应用膜技术从丹参提取液中分离纯化有效成分的方法.pdf

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1、10申请公布号CN102020620A43申请公布日20110420CN102020620ACN102020620A21申请号200910272174222申请日20090918C07D307/86200601B01D61/58200601B01D61/1420060171申请人劲牌有限公司地址435100湖北省大冶市大冶大道169号72发明人杨跃军赵国锋刘源才陈凯刘世龙余达焱74专利代理机构黄石市三益专利商标事务所42109代理人瞿晖54发明名称应用膜技术从丹参提取液中分离纯化有效成分的方法57摘要本发明是一种应用膜技术从丹参提取液中分离纯化有效成分的方法，其特征在于包括下述步骤1丹参提取液。

2、的制备；2固液分离；3微滤除沉；4超滤分离；5纳滤浓缩；6真空干燥；本方法以具有选择透过性的膜为分离介质，提取液中的有效成分依据滤膜孔径的大小或通过或被截留，从而达到分离、浓缩的目的；本方法能较好的实现了中药有效部位的分离，充分保留了中药的药效，同时还能显著缩短生产周期，降低生产成本及能耗，确保提取分离物用于制备中药制剂及药酒时产品质量的稳定。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书6页CN102020634A1/1页21应用膜技术从丹参提取液中分离纯化有效成分的方法，其特征在于包括下述步骤1丹参提取液的制备将丹参药材以三罐逆流方法进行提取，得提取液；。

3、2固液分离将丹参提取液进行离心分离，时间为2030MIN，转速为6000R/MIN以上，得离心液；3微滤除沉将上述离心液采用膜孔径为00502UM、膜材质为AL2O3的陶瓷膜机组进行微滤分离处理；操作温度3060，操作压力02MPA05MPA；微滤分离结束后，以截留液3倍量的纯净水对截留液顶洗三次，顶洗温度3060、顶洗压力02MPA05MPA，得微滤液；要求微滤液澄清透明，浊度300NTU，有效成分丹酚酸B透过率95；4超滤分离将上述微滤液以100010000分子量的聚偏氟乙烯超滤膜管进行超滤，操作压力0810MPA；操作温度4045，超滤膜分离结束后，用截留液2倍量的纯净水对截留液顶洗三次。

4、，顶洗温度4045，顶洗压力0810MPA，得超滤液；要求超滤液澄清透明，丹酚酸B透过率95，浊度150，固形物中丹酚酸B成分含量60；5纳滤浓缩将上述超滤液采用膜型号为200分子量，膜材质为聚酰胺的纳滤膜机组进行浓缩处理，浓缩温度4045，操作压力015018MPA，浓缩倍数1015倍，得截留液；丹参纳滤截留液质量要求丹酚酸B截留率95，固形物中丹酚酸B成分含量80；6真空干燥对丹参纳滤截留液于5080下进行真空干燥，即得。2根据权利要求1所述的应用膜技术从丹参提取液中分离纯化有效成分的方法，其特征在于所述丹参药材的提取方法是先将丹参药材平均加至A、B、C三罐中进行逆流提取，提取温度6070。

5、，提取溶剂为药材重量812倍量的30的乙醇，在梯度形成阶段，A罐提取时间分别为5MIN、15MIN，B罐提取时间为10MIN；在提取阶段，各罐提取时间为2H；在提取结束阶段，提取时间为2H；结束后将各罐提取液合并即得丹参提取液。权利要求书CN102020620ACN102020634A1/6页3应用膜技术从丹参提取液中分离纯化有效成分的方法0001一技术领域本发明涉及一种从丹参药材中提取有效成分的方法，特别是应用膜技术从丹参提取液中分离纯化有效成分的方法。0002二现有技术丹参为双子叶植物唇形科LABIATAE丹参SALVIAMILTIORRHIZABGE的干燥根及根茎，始载于神农本草经，列为。

