嘧啶、 三嗪类化合物以及它们作为药剂的用途 【技术领域】
本发明涉及的取代嘧啶类和 [1， 3， 5]- 三嗪类衍生物， 它们通过抑制一种或多种 蛋白激酶而具有广泛的治疗用途。本发明还提供了该化合物的制备方法、 包含化合物的可 药用组合物、 化合物的用途、 和该化合物及组合物在治疗各种疾病、 病症或紊乱中的使用方 法。背景技术
近年来， 人们对与疾病相关的酶类及其生物分子的结构有了进一步认识， 这对研 究新型治疗药物非常有帮助。蛋白激酶家族是一类重要的酶， 它一直是人们广泛研究的课 题。
蛋白激酶家族是人类基因组中最大的一类酶， 它由 500 个基因组成。大多数蛋白 激酶都含有由 250-300 个氨基酸残基构成的有保守核心结构的催化域。该催化域包含 ATP 的结合口袋， ATP 的末端磷酸基团共价地转移到大分子底物上。蛋白激酶可以根据他们磷 酸化不同底物进行分类， 如丝氨酸 / 苏氨酸蛋白、 酪氨酸蛋白等。
蛋白激酶通过影响磷酰基， 使之从三磷酸核苷转移到与信号传导通路相关的蛋白 受体上， 从而间接调节细胞内信号。 这些磷酸化反应犹如分子的闭合开关一样， 一旦受到多 种细胞外和其它的刺激而触发将调整或调节靶蛋白的生物学功能。 胞外刺激可能会影响一 个或多个细胞反应， 如细胞生长、 迁移、 分化、 激素分泌、 转录因子活化、 肌肉收缩、 葡萄糖代 谢、 蛋白质合成控制、 以及细胞周期调控等。
许多疾病都与蛋白激酶介导引起的异常细胞反应有关。 这些疾病包括过敏、 哮喘、 阿尔茨海默氏病、 自身免疫性疾病、 骨骼疾病、 癌症、 心血管疾病、 发炎性疾病、 激素有关的 疾病、 代谢疾病、 神经和神经退行性疾病等， 并且不仅限于此。因此， 在药物化学的研究中， 人们会花费大量精力去寻找可以作为治疗药物的有效蛋白激酶抑制剂。
从文献中得知， 大多数能抑制蛋白激酶的分子都是通过对抗蛋白激酶与 ATP 的结 合而发挥作用。 之前报道过具有蛋白激酶抑制作用的化合物有 2- 苯胺 -4- 杂环嘧啶 (Wang， S. ； et al.WO 2003029248， Cyclacel Limited， UK.Fischer， P.M.， WO2002079193， Cyclacel Limited， UK.Wang， S. ； Fischer， P.M.US2002019404， Cyclacel Limited， UK. ； Fischer， P.M. ； Wang， S.WO2001072745， Cyclacel Limited， UK) 和 2- 苯胺 4- 苯基嘧啶 (Wang S.， et al.WO2005012262， Cyclacel Limited， UK)， 其中 2- 苯胺 -4- 杂环嘧啶对周期依赖性蛋白激 酶 (CDK) 有特别的抑制作用。
已 知 具 有 蛋 白 激 酶 抑 制 作 用 的 还 有 [1， 3， 5] 三 嗪 类 化 合 物 (Liu C， WO2004032875， Squibb Bristol Myers Co.US ； Armistead， D M， et al.WO200125220， Kinetix Pharmaceuticals Inc.US)。
细胞周期依赖性蛋白激酶 (CDK) 属于丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶家族， 在调节细 胞周期及转录周期时， 这些酶与各种细胞周期蛋白亚基起着极重要的作用。十种不同的 CDK(CDK1-9 和 11) 与许多真核细胞的重要调节途径有关， 包括细胞周期调控、 细胞凋亡、 神经生理、 分化和转录等途径。
CDK 根据其作用不同可以分为两大类。 细胞周期调节 CDK 主要由 CDK1、 CDK2、 CDK3、 CDK4 和 CDK6 组成， 它们与其细胞周期蛋白配偶体包括 A、 B、 D1、 D2、 D3、 E、 F 作用， 从而调节 了细胞周期进程。转录调节 CDK 包括 CDK7、 CDK8、 CDK9 和 CDK11， 它们通过与细胞周期蛋白 C、 H、 K、 L1、 L2、 T1、 T2 作用来调节转录。
CDK 已经被认为与细胞增殖紊乱 ( 尤其是癌症 ) 有关。细胞分裂周期异常直接或 间接地引起细胞增殖紊乱， 而 CDK 对调控细胞分裂周期不同阶段起着至关重要的作用。因 此， CDK 及其相关的细胞周期蛋白抑制剂是治疗癌症的有效靶点。
CDK 在细胞凋亡和 T- 细胞生长中能发挥作用， 这主要是由于 CDK 有调控转录功 能。例如， 最近有一种抗肿瘤药黄酮类 CDK 抑制剂 Flavopiridol 在慢性淋巴细胞性白血病 (CLL) 的治疗中获得了明确的临床疗效。通过抗凋亡蛋白的增量调节， CLL 表现出细胞抗凋 亡的特征。CDK9 对于 mRNA 延长是必需的， 通过抑制 CDK9 水平上的转录能选择性恢复 CLL 细胞凋亡。在药理学和药剂学上都需要良好的 CDK 抑制剂， 这些抑制剂需要有明确的激酶 选择性、 细胞层面的特异性和抗慢性淋巴细胞性白血病的疗效， 并能有效对抗其他 CDK 介 导引起的疾病。
此外， 许多病毒的复制过程都需要 CDK， 特别是 CDK2、 CDK7 和 CDK9。有文章报道 CDK 抑制剂能抑制病毒的复制， 这些病毒包括人类免疫缺陷病毒、 人巨细胞病毒、 疱疹病毒、 水痘带状疱疹病毒。
