新化合物结构及制备方法与用途
技术领域
本发明涉及新化合物、含有该新化合物的药物组合物及其制备方法以及该新化合物在制备抗肿瘤药物和治疗肿瘤中的应用。
背景技术
恶性肿瘤是目前威胁人类健康的三大“杀手”之一。据统计，自2003年以来全世界每年癌症发病为1600万人，死亡为1000万人。中国每年癌症发病为160万人，死亡为100万人，而且每年还在不断增加，癌症防治任重道远。目前，癌症治疗的手段主要是化疗、放疗、手术和生物方法治疗。化疗与放疗在杀死肿瘤细胞的同时也损伤正常细胞，严重影响患者的生存和生活质量。因此，寻找高效低毒的肿瘤治疗药物，成为当前肿瘤防治领域的重中之重。
上世纪七十年代始研究人员对豆科槐属植物苦参(Sophora flavescens Alt.)、苦豆子(Sophora alopecuroides L.)等进行了系统研究，从中发现了苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱等含喹喏里西啶结构的生物碱化合物。槐定碱(sophoridine)为苦参碱的一种立体异构体，其基本结构是由3价氮原子形成稠合的哌啶环，分子量为248，分子式为C15H24N2O：
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具有抗炎、抗菌、保护心肌、正性肌力、抗肿瘤、抗病毒作用(参见：余建强等.槐定碱、氧化槐定碱的药理学研究进展，宁夏医学院学报，2005，27(1)：78-80；李雪梅等，槐定的抗癌作用，中国药理学报，1987，8(2)：153-158；中国专利申请93100881.6和中国专利申请03137058.6等)；氧化槐定碱也被报道有治疗恶性肿瘤的作用(参见：中国专利申请200510064670.0和中国专利申请200610013607.9等)。
虽然槐定碱具有抗肿瘤作用，但其有一定的神经系统毒性。为了发现药效强，毒性低的新型抗肿瘤药物，对已有疗效的抗肿瘤药物进行结构修饰或改造，是一条简便快捷的途径。天然产物结构的修饰或改造，是通过化学和生物学等方法对活性天然产物的结构进行衍生化、转化和活性测定比较等研究，确定其结构中的活性和毒性部位；使经过结构改造后的新化合物毒性降低，活性和生物利用度提高，在临床应用中更加安全有效。因此，本发明人尝试以槐定碱为起始原料，经过结构修饰，创制出毒性低活性强的新型抗肿瘤药，由此完成了本发明。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供槐定生物碱(sophoridine)经结构修饰得到的全新结构的式(I)化合物：
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及其立体异构体或立体异构体的混合物，它们的药学上可接受的盐或前体药物形式，以及它们的溶剂化物；式中R1、R2、R3和R4的定义见下文。该化合物具有细胞增殖抑制以及直接杀伤癌细胞等抗肿瘤活性，可用于治疗肿瘤和制备抗肿瘤药物。
因此，本发明的一个方面是提供具有所述式(I)结构的一类新化合物。
本发明的另一方面是提供所述式(I)化合物的制备方法。
本发明的再一个方面是提供含有所述式(I)化合物的药物组合物和药用制剂。
本发明的又一个方面是提供所述式(I)化合物在制备用于治疗和/或预防肿瘤的药物中的应用。
本发明的再一个方面是提供式(I)化合物作为体外抑制细胞增殖的低分子生物探针的应用。
本发明的又一个方面是提供治疗和/或预防哺乳动物肿瘤的方法，包括将治疗或预防有效量的本发明式(I)化合物给予需要此治疗或预防的哺乳动物。
在上述本发明的式(I)化合物中：
R1选自H、OH、SH，或者C1-C10烷基、C2-C10链烯基、C2-C10炔基、C3-C8环烷基或C4-C12环烷基烷基，或者C6-C10芳基或C4-C10杂环基，其中每个C1-C10烷基、C3-C6环烷基、C4-C12环烷基烷基、C6-C10芳基和C4-C10杂环基任选被1、2或3个独立选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、C3-C6环烷基、卤素、C1-C4卤代烷基、CN、OR5、SH、S(O)nR5、COR5、NR6COR5、N(COR5)2、NR6CONR7R5、NR6CO2R5、CONR7R5、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基亚硫酰基以及C1-C6烷基磺酰基，而其中的OH和SH各自独立地任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C10烷基、C(O)C3-C8环烷基、C1-C10烷基、C2-C10链烯基和C2-C10炔基；
R2选自＝O、＝S、H、OH、SH，或者C1-C10烷基、C2-C10链烯基、C2-C10炔基、C3-C8环烷基或C4-C12环烷基烷基、C6-C10芳基或C4-C10杂环基、NO2、卤素、CN、C1-C4卤代烷基、NR8R9、NR6COR9、NR6CO2R9、COR9、OR9、CONR8R9、CON(OR10)R9、CO2R9或S(O)nR9，其中每个C1-C10烷基、C3-C6环烷基、C4-C12环烷基烷基、C6-C10芳基和C4-C10杂环基任选被1、2或3个独立选自下列的取代基取代：C1-C4烷基、NO2、卤素、CN、NR8N9、NR6COR9、NR6CO2R9、COR9、OR9、CONR8R9、CO2R9、CON(OR10)R9或S(O)nR9，而其中的OH和SH各自独立地任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C10烷基、C(O)C3-C8环烷基、C1-C10烷基、C2-C10链烯基和C2-C10炔基；
R3不存在(R3不存在时，所连氮为叔氮)或者选自OH、SH或为N-氧化物，其中的OH和SH各自独立地任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C10烷基、C(O)C3-C8环烷基、C1-C10烷基、C2-C10链烯和C2-C10炔基；
R4为O-、OR10或SH，当R4为O-时，该O-与式(I)中的N+形成内盐；并且OR10(当R10为H时)和SH各自独立地任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C10烷基、C(O)C3-C8环烷基、C1-C10烷基、C2-C10链烯基和C2-C10炔基；
R5和R7各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C4-C16环烷基烷基，但是S(O)nR5中的R5不能为H；
R6选自氢或C1-C4烷基；
R8、R9选自H；以及C1-C4烷基或C3-C6环烷基；
R10选自H、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基或C4-C10杂环基；以及
n为0、1或2。
