一种阿托伐他汀钙异构体混合物及其中间体的制备方法 【技术领域】
本发明涉及化学合成领域， 尤其涉及阿托伐他汀钙异构体混合物及其中间体 2 的 异构体混合物的制备及纯度测定方法。背景技术
阿托伐他汀钙是由柏克 - 戴维斯公司 ( 华纳 - 兰伯特分公司 ) 研制， 并与辉瑞公 司联合销售的他汀类血脂调节药。阿托伐他汀钙属于一种竞争性、 选择性 HMG-CoA 还原酶 抑制剂， 能阻断 HMG-CoA 还原成羟甲戊酸， 从而大大降低总胆固醇和低密度脂蛋白的含量。
由于阿托伐他汀的活性优于在它之前的所有他汀类药物， 且毒副作用小， 因次一 经上市就表现出不同凡响的上升势头。2000 年后一跃成为全球销售额最高的药物， 在世界 调血脂药物市场上的占有率为 55％ ； 2004 年全球销售收入高达 120 亿美元， 成为全球首个 销售额破百亿美元的药品 ； 2005 年更是达到了 121.87 亿美元的高度。巨大的经济刺激对 阿托伐他汀钙的相关研究不断深入。 阿托伐他汀钙分子结构上存在两个手性中心， 存在四种立体构型， 其中如式 1 所 示的立体构型， 即 (3R， 5R)-7-[2-(4- 氟苯基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡 咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟基庚酸钙盐是活性成分， 其它三种构型， 即 (3R， 5S)-7-[2-(4- 氟苯 基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟基庚酸钙盐、 (3S， 5R)-7-[2-(4- 氟苯基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡咯 -1- 基 ]-3， 5- 二 羟基庚酸钙盐和 (3S， 5S)-7-[2-(4- 氟苯基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡 咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟基庚酸钙盐是杂质， 由于它们的结构非常接近， 给活性成分的测定分 析带来了很大的困难。
同时， 在现有技术中合成阿托伐他汀钙过程中的手性主要是由如式 2 所示的化合 物， 即 (4R， 6R)-6-(2- 氨乙基 )-2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧六环 - 乙酸叔丁酯， 带来的。目前 对于该中间体 ( 即侧链化合物 ) 的质量监控方法非常复杂， 因此， 对于该中间体的手性分析 和质量控制也一直是本领域尚待解决的问题。
美国专利 US5273995 中公开了阿托伐他汀钙的对映异构体， 但是另外一组非对映 异构体的合成与分析并没有涉及。
因此， 本领域迫切需要提供一种新的对上述中间体的质量控制方法， 从而进一步 有效保证产品阿托伐他汀钙的手性纯度。 发明内容 本发明旨在提供一种阿托伐他汀钙异构体混合物及其中间体 2 的异构体混合物 的制备方法和纯度测定方法。
在本发明的第一方面， 提供了一种如式 11A 所示的异构体混合物的制备方法， 所 述的方法包括步骤 ：
(a) 将如式 2 所示化合物和化合物 RCOX 混合， 得到如式 7A 所示的化合物 ；
(b) 将如式 7A 所示的化合物在酸的存在下进行开环， 得到如式 8A 所示的化合物 ；
(c) 将如式 8A 所示的化合物和氧化剂混合， 得到如式 9A 所示的异构体混合物 ；
(d) 将如式 9A 所示的化合物进行还原， 得到如式 10A 所示的的异构体混合物 ； 和
(e) 将如式 10A 所示的化合物的异构体混合物、 催化剂和丙酮、 2， 2- 二甲氧基丙烷 混合， 得到如式 11A 所示的异构体混合物 ；
其中 R 是紫外发射基团， 可为芳基或芳氧基 ； X 为氟、 氯、 溴、 或碘 ；
在另一优选例中， 所述的 RCOX 是氯甲酸苄酯、 氯乙酸苄酯、 或苯甲酰氯。 在另一优选例中， 步骤 (c) 中使用的氧化剂为氯鉻酸吡啶。 在另一优选例中， 步骤 (d) 中使用硼氢化钠进行氢还原。 在另一优选例中， 步骤 (e) 中的催化剂为对甲基苯磺酸。 在另一优选例中， 所述的方法在步骤 (e) 后还包括步骤 ： (f)HPLC 方法确定如式 11A 所示化合物的异构体混合物中各旋光组分的保留时 (g) 将步骤 (a) 中得到的如式 7A 所示的化合物通过步骤 (f) 中所述 HPLC 方法测定7间； 和
102101855 A CN 102101858说明书3/17 页如式 7A 所示化合物的 HPLC 纯度， 也就是如式 2 所示化合物的 HPLC 纯度 ； 所述的 HPLC 方法 是以直链淀粉 -3-(5- 氯 - 二甲基苯基氨基甲酸酯 ) 为填充剂 ； 柱温 ： 30-40℃ ； 以体积配比 94 ∶ 6 ∶ 0.1 的正己烷 - 乙醇 - 乙二胺为流动相 ； 检测波长为 224nm ； 检测限 5.7383ng ； 理 论塔板数按叔丁基 2-((4R， 6R)-6-(2- 苯甲酰胺乙基 )-2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧六环 -4- 基 ) 乙酸酯计算不低于 1000 ； 外标法测定。