CDK 特别是 CDK9 的抑制剂是治疗心血管疾病包括心脏肥大的一个潜在的新策略。 心脏肥大的特点是 mRNA 和蛋白质合成的全面增加。CDK7 和 CDK9 与心肌肥厚有密切联系， 因为它们是细胞转录的主要驱动力。因此， 抑制 CDK9 和与其相关的细胞周期蛋白是治疗心 血管疾病的适当药物靶点。
抑制 CDK 对神经退行性疾病如阿尔茨海默病也有治疗作用。在 CDK5/p25 的作用 下， Tau 蛋白高度磷酸化， 导致出现了与阿尔茨海默病相关的双股螺旋细丝。
抑制其它一个或多个丝氨酸 / 苏氨酸激酶及酪氨酸激酶， 对于治疗由这些激酶间 接导致的多种疾病也有效。丝氨酸 / 苏氨酸激酶包括极光激酶、 糖原合成激酶 (GSK)、 极本 样激酶 (PLK)。酪氨酸激酶包括 Ableson 酪氨酸激酶 (BCR-ABL)、 FMS 相关的酪氨酸蛋白激 酶 (FLT)、 IKB 激酶 (IKK)、 Janus 激酶 (JAK)、 血小板源性生长因子 (PDGF) 受体酪氨酸激酶、 血管内皮细胞生长因子 (VEGF) 受体酪氨酸激酶和 Src 家族。
GSK3 可以对许多底物进行磷酸化， 从而参与多个生化途径的调控。例如， GSK 在 中枢和外周神经系统能高度表达。因此， 抑制 GSK3 对于治疗中枢神经系统疾病如帕金森和 阿尔茨海默病很有意义。此外已经证实， GSK3 在 II 型糖尿病患者肌细胞中会过度表达， 且 骨骼肌中 GSK3 活性和胰岛素活性成负相关。因此， 抑制 GSK3 对于治疗糖尿病 ( 尤其是 II 型 ) 和糖尿病性神经病变有重要的意义。
极光激酶和 PLK 也是治疗增生疾病的重要靶点。基于对这两种激酶功能的认识， 抑制极光激酶和 PLK 的活性会破坏有丝分裂， 导致细胞周期阻滞从而减缓肿瘤细胞的生 长， 诱导肿瘤细胞凋亡。
该发明提供了一类新的取代 -2- 苯胺基 -4- 桂皮酰哌啶和取代 -4- 芳基 -[1， 3， 5] 三嗪 -2- 苯胺作为蛋白激酶抑制剂。这些抑制剂都具有广泛的治疗用途， 特别是当化合物中嘧啶类的 2、 4、 5 和 / 或 6 位被取代或者是 [1， 3， 6] 三嗪类的 2、 4、 6 位被取代时。这些化 合物难以合成获得。 我们发现， 该发明提供的一类化合物可以有效抑制蛋白激酶类， 并具优 选择性抑制的优点， 是一类潜在的有效治疗剂。 发明内容 本发明的第一个方面涉及化学式 I 的化合物及其可药用盐、 或溶剂化物、 和生理 学上可水解的、 可增溶的或可固定的衍生物 ：
其中 ：
Ar 是任选地被取代的， 并且是五元杂芳环， 其中 X1 和 X2 是一种或两种杂原子， 或 Ar 是六元芳环， 其中杂原子选自 S、 O、 N、 Se， 并且其中任选的取代基包括 R1 和 R2 ；
Z 是 NH、 NHCO、 NHSO2、 N- 烷基、 CH2NH、 CH2N- 烷基、 CH2、 CH2CH2， CH ＝ CH、 CH2CONH、 SO2 或 SO ；
Y 是 N 或 CR3 ；
R1、 R2、 R5、 R6、 R7、 R8 和 R9 是各自独立的 H、 烷基或 R13， 其中 R13 选自 R10、 烷基 -R10、 芳基、 杂芳基、 及其两种或多种的组合、 以及它们与烷基和 R11 中的一种或两种的组合， 或 R13 选自一种或多种部分 R14， 所述 R14 选自直接、 或通过选自亚烷基、 亚芳基、 杂亚芳基或其组 10 11 合的部分而连接一个或多个烷基、 芳基、 杂芳基、 或R 、 或R 、 或其组合的 O-、 N-、 NH-、 CO-、 COO-、 CON-、 CONH-、 SO2-、 SO2N-、 SO2NH- ； 或者是， 其中烷基、 芳基、 杂芳基或其部分可以被一 15 15 个或多个基团 R 取代， 所述 R 基团选自卤素、 NH2、 NO2、 CN、 OH、 COOH、 CONH2、 C( ＝ NH)NH2、 SO3H、 SO2NH2、 SO2CH3、 OCH3、 CF3 ； 或 R13 选自基团 R15 ；
或 R5 至 R9 中的两者连接以形成含有一个或多个氧原子的环醚 ；
当存在时， R3 选自烷基和上文中定义的 R13， 限制条件是在 Y 是 CR3， Ar 是含有一个 3 或两个 N 杂原子的五元杂环， 并且 Z 是 NH 时， R 选自 C3+ 烷基和上面定义的 R13 ；
R4 选自 H、 烷基、 和上文中定义的 R13， 限制条件是当 R3 不存在时， R4 选自烃基和上 面定义的 R13 ； 如果存在， R 1、 R 2、 R4、 、 R5、 R6、 R7、 R8 和 R9 中至少一者和 R3 或者 R12 包含基团 R10 或 R11， 其中 R10 和 R11 含有一个或多个增溶部分， 所述增溶部分选自 ： i) 中性亲水性基团 ； ii) 可解离的有机酸 ； iii) 可解离的有机碱及其组合。
本发明的另一方面涉及的式 I 化合物中， 其中 R10 或 R11 中的至少一者还包含可固 定的部分， 所述可固定的部分选自 iv) ： 提供与固相或可固定的受体共价或非共价地键接 或键合的化学官能团或部分。
本发明的另一方面涉及上文中定义的式 I 化合物的制备方法、 前体或中间体的制 备方法、 和新的前体或中间体。
本发明另一方面涉及化学式 I 的化合物或其可药用盐、 溶剂化物、 或生理学上可 水解的、 可增溶的或可固定的衍生物在制备治疗由酶介导的病症的药物中的用途， 所述酶