本发明包括式(1)化合物的所有药学上可接受的盐。所述“药学上可接受的盐”是指在药学上无毒的酸加成盐和碱加成盐。这些盐可以按照本领域的常规方法，使用可商购的试剂制备。所述酸加成盐为式(1)化合物与合适的无机酸或者有机酸形成的盐，包括例如氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、碳酸盐、碳酸氢盐、亚硫酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、草酸盐、丙二酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、甲苯甲酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、双羟萘酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、葡萄糖酸盐、和乳糖酸盐等。所述碱加成盐为式(1)化合物与合适的无机碱或者有机碱形成的盐，包括例如与碱金属、碱土金属、季铵阳离子形成的盐，如钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐、四甲基季铵盐、四乙基季铵盐等；胺盐，包括与氨(NH3)、伯胺、仲胺或叔胺形成的盐，如：甲胺盐、二甲胺盐、三甲胺盐、三乙胺盐、乙胺盐等。
本发明也包括式(1)化合物的所有溶剂化物形式，尤其是水合物。溶剂化物对化合物的生理活性或毒性没有明显影响，因此起药理学同等作用。溶剂化物可以以化学计算量形成，或可以由外来的溶剂或两者相结合形成。一种类型的溶剂化物是水合物，一些水合形式包括半水合物、一水合物、二水合物、三水合物等。
一些本发明的式(I)化合物以立体异构体形式存在。本发明包括式(I)化合物的所有立体异构形式，包括对映体和非对映体，以及立体异构体的混合物。制备和分离立体异构体的方法在本领域是已知的。
本发明还包括式(I)化合物的前体药物形式。
在本发明化合物的一个实施方案中，R1选自H、OH、SH，或者C1-C6烷基、C2-C6链烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基或C4-C8环烷基烷基，或者C6-C10芳基或C4-C10杂环基，其中每个C1-C10烷基、C3-C6环烷基、C4-C12环烷基烷基、C6-C10芳基和C4-C10杂环基任选被1或2个独立选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、C3-C6环烷基、卤素、C1-C4卤代烷基、CN、OR5、SH、S(O)nR5、COR5、NR6COR5、N(COR5)2、NR6CONR7R5、NR6CO2R5、CONR7R5、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基亚硫酰基以及C1-C6烷基磺酰基，而其中的OH和SH各自独立地任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C6烷基、C(O)C3-C6环烷基、C1-C6烷基、C2-C6链烯基和C2-C6炔基；
R2选自＝O、＝S、H、OH、SH，或者C1-C6烷基、C2-C6链烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基或C4-C8环烷基烷基、C6-C10芳基或C4-C10杂环基、NO2、卤素、CN、C1-C4卤代烷基、NR8R9、NR6COR9、NR6CO2R9、COR9、OR9、CONR8R9、CON(OR10)R9、CO2R9或S(O)nR9，其中每个C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C4-C8环烷基烷基、C6-C10芳基或C4-C10杂环基任选被1或2个独立选自下列的取代基取代：C1-C4烷基、NO2、卤素、CN、NR8N9、NR6COR9、NR6CO2R9、COR9、OR9、CONR8R9、CO2R9、CON(OR10)R9或S(O)nR9，而其中的OH和SH各自独立地任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C6烷基、C(O)C3-C6环烷基、C1-C6烷基、C2-C6链烯基和C2-C6炔基；
R3不存在(R3不存在时，所连氮为叔氮)或者选自OH、SH或为N-氧化物，其中的OH和SH各自独立地任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C6烷基、C(O)C3-C6环烷基、C1-C6烷基、C2-C6链烯和C2-C6炔基；
R4选自O-、OR10或SH；当R4为O-时，该O-与式(I)中的N+形成内盐；并且OR10(当R10为H时)和SH各自独立地任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C6烷基、C(O)C3-C6环烷基、C1-C6烷基、C2-C6链烯基和C2-C6炔基；
R5和R7各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C4-C8环烷基烷基，但是S(O)nR5中的R5不能为H；
R6选自H或C1-C4烷基；
R8、R9选自H；以及C1-C4烷基或C3-C6环烷基；
R10选自H、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基或C4-C10杂环基；
n为0、1或2。
在本发明化合物的另一个实施方案中，
R1为C1-C6烷基，优选-CH3，-CH2CH3，-CH2CH2CH3，更优选-CH3；C2-C6链烯基，优选-CH＝CH2，-CH＝CHCH3，-CH2CH＝CH2，更优选-CH＝CH2；C2-C6炔基，优选-C≡CH，-CH2C≡CH，更优选-C≡CH；R2为C1-C6烷基，优选-CH3，-CH2CH3，-CH2CH2CH3，更优选-CH2CH3；C2-C6链烯基，优选-CH＝CH2，-CH＝CHCH3，-CH2CH＝CH2，更优选-CH＝CHCH3；C2-C6炔基，优选-C≡CH，-CH2C≡CH，更优选-CH2C≡CH；R3为OH和R4为O-或OH，且其中的OH任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C6烷基、C(O)C3-C6环烷基、C1-C6烷基、C2-C6链烯和C2-C6炔基。
本发明化合物的另一个实施方案中，
R1为C6-C10芳基或C4-C10杂环基，优选苯基或吡啶基；R2为OH且任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C6烷基、C(O)C3-C6环烷基、C1-C6烷基、C2-C6链烯和C2-C6炔基；R3为OH和R4为O-或OH且其中的OH任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C6烷基、C(O)C3-C6环烷基、C1-C6烷基、C2-C6链烯和C2-C6炔基；R2为＝O、＝S、C1-C6烷基、C2-C6链烯或C2-C6炔基。
在本发明化合物的另一个实施方案中，
R1为OH或SH，它们各自独立地任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C6烷基、C(O)C3-C6环烷基、C1-C6烷基、C2-C6链烯和C2-C6炔基；R3为OH或SH以及R4为O-、OH或SH，其中的OH或SH各自独立地任选被选自下列的取代基取代形成酯或醚：C(O)C1-C6烷基、C(O)C3-C6环烷基、C1-C6烷基、C2-C6链烯和C2-C6炔基；R2为＝O、＝S、C1-C6烷基、C2-C6链烯或C2-C6炔基。