在本发明的第二方面， 提供了一种如式 2 所示化合物的纯度测定方法， 所述的方 法包括步骤 ：
(a) 将如式 2 所示化合物和化合物 RCOX 混合， 得到如式 7A 所示的化合物 ；
(b) 将如式 7A 所示的化合物在酸的存在下进行开环， 得到如式 8A 所示的化合物 ；
(c) 将如式 8A 所示的化合物和氧化剂混合， 得到如式 9A 所示的异构体混合物 ；
(d) 将如式 9A 所示的化合物进行还原， 得到如式 10A 所示的的异构体混合物 ；
(e) 将如式 10A 所示的化合物的异构体混合物、 催化剂和丙酮、 2， 2- 二甲氧基丙烷 混合， 得到如式 11A 所示的异构体混合物 ； 和
(f)HPLC 方法确定如式 11A 所示化合物的异构体混合物中各旋光组分的保留时 间； 和 (g) 将步骤 (a) 中得到的如式 7A 所示的化合物通过步骤 (f) 中所述 HPLC 方法测定 如式 7A 所示化合物的 HPLC 纯度， 也就是如式 2 所示化合物的 HPLC 纯度 ； 所述的 HPLC 方法 是以直链淀粉 -3-(5- 氯 - 二甲基苯基氨基甲酸酯 ) 为填充剂 ； 柱温 ： 30-40℃ ； 以体积配比 94 ∶ 6 ∶ 0.1 的正己烷 - 乙醇 - 乙二胺为流动相 ； 检测波长为 224nm ； 检测限 5.7383ng ； 理 论塔板数按叔丁基 2-((4R， 6R)-6-(2- 苯甲酰胺乙基 )-2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧六环 -4- 基 ) 乙酸酯计算不低于 1000 ； 外标法测定 ；
其中 R 是紫外发射基团， 可为芳基、 或芳氧基 X 为氟、 氯、 溴、 或碘。
在另一优选例中， 所述的 RCOX 是氯甲酸苄酯、 氯乙酸苄酯、 或苯甲酰氯。
在另一优选例中， 步骤 (c) 中使用的氧化剂为氯鉻酸吡啶。
在另一优选例中， 步骤 (d) 中使用硼氢化钠进行氢还原。
在另一优选例中， 步骤 (e) 中的催化剂为对甲基苯磺酸。
在本发明的第三方面， 提供了一种如式 1 所示化合物的纯度测定方法， 所述的方 法包括步骤 ：
(1) 将如式 2’ 所示的异构体混合物和如式 12 所示化合物进行缩合反应， 得到如式 13 所示的的异构体混合物 ；
(2) 将如式 13 的异构体混合物进行酸水解后， 使得到的如式 14 所示的异构体混合 物形成如式 15 所示的钠盐的异构体混合物 ；
(3) 将如式 15 所示的钠盐的立体异构体混合物和醋酸钙混合， 得到如式 1’ 所示的 异构体混合物 ；
(4) 高效液相色谱 (High Performance Liquid Chromatography， HPLC) 方法确 定式 1’ 所示的异构体混合物中 (3R， 5R)-7-[2-(4- 氟苯基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯 胺基甲酰基 ) 吡咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟基庚酸钙盐、 (3R， 5S)-7-[2-(4- 氟苯基 )-5- 异丙 基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟基庚酸钙盐、 (3S， 5R)-7-[2-(4- 氟 苯基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟基庚酸钙盐和 (3S，
5S)-7-[2-(4- 氟苯基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟 基庚酸钙盐的保留时间 ； 和
(5) 重复步骤 (1) 至 (3)， 其中将步骤 (1) 中如式 2’ 所示的异构体混合物替换为 如式 2 所示的化合物， 从而得到如式 1 所示的化合物 ； 通过步骤 (4) 中所述 HPLC 方法测定 如式 1 所示化合物的 HPLC 纯度 ；
所 述 HPLC 方 法 是 以 直 链 淀 粉 衍 生 物 为 填 充 剂 ； 柱温 ： 30-40 ℃ ； 以体积配比 92 ∶ 8 ∶ 0.3 的正己烷 - 乙醇 - 冰醋酸为流动相 ； 检测波长为 246nm ； 理论塔板数按阿托伐 他汀钙计算不低于 1000 ； 外标法测定
在另一优选例中， 步骤 (1) 中缩合反应的催化剂是特戊酸。 在另一优选例中， 步骤 (2) 中使用盐酸进行酸水解， 并使用氢氧化钠形成钠盐。 在另一优选例中， 所述如式 2’ 所示的异构体混合物通过下述步骤得到 ： (i) 将如式 11A 所示的异构体混合物和钯碳混合， 得到如式 2’ 所示的异构体混合物；
； 其中 R 为芳基、 或芳氧基。
在另一优选例中， R 为苄氧基。
据此， 本发明提供了一种新的对阿托伐他汀钙中间体的质量控制方法， 从而进一 步有效保证产品阿托伐他汀钙的手性纯度。
附图说明