选自一种或多种 CDK、 极光激酶、 GSK、 PLK、 BCR-ABL、 FLT、 IKK、 JAK、 PDGF 或 VEGF/ 和 Src 族 酶， 特别选自一种或多种 CDK2、 CDK7、 CDK8、 CDK9、 CDK11、 GSK-3、 极光激酶、 PLK 或至少一种 酪氨酸激酶。
本发明另一方面提供治疗人或动物受试者中的由一种或多种酶介导的病症的方 法， 所述酶选自 CDK、 极光激酶、 GSK、 PLK、 BCR-ABL、 FLT、 IKK、 JAK、 PDGF 或 VEGF、 和 Src 族 酶， 特别选自一种或多种 CDK2、 CDK7、 CDK8、 CDK9、 CDK11、 GSK-3、 极光激酶、 PLK 或酪氨酸激 酶， 这种方法包括给予需要这种治疗的人或动物有效治疗量的化学式 I 的化合物或其可药 用盐、 溶剂化物、 或生理学上可水解的、 可增溶的或可固定的衍生物。
本发明另一方面提供化学式 I 的化合物或其可药用盐、 溶剂化物、 或生理学上可 水解的、 可增溶的或可固定的衍生物在治疗由酶介导的病症的方法中的用途， 所述酶选自 一种或多种 CDK、 极光激酶、 GSK、 PLK、 BCR-ABL、 FLT、 IKK、 JAK、 PDGF 或 VEGF、 和 Src 族酶， 特 别选自一种或多种 CDK2、 CDK7、 CDK8、 CDK9、 CDK11、 GSK-3、 极光激酶、 PLK 或酪氨酸激酶。
本发明另一方面涉及化学式 I 的化合物或其可药用盐、 或溶剂化物、 或生理学上 可水解的、 可增溶的或可固定的衍生物在鉴定能够治疗由酶介导的病症的候选化合物的测 试中的用途， 所述酶选自一种或多种 CDK、 极光激酶、 GSK、 PLK、 BCR-ABL、 FLT、 IKK、 JAK、 PDGF 或 VEGF、 和 Src 族酶， 特别选自一种或多种 CDK2、 CDK7、 CDK8、 CDK9、 CDK11、 GSK-3、 极光激 酶、 PLK 或酪氨酸激酶。
本发明另一方面涉及药物组合物， 包含 ： 化学式 I 的化合物或其可药用盐、 或溶剂 化物、 或生理学上可水解的、 可增溶的或可固定的衍生物 ； 和一种或多种稀释剂、 载体或赋 形剂。附图说明
该发明的更详尽实施方案请参考附表， 其中图 1 和图 2 阐明了该发明的化合物的 制备方法。
发明详述
本文中使用的术语 “烷基” 包括直链烷基和支链烷基。该烷基可以是取代的 ( 单取 代或多取代 ) 或未取代的。适宜的取代基包括 ( 例如 ) 卤素、 CF3、 OH、 CN、 NO2、 SO3H、 SO2NH2、 SO2Me、 NH2、 COOH、 CONH2 和烷氧基。优选地， 该烷基是 C1-20 的烷基， 更优选 C1-15 烷基， 甚至更 优选 C1-12 烷基， 甚至更优选 C1-6 烷基， 更优选 C1-3 烷基。特别优选的烷基包括， 例如， 甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 丁基、 异丁基、 叔丁基、 戊基及己基。
本文中使用的术语 “杂烷基” 包括包含一个或多个杂原子的上文中定义的烷基。
本文中使用的术语 “环烷基” 是指可被取代 ( 单取代或多取代 ) 或未取代的环状 烷基。适宜的取代基包括， 例如， 卤素、 CF3、 OH、 CN、 NO2、 SO3H、 SO2NH2、 SO2Me、 NH2、 COOH、 CONH2 和烷氧基。
同样， 术语 “杂环烷基” 是指可被取代 ( 单取代或多取代 ) 或未取代的环状杂烷基。 适宜的取代基包括如卤素、 CF3、 OH、 CN、 NO2、 SO3H、 SO2NH2、 SO2Me、 NH2、 COOH、 CONH2 和烷氧基。 优选的杂环烷基包括吗啉基、 哌啶基和哌嗪基。
本文中使用的术语 “芳基” 是指取代的 ( 单取代或多取代 ) 或未取代的芳香基团， 并且包括， 例如， 苯基、 萘基等。此外， 适宜的取代基包括， 例如， 卤素、 CF3、 OH、 CN、 NO2、 SO3H、SO2NH2、 SO2Me、 NH2、 COOH、 CONH2 和烷氧基。
本文中使用的术语 “杂芳基” 指的是含有一个或多个杂原子的、 取代的 ( 单取代或 多取代 ) 或未取代的芳香基团。优选的杂原子包括 N、 S、 O。优选的杂芳基包括吡咯、 吡唑、 嘧啶、 吡嗪、 吡啶、 喹啉、 三嗪、 三唑、 噻吩、 硒唑、 噻唑和呋喃。此外， 适宜的取代基包括， 例 如， 卤素、 CF3、 OH、 CN、 NO2、 SO3H、 SO2NH2、 SO2Me、 NH2、 COOH、 CONH2 和烷氧基。
本文中使用的术语 “卤素” 或 “卤代” 指的是 F、 Cl、 Br 或 I。
本发明的第一实施方案提供化学式 I’ 的化合物
其中， X1 和 X2 各自独立地选自 NH、 或 N、 O、 S、 Se、 CH 和 CR15， 并且 X1 和 X2 中至少一 个选自 NH 或 N、 O、 S 和 Se， 以及其中 R15 和如上文中 R1 的定义那样， 并且所有其它变体形式 如上文中所定义的那样。 优选地， 提供式 I’ 化合物， 其中 ： 1 2 X 和 X 中的一者是 CH 或 CR15， X1 和 X2 中的另一者是 S、 O、 NH、 NR15 或 Se ； 或者 1 2 1 2 X 和 X 中的一者是 S、 O 或 Se， X 和 X 中的另一者是 N ； 或者 1 2 1 2 15 X 和 X 中的一者是 N， X 和 X 中的另一者是 NH 或 NR ； 并且其中所有变体形式如上文所定义的那样。 更优选地， X1 是 S 且 X2 是 N， 或 X2 是 S 且 X1 是 N。 本发明的可选择的实施方案提供化学式 I” 的化合物。