6、上品，是我国常用的一种中药。丹参作为治疗心血管方面的药物，具有显著的药理作用。丹参有效成分可以加强心肌收缩力、改善心脏功能，不增加心肌耗氧量；对血管方面，可以扩张冠脉，增加心肌血流量；扩张外周血管，血流增加，脑血流量下降，故常用于配制复方中药制剂或药酒。0003最近几年，随着现代医学技术的发展，结合化学、分子生物学和细胞生物学等多种学科技术，对丹参进行了系统的研究。丹参的水溶性成分主要有丹酚酸A、B、C、D、E，丹参素等，其中丹酚酸类活性最强。经药理实验证实，丹酚酸B具有抗脂质过氧化，消除自由基和抗血栓作用。因此丹参广泛应用于生物制药和保健食品方面，具有广阔的运用前景。0004目前丹参提取液的。

7、分离多以成分间的极性差异为基本原理而分离杂质有机溶剂沉淀、萃取等，而浓缩也基本以单效、双效浓缩为主，这些传统工艺在实际生产中不同程度的存在着较多不足。首先是有效成分损失严重，中药中的部分有效成分本来含量就很低，再经溶剂沉淀、萃取或硅藻土过滤等除杂工艺，这些成分可能全部被除去，并且由于杂质沉淀时的吸附和包埋等因素，也造成了其它有效成分较大的损失；另外是污染环境，如硅藻土过滤过程中，产生大量的废弃硅藻土，给环境造成了较大污染，并且容易引入一些新的杂质硅酸盐等，给产品稳定性造成较大影响。其次除杂效果不理想，丹参提取液中的鞣质、淀粉、树脂和蛋白等物质，用传统方法很难除尽，因而固体收率很高，当丹参提取物。

8、与其他中药半成品或基酒调配时亦会对产品的稳定性产生较大影响。再就是某些传统分离方法大孔树脂吸附分离等过分强调单个组分，使中药失去了原有的复方特色，影响药效，并且在食品行业中应用安全性较差。而在浓缩过程中主要存在着浓缩温度高，浓缩时间长，有效成分损失严重，一步浓缩难以实现高相对密度的质量要求，设备易结垢等问题。0005三发明内容本发明的目的就是提供应用膜技术从丹参提取0006液中分离纯化有效成分的方法；该方法以具有选择透过性的膜为分离介质，依据滤膜孔径的大小或通过或被截留，达到分离、浓缩的目的，实现了中药有效部位的分离，充分保留了中药的药效。同时根据丹参提取液的理化性质，以相应的考察指标，对膜的。

9、材质、膜管型号及操作条件进行了优化，实现了膜设备与丹参药材的匹配性，提高了膜设备抗污染的能力，使膜设备的分离效率得到进一步的提高；同时还能显著缩短生产周期，降低生产成本及能耗，确保制备中药制剂及药酒时产品质量的稳定。0007本发明方法包括下述步骤00081丹参提取液的制备0009将丹参药材以三罐逆流方法进行提取，得提取液；00102固液分离说明书CN102020620ACN102020634A2/6页40011将丹参提取液进行离心分离，时间为2030MIN，转速为6000R/MIN以上，得离心液；00123微滤除沉0013将上述离心液采用膜孔径为00502UM、膜材质为AL2O3的陶瓷膜机组进。

10、行微滤分离处理；操作温度3060，操作压力02MPA05MPA；微滤分离结束后，以截留液3倍量的纯净水对截留液顶洗三次，顶洗温度3060、顶洗压力02MPA05MPA，得微滤液；要求微滤液澄清透明，浊度300NTU，有效成分丹酚酸B透过率95；00144超滤分离0015将上述微滤液以100010000分子量的聚偏氟乙烯超滤膜管进行超滤，操作压力0810MPA；操作温度4045，超滤膜分离结束后，用截留液2倍量的纯净水对截留液顶洗三次，顶洗温度4045，顶洗压力0810MPA，得超滤液；0016要求超滤液澄清透明，丹酚酸B透过率95，浊度150，固形物中丹酚酸B成分含量60；00175纳滤浓缩0。