在本发明化合物的另一个实施方案中，
R1为OH或SH；R2为＝O或＝S，R3为OH或SH，R4为O-、OH或SH。
在本发明化合物的一个实施方案中，R1和R3为羟基，R2为羰基以及R4为O-，其结构式名称为(1R，3aS，7R，10aR，10bR)-1-(3-羧丙基)-2，7-二羟基-3-氧-十氢-1H，4H-吡啶并[3，2，1-ij][1，b]萘啶-7-盐，在本申请中又将其称作“化合物1”。
在本发明化合物的一个实施方案中，R1和R3为羟基，R2为羰基以及R4为O-，为其水合物晶体，即化合物1水合物晶体，具有下式结构：
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下面所列的是本申请中使用的用于描述本发明化合物的术语的定义。
除非另有说明，术语“烷基”包括直链的和支链的烷基，术语“C1-10烷基”是指具有1-10个碳原子的烷基，可以是，但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基，叔丁基、正戊基、异戊基、叔戊基、新戊基、正己基或异己基、叔己基等，优选C1-6烷基，尤其是C1-4烷基，特别是甲基。
除非另有说明，术语“链烯基”包括直链的和支链的链烯基。术语“C2-10链烯基”是指具有2-10个碳原子和1个或2个双键的链烯基，可以是，但是不限于，乙烯基、烯丙基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、2-丁烯基、戊烯基、异戊烯基、己烯基等，优选C2-6链烯基，尤其是C2-4链烯基，特别是乙烯基。
除非另有说明，术语“炔基”包括直链的和支链的炔基。术语“C2-10炔基”是指具有2-10个碳原子和1或2个叁键的炔基，可以是，但是不限于，乙炔基、炔丙基、丁炔基、异丁炔基、戊炔基、异戊炔基、己炔基等，优选C2-6炔基，尤其是C2-4炔基，特别是乙炔基。
除非另有说明，术语“环烷基”是指饱和环烃基。术语“C3-10环烷基”是指具有2-10个碳原子的单环或双环饱和环系，可以是，但是不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等，优选C3-6环烷基，尤其是C5-6环烷基。
除非另有说明，术语“环烷基烷基”是指通过烷基连接于环烷基上的取代基。
术语“芳基”是指包含至少一个不饱和芳香环的单环或者双环烃环系。术语“C6-10芳基”的例子有苯基、萘基、1，2，3，4-四氢萘基等，优选苯基。
除非另有说明，术语“杂环基”是指包含至少一个独立选自N、O或S的杂原子的单环或双环饱和、不饱和或芳香环系。这些环的例子包括但不限于噻吩基、吡啶基、噻唑基、异噻唑基、呋喃基、吡咯基、三唑基、咪唑基、![]()
唑基、异![]()
唑基、![]()
二唑基、吡唑基、四唑基、噻二唑基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并![]()
唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并三唑基、吲哚基、二氢吲哚基、异吲哚基、喹啉基、哒嗪基、嘧啶基、咪唑并吡啶基、![]()
唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、吡啶基、咪唑并哒嗪基、![]()
唑并哒嗪基、噻唑并哒嗪基、咪唑烷基、咪唑啉基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡咯烷基、吡咯啉基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、氮杂环丁烷基等。
除非另有说明，术语“卤素”可以是氟、氯、溴或碘。
除非另有说明，术语“卤代烷基”是指上面所定义的烷基被一个或多个卤素取代。
合成方法
本发明式(I)化合物可以通过采用本领域已知的各种方法来制备，包括下面反应路线和在具体实施方式部分中描述的那些。
化合物(IA)的制备，例如可参见Journal of the Royal Netherlands Chemical Society，103，11，1984，328-332；J O C 61，1，1996，368-371，包括下面反应路线中的那些。
反应路线I：
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在上述反应路线中，R＝CmH2m+1，其中m＝1-10；还原剂可选自例如金属或含金属或含金属类还原剂(Zn、Fe、Mg、Sn、NaBH4、LiAlH4等)或非金属还原剂(C、CO、H2SO3、H2S、CO、H2等)等；X＝卤素(F，Cl，Br，I)；有机溶剂可以选自例如二氯甲烷、三氯甲烷、二甲醚，石油醚、乙醚、苯(甲苯)、甲醇、乙醇等；所述碱可选自例如NaH、CH3CH2ONa，CH3ONa等；低温可为-20℃至-10℃；R1基团同上述式(I)化合物中的定义，但不为H、OH、SH。
化合物(IB)的制备例如可参见：
1、Shishido，Yuji；Kibayashi，Chihiro Enantiogenic Total Syntheses of (-)-Indolizidines(Bicyclic Gephyrotoxins)205A，207A，209B，and 235Bvia the Intramo lecular Diels-Alder Reaction of a Chiral N-Acylnitroso Compound 1992，Journal of Organic Chemistry，57(10)，pp.2876-2883；
2、Aoyagi，Sakae；Shishido，Yuji；Kibayashi，Chihiro TOTAL SYNTHESIS OF(-)-NUPHARAMINE AND(+)-3-EPINUPHARAMINE VIA ASYMMETRIC NITROSO DIELS-ALDER REACTION1991，Tetrahedron Letters，32(34)，pp.4325-4328，包括下面反应路线中的那些。
反应路线II：
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上述反应中：保护基R11为羟基保护基团，选自例如R2CO等；R12为羧基保护基团，选自例如OR2，卤素等；R2基团同上述式(I)化合物中的定义，但不为＝O、＝S、H、OH、SH；强碱可选NaH，醇钠等；所述酸可选自无机酸例如HCl、H2SO4等或有机酸例如HCOOH，CH3COOH等；所述低温为-10℃至-90℃，例如-78℃；所述无水有机溶剂选自例如二氯甲烷、三氯甲烷、无水乙醚、石油醚、苯(甲苯)、无水乙醇、甲醇等。
化合物(IC)的制备例如可参见：
1.Kaimova，S，U.；Israilov，I，V；Yunusov，M.S.；Yunusov，S.Yu.；CHNCA8；ChemistryofNaturalCompound；English；16；2；1980；177-180.