其中所有变体形式如上文所定义的那样。
更 优 选 地， 式 I’或 I”化 合 物 中 优 选 含 有 单 取 代 或 双 取 代 的 苯 环、 -4- 噻 唑 基、 -5- 噻唑基、 -4- 咪唑基、 -5- 咪唑基、 -4- 吡咯基或 -5- 吡咯基， 这些基团与嘧啶或 [1， 3， 5] 三嗪环上的碳原子相连。这些基团优选苯、 -4- 咪唑基或 -5- 噻唑基。 10 11
如果 R 或 R 含有上文中定义的中性亲水性基团 (i)， 这些亲水性基团优选包含 这样的基团， 该基团含有单、 双和多羟基化的饱和或不饱和脂肪族、 脂环族或芳香族体系、 糖类衍生物、 任选地含有一个或多个羟基的醚类和聚醚类、 任选地含有一个或多个羟基的 含 O 和 / 或 S 的杂环体系、 含有甲酰胺、 亚砜、 砜或磺胺官能团的脂肪族或芳香族体系、 和卤 代的烷基羰基。
如果 R10 或 R11 含有上文中定义的可解离有机酸 (ii)， 这些有机酸优选包括含有
COOH、 SO3H、 OSO3H、 PO3H2 和 OPO3H2 中的一种或多种官能团的基团。 10
如果 R 或 R11 包含一个上文中定义的可解离基团 (iii)， 该组最优选包括含有官 能团 -O-、 -NH2、 -NH-、 ＝ N-、 季铵盐、 胍、 和脒中的一种或多种的脂肪族、 脂环族、 芳香族或杂 环基团， 它们任选地被一个或多个这样的取代基取代， 所述取代基选自 ： 卤素、 SO2- 烷基、 任 选地被一个或多个 OH 或卤素取代的烷基、 CHO、 CO- 烷基、 芳烷基、 COO- 烷基酯和被一个或 多个 OH 取代的醚基。
在一个实施方案中， R10 和 R11 可由天然或非天然的氨基酸残基和肽、 或它们的衍生 物构成。
优选地， R10 或 R11 选自 ：
v)OSO3H、 PO3H2、 OPO3H2 ；
vi)Y′， 其中 Y′选自含有官能团 -O-、 -NH2、 -NH-、 ＝ N-、 脒中的一种或多种的脂 肪族、 脂环族、 芳香族或杂环基团， 它们任选地被一个或多个这样的取代基取代， 所述取代 基选自 ： 卤素、 SO2- 烷基、 任选地被一个或多个 OH 或卤素取代的烷基、 芳烷基、 COO- 烷基酯 和被一个或多个 OH 取代的醚基 ；
(vii)NHCO(CH2)m[NHCO(CH2)m′ ]p[NHCO(CH2)m″ ]qY′或者 NHCO(CH2)tNH(CH2)t′ Y′， 其中 p 和 q ＝ 0 或 1， 并且 m、 m′、 m″、 t 和 t′各自独立地是 1 到 10 的整数 ； 以及 19 17 20 18 21 17 18 21
(viii)(CH2)nNR COR 、 (CH2)n’ NR SO2R 或 SO2R ， 其中 R 、 R 和 R 均是任选地含 有一个或多个杂原子、 并且任选地被一个或多个选自 OH、 NH2、 卤素和 NO2 中的取代基取代的 19 20 烷基， R 和 R 各自独立地是 H 或烷基， 并且 n 和 n’ 各自独立地是 0、 1、 2或3；
(ix) 任选地被一个或多个羟基或者一个或多个 Y’ 基团所取代的醚或聚醚 ；
(x)(CH2)rNH2 ： 其中 r 是 0、 1、 2或3；
(xi)(CH2)r’OH ： 其中 r’ ＝ 0、 1、 2或3； 22 23 22
(xii)CH2)n”NR COR ， 其中 R 是 H 或者烷基， n ″是 0、 1、 2 或 3， 且 R23 是芳基或 杂芳基团， 它们均可任选地能被一个或多个这样的取代基取代， 所述取代基选自卤素、 NO2、 OH、 烷氧基、 NH2、 COOH、 CONH2、 和 CF3 ； 24 25
(xiii)SO2NR R ， 如果 R24 和 R25 各自独立地是 H、 烷基、 芳烷基、 CO- 烷基或芳基， 24 25 24 25 限制条件是 R 和 R 中的至少一个不是 H， 或者 R 和 R 相连成环基， 该环基任选地含有一 个或多个选自 N、 O 和 S 中的杂原子， 并且其中所述烷基、 芳基或环基任选地被一个或多个这 样的取代基取代， 所述取代基选自卤素、 NO2、 OH、 烷氧基、 NH2、 COOH、 CH2CO2- 烷基、 CONH2 和 CF3 ；
(xiv)N- 哌啶基、 哌啶基、 N- 哌嗪基、 N- 二氮杂环基、 N- 吡啶基、 N- 吡咯烷基、 N- 吗 啉基或 N- 硫代吗啉基 ； 这些基团都可任选地被烷基、 烷氧基、 芳基、 CHO 或 CO- 烷基中的一 个或多个取代。
在本发明的一个优选实施方案中， 每个 R10 或 R11 独立地选自 ： C1-30 烃基， 任选地包 含最多 12 个选自 N、 S 和 O 中的杂原子， 并且任选地具有均独立地选自在上文中定义的基团 15 R 的最多 6 个取代基、 或包含在上文中定义的部分 R14 ； 和基团 R15。