图 1 显示了中间体 (4R， 6R)-6-(2- 苯甲酰胺乙基 )-2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧六 环 - 乙酸叔丁酯苯甲酰衍生物的立体异构体混合物的 HPLC 图谱和液质联用 LC-MS 图谱 ；其中 A 是 HPLC 图谱 ； B 是图谱 A 中保留时间为 5.03 的异构体的 LC-MS 图谱 ； C是 图谱 A 中保留时间为 5.52 的异构体的 LC-MS 图谱 ； D 是图谱 A 中保留时间为 10.62 的异构 体的 LC-MS 图谱 ； E 是图谱 A 中保留时间为 20.70 的异构体的 LC-MS 图谱。( 保留时间有差 别在 LCMS 是正常的。因为从 HPLC 流出后还得经过一个质谱检测的管路， 中间会有非常细 微的时间差， 是本领域熟知且公认的 )
图 2 显示了阿托伐他汀钙异构体混合物 HPLC 图谱。 具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究， 意外地发现， 可以使用简单的方法在使如式 2 所 示的化合物消旋的同时加入紫外发色基团， 通过建立适当的 HPLC 测定条件确定如式 2′所 示异构体的混合物中各旋光体的保留时间， 从而有效检测作为合成阿托伐他汀钙的中间体 的如式 2 所示的化合物的手性纯度。进一步地， 通过使用消旋的如式 2 所示的化合物制备 得到消旋的如式 1 所示的阿托伐他汀钙， 再通过适当的 HPLC 测定条件， 可以利用消旋的如 式 1 所示的阿托伐他汀钙确定其中各种立体异构体的保留时间， 从而有效控制如式 1 所示 的阿托伐他汀钙的质量。
在此基础上， 完成了本发明。 定义 本文所述化合物的结构式列表如下 ：
如本文所列化学结构式， 凡是表示了立体异构体结构的， 该式就是表示这种立体 异构体 ； 凡是没有表示立体异构体结构的， 表示具有该化学结构式的立体异构体的混合物， 也可称为如式 n 所示化合物的异构体混合物。
如本文所述， “如式 1 所示化合物的 HPLC 纯度” 和 “如式 1 所示化合物的 HPLC 手 性纯度” 可以互换使用， 都是指将如式 1 所示化合物的立体异构体混合物， 经过 HPLC 检测， 根据所得到的色谱图谱， 进行面积归一法， (3R， 5R)-7-[2-(4- 氟苯基 )-5- 异丙基 -3- 苯 基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟基庚酸钙盐的峰面积在四种构型峰面积 总和中所占的百分数。其它三种构型是 (3R， 5S)-7-[2-(4- 氟苯基 )-5- 异丙基 -3- 苯 基 -4-( 苯 胺 基 甲 酰 基 ) 吡 咯 -1- 基 ]-3， 5- 二 羟 基 庚 酸 钙 盐、 (3S， 5R)-7-[2-(4- 氟 苯 基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟基庚酸钙盐和 (3S， 5S)-7-[2-(4- 氟苯基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟 基庚酸钙盐。
所述 HPLC 方法如下 ： 以直链淀粉衍生物为填充剂 ； 柱温 ： 30-40 ℃ ； 以体积配比 92 ∶ 8 ∶ 0.3 的正己烷 - 乙醇 - 冰醋酸为流动相 ； 检测波长为 246nm ； 检测限 0.512ng ； 理 论塔板数按阿托伐他汀钙计算不低于 1000。外标法测定。
可以使用本领域熟知的直链淀粉衍生物， 例如但不限于， 直链淀粉 -3-(5- 氯 - 二 甲 基 苯 基 氨 基 甲 酸 酯 )、 直 链 淀 粉 - 三 (3， 5- 二 甲 苯 基 氨 基 甲 酸 酯 )、 直链淀粉 - 三 [(S)-a- 甲基苄基氨基甲酸酯 ] 等。
如本文所述， “如式 2 所示化合物的 HPLC 纯度” 和 “如式 2 所示化合物的 HPLC 手性 纯度” 可以互换使用， 都是指将如式 2’ 所示异构体混合物， 经过 HPLC 检测， 根据所得到的色 谱图谱， 进行面积归一法， (4R， 6R)-6-(2- 氨乙基 )-2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧六环 - 乙酸叔丁 酯的峰面积在四种构型峰面积总和中所占的百分数。其它三种构型是 (4R， 6S)-6-(2- 氨乙 基 )-2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧六环 - 乙酸叔丁酯、 (4S， 6R)-6-(2- 氨乙基 )-2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧六环 - 乙酸叔丁酯和 (4S， 6S)-6-(2- 氨乙基 )-2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧六环 - 乙酸 叔丁酯。
所述的 HPLC 检测方法如下 ：
以直链淀粉 -3-(5- 氯 - 二甲基苯基氨基甲酸酯 ) 为填充剂 ； 柱温 ： 30-40 ℃ ； 以 体积配比 94 ∶ 6 ∶ 0.1 的正己烷 - 乙醇 - 乙二胺为流动相 ； 检测波长为 224nm ； 检测限 5.7383ng ； 理论塔板数按叔丁基 2-((4R， 6R)-6-(2- 苯甲酰胺乙基 )-2， 2- 二甲基 -1， 3- 二 氧六环 -4- 基 ) 乙酸酯计算不低于 1000。外标法测定。