2、Birch，Alan M.；Kenny，Peter W.；Oikonomakos，Nikos G.；Otterbein，Ludovic；Schofield，Paul；Whittamore，Paul R.O.；Whalley，Dave P.Development of potent，orally active 1-substituted-3，4-dihydro-2-quinolone glycogen phosphorylase inhibitors2007，Bioorganic Medicinal Chemistry Letters，17(2)，pp.394-399，包括下面反应路线中的那些。
反应路线III：
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上述反应中，所述还原剂可选自金属或含金属类还原剂(例如Zn、Fe、Mg、Sn、NaBH4、LiAlH4、Pd/C等)或非金属还原剂(例如C、CO、H2SO3、H2S、CO、H2等)等；R1基团同上述式(I)化合物中的定义，但不为H、OH、SH；R2基团同上述式(I)化合物中的定义，但不为＝O、＝S、H、OH、SH；所述强碱选自例如NaH，醇钠等；所述酸可选自无机酸例如HCl、H2SO4等或有机酸例如HCOOH，CH3COOH等；所述无水有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、无水乙醚、石油醚、二甲醚、苯(甲苯)、甲醇、无水乙醇等无水有机溶剂；所述低温为-10℃至-90℃度，例如-55℃。
本发明还提供一种制备式中R1和R3为羟基、R2为羰基、R4为O-的本发明式(I)化合物，化合物1[即化合物(1R，3aS，7R，10aR，10bR)-1-(3-羧丙基)-2，7-二羟基-3-氧-十氢-1H，4H-吡啶并[3，2，1-ij][1，b]萘啶-7-盐]的方法，其特征在于：在30-80℃温度下，使下式槐定碱与氧化剂反应8-12小时：
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所述反应的温度优选为30-80℃，尤其优选40-60℃，特别是50℃。
所述反应中的氧化剂可以是过氧化物氧化剂例如过氧化氢、过氧化钠、过氧化钾、过氧化锂、过氧化镁、过氧化钙等；或高氯酸及高氯酸盐；或氯酸及氯酸盐；或高锰酸及高锰酸盐；或碘酸及碘酸盐；及高碘酸盐；及重铬酸盐等氧化剂；优选过氧化氢、过氧化钠、过氧化钾；或高氯酸；或氯酸；或高锰酸；或碘酸；或高碘酸；或重铬酸；特别优选过氧化氢。
所述反应的时间优选为6-20小时，尤其优选7-12，特别是8小时。
所述反应中，槐定碱与氧化剂的比例为1∶3-9，优选1∶5-8，特别优选1∶6-7，特别是1∶7。
将反应结束后的反应产物经减压蒸发至最小体积，放于干燥箱中继续反应，反应后的产物用适量有机溶剂，例如甲醇、无水乙醇、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷等或其混合物洗涤，过滤，得到白色固体状目标化合物粗品。
将得到的化合物粗品用有机溶剂例如甲醇、无水乙醇、丙酮、四氢呋喃等或其混合物，优选甲醇-丙酮混合物，重结晶，得白色、类白色晶体状目标化合物化合物1。
本发明还提供制备式中R1和R3为羟基、R2为羰基、R4为O-的本发明式(I)化合物化合物1[即化合物(1R，3aS，7R，10aR，10bR)-1-(3-羧丙基)-2，7-二羟基-3-氧-十氢-1H，4H-吡啶并[3，2，1-ij][1，b]萘啶-7-盐]三水合物单晶的方法：将所得化合物1溶于较大极性溶剂例如水、乙醇、丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、二甲亚砜等或其混合体系中，加入适量非极性有机溶剂例如苯、甲苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、石油醚等，静置，温度控制在溶剂沸点以下，例如5-10℃，单晶培养时间约2周。
经过所述单晶培养所得晶体，通过单晶X-射线衍射，获得以下晶系、空间群、晶胞参数和晶胞体积等参数：该晶体为三斜晶系，空间群为P 1，晶胞参数：a＝6.4102(1)，b＝7.6395(1)，c＝10.9102(2)![]()
α＝94.160(1)°，β＝105.922(1)°，γ＝109.464(1)°，晶胞体积V＝444.99(1)![]()
晶胞内分子数Z＝1。
本发明还提供药物组合物，它含有所述本发明的式(I)化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明药物组合物可施用于哺乳动物(如人)，可以口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、局部等方式施用。
本发明药物组合物可以采用本领域技术人员已知的方法，通过将本发明式(I)化合物与药学上可接受的载体或赋形剂混合来制备。
所述药学上可接受的载体包括常规惰性固体或液体载体或赋形剂，包括常规的稀释剂、填充剂(例如乳糖、聚乙二醇等)，粘合剂(例如淀粉、纤维素、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮等)，崩解剂(例如羧甲基纤维素、低取代的羟丙基纤维素等)，润滑剂(例如滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙、固体聚乙二醇、等)，湿润剂(例如丙二醇、乙醇等)，稳定剂(例如EDTA-2Na、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、乙醇胺、碳酸氢钠、烟酰胺等)等等，上述辅料可以使常用剂量，以常用的配比与本发明式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物混合。各药用辅料之间的配比可以根据需要做适当的调节。
所述药物组合物可以配制为用于口服给药的固体剂型，包括胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂和糖丸等。在这些固体剂型中，本发明式(1)化合物可以与至少一种常规惰性载体或赋形剂混合，所述惰性载体或赋形剂包括但不限于：填充剂，粘合剂，崩解剂，润滑剂等。
固体剂型如片剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用常规的包衣技术用例如肠溶衣和其它本领域公知的壳材料包衣。并且，这种组合物中活性化合物的释放可以缓释、控释的方式在消化道内的某一部分中释放。必要时，活性化合物也可采用本领域已知的方法用常规赋形剂形成微胶囊形式。