优选地， 上文中定义的式 I 化合物含六个取代基， 如上文中定义， 它们选自从 R1 到 R9、 R12 和 R16。每个取代基都包含一个或多个 N、 S、 O 杂原子， 或者每个取代基都包含有一个 14 15 或多个上文中定义的 R 和 R ， 其中复合取代基含有多达十个杂原子或 N、 S、 O 原子。Z 优选 NH 或 NR16。
Y 优选 N 或 CR3。
优选地 R13 选自烷基 -R10、 可部分不饱和的烷基 - 环烷基、 烷基 - 杂环烷基、 芳基、 芳 10 10 基 -R 、 芳烷基、 芳烷基 -R 、 烷基 - 杂环、 卤素、 NO2、 CN、 OH、 O- 烷基、 部分不饱和的 O- 环烷 10 基、 O- 芳基、 O- 杂环芳基、 O-R 、 NH2、 NH- 烷基、 部分不饱和的 NH- 环烷基、 NH- 环烷基、 NH- 芳 基、 NH- 杂环、 N-( 烷基 )2、 N-( 芳基 )2、 N-( 烷基 )( 环烷基 )、 N-( 烷基 )( 杂环烷基 )、 N-( 烷 10 10 11 10 10 基 )( 芳基 )、 N-( 烷基 )( 杂环 )、 NH-R 、 N-(R )(R )、 N-( 烷基 )(R )、 N-( 芳基 )(R )、 COOH、 10 10 COO-R 、 CONH2、 CONH- 烷基、 CONH- 芳基、 CONH- 杂环、 CON-( 烷基 )(R )、 CON-( 芳基 )(R10)、 CON( 杂环 )(R10)、 CONH-R、 CON-(R10)(R11)、 NHCO- 烷基、 NHCO- 芳基、 NHCO- 杂环、 NHCO-R10、 SO3H、 SO2- 烷基、 SO2- 烷基 -R10、 SO2- 杂环、 SO2- 杂环 -R10、 SO2NH2、 SO2NH-R10、 SO2N-(R10)(R11)、 NHSO2R10、 CF3、 CO-R10、 CO- 烷基、 CO- 烷基 -R10、 CO- 杂环烷基、 CO- 芳基、 CO- 芳基 -R10、 CO- 杂 10 环、 CO- 杂环烷基或 R 。其中烷基、 芳基、 芳烷基、 杂环组可能会进一步被一个或多个卤素、 NO2、 CN、 OH、 甲氧基、 NH2、 COOH、 CONH2 和 CF3 基团取代。杂环烷基优选吗啉、 哌嗪或哌啶。 1
优选地 R 选自 NH- 烷基、 部分不饱和的 NH- 环烷基、 NH- 杂环、 O- 烷基、 可部分不 饱和的 O- 环烷基、 O- 杂环、 烷基 - 杂环、 可部分不饱和的烷基 - 环烷基。 2
优选地 R 选自 H、 烷基例如 C1-5- 烷基、 苯基、 NH- 烷基、 部分不饱和的 NH- 环烷基、 NH- 杂环、 O- 烷基、 可部分不饱和的 O- 环烷基、 O- 杂环、 烷基 - 杂环和可部分不饱和的烷 基 - 环烷基。
优选地 R5 选自 H、 O- 烷基， 特别是 OCH3、 CF3、 烷基或卤素。 6 8
优选地， R 和 R 独立地选自磺酰基、 羰基、 酰胺或磺胺类， 或者硫醚连接到不可取 6 8 代或可取代的六元环、 杂环、 芳环。R 和 R 独立选自 SO2- 杂环烷基、 SO2- 环烷基、 SO2- 杂环、 SO- 杂环烷基、 SO- 环烷基、 SO- 杂环、 CO- 杂环烷基、 CO- 环烷基、 CO- 杂环、 N-( 烷基 )( 环烷 基 )、 N-( 烷基 )( 杂环烷基 ) 或 N-( 烷基 )( 杂环 )。其中杂环烷基最好由杂原子连接同时 由一个、 两个或三个 N、 O、 S 原子取代或不取代。杂环烷基优选 N- 烷基 - 吗啉、 N- 烷基 - 哌 6 8 嗪或 N- 烷基 - 哌啶。R 和 R 独立选自由 N 连接的 N-( 烷基 )( 杂环烷基 )、 SO2- 杂环烷基 和 CO- 杂环烷基， 例如 N-( 烷基 )( 吗啉 )、 N-( 烷基 )( 哌嗪 )、 N-( 烷基 )( 哌啶 )、 SO2- 哌 嗪、 SO2- 吗啉、 CO- 哌嗪、 CO- 吗啉、 CO- 哌啶或者其他相似基团。 7
优选地， R 选自烷基如 C1-5 烷基、 CONH2、 CONH- 烷基、 CN、 OH、 CF3、 O- 烷基、 卤素、 NH2、 NH- 烷基和 NHCO- 烷基。
优选地， R9 选自 H、 卤素、 O- 烷基， 更优选 H、 卤素、 O-C1-5 烷基。 3
优选地， R 选自 C1-6 烷基， 更优选异丙基、 异丁基、 叔丁基或上文中定义的 R13。 更优 3 13 13 3 选地， R 选自 C4+ 烷基和上面定义的 R 或选择上面定义的 R 。更优选地， R 选自 CN、 CF3、 10 10 卤素、 NO2、 NH2、 NH- 烷基、 N-( 烷基 )(R )、 NH- 环杂烷基、 NHSO2R 、 CONH2、 CONH-( 烷基 )、 10 10 CON-( 烷基 )(R )、 R 、 CO- 环杂烷基、 CO- 杂芳基、 CONH- 杂芳基， CH2- 杂环烷基、 CH2- 杂芳 基、 杂环烷基、 杂芳基、 C2-6 或 C4-6 烷基。其中， 烷基、 杂环烷基、 芳基、 芳烷基、 杂芳基可能被 一个或多个卤素、 NO2、 CN OH、 O- 甲基、 NH2、 COOH、 CONH2 和 CF3 进一步取代。 4 13
优选地， R 选自烷基和上文中定义的 R ， 更优选氨基、 卤素如 Cl 和烷基。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 12 16