11、018将上述超滤液采用膜型号为200分子量，膜材质为聚酰胺的纳滤膜机组进行浓缩处理，浓缩温度4045，操作压力015018MPA，浓缩倍数1015倍，得截留液；丹参纳滤截留液质量要求丹酚酸B截留率95，固形物中丹酚酸B成分含量80；00196真空干燥0020对丹参纳滤截留液于5080下进行真空干燥，即得。0021所述丹参药材的提取方法是先将丹参药材平均加至A、B、C三罐中进行逆流提取，提取温度6070，提取溶剂为药材重量812倍量的30的乙醇，在梯度形成阶段，A罐提取时间分别为5MIN、15MIN，B罐提取时间为10MIN；在提取阶段，各罐提取时间为2H；在提取结束阶段，提取时间为2H；结束后。

12、将各罐提取液合并即得丹参提取液。0022上述膜的材质及型号选择是膜分离纯化丹参有效成分的关键因素。选用合适的膜能起到很好的分离纯化作用，同时减少膜污染。0023微滤除沉单元我们选用00502UM孔径的陶瓷膜管除沉，可以除去大部分的颗粒杂质成分，减少后步超滤膜污染，保护超滤膜芯。同时陶瓷膜具有耐酸碱、耐高温的特点，膜通量大，清洗方便。0024目前常用有机膜材料有醋酸纤维素、聚丙烯腈、聚醚酮、聚砜、聚酰胺等，按其对水的亲和力分类，大致可分为两类疏水性膜材料和亲水性膜材料。醋酸纤维素、聚丙烯腈等亲水性膜材料对溶质吸附少，截留分子量较小，但热稳定性差，机械强度、抗化学药品性、抗菌侵蚀能力通常不高；聚砜。

13、、聚偏氟乙烯等疏水性膜材料机械强度高，耐高温、耐溶剂、耐生物降解，但膜透水速度低，抗污染能力较低。不同材质的有机膜其耐PH范围也大致不同，一般来讲PAN、PS、PVDF为PH213，CA为PH56。丹参提取液是用30乙醇提取而得，其有效成分的相对分子量一般在5002000之间，PH值48，根据以上理化性质，因此选用材质为聚偏氟乙烯的超滤膜和聚酰胺的说明书CN102020620ACN102020634A3/6页5纳滤膜。0025本发明所得干燥物技术指标0026产品纯度丹参有效成分转移率85，有效成分含量90。0027产品色泽无杂质色泽。0028产品香气具有本品特有的气味，无明显的异味。0029产。

14、品形状疏松粉末状0030产品水分50按照GB/T14769执行。0031产品灰分50按照GB/T14770执行。0032粗细度80目通过率950033丹参指标成分检测方法0034依据2005年版中国药典中丹参药材指标成分检测方法，经过验证，此方法稳定性、重现性较好。具体方法如下0035丹酚酸B含量测定方法00361、采用高效液相色谱法测定参照中国药典2005版00372、色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇乙腈甲酸水3010159为流动相；检测波长为286NM。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。00383、对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加75甲醇。

15、制成每1ML含014MG的溶液，即得。00394、供试品溶液的制备取本品粉末过三号筛约02G，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75甲醇50ML，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用75甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。00405、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10L，注入液相色谱仪，测定，即得。0041丹参提取液中化学成分十分复杂，除含有蒽醌类、黄酮类、糖类、氨基酸、挥发性成分主要为有机酸及其酯、甾体、环烯醚萜及其苷类化合物外，还含有大量的蛋白质、胶体、鞣质、淀粉、纤维素、无机盐等物质以及许多微粒、絮状物。化学成分相对分子质量分布较宽，为几十至几百万。