所述药物组合物也可以配制为用于口服给药的液体剂型，包括乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂等。除了本发明式(I)化合物作为活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂、乳化剂和悬浮剂等，例如，乙醇、异丙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、1，3-丁二醇等)、油类，例如棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油等，吐温类、司盘类、聚乙二醇类、琼脂等，或这些物质的混合物等。
所述药物组合物可以配制为用于肠胃外注射的剂型，包括水溶液、含水或非水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌冻干粉剂。
所述药物组合物可以配制为用于局部给药的剂型，包括栓剂、软膏剂、散剂、贴剂、喷雾剂和吸入剂。本发明式(I)化合物可在无菌条件下与相应剂型用生理上可接受的载体或赋形剂(或推进剂)及任何适宜的添加剂一起混合。
除了上述常规惰性载体、赋形剂或惰性稀释剂外，本发明药物组合物或药物制剂也可包含各种适宜的添加剂，例如润湿剂、甜味剂、矫味剂、香料、防腐剂、缓冲剂等。
本发明式(I)化合物和本发明药物组合物可用于制备用于预防和/或治疗疾病的药物，所述疾病包括肿瘤，特别是恶性肿瘤，例如乳腺癌、肺癌、宫颈癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、鼻咽癌、肺癌、舌癌、食道癌、肠癌、肉瘤、淋巴癌等。
再一方面，本发明还涉及治疗和/或预防哺乳动物肿瘤的方法，包括将治疗或预防有效量的本发明式(I)化合物给予需要此治疗或预防的哺乳动物。
术语“治疗或预防有效量”指的是足能够在哺乳动物(如人)体内引起兽医或临床医师所认可的生物或医学反应所需要的活性化合物的量。普通的兽医和临床医师可容易地确定治疗或预防指定疾病所需的本发明式(I)化合物的有效量。一般，每天2-20mg/kg患者体重，优选每天6-12mg/kg患者体重。具体剂量还应考虑给药途径，患者的年龄、性别、体重和健康状况，以及被治疗的特定状况和疾病的严重程度等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。在本文中使用的术语“哺乳动物”包括但不限于猫、狗、兔、山羊、绵羊、大鼠、小鼠和人等，特别优选人。
本发明式(I)化合物可以单独施用，或者与其他药学上可接受的治疗剂联用，特别是与其它抗肿瘤药物组合使用。所述治疗剂包括但不限于：细胞毒药物如破坏DNA结构和功能的药物氮芥、环磷酰胺、顺铂、卡铂及奥沙利铂；影响核酸生物合成药物5-氟尿嘧啶、卡培他滨、雷替曲塞、阿糖胞苷、吉西他滨、甲氨碟呤、培美曲塞、羟基脲及6-巯嘌呤；干扰转录过程抑制RNA合成的药物如阿霉素、柔红霉素、表柔比星及吡柔比星；作用于DNA复制拓扑异构酶抑制剂如羟喜树碱、伊立替康及拓扑替康；影响蛋白质合成和功能的药物如长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、紫杉醇及多西紫杉醇。影响激素平衡药物如托瑞米芬、依西美坦、来曲唑及比卡鲁胺。其他类抗肿瘤药物如包括生物反应调节剂，干扰素、胸腺肽、白细胞介素等调节机体免疫功能的药物，细胞分化诱导剂维甲酸、亚砷酸等，及近年来出现的作用于肿瘤发生和转移的不同环节和新靶点新型的抗肿瘤药物，单克隆抗体、血管生成抑制剂、表皮生长因子受体拮抗剂等。联用的治疗剂可与本发明式(I)化合物，以单一制剂形式或以不同制剂的形式，同时或顺序施用。
本发明式(I)化合物还可作为体外抑制细胞增殖的低分子生物探针用作生命科学研究，作为探针应用时，式(I)化合物可溶于甲醇、水或含水甲醇中，也可溶于二甲基亚砜的含水溶液中加以应用。
附图说明
图1为化合物1三水合物分子立体结构椭球图。
图2为化合物1三水合物分子晶胞堆积图。
图3为化合物1的紫外吸收光谱图。
图4为化合物1的红外吸收光谱图。
图5为化合物1的1HNMR谱图。
图6为化合物1的13CNMR谱图。
图7为化合物1三水合物的绝对构型图。
具体实施方式
下面结合实施例进一步阐述本发明。这些实施例仅用于举例说明本发明，而不构成对本发明范围的限制。
实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。所采用的原料为可商购得的或者可以很容易地由本领域技术人员根据已知文献方法制得的。除非另有说明，百分比为重量百分比。
第一部分化合物制备实施例
实施例1(1R，3aS，7R，10aR，10bR)-1-(3-羧丙基)-2，7-二羟基-3-氧-十氢-1H，4H-吡啶并[3，2，1-ij][1，b]萘啶-7-盐(化合物1)的制备
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称取30.0g槐定碱(宁夏盐池紫荆花药业有限公司，批号：90080418，纯度≥95％。)至250ml圆底烧瓶中，加入84ml双氧水(过氧化氢质量分数≥30％，天津市江天化工技术有限公司，20070302)，在50℃的恒温水浴中反应8小时。反应物经减压旋转蒸发至最小体积，置于干燥箱中继续反应2周。将反应产物用少量无水乙醇洗涤，去除无水乙醇可溶物后，得到的类白色固体16.3g，收率为54.3％。将得到的白色固体用甲醇-丙酮(1∶2-3)溶媒系统反复重结晶处理后，得白色或类白色化合物1晶体。
化合物1结构确证实验数据如下。
a.紫外吸收光谱(BECKMAN，DU800，紫外/可见分光光度计，贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司)：UVλmax(H2O)nm(logε)210(2.60)；
b.红外吸收光谱(Bruker500红外光谱仪，布鲁克光谱仪器公司)：IR v(KBr，cm-1)：3408，2966，2941，2872，1635，957；
c.质谱(TRACE DSQ，Thermofinnigan公司)：ESI-MS m/z(％)：311[M-H]-，623[2M-H]-，313[M+H]+，625[2M+H]+；
d.1H核磁共振谱(Bruker 400M，布鲁克光谱仪器公司)：1HNMR400MHz(D2O)δ(ppm)：3.55(1H，td，J＝3，9Hz)、3.24(1H，dd，J＝4，10Hz)、1.60(1H，m)和2.36(1H，m)、1.74(1H，m)和1.98(1H，m)、3.55(1H，dd，J＝4，10Hz)、3.24(1H，td，J＝3，10Hz)和4.02(1H，td，J＝3，10Hz)、1.98(1H，m)和2.36(1H，m)、1.74(2H，td，J＝4，10Hz)、3.03(1H，td，J＝3，9Hz)、3.77(2H，td，J＝3，10Hz)、1.60(1H，m)和1.98(1H，m)、1.60(1H，m)和1.98(1H，m)、2.36(2H，t，J＝7Hz)；