R、 R、 R、 R、 R、 R、 R、 R、 R、 R 和 R 中最多六个如一个、 两个、 三个或四个应相 10 11 当于或包括一个或多个 R 或 R 组。优选地， R3 和 R4 中一个或两个都包含一个或多个 R10 或 R11 组。两个或多个 R10 和 / 或 R11 组可以一样也可以不一样。
优选地， R1、 R2、 R3、 R5 或 R7 包含一个增溶基团 R10 或 R11。
该发明一个优选实施方案中涉及化学式 I’ 化合物， 其中 ： 1 2 15
X 和 X 一个是 S、 O、 NH、 NR 、 Se， 另一个是 N ； 3
Y 是 CR 或 N ；
Z 是 NH ；
每个 R13 是烷基 -R10、 可能部分不饱和的烷基 - 环烷基、 烷基 - 环杂烷基、 芳基、 芳 10 10 基 -R 、 芳烷基、 芳烷基 -R 、 烷基 - 杂芳基、 卤素、 NO2、 CN、 OH、 O- 烷基、 可能部分不饱和的 10 O- 环烷基、 O- 芳基、 O- 杂芳基、 O-R 、 NH2、 NH- 烷基、 部分不饱和的 NH- 环烷基、 NH- 环杂烷 基、 NH- 芳基、 NH- 杂芳基、 N-( 烷基 )2、 N-( 芳基 )2、 N-( 烷基 )( 环烷基 )、 N-( 烷基 )( 环 10 10 11 杂烷基 )、 N-( 烷基 )( 芳基 )、 N-( 烷基 )( 杂芳基 )、 NH-R 、 N-(R )(R )、 N-( 烷基 )(R10)、 N-( 芳基 )(R10)、 COOH、 COO-R10、 CONH2、 CONH- 烷基、 CONH- 芳基 CONH- 杂芳基、 CON-( 烷基 ) 10 10 10 10 10 11 (R )、 CON( 芳基 )(R )、 CON( 杂芳基 )(R )、 CONH-R 、 CON-(R )(R )、 NHCO- 烷基、 NHCO- 芳 10 10 10 基、 NHCO- 杂芳基、 NHCO-R 、 SO3H、 SO2- 烷基、 SO2- 烷基 -R 、 SO2- 芳基、 SO2- 芳基 -R 、 SO2- 杂 10 10 10 11 10 10 芳基、 SO2- 杂芳基 -R 、 SO2NH2、 SO2NH-R 、 SO2N-(R )(R )、 NHSO2R 、 CF3、 CO-R 、 CO- 烷基、 10 10 CO- 烷基 -R 、 CO- 环杂烷基、 CO- 芳基、 CO- 芳基 -R 、 CO- 杂芳基、 CO- 杂芳烷基或 R10。其 中， 烷基、 芳基、 芳烷基、 杂芳基可能被一个或多个卤素、 NO2、 CN、 OH、 O- 甲基、 NH2、 COOH、 CONH2 和 CF3 取代。
更优选地， R4 是氨基、 卤素或烷基 ； 5
更优选地， R 是 O- 烷基、 CF3、 烷基或卤素 ； 6 8
更优选地， 每个 R 或 R 独立选自 SO2- 环杂烷基、 SO2- 杂芳基、 SO- 环杂烷基、 SO- 杂 芳基、 CO- 环杂烷基或 CO- 杂芳基。环杂烷基优选 N- 烷基 - 吗啉、 N- 烷基 - 哌嗪、 N- 烷 基 - 哌啶。
更优选地， R7 是烷基、 CN、 OH、 CF3、 O- 烷基、 卤素、 NH2、 CONH-R10、 NHR10 或 NHCO-R10。
更优选地， 增溶部分 R10 或 R11 相当于或者包含于 R1、 R2、 R3 或 R5， R9 是 H。
本发明的特别优选的化合物的分子结构 I’ 中： X1 或 X2 中的一个是 S， 另一个是 N ； Y 3 1 2 3 是 CR 或 N ； Z 是 NH ； R 和 R 是氨基、 烷基、 杂芳基或芳基 ； R 是 C1-4 烷基、 CN、 CF3、 卤素、 NO2、 O- 烷基、 NH2、 NH- 烷基、 N( 烷基 )2、 CO2- 烷基、 CO- 烷基、 CONH2、 CONH- 烷基或杂芳基 ； R4 是 氨基、 卤素或烷基 ； R5 是甲氧基、 烷基或卤素 ； 每个 R6 或 R8 是独立的 SO2- 环杂烷基、 SO- 环 7 杂烷基、 SO2- 杂芳基、 SO- 杂芳基、 CO- 环杂烷基或 CO- 杂芳烷基 ； R 是烷基、 OH、 CF3、 O- 烷 1 2 3 5 9 基、 卤素或 NH2 ； 增溶部分相当于或者包含于 R 、 R、 R 或R， R 是 H。
尤其是该发明优选的化合物， 其式 I” 中：
Z 是 NH ；
R1 和 R2 是氨基、 烷基、 芳基， R2 还可以是 H ； R1 和 R2 优选 NH- 烷基、 部分不饱和的 NH- 环烷基、 NH- 杂芳基、 部分不饱和的 O- 烷基、 O- 杂芳基、 烷基 - 杂芳基、 可能部分不饱和 2 的烷基 - 环烷基， R 还可以是 H、 烷基如 C1-5- 烷基或芳基如 C6- 芳基 ； 3
R 是 CN、 CONH- 烷基、 CF3、 卤素、 NO2、 杂芳基或包含于 R13 ；
R4 是氨基， 卤代基或者烷基 ；R5 是甲氧基， 烷基或者卤代基 ； 6 8 每个 R 和 R 独立选自 SO2- 环杂烷基、 SO- 环杂烷基、 CO- 环杂烷基和 CO- 杂芳基 ； 7 R 是烷基、 OH、 CF3、 O- 烷基、 卤素或 NH2 ； 9 R 是H； 增溶基团相当于或者包含于 R1、 R2、 R3 或 R5。 该发明的化合物包括式 I’ 化合物 ：