可以使用本领域熟知的直链淀粉衍生物， 例如但不限于， 直链淀粉 -3-(5- 氯 - 二 甲 基 苯 基 氨 基 甲 酸 酯 )、 直 链 淀 粉 - 三 (3， 5- 二 甲 苯 基 氨 基 甲 酸 酯 )、 直链淀粉 - 三 [(S)-a- 甲基苄基氨基甲酸酯 ] 等。
侧链化合物的手性纯度测定和制备方法
本发明提供一种如式 11A 所示的异构体混合物的制备方法， 所述的方法包括步 骤：
(a) 将如式 2 所示化合物和化合物 RCOX 混合， 得到如式 7A 所示的化合物 ；
(b) 将如式 7A 所示的化合物在酸的存在下进行开环， 得到如式 8A 所示的化合物 ；
(c) 将如式 8A 所示的化合物和氧化剂混合， 得到如式 9A 所示的异构体混合物 ；
(d) 将如式 9A 所示的化合物进行还原， 得到如式 10A 所示的的异构体混合物 ； 和 (e) 将如式 10A 所示的化合物的异构体混合物、 催化剂和丙酮、 2， 2- 二甲氧基丙烷 混合， 得到如式 11A 所示的异构体混合物 ；
其中 R 是紫外发射基团， 芳基 ； 芳氧基 ；
X 为氟、 氯、 溴、 或碘。
在本发明的一个优选例中， 使如式 2 所示化合物衍生化并消旋的路线如下 ：然后将得到的如式 3’ 所示的异构体混合物进行 HPLC 检测， 得到其中所含有的如 式 3 所示化合物及其它三种立体异构体的保留时间， 所述 HPLC 方法如下 ：
以直链淀粉 -3-(5- 氯 - 二甲基苯基氨基甲酸酯 ) 为填充剂 ； 柱温 ： 30-40 ℃ ； 以 体积配比 94 ∶ 6 ∶ 0.1 的正己烷 - 乙醇 - 乙二胺为流动相 ； 检测波长为 224nm ； 检测限 5.7383ng ； 理论塔板数按叔丁基 2-((4R， 6R)-6-(2- 苯甲酰胺乙基 )-2， 2- 二甲基 -1， 3- 二 氧六环 -4- 基 ) 乙酸酯计算不低于 1000。
可以使用本领域熟知的直链淀粉衍生物， 例如但不限于， 直链淀粉 -3-(5- 氯 - 二 甲 基 苯 基 氨 基 甲 酸 酯 )、 直 链 淀 粉 - 三 (3， 5- 二 甲 苯 基 氨 基 甲 酸 酯 )、 直链淀粉 - 三 [(S)-a- 甲基苄基氨基甲酸酯 ] 等。
该 HPLC 方法的分离度为 2.682 ； 通过该 HPLC 方法可以获得对于按照本发明提供 的方法合成得到的式 3 所示的化合物的 HPLC 纯度， 该 HPLC 纯度数值就是如式 2 所示化合 物的 HPLC 纯度。
阿托伐他汀钙的制备方法和手性纯度纯度
本发明提供一种如式 1’ 所示的化合物的异构体混合物的制备方法 ：
(1) 将如式 2’ 所示的异构体混合物和如式 12 所示化合物进行缩合反应， 得到如式 13 所示的化合物的异构体混合物 ；
(2) 将如式 13 所示的异构体混合物进行酸水解后， 使得到的如式 14 所示异构体混 合物形成如式 15 所示钠盐的异构体混合物 ；
(3) 将如式 15 所示钠盐的异构体混合物和醋酸钙混合， 得到如式 1’ 所示化合物的 消旋混合物。
在本发明的一个优选例中， 如式 1’ 所示的化合物的消旋混合物的合成路线如下 ：
本发明将得到的如式 1’所示的异构体混合物进行 HPLC 检测， 得到其中所含 有的立体异构体 (3R， 5R)-7-[2-(4- 氟苯基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡 咯 -1- 基 ]-3， 5- 二 羟 基 庚 酸 钙 盐、 (3R， 5S)-7-[2-(4- 氟 苯 基 )-5- 异 丙 基 -3- 苯 基 -4-( 苯 胺 基 甲 酰 基 ) 吡 咯 -1- 基 ]-3， 5- 二 羟 基 庚 酸 钙 盐、 (3S， 5R)-7-[2-(4- 氟 苯 基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟基庚酸钙盐和 (3S， 5S)-7-[2-(4- 氟苯基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基甲酰基 ) 吡咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟 基庚酸钙盐的保留时间， 所述 HPLC 方法如下 ：以直链淀粉衍生物为填充剂 ； 柱温 ： 30-40 ℃ ； 以体积配比 92 ∶ 8 ∶ 0.3 的正己 烷 - 乙醇 - 冰醋酸为流动相 ； 检测波长为 246nm ； 检测限 0.512ng ； 理论塔板数按阿托伐他 汀钙计算不低于 1000。
可以使用本领域熟知的直链淀粉衍生物， 例如但不限于， 直链淀粉 -3-(5- 氯 - 二 甲 基 苯 基 氨 基 甲 酸 酯 )、 直 链 淀 粉 - 三 (3， 5- 二 甲 苯 基 氨 基 甲 酸 酯 )、 直链淀粉 - 三 [(S)-a- 甲基苄基氨基甲酸酯 ] 等。
该 HPLC 方法的分离度为 1.695 ； 通过该 HPLC 方法对于按照本领域熟知的方法合 成得到的式 1 所示的化合物 ((3R， 5R)-7-[2-(4- 氟苯基 )-5- 异丙基 -3- 苯基 -4-( 苯胺基 甲酰基 ) 吡咯 -1- 基 ]-3， 5- 二羟基庚酸钙盐 ) 可以获得如式 1 所示化合物的 HPLC 纯度， 从而进行有效的含量检测和质量控制。