e.13C核磁共振谱(Bruker 300M，布鲁克光谱仪器公司，D2O为溶剂)具有以下特征峰(ppm)：19.3，21.3，21.8，21.9，23.4，31.3，31.6，35.6，37.4，56.4，64.7，68.8，68.9，164.8，180.9；
f.元素分析：
分子式：C15H24N2O5；分子量：312
理论值：C％57.69％H％7.69％N％8.97％
实测值：C％57.42％H％9.35％N％8.91％
实施例2(1R，3aS，7R，10aR，10bR)-1-(3-羧丙基)-2，7-二羟基-3-氧-十氢-1H，4H-吡啶并[3，2，1-ij][1，b]萘啶-7-盐(化合物1)三水合物单晶制备
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取实施例1化合物10mg，将其充分溶解于5ml水(双蒸水，实验室自制)中(超声)，溶液达饱和状态，经过滤后成为培养单晶使用溶液。
将培养瓶中抽真空，然后通氮气，用注射器加入上述溶液，然后再用注射器沿器壁加入5ml丙酮(分析纯，天津市化学试剂有限公司，批号：200801203)，于无机械震荡处静置，温度5-10℃，培养时间约2周，得化合物1的无色透明状单晶体。
所得单晶(0.10×0.10×0.40mm晶体)经MAC DIP-2030K X-射线衍射仪(日本MAC公司)测定，确定该晶体属三斜晶系，空间群为P 1，晶胞参数：a＝6.4102(1)，b＝7.6395(1)，c＝10.9102(2)![]()
α＝94.160(1)°，β＝105.922(1)°，γ＝109.464(1)°，晶胞体积V＝444.99(1)![]()
晶胞内分子数Z＝1。
在微机上用直接法(shelxs-97)解析该晶体结构，从E图上获得全部25个非氢原子位置，使用最小二乘法修正结构参数和判别原子种类，使用几何计算法和差值Fourier法获得全部氢原子位置，最终可靠因子R1＝0.032，wR2＝0.085，S＝1.080。最总确定不对称单位化学计量式为C15H24N2O5·3H2O，计算单个分子的分子量为366.41，计算晶体密度1.367g/cm3。晶态下分子排列属第一类(P1)空间群，故样品应具有旋光活性，根据计算得到Flack系数为0.2(2)。
结果表明：化合物1为喹喏里西啶类酸碱两性生物碱。该化合物分子(图7)骨架由3个六元环A、B、C稠合而成，其中B、C环均呈椅式构象，A环呈半椅式构象，环A/B为反式稠合，A/C，B/C均为顺式稠合。计算各环间二面角值分别为：A/B：9.3°，A/C：112.7°，B/C：116.0°。三个结晶水位置无序造成温度因子偏高。晶态下分子内不存在氢键联系，但分子间存在氢键联系：O5-O1w：2.603![]()
O2-O3(x，y，z-1)：2.533![]()
O1w-O4(x，y+1，z)：2.800A，O1w-O2w(x+1，y，z)：2.771![]()
O2w-O3w：2.778![]()
O3w-O1：2.843![]()
晶态分子以氢键作用力和范德华力维系其在空间的稳定排序。
第二部分本发明化合物抗肿瘤活性的测试实施例
通过体内、体外抗肿瘤实验证实本发明化合物的药理活性。
所用试剂：二甲基亚砜(DMSO)批号：080602(上海生工生物工程技术服务有限公司)、生理盐水，南京小营制药厂，批号：2008052505、
动物：IRM-2纯系小鼠((SCXK(津)2008-0012))、昆明种小鼠(STXK(京)2008-0012)、C57BL/6小鼠(STXK(京)2008-0012)。
细胞：人肺腺癌细胞A549(由天津医科大学提供，取对数生长期细胞)；淋巴瘤(从IRM-2纯种小鼠自发淋巴瘤传5代接种)；乳腺癌和Lewis肺癌(由天津医科大学提供，本实验室传6代接种)；宫颈癌U14、肉瘤S180、肝癌H22(由天津医药科学研究所提供，本实验室传12代接种)。
培养基：RPMI-1640培养基(上海强肯仪器有限公司)。
试药：化合物1(本实验室提供，批号：20080512)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)(5-Fu粉由中国天津太河制药有限公司提供，批号为080223)、顺铂粉剂(DDP)，山东齐鲁制药厂产品，批号：081015。
统计软件：SPSS13.0。
一.体外抗肿瘤与辐射增敏实验：
本实验采用MTT检测方法。抑制A549细胞增殖能力为指标。用酶标仪在570nm波长处测定吸光度(OD)值，并按下列公式计算其抑制率。以IC50软件1.00版本计算试药对人肺腺癌A549细胞的IC50值。
抑制率计算公式：抑制率(％)＝[(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值]×100％。试药对人肺腺癌细胞株的抑制作用结果以![]()
±S表示。计算50％细胞杀伤时药物浓度(IC50)，IC50采用加权直线回归法处理。
本发明采用MTT法测试了本发明化合物1及其与辐射联用对人肺腺癌A549细胞株的抗肿瘤活性，实验证实，本发明化合物对人肺腺癌A549肿瘤细胞有增殖抑制和辐射增敏作用，因此本发明化合物可直接或与辐射治疗联用用作细胞增殖抑制剂或肿瘤细胞杀伤剂。
二.体内抗肿瘤实验
选取淋巴瘤、乳腺癌、Lewis肺癌并利用IRM-2纯系小鼠进行体内的抗肿瘤实验研究，实验设定空白对照组、及低、中、高三种浓度的化合物1，实验结果发现三种浓度的化合物1对三种癌细胞与空白对照组相比均具有较好的抗肿瘤作用。与空白对照组比较有统计学意义。
选取宫颈癌U14、肉瘤S180、肝癌H22并利用昆明种小鼠进行体内的抗肿瘤实验研究，实验设定空白对照组、阳性对照顺铂组、及低、中、高三种浓度的化合物1组，实验重复三次，研究结果均发现化合物1不仅对肿瘤有较好的抑制作用，同时和阳性对照药顺铂相比能够显著增强试验小鼠的免疫功能。与空白对照组比较有统计学意义。
抗肿瘤转移实验利用接种Lewis肺癌瘤株的C57BL/6小鼠进行体内的抗肿瘤转移实验，实验设定空白对照组、阳性对照5-FU组、及化合物1的低、中、高三种浓度组。实验结果：实验重复三次，化合物1的三个剂量组均有明显抑制肺转移灶数，抑制率均大于60％。与空白对照组比较有统计学意义(P＜0.01)。
三.抗肿瘤活性的测试结果
1-1体外抗肿瘤活性的测试：
被测样品溶液的制备：测试样品为上述实施例1中分离精制的化合物1纯品。准确称取适量样品，用DMSO配置所需浓度的溶液，供活性测试。
细胞系及细胞的继代培养：活性测试采用人肺腺癌A549细胞，细胞均用含有10％胎牛血清的RPMI-1640培养基，在37℃通入5％二氧化碳培养箱内继代培养。
细胞增殖抑制活性测试方法(MTT法)
本发明采用MTT法，测试评价了被检测样品对癌细胞增殖的抑制活性。活细胞线粒体中脱氢酶能够代谢还原黄色的溴化3-(4，5-二甲基噻唑)-2，5-二苯基四氮唑为蓝紫色的不溶于水的formazan，formazan的多少可通过酶标仪测定其吸收度求得。由于formazan的量与活细胞成正比，所以可根据吸收度求出活细胞的数目，从而了解药物抑制或杀伤肿瘤细胞的能力。