16、道尔顿，其中高相对分子质量的物质主要是胶体和纤维素等非药用性成分或药用性较差的成分，而有效成分如蒽醌类、糖类、甾体、环烯醚萜、苷类等的相对分子质量较小，一般都在50000以下。如丹参中的主要有效成分丹酚酸BC36H30O16，其分子量只有71861。由此可见，丹参提取液中有效成分和非药用成分的相对分子质量差别很大，故选用适宜分子量截留值的超滤膜对提取液进行分离，可很好的实现去除杂质及浓缩的目的，以便于与其他中药半成品或基酒定量调配，确保产品的稳定性。0042本工艺与传统工艺有着本质的区别，传统分离纯化工艺主要是利用不同组分在不同溶剂中溶解度的不同而实现分离；浓缩则是利用溶质和溶剂之间挥发度的差。

17、异，用加入热能的方法使溶剂汽化，而溶质则为非挥发性的，从而获得一个有利的气液平衡条件，达到浓缩的目的。0043而本工艺是以具有选择透过性的膜为分离介质，在某种驱动力压力差的作说明书CN102020620ACN102020634A4/6页6用下，物料中不同分子量的成分依据滤膜孔径的大小或通过或被截留，达到分离、浓缩的目的，它实现了中药有效部位的分离，充分保留了中药的药效。同时在本工艺中，我们根据丹参提取液的理化性质，以透过液的浊度、膜通量变化趋势及指标成分以丹酚酸B为丹参指标成分的透过率为考察指标，对膜的材质、膜管型号及操作条件进行了优化，实现了膜设备与丹参药材的匹配性，提高了膜设备抗污染的能力。

18、，使膜设备的分离效率得到进一步的提高。应用本工艺所得各丹酚酸产品经检测表明丹参素、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸A和丹酚酸B的最高收率分别为8555、8665、9927、9278和9934，远高于传统工艺。提取物中有效成分的含量高达90以上。0044在丹参提取液分离浓缩过程中，与传统的提取分离浓缩工艺相比，现有工艺的主要优点有00451、本发明采用多罐逆流提取代替传统的浸渍和热回流，有效地缩短了提取时间，减少了溶剂用量，提高了提取效率和有效成分转移率。00462、膜分离浓缩过程中无相变，有利于保存丹参有效成分的理化特性，且超滤、纳滤技术的应用会尽量多地保留丹参药材的多种有效成分，特别是可以保留丹参提。

19、取液中的一些微量成分。00473、提高了复方制剂或药酒的质量，较高相对分子质量非药效成分或低药效成分的存在，使中药有效部位的浓度降低，药效减弱，同时参与制备中药复方制剂或药酒时带来较大困难。而膜分离浓缩技术能最大限度地除去相对分子质量非药效成分或低药效成分，因而此技术能使产品质量得到较大提高。00484、由于不耗用有机溶剂，并且分离浓缩过程中不添加其它任何物质，因此与传统方法相比，膜分离浓缩技术可减少工序，缩短生产周期、降低生产成本，降低环境污染，且整个工艺可连续进行，利于大规模生产。00495、本发明对分离目标成分具有较高的选择性，可根据市场对产品的要求，改变微滤膜的规格和操作条件，从而很方。

20、便地控制所得产品的目标物质组成。四具体实施方式0050实施例100511、丹参提取液的制备0052将经整理干净后的丹参药材平均加至A、B、C三罐中进行逆流提取，提取温度60，提取溶剂为药材重量8倍量的30的乙醇，在梯度形成阶段，A罐提取时间分别为5MIN、15MIN，B罐提取时间为10MIN；在提取阶段，各罐提取时间为2H；在提取结束阶段，提取时间为2H；结束后将各罐提取液合并即得丹参提取液；00532、固液分离0054由于丹参提取液中含有较多的固体颗粒杂质，直接用陶瓷膜除沉会造成膜的严重污染，降低膜的使用寿命，因而药液的预处理是保证膜使用性能的关键，并能延长膜的使用寿命。0055将丹参提取液。