如表 1 所示， 其中 X1 ＝ S， X2 ＝ N
22
CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CN CN H H CN H H H CH3 CN H H CN H H “MeDz” “MeDz” “MeDz” “MeDz” H CN H H H CN H H H CN H H H CN H H H CN H H (2- 甲氧乙基 )“PdC” H “MeDz” “MeDz” “MeDz” “MeDz” H H H H OH CN H H (2- 甲氧乙基 )“PzC” H H H H H H H H H H H CH3 CN H H (2- 甲氧乙基 )“PzC” H H H H H H H H H H H H H H
102143953 A CN 1021439601.42NH21.43NH(CH2)2CH31.44NH(CH2)2CH31.45NH(CH2)2CH3和表 2， 其中 X1 ＝ N， X2 ＝ S1.46NHCH2CH3说1.47NHCH3明231.48NH2书1.49NH21.50NHCH31.51NHCH2CH31.52NH(CH2)2CH31.53NHCH311/35 页102143953 A CN 102143960说明书12/35 页
和式 I” 化合物 ：
如表 3 所示
和式 I’ 化合物 ：
如表 4 所示， 其中 X1 ＝ S， X2 ＝ N3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 3.11 3.12 3.13 3.14 3.15 3.16 3.17 3.18 3.19 3.20 3.21 3.22 3.23NHMe NHCH3 NHCH3 NHCH3 NHCH3 NHCH3 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NHCH3 NHCH2CH3 NHCH2CH3 NHCH3 NHCH3 NH2 NH2 NH2Ph Ph tBu “Py” CH3 CH3 CH3 Ph Ph Ph Ph CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2H H H H H H H H H H H H H H H H H H H HNO2 “MS” “MS” “MS” “MS” “MS” “MS” “MS” “MS” “PzC” “MePzS” “BPzS” “BPzS” “BPzS” “MePzS” “MePzS” “PzS” “PzS” “PzC” “MePzC”H CH3 CH3 CH3 CH3 H H H CH3 H H H H H H H H H H HH H H H H H H H H H H H H H H H H H H HH H H H H H H H H H H H H H H H H H H H25102143953 A CN 102143960 3.24 3.25 3.26 3.27 3.28 3.29 3.30
NHCH3 NHCH2CH3 NHCH3 NHCH3 NHCH3 NH2 NH2 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3说NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2 NH2明H H H H H H H书“MePzC” “MePzC” “PdC” “MePdC” “BPdC” “Pz” “MePz” H H H H H H H H H H H H H H H H H H H H H14/35 页其中 MS ＝吗啉 -4- 璜酰基 PzC ＝哌嗪 -1- 羰基或哌嗪 -1- 甲酮 AcPzC ＝ 4- 乙酰哌嗪 -1- 羰基 MePzC ＝ 4- 甲基哌嗪 -1- 羰基或 4- 甲基哌嗪 -1- 甲酮 M ＝吗啉基 MC ＝吗啉 -4- 羰基或吗啉 -4- 甲酮 PzS ＝哌嗪 -1- 磺酰基 MePzS ＝ 4- 甲基哌嗪 -1- 磺酰基 BPzS ＝ 4- 苯甲基哌嗪 -1- 磺酰基 BPzC ＝ 4- 苯甲基哌嗪 -1- 羰基 BPdC ＝ 1- 苯甲基哌啶 -4- 羰基或 1- 苯甲基哌啶 -4- 甲酮 PdC ＝哌啶 -4- 羰基或哌啶 -4- 甲酮
MePdC ＝ 1- 甲基哌啶 -4- 甲酮 MePdCB ＝ 4-(1- 甲基哌啶 4- 羰基 ) 苯酰基 Pz ＝哌嗪 -1- 基 MePz ＝ 4- 甲基哌嗪 -1- 基 Py ＝砒啶 -3- 基 PyEtA ＝ 2-( 吡啶 -3- 基 ) 乙烷基氨基 PyMeA ＝砒啶 -3- 甲氨基 MeDz ＝ 4- 甲基 --1， 4- 二氮杂庚烷基 以及它们可药用盐、 溶剂化物、 和生理学上可水解的、 可增溶的或可固定的衍生
物。 该发明另一方面提供了上面所定义的式 I 化合物， 其中一个或多个 R10 或 R11 形成 用于可固定的结构。这个结构可能是用来和固定相共价连接， 这些固定相包括例如功能化 的聚合物 ( 如琼脂糖、 聚丙烯酰胺、 聚苯乙烯等 )， 常用于生化试验 ( 微滴定板、 微粒、 细胞膜 等等 ) 和亲和层析的基质。另外， 该结构可能是小分子 ( 如生物素 ) 或多肽类 ( 如抗原 )， 可以通过与固定的受体结合而用于非共价的固定 ( 如关于生物素的抗生物素蛋白或抗生 蛋白链菌素， 或关于抗原的特异性抗体 )。