活性测试时，取对数生长期的人肺腺癌A549细胞，经0.02％的EDTA消化，加入含有10％胎牛血清的RPMI-1640培养液，制成细胞悬液，均匀接种于96孔微量培养板中(细胞个数为2×104个/孔)，将接种后的细胞置于37℃二氧化碳培养箱内培养过夜。给药组分别加入10-1000μg/ml等7个浓度的化合物化合物1，对照组加入相应的培养液，检测样品用DMSO溶解，RPMI-1640培养液稀释，加药后仍将细胞置于37℃二氧化碳培养箱中继续培养72h。每孔加2mg/ml MTT 50μl(四甲基偶氮唑：Sigma)，再置于37℃继续培养4h，弃去上清液，加DMSO 150μl，于恒温震荡器震荡3min，待蓝色结晶体完全溶解，用酶标仪在570nm波长处测定吸光度(OD)值，按照抑制率(％)＝[(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值]×100％计算每个浓度下的细胞增殖抑制率。化合物1对人肺腺癌细胞株的抑制作用结果以![]()
±S表示。计算50％细胞杀伤时药物浓度(IC50)，IC50采用加权直线回归法处理。结果见表1。
表1化合物1对人肺腺癌细胞A549细胞的细胞毒实验结果
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结果表明，化合物1对体外培养的人肺腺癌A549细胞有一定的细胞毒作用，其IC50为209.6μg/ml。
1-2化合物1联合辐射处理对肿瘤细胞抑制作用的测试
细胞株的培养和化合物1的配制(同1-1体外抗肿瘤活性的测试)。
采用MTT法测定化合物1孵育A549细胞72h后再予辐射对其增值的抑制率，A549细胞按3×103个/孔接种于2块96孔板，培养24h，加入含化合物1浓度分别是0、50、100、130、160、180、200、220、250、270、300μg/ml的培养液，100μl/孔，每种浓度8个复孔。继续培养72h，随机取其中一块96孔板，予γ射线照射6Gy，再培养72h，常规MTT法测OD570。计算细胞抑制率＝[对照组吸光值OD一实验组吸光值OD]/对照组吸光值OD×100％计算每个浓度下的细胞增殖抑制率。化合物1及其与辐射处理联合对人肺腺癌细胞株的抑制作用结果以![]()
±S表示。计算50％细胞杀伤时药物浓度(IC50)，IC50采用加权直线回归法处理。结果见表2。
照射：137Csγ源(加拿大产，CAMMA-CELL40)，照射剂量为1Gy，剂量率0.87Gy/min。
化合物1联合辐射处理对A549细胞的抑制作用：当化合物1浓度为50、100、130、160、180、200μg/ml时，与辐射处理联合的杀伤作用大于化合物1单一作用(P＜0.05)。化合物1浓度为220、250、270、300μg/ml时，化合物1对细胞的直接杀伤作用明显，因此两组细胞的抑制率相近。
表2化合物1作用72h+辐射作用72h对A549细胞的抑制作用![]()
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2、体内抗肿瘤实验的测试
2-1.抑制淋巴瘤、乳腺癌、Lewis肺癌的实验研究
瘤株：淋巴瘤(从IRM-2纯种小鼠自发淋巴瘤传5代接种)、乳腺癌、Lewis肺癌(由天津医科大学提供，本实验室传6代接种)
动物：本研究所自行繁殖IRM-2纯系小鼠，雌雄兼用，体重：22-30g。
药物的配制：取化合物1配制浓度为50mg/kg，100mg/kg，150mg/kg，溶剂为注射用水。
方法：
接种：选择肿瘤生长旺盛且无溃破，健康情况良好的荷瘤鼠，脱臼处死，剖取肿瘤将肿瘤切成2mm左右的小块，在动物左侧腹股沟处皮下接种。
分组给药：接种后次日将动物随机分组，设对照组和给药组，对照组给予生理盐水，给药组给予3个不同剂量的化合物1水溶液，每日一次，腹腔注射，每次0.5ml，连续给药10天。
观察指标：停药后24小时处死动物，称体重，解剖剥离瘤块，秤瘤重。
抑瘤率＝(1-给药组平均瘤重/对照组平均瘤重)*100％
结果如下表3-5所示：
表3化合物1对淋巴瘤的抑制作用
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表4化合物1对乳腺癌的抑制作用
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表5化合物1对Lewis肺癌的抑制作用
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2-2.抑制肉瘤S180、宫颈癌U14、肝癌H22的实验研究
瘤株：肉瘤S180、宫颈癌U14、肝癌H22(由天津医药科学研究所提供，本实验室传12代接种)。
动物：昆明种小鼠，体重(20±2g)，雌雄各半，购于中国医学科学院动物研究所。
移植：将小鼠在正常条件下喂养3天，称重后(原始体重)，在无菌条件下抽取接种7天后的小鼠宫颈癌U14、肉瘤S180、肝癌H22腹水瘤瘤液，用生理盐水稀释成(1∶2)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬液用新鲜配制的0.2％台盼蓝染色，混匀后按白细胞计数方法计数。染蓝色者为死细胞，不染色者为活细胞，按如下公式计算细胞浓度和细胞存活率。细胞浓度＝4大方格内活细胞数/4×104×稀释倍数＝细胞数/ml
细胞存活率＝活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100％
接种U14，S180，H22肿瘤计数分别为4.5-7.5×107个/ml，4.2-5.7×107个/ml，4.1-5.8×107个/ml，细胞存活率均大于95％，用0.25ml注射器以0.2ml/只接种于小鼠的右前肢下。
动物分组：肿瘤接种后，将70只小鼠随机分成5组：空白对照组，给药组(化合物1高、中、低剂量组)，阳性对照组(顺铂组)，每组14只，各组同时接种肿瘤24h后开始给药。
给药剂量与给药途径：空白对照组给予生理盐水(0.3ml/d×10d)，化合物1的高、中、低剂量组(50，100，150mg/kg/g×10d)，阳性对照组顺铂(4mg/kg/2d×10d)。样品临用前用水配制，ip给药。
检测指标及方法
一般情况：每日观察小鼠的自主活动，精神状态，毛发，呼吸，饮食，粪便性状及对外刺激的反应。
实体瘤抑瘤率和体重增长的测定：移植瘤株24小时后小鼠给药，连续给药10天，于第11天脱颈椎处死小鼠，称取体重(处死体重)，剖取肿瘤，精密称重，求取肿瘤均值，然后按下述公式计算用药后肿瘤抑制率。
肿瘤抑制率＝(1-治疗组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100％
体重增长＝处死体重-原始体重-瘤重
肝、脾和胸腺指数的测定：采用称重法及剥离肿瘤后的小鼠，再剖取出肝、脾和胸腺，用天平称取肝重、脾重和胸腺重，并按如下公式计算脾指数和胸腺指数。