要进行上述的本发明提供的如式 1’ 所示异构体混合物的制备方法， 关键是得到如 式 2’ 所示的异构体混合物， 本发明提供了一种制备如式 2’ 所示异构体混合物的方法 ：
(a) 将如式 2 所示化合物和化合物 RCOX 混合， 得到如式 7A 所示的化合物 ；
(b) 将如式 7A 所示的化合物在酸的存在下进行开环， 得到如式 8A 所示的化合物 ；
(c) 将如式 8A 所示的化合物和氧化剂混合， 得到如式 9A 所示的异构体混合物 ；
(d) 将如式 9A 所示的化合物进行还原， 得到如式 10A 所示的的异构体混合物 ； 和
(e) 将如式 10A 所示的化合物的异构体混合物、 催化剂和丙酮、 2， 2- 二甲氧基丙烷 混合， 得到如式 11A 所示的异构体混合物 ；； 和
(f) 将如式 11A 所示的化合物和钯碳混合， 得到如式 2’ 所示的异构体混合物 ；
其中 R 可为芳基 ； 芳氧基 ；
X 为氟、 氯、 溴、 或碘。
在本发明的一个优选例中， 如式 2’ 所示异构体混合物的合成路线如下 ：
要得到纯度高的如式 1 所示的化合物， 合成中间体， 即如式 2 所示的化合物的纯度 必须符合要求， 为了有效检测如式 2 所示化合物的纯度， 本发明提供了一种使如式 2 所示化 合物衍生化的检测方法 ：
(i) 将如式 2 所示的化合物和苯甲酰氯混合， 得到如式 3 所示的化合物 ；
(ii) 将如式 3 所示的化合物和盐酸混合， 得到如式 4 所示的化合物 ；
(iii) 将如式 4 所示的化合物和氯鉻酸吡啶混合， 得到如式 5 所示的化合物 ；
(iv) 将如式 5 所示的化合物进行氢还原， 得到如式 6 所示的异构体混合物 ；
(v) 将如式 6 所示的异构体混合物和丙酮、 2， 2- 二甲氧基丙烷混合， 得到如式 3’ 所示的异构体混合物。
在本发明的一个优选实施例中， 合成阿托伐他汀钙的立体异构体的路线如下 ：
第一步 ： 化合物 2 与氯甲酸苄酯反应得到化合物 7， 化合物 2 与氯甲酸苄酯的摩尔 比 1 ∶ 1.2， 以碳酸钾作催化剂， 碳酸钾和化合物 2 的摩尔比是 2.5 ∶ 1， 将 2 溶解于二氯甲 烷和水中加入碳酸钾， 滴加氯甲酸苄酯， 控制温度不超过 15℃， 滴加完毕后室温搅拌过夜。 加水， 分液， 用二氯甲烷抽提水相两次， 合并有机相， 用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥浓 缩得到化合物 7 的粗品。
第二步 ： 溶解化合物 7 到甲醇中， 滴加 10％盐酸， 10％盐酸和化合物 7 的摩尔比是 2 ∶ 1， 滴加完毕后搅拌 2-3h， 加入饱和碳酸氢钠溶液调 pH 到 6-7， 浓缩， 加入二氯甲烷分 液， 有机相用饱和食盐水洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 浓缩得到化合物 8 的粗品。
第三步 ： 溶解化合物 8 到二氯甲烷中， 取氯铬酸吡啶 (PCC) 与化合物物 4 的摩尔比 是 4 ∶ 1， 溶于二氯甲烷中， 加入三倍质量的硅胶或者硅藻土。室温下滴加化合物 8 的二氯 甲烷溶液， 搅拌过夜。过滤得到化合物 9 的二氯甲烷溶液， 经过柱层析分离得到化合物 9。
第四步 ： 溶解化合物 9 到甲醇中冷却到 -10℃， 分批次加入硼氢化钠与化合物 9 的 摩尔比是 3 ∶ 1。保持 -10℃搅拌 1.5h。加水和二氯甲烷分液， 水相用二氯甲烷抽提 2 次， 有机相合并， 用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩得到异构体混合物 10。
第五步 ： 异构体混合物 10 溶于体积比 1 ∶ 1 的丙酮和 2， 2- 二甲氧基丙烷中， 加入 催化量的对甲基苯磺酸， 搅拌 0.5h， 加入饱和碳酸氢钠溶液调 pH 到 6-7， 浓缩后加入乙酸乙 酯分液， 有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥后浓缩得到异构体混合物 11。
第六步 ： 溶解异构体混合物 11 的立体异构体混合物于甲醇中， 加入 5％钯碳和冰 乙酸。冰乙酸和异构体混合物 11 的摩尔比是 1.2 ∶ 1， 钯碳的质量为异构体混合物 11 总质 量的十分之一。在 45psi 压力下氢化 3h。过滤， 加入饱和碳酸氢钠溶液调 pH 值到 7， 浓缩， 加入二氯甲烷分液， 用无水硫酸钠干燥后浓缩得到式 2’ 的立体异构体混合物。
第七步 ： 缩合反应， 摩尔比， 化合物 12 ∶化合物 2 ∶特戊酸＝ 1 ∶ 1.1 ∶ 0.3。 将化合物 12， 异构体混合物 2’ 以及特戊酸溶于混合溶剂 ( 四氢呋喃∶甲苯∶正庚烷＝ 1 ∶ 1 ∶ 4) 中， 加入有分水装置的设备中， 升温回流在 85℃保温 24h， 降温到 30-40℃， 加入 饱和碳酸氢钠溶液搅拌 0.5h， 静置 0.5h， 分层， 有机相水洗两次， 用饱和食盐水洗涤一次， 用无水硫酸钠干燥后浓缩得到异构体混合物 13.