该发明另一方面提供了上文中定义的式 I 化合物的前体， 其中一个或多个 R10 或 R11 是增溶部分， 如上文中定义的这些增溶基团都含有天然或非天然的氨基酸残基、 肽或衍 生物。
该发明另一方面提供了上文中定义的式 I 化合物的制备方法。式 I 化合物可以由 任何已知的方法制备。
上文中定义的式 I 化合物的适当制备方法 ：
(1) 式 III 化合物 ( 如上文中定义 ) 与式 IV( 如下文图中所示 ) 化合物反应。式 III 化合物中芳环是单取代或双取代的苯、 -4- 噻唑基、 -5- 噻唑基、 -4- 咪唑基、 -5- 咪唑 基、 -4- 吡咯基、 -5- 吡咯基， 芳环最好是苯基、 -4- 噻唑基或 -5- 噻唑基组， Y 是 N 或 CR3， L1 是一个离去基团， 式 IV 化合物中的 Z 和 R5 至 R9 是上文中定义的 ；
或 (2) 式 VI( 如下文图中所示 ) 化合物与式 VII 化合物反应。式 VI 化合物中 Z 5 和 R 至 R9 是上文中定义的， 式 VII 化合物中的芳基是上文中定义的， Y是N；
或 (3) 式 XI( 如下文图中所示 ) 化合物与式 XII 化合物反应。式 XI 化合物中 Y 是 N 或 CR3 ； L3 是任意离去基团， 优选卤素 ； 芳环和 R4 如上文中定义的， 式 XII 化合物中的 Z 和 R5 ～ R9 是上文中定义的 ；
式 I 化合物优选上文中定义的式 I’ 化合物， 其中的芳基是通过环上的碳原子连接
到嘧啶或 [1， 3， 5] 三嗪的单取代或多取代的 -4- 噻唑基、 -5- 噻唑基、 -4- 咪唑基、 -5- 咪唑 基、 -4- 吡咯基、 -5- 吡咯基， ， 首选芳基是 -4- 噻唑基或 -5- 噻唑基， 或者如上文中定义的式 I” 化合物， 当式 I” 化合物中连有单取代或多取代的苯， 这个苯通过环上的碳原子连接在嘧 啶或 [1， 3， 5] 三嗪上时较优。
优选地， 在方法 (1) 中， L1 是任意离去基团， 这些基团有 N( 烷基 )2、 卤素、 酯、 硫酯、 NMe2， 方法 (1) 有多种方法如 Fischer PM， Wang S.WO 2001072745 和 Wang， S. ； et.al WO 2003029248， Cyclacel Limited， UK 中所诉。
优选地， 方法 (2) 通过文献中多种已知的方法指导， 特别是 Liu， C(Liu， C， et al.2007， Tetrahedron Lett.48， 435) 和 Hodous， B(Hodous， B.L.J Med Chem， 50， 611) 所描 述的方法。
优选地， 在方法 (3) 中， 式 XI( 如下文图中所示 ) 化合物是通过式 VIII( 如下文图 中所示 ) 化合物和式 X( 如下文图中所示 ) 化合物反应得到的。式 XI 化合物中的 L2 是离 去基团， 优选是卤素 ； Y、 L3 和 R4 如上文中定义的。式 X 化合物中的芳基如上文中定义的， L4 3 是任意硼酸或衍生物。钯催化的 VIII(Y 是 N 或 CR ) 和 X 或衍生物交叉偶联得到 4- 芳化 的 2- 卤素嘧啶或 [1.3.6] 三嗪类 XI。得到的 4- 芳化的 2- 卤素嘧啶或 [1， 3， 6] 三嗪类 XI 可以被苯胺 XII( 上面所定义的 ) 氨化。另外， VIII、 X 和格氏试剂如烷基溴化镁反应得到 XI， XI 和 XII 如上文中描述反应可以得到式 I 化合物。
更优选地， 方法如下面方案 1 所描述的 ：
(4) 式 VII’ ( 如下文图中所示 ) 化合物和式 VIII’ ( 如下文图中所示 ) 的苯基胍 进行缩合反应得到嘧啶类或式 I’ 的 [1， 3， 5] 三嗪类化合物。式 VII’ 化合物中的 R1、 R2、 R4、 X1、 X2、 Y 和 L2 都如上文中定义的， 式 VIII’ 中的 Z 和 R5 到 R9 都是上文中定义的。
或者 (5) 在 POCl3 的存在下， 脒类 VI’ ( 如下文图中所示 )， 与式 XII( 如上文图中 所示 ) 的苯胺发生烷基化得到式 I’ 的 [1， 3， 5] 三嗪类化合物。脒类 VI’ 中的 Z 和 R4 至 R9 都是上文中定义的。
或者 (6) 式 XII’ 化合物与式 XIII’ 的脒在碱存在存在条件下发生缩合反应得到 式 I’ 的 [1， 3， 5] 三嗪类化合物。
式 XII’ 化合物中的 Z、 R5 ～ R9 如上文中定义的， 式 XIII’ 脒中的 R1、 R2、 X1 和 X2 如 上文中定义的。
上文中定义式 I’ 化合物为优选化合物， 当其中的芳基是单取代或多取代 -4- 噻唑 基、 -5- 噻唑基、 -4- 咪唑基、 -5- 咪唑基、 -4- 吡咯基、 -5- 吡咯基且通过环上的碳原子连接 在嘧啶或 [1， 3， 5] 三嗪上时更优。芳基是一个 -4- 噻唑基或 -5- 噻唑基时最优。
优选地， 方法 (4) 采用 (Wang， S.et al.J Med Chem， 2004， 47， 1662-75) 先前所描 述的方法。
优选地， 方法 (4) 或 (5) 中， VII’ 通过相应的 VI’ 与 N， N’ - 二甲基甲酰胺二甲