在2位上,M优选为14。在2位上,M优选为10。在3位上,M优选为12。因此基团R1、R2和R3优选为来自十二烷酸、十四烷酸或十六烷酸的O酰基。0187当R1、R2和R3均为H时,3DMPL仅含有3条酰基链2、2和3位上各有一条。当R1、R2和R3中仅有两个是H时,3DMPL可含有4条酰基链。当R1、R2和R3中仅有一个是H时,3DMPL可含有5条酰基链。当R1、R2和R3中无一是H时,3DMPL可含有6条酰基链。本发明所用的3DMPL可以是含有3至6条酰基链的这。
47、些形式的混合物,但混合物中优选包含具有6条酰基链的3DMPL,具体而言,以保证所述6条酰基链的形式占3DMPL总重的至少10,例如,大于或等于20、大于或等于30、大于或等于40、大于或等于50或更多。已发现具有6条酰基链的3DMPL是佐剂活性最高的形式。说明书CN104159602A1715/37页180188因此,可用于本发明的3DMPL的最优选形式是01890190以混合物的形式使用3DMPL时,3DMPL在本发明组合物中的含量或浓度指混合物中所包含的合并的3DMPL物质。0191典型的组合物包括浓度为25G/ML至200G/ML的3DMPL,例如浓度为50150G/ML、75125G/。
48、ML、90110G/ML或约100G/ML的组合物。通常采用2575G的3DMPL/剂量,例如4555G,或约50G3DMPL/剂量。0192在水性条件下,3DMPL可形成不同大小的胶束聚集体或颗粒,如直径小于150NM或大于500NM的胶束聚集体或颗粒。胶束聚集体或颗粒中的一种或两种可用于本发明,可通过常规试验选择较好的颗粒。本发明优选采用较小颗粒例如小到足以产生澄清的3DMPL水性悬液,因为其具有优良的活性30。优选的颗粒的平均直径小于150NM,更优选地小于120NM,甚至可以小于100NM。然而,在大多数情况下,平均直径不小于50NM。当说明书CN104159602A1816/37页1。
49、93DMPL吸附至铝盐时,可能无法直接测定3DMPL的粒度,但可以在发生吸附之前测定粒度。可通过动态光散射的常规技术来评估粒径,其揭示平均粒径。当颗粒的直径据称为XNM时,粒径通常分布在此平均值附近,但数量上至少50例如大于或等于60、大于或等于70、大于或等于80、大于或等于90或更多颗粒的直径在X25的范围内。0193式K310194所述TLR激动剂可以是式K化合物01950196其中0197R1是H、C1C6烷基、CR52OH、L1R5、L1R6、L2R5、L2R6、OL2R5或OL2R6;0198L1是CO或O;0199L2是C1C6亚烷基、C2C6亚烯基、亚芳基、杂亚芳基或CR4R4POQCH2P,且L2的C1C6亚烷基和C2C6亚烯基可任选被1至4个氟基团取代;0200各L3独立地选自C1C6亚烷基和CR4R4POQCH2P,其中L3的C1C6亚烷基可任选被1至4个氟基团取代;0201L4是亚芳基或杂亚芳基;0202R2是H或C1C6烷基;0203R3选自C1C4烷基、L3R5、L1R5、L3R7、L。