第八步 ： 水解反应， 摩尔比 ： 异构体混合物 13 ∶ HCl ∶ NaOH ＝ 1 ∶ 8 ∶ 8， 将异构 体混合物 13 溶于甲醇， 滴加 10％盐酸， 滴毕， 搅拌澄清， 于 28-32℃条件下反应 1 小时， 反 应毕， 滴加配制好的氢氧化钠溶液 (40％ )， 控温 30℃下， 滴毕， 溶液澄清， 28-32℃搅拌反应 1 小时， 反应毕， 溶液于 35-40℃外温下减压浓缩， 在加入适量水， 冷却到 10℃， 2 小时， 开搅 拌， 过滤， 水洗后得钠盐异构体混合物 15， 60℃鼓风干燥 8 小时， 粉碎。
第九步 ： 成盐， 摩尔比 ： 化合物 15 ∶醋酸钙＝ 1 ∶ 0.5。将上步粉碎的钠盐异构体 混合物 15 加入装有甲醇带有回流装置的反应设备中。升温回流 0.5h， 过滤， 母液转移到反 应瓶中， 加水， 搅拌澄清， 60℃下缓慢滴加乙酸钙溶液 (0.5mol/L 甲醇和水体积比 1 ∶ 1)。 滴毕， 回流半小时， 停止加热， 水冷却到 40℃， 打开冷冻， 降温到 10℃， 保温 4 小时， 过滤， 水 洗。60℃鼓风干燥 8 小时， 控制水分 3.5-5.5％， 粉碎， 得钙盐异构体混合物 1’ 。
在本发明的一个优选实施例中， 中间体 (4R， 6R)-6-(2- 苯甲酰胺乙基 )-2， 2- 二甲 基 -1， 3- 二氧六环 - 乙酸叔丁酯苯甲酰衍生物的立体异构体的合成路线如下 ：
第一步 ： 化合物 2 与苯甲酰氯反应得到化合物 3， 化合物 2 与苯甲酰氯的摩尔比 1 ∶ 1， 将 2 溶解于二氯甲烷中， 滴加苯甲酰氯控制温度不超过 40℃， 滴加完毕后 30℃搅拌 2h。加入水洗涤， 分液， 有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物 3 的粗品。
第二步 ： 溶解化合物 3 到甲醇中， 滴加 10％盐酸， 10％盐酸和化合物 3 的摩尔比是 2 ∶ 1， 滴加完毕后搅拌 2-3h， 加入饱和碳酸氢钠溶液调 pH 到 6-7， 浓缩， 加入二氯甲烷分 液， 有机相用饱和食盐水洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 浓缩得到异构体混合物 4 的粗品。
第三步 ： 溶解异构体混合物 4 到二氯甲烷中， 取氯铬酸吡啶 (PCC) 与化合物物 4 的 摩尔比是 4 ∶ 1， 溶于二氯甲烷中， 加入三倍质量的硅胶或者硅藻土。室温下滴加异构体混 合物 4 的二氯甲烷溶液， 搅拌过夜。过滤得到化合物 5 的二氯甲烷溶液， 经过柱层析分离得 到化合物 5。
第四步 ： 溶解化合物 5 到甲醇中冷却到 -10℃， 分批次加入硼氢化钠与化合物 5 的 摩尔比是 3 ∶ 1。保持 -10℃搅拌 1.5h。加水和二氯甲烷分液， 水相用二氯甲烷抽提 2 次， 有机相合并， 用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩得到异构体混合物 6。
第五步 ： 异构体混合物 6 溶于体积比 1 ∶ 1 的丙酮和 2， 2- 二甲氧基丙烷中， 加入 催化量的对甲基苯磺酸， 搅拌 0.5h， 加入饱和碳酸氢钠溶液调 pH 到 6-7， 浓缩后加入乙酸乙 酯分液， 有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物 3 的立体异构体混 合物， HPLC-MS 得到四组峰， 质谱显示其分子量相同。
本发明提供了一种阿托伐他汀钙及式 2 所示的原料的手性纯度的控制方法所述的方法包括步骤 ： (1) 将如式 2’ 所示化合物的消旋混合物和如式 12 所示化合物进行缩合反 应， 得到如式 13 所示的异构体混合物 ； (2) 将如式 13 所示的异构体混合物进行酸水解后， 使得到的如式 14 所示异构体混合物形成如式 15 所示的钠盐的异构体混合物 ； (3) 将如式 15 所示异构体混合物和醋酸钙混合， 得到如式 1’ 所示的异构体混合物 ； (4)HPLC 方法测定 如式 1’ 所示异构体混合物中各个立体异构体的保留时间从而确定式 1 所示的化合物， 即阿 托伐他汀钙的手性纯度 ； (5) 将式 2 所示的原料通过以下衍生化步骤从而实现 HPLC 的手性 纯度的检测 ：
(i) 将如式 2 所示的化合物和苯甲酰氯混合， 得到如式 3 所示的化合物 ；
(ii) 将如式 3 所示的化合物和盐酸混合， 得到如式 4 所示的化合物 ；
(iii) 将如式 4 所示的化合物和氯鉻酸吡啶混合， 得到如式 5 所示的化合物 ；
(iv) 将如式 5 所示的化合物进行氢还原， 得到如式 6 所示的化合物 ；