21、采用阿法拉伐碟片式离心机进行高速离心，时间为2030MIN，转速为6000R/MIN以上，得离心液；离心后的沉淀直接排掉，要求离心液澄清透明；00563、微滤除沉说明书CN102020620ACN102020634A5/6页70057微滤分离处理主要去除丹参提取液中的一些细菌、悬浮颗粒和胶体类物质；将上述离心液采用膜孔径为005UM、膜材质为AL2O3的陶瓷膜机组进行微滤分离处理；操作温度30，操作压力02MPA；微滤分离结束后，以截留液3倍量的纯净水对截留液顶洗三次，顶洗温度30，顶洗压力02MPA，得微滤液；要求微滤液澄清透明，浊度300NTU，有效成分丹酚酸B透过率95；00584、超滤。

22、分离0059将上述微滤液以1000分子量的聚偏氟乙烯超滤膜管进行超滤，操作压力08MPA，操作温度40，超滤膜分离结束后，用截留液2倍量的纯净水对截留液顶洗三次，顶洗温度40，顶洗压力08MPA，得超滤液；0060要求超滤液澄清透明，丹酚酸B透过率95，浊度150，固形物中丹酚酸B成分含量60；00615、纳滤浓缩0062将上述超滤液采用膜型号为200分子量，膜材质为聚酰胺的纳滤膜机组进行浓缩处理，浓缩温度40，操作压力015MPA，浓缩倍数10倍，得截留液；丹参纳滤截留液质量要求丹酚酸B截留率95，固形物中丹酚酸B成分含量80；00636、真空干燥0064对丹参纳滤截留液于50下进行真空干燥。

23、，即得。0065实施例200661、丹参提取液的制备中的提取温度为70，提取溶剂为药材重量12倍量的30的乙醇；余同实施例100672、固液分离0068同实施例100693、微滤除沉0070将上述离心液采用膜孔径为02UM、膜材质为AL2O3的陶瓷膜机组进行微滤分离处理；操作温度60，操作压力05MPA；微滤分离结束后，以截留液3倍量的纯净水对截留液顶洗三次，顶洗温度60、顶洗压力05MPA，得微滤液，余同实施例1；00714、超滤分离0072将上述微滤液以10000分子量的聚偏氟乙烯超滤膜管进行超滤，操作压力10MPA，操作温度45，顶洗温度45，顶洗压力10MPA，得超滤液；余同实施例1；。

24、00735、纳滤浓缩0074浓缩温度45，操作压力018MPA，浓缩倍数15倍，得截留液；余同实施例1；00756、真空干燥0076对丹参纳滤截留液于80下进行真空干燥，即得。0077实施例300781、丹参提取液的制备中的提取温度为65，提取溶剂为药材重量10倍量的30的乙醇；余同实施例100792、固液分离说明书CN102020620ACN102020634A6/6页80080同实施例100813、微滤除沉0082将上述离心液采用膜孔径为009UM、膜材质为AL2O3的陶瓷膜机组进行微滤分离处理；操作温度60，操作压力05MPA；微滤分离结束后，以截留液3倍量的纯净水对截留液顶洗三次，顶洗温度45、顶洗压力03MPA，得微滤液，余同实施例1；00834、超滤分离0084将上述微滤液以5000分子量的聚偏氟乙烯超滤膜管进行超滤，操作压力09MPA，操作温度42，顶洗温度42，顶洗压力09MPA，得超滤液；余同实施例1；00855、纳滤浓缩0086浓缩温度43，操作压力017MPA，浓缩倍数13倍，得截留液；余同实施例1；00876、真空干燥0088对丹参纳滤截留液于70下进行真空干燥，即得。0089本发明中所使用的30乙醇V/V为食用级。说明书CN102020620A。