脾指数＝脾重/处死体重
胸腺指数＝胸腺重/处死体重
实验结果表明：
1.化合物1对U14荷瘤小鼠的抑瘤率及体重的影响结果。
实验表明，化合物1(50-150mg)对U14小鼠肿瘤具有非常显著的抑制作用(P＜0.01)，并存在一定的剂量依赖关系，虽然阳性对照药顺铂抑瘤效果优于化合物1，但荷瘤小鼠的体重、肝重及免疫指标(脾指数和胸腺指数)明显下降，与空白对照组差异极其显著(P＜0.001)，而组的体重、脾指数和胸腺指数等指标较空白对照组也有所提高，提示化合物1不仅有抗肿瘤的作用可能还有一定的改善荷瘤动物免疫机能的作用。具体见下表6和7所示。
表6化合物1对U14荷瘤小鼠的抑瘤率及体重的影响
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注：与空白对照组比较*P＜0.01
表7化合物1对U14荷瘤小鼠各脏器的影响
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注：与空白对照组比较**P＜0.01
2.化合物1对S180荷瘤小鼠的抑瘤率及体重的影响结果。
实验表明，化合物1(50-150mg/kg)对S180小鼠肿瘤具有非常显著的抑制作用(P＜0.001)，虽然阳性对照药顺铂抑瘤效果优于化合物1，但荷瘤小鼠的体重、肝重及免疫指标(脾指数和胸腺指数)明显下降，与空白对照组差异极其显著(P＜0.001)，而奥赛博的这些指标与空白对照组相比相差无几。具体见下表8和9所示。
表8化合物1对S180荷瘤小鼠的抑瘤率及体重的影响
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注：与空白对照组比较**P＜0.001
表9化合物1对S180荷瘤小鼠各脏器的影响
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注：与空白对照组比较**P＜0.001
3.化合物1对H22荷瘤小鼠的抑瘤率及体重的影响结果。
实验表明，化合物1(50-150mg)对H22小鼠肿瘤具有非常显著的抑制作用(P＜0.001)，虽然阳性对照药顺铂抑瘤效果优于化合物1，但荷瘤小鼠的体重、肝重及免疫指标(脾指数和胸腺指数)明显下降，与空白对照组差异极其显著(P＜0.001)，而组的体重、脾指数和胸腺指数等指标较空白对照组也有所提高，提示化合物1不仅有抗肿瘤的作用可能还有一定的改善荷瘤动物免疫机能的作用。具体见下表10和11所示。
表10化合物1对H22荷瘤小鼠的抑瘤率及体重的影响
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注：与空白对照组比较**P＜0.001
表11化合物1对H22荷瘤小鼠各脏器的影响
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注：与空白对照组比较**P＜0.001
2-3.化合物1体内抗转移实验
瘤株：Lewis肺癌瘤株(天津医药科学研究所，本实验室传6代接种)。
动物：C57BL/6小鼠，体重(20±2g)，雌雄各半，购于中国医学科学院实验动物研究所。
实验方法Lewis肿瘤小鼠，在无菌条件下取瘤块，匀浆液放入无菌小瓶内，生理盐水调整浓度，0.2ml/只鼠接种于C57BL/6小鼠液部皮下，去接种后的实验小鼠50只，随机分为5组，空白对照组：给予生理盐水；阳性对照组：给予5-氟尿嘧啶20mg/kg；化合物1的三个剂量组(50mg/kg，100mg/kg，150mg/kg)。以上各组小鼠均ip给药，每日1次，14天后脱颈处死。解剖取出小鼠完整肺，用Bouin式液固定24h，然后放入无水乙醇，漂洗至黄色褪去，转移灶成白色小点，用显微镜观察转移灶数，计算转移率：
转移率＝(1-给药组平均转移灶数/对照组平均转移灶数)*100％。
试验结果：实验重复三次，化合物1的三个剂量组均有明显抑制肺转移灶数，抑制率均大于60％。与空白对照组比较有统计学意义(P＜0.01)。见下表12所示。
表12化合物1体内抗转移作用
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注：与空白对照组比较*P＜0.05
第三部分药物制剂实施例：
(1)片剂：取1000g化合物1，加入1160g淀粉、40g硬脂酸镁、1400g羧甲基纤维素、400g微晶纤维素以及适量乙醇(体积百分比含量为50％)、充分搅拌混合制成湿粒，60-70℃干燥3-4小时，压制成片.片剂规格：片重：0.4g，每片含化合物10.1g。
(2)胶囊：取1000g化合物1，加入1400g羧甲基纤维素以及1600g微晶纤维素，充分搅拌混合制成湿颗粒，在60-70℃干燥3-4小时，然后填充到空胶囊壳中.胶囊规格：粒重：0.4g，每粒含化合物10.1g。
(3)口服液：取2000g化合物1，加入单糖浆20L至纯化水中共计100L，搅拌溶解，分装入口服液瓶，灭菌。口服液规格：10ml/瓶，每瓶含化合物10.2g。
(4)颗粒剂：取3000g化合物1，加入300g硬脂酸镁、10500g羧甲基纤维素、12000g微晶纤维素以及4200g蔗糖粉与糊精(3∶1)混合物，充分搅拌混合，用12-14目筛制成颗粒。60-70℃干燥3-4小时。颗粒剂规格：每袋颗粒剂重量：4g，每克颗粒含化合物10.1g。
(5)滴丸剂：取2000g化合物1，加入3000g助溶剂聚乙二醇，加热熔融温度为90℃，使原料和辅料充分混溶，滴制成丸。规格：每丸重0.025g，每袋20丸，每丸含化合物10.010g。
(6)注射液：取2500g化合物1以及2500g葡糖糖，加入注射用水至50L，搅拌溶解，滴加体积比1∶1的盐酸水溶液，调节PH值至4.0，再加入活性炭，再搅拌煮沸30-50分钟，过滤除去活性炭，再用0.22μm滤膜过滤除菌，得澄明无菌液，装入注射剂用瓶中，于115℃下热压灭菌30分钟，灌封，注射剂规格：5ml/支，每支含化合物10.25g。
(7)冻干粉针：取1500g化合物1以及1250g甘露醇，加入注射用水至25L，搅拌溶解，滴加体积比1∶1的盐酸水溶液，调节PH值至6.0，再加入针剂用活性炭，室温搅拌20-50分钟，过滤除去活性炭，再用0.22μm滤膜过滤除菌，得澄明无菌液，灌入5ml管制瓶中，放入真空冷冻干燥器中进行冷冻干燥，冻干粉针规格：5ml/支，每支含化合物10.3g。
(8)缓释片剂：取1000g化合物1，加入1000g聚乙烯吡咯烷酮、40g硬脂酸镁、1800g羟甲基纤维素、加入160g助溶剂聚乙二醇，充分搅拌混合干法制粒，压制成片。缓释片规格：片重：0.4g，每片含化合物10.1g。
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显而易见，本领域技术人员可以在不违背本发明的精神和范围的情况下对本发明作出许多修饰、修改和改变。这些修饰、修改和改变均应包括在本发明范围内。