(v) 将如式 6 所示的化合物和丙酮、 2， 2- 二甲氧基丙烷混合， 得到如式 3’ 所示化 合物的异构体混合物 ；
(vi)HPLC 方法确定如式 3’ 所示化合物的异构体混合物中各组分的保留时间 ； 和
(vii) 将步骤 (i) 中得到的如式 3 所示的化合物通过步骤 (vi) 中所述 HPLC 方法 测定如式 3 所示化合物的 HPLC 纯度， 也就是如式 2 所示化合物的 HPLC 纯度 ；
通过以上的方法， 简单有效的实现了生产过程中对化合物 1， 即阿托伐他汀钙及其 中间体化合物 2 的手性纯度的控制。从而保证了产品阿托伐他汀钙的纯度和质量。
本发明提到的上述特征， 或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示 的所有特征可与任何组合物形式并用， 说明书中所揭示的各个特征， 可以任何可提供相同、 均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明， 所揭示的特征仅为均等或相似特 征的一般性例子。
本发明的主要优点在于 ：
1、 对化合物 2 进行衍生化操作简单， 实验条件相对温和， 易于 HPLC 检测 ； 结合一定 的手性分析条件能够简洁明了的实现对化合物 2 手性的检测和控制。
2、 发明了合成化合物 2 立体异构体的方法， 同时得到了化合物 2 的一个对映异构 体和两个非对映异构体。
3、 合成阿托伐他汀钙立体异构体的方法， 简单实用， 条件温和。 结合一定的手性分 析条件能有效实现阿托伐他汀钙的立体异构体分析检测。
下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 通常按照常规条 件或按照制造厂商所建议的条件。 除非另外说明， 否则所有的百分数、 比率、 比例、 或份数按 重量计。
本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的， 例如是指在 100 毫升的溶液中溶质的重量。
除非另行定义， 文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意 义相同。此外， 任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文 中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
合成中间体 (4R， 6R)-6-(2- 苯甲酰胺乙基 )-2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧六环 - 乙酸叔丁酯苯甲酰衍生物的立体异构体 ：
实施例 1 ：
化合物 2 与苯甲酰氯反应得到化合物 3， 化合物 2 与苯甲酰氯的摩尔比 1 ∶ 1， 将 2(10g， 0.037mol) 溶解于二氯甲烷中， 滴加苯甲酰氯 (5.18g， 0.037mol)， 控制温度不超过 40℃， 滴加完毕后 30℃搅拌 2h。加入水洗涤， 分液， 有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩得到化 合物 3 的粗品 10.1g， 收率 72％。
实施例 2 ：
溶解化合物 3(10.1g， 0.027mol) 到甲醇中， 滴加 10％盐酸， 10％盐酸和化合物 3 的 摩尔比是 2 ∶ 1， 滴加完毕后搅拌 2-3h， 加入饱和碳酸氢钠溶液调 pH 到 6-7， 浓缩， 加入二 氯甲烷分液， 有机相用饱和食盐水洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 浓缩得到异构体混合物 4 粗品 8.5g， 收率 93％。
实施例 3 ：
溶解异构体混合物 4(15g， 0.044mol) 到二氯甲烷中， 取氯铬酸吡啶 (PCC) 与异构 体混合物 4 的摩尔比是 4 ∶ 1， 溶于二氯甲烷中， 加入 45g 的硅胶。室温下滴加异构体混合 物 4 的二氯甲烷溶液， 搅拌过夜。过滤得到化合物 5 的二氯甲烷溶液， 经过柱层析分离得到 化合物 5 纯品 8.9g， 0.027mol 收率 61％。
实施例 4 ：
溶解化合物 5(8.9g， 0.027mol) 到甲醇中冷却到 -10 ℃， 分批次加入硼氢化钠 (3.1g， 0.081mol)。保持 -10 ℃搅拌 1.5h。加水和二氯甲烷分液， 水相用二氯甲烷抽提 2 次， 有机相合并， 用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩得到异构体混合物 6(7.5g， 收率 82％ )。
实施例 5 ：
化合物 6 溶于体积比 1 ∶ 1 的丙酮和 2， 2- 二甲氧基丙烷中， 加入催化量的对甲基 苯磺酸， 搅拌 0.5h， 加入饱和碳酸氢钠溶液调 pH 到 6-7， 浓缩后加入乙酸乙酯分液， 有机相 用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥后浓缩得到异构体混合物 3’ ， HPLC-MS 得到四组峰， 质 谱显示其分子量相同。
合成阿托伐他汀钙衍生物立体异构体 ：
合成化合物 11 的反应路线于合成条件与合成化合物 6 类似。
实施例 6 ：
溶解异构体混合物 7(15g， 0.037mol) 于甲醇中， 加入 5％钯碳 (1.5g) 和冰乙酸。 冰乙酸和异构体混合物 7 的摩尔比是 1.2 ∶ 1， 在 45psi 压力下氢化 3h。过滤， 加入饱和碳 酸氢钠溶液调 pH 值到 7， 浓缩， 加入二氯甲烷分液， 用无水硫酸钠干燥后浓缩得到异构体混 合物 2’ (9.0g)， 收率 89％。
实施例 7 ：
将化合物 12(14.2g， 0.034mol)， 异构体混合物 2’ (10g， 0.037mol) 以及特戊酸 (1.02g， 0.01mol) 溶于混合溶剂 ( 四氢呋喃∶甲苯∶正庚烷＝ 1 ∶ 1 ∶ 4) 中， 加入有分水装 置的设备中， 升温回流在 85℃保温 24h， 降温到 30-40℃， 加入饱和碳酸氢钠溶液搅拌 0.5h， 静置 0.5h， 分层， 有机相水洗两次， 用饱和食盐水洗涤一次， 用无水硫酸钠干燥后浓缩得到 异构体混合物 13 粗品 12.9g， 收率 58％。实施例 8 ：
将异构体混合物 13(10g， 0.015mol) 溶于甲醇， 滴加 10 ％盐酸 (0.12mol)， 滴毕， 搅拌澄清， 于 28-32 ℃条件下反应 1 小时， 反应毕， 滴加配制好的氢氧化钠溶液 (40 ％ ) (0.12mol)， 控温 30℃下， 滴毕， 溶液澄清， 28-32℃搅拌反应 1 小时， 反应毕， 溶液于 35-40℃ 外温下减压浓缩， 在加入适量水， 冷却到 10℃， 2 小时， 开搅拌， 过滤， 水洗后得钠盐异构体 混合物 15(0.013mol， 收率 89％ )， 60℃鼓风干燥 8 小时， 粉碎
实施例 9 ：
将上步粉碎的钠盐异构体混合物 15 加入装有甲醇带有回流装置的反应设备中。 升温回流 0.5h， 过滤， 母液转移到反应瓶中， 加水， 搅拌澄清， 60 ℃下缓慢滴加乙酸钙溶液 (0.5mol/L 甲醇和水体积比 1 ∶ 1)(0.0065mol)。滴毕， 回流半小时， 停止加热， 水冷却到 40 ℃， 打开冷冻， 降温到 10 ℃， 保温 4 小时， 过滤， 水洗。60 ℃鼓风干燥 8 小时， 控制水分 3.5-5.5％， 粉碎， 得异构体混合物 1’ 7.2g， 收率 92％。
实施例 10 ：
以直链淀粉 - 三 (3， 5- 二甲苯基氨基甲酸酯 ) 为填充剂 ； 柱温 ： 30-40℃； 以体积配 比 92 ∶ 8 ∶ 0.3 的正己烷 - 乙醇 - 冰醋酸为流动相 ； 检测波长为 246nm ； 检测限 0.512ng ； 理论塔板数按阿托伐他汀钙计算不低于 1000。 精密称取阿托伐他汀钙异构体混合物适量， 置于 25ml 的容量瓶中， 先加 2ml 甲醇 超声使溶解， 再加 2ml 乙醇， 然后用正己烷定容至刻度， 摇匀， 制成每 1mL 中约含 0.5mg 的溶 液作为供试液， 取供试液 20ul， 注入液相色谱仪， 按峰面积归一化法计算。
实施例 11 ：
以直链淀粉 - 三 [(S)-a- 甲基苄基氨基甲酸酯 ] 为填充剂 ； 柱温 ： 30-40 ℃ ； 以 体积配比 94 ∶ 6 ∶ 0.1 的正己烷 - 乙醇 - 乙二胺为流动相 ； 检测波长为 224nm ； 检测限 5.7383ng ； 理论塔板数按叔丁基 2-((4R， 6R)-6-(2- 苯甲酰胺乙基 )-2， 2- 二甲基 -1， 3- 二 氧六环 -4- 基 ) 乙酸酯计算不低于 1000。取适量化合物 3， 精密测定， 以上述流动相稀释， 制成每 1mL 含 0.5mg 的溶液为供试品溶液 ； 另取异构体混合物 3’ 制成每 1mL 中分别含 15ug 的溶液， 作为对照溶液。外标法计算。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已， 并非用以限定本发明的实质技术内容范 围， 本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中， 任何他人完成的技术 实体或方法， 若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同， 也或是一种等效的变更， 均将 被视为涵盖于该权利要求范围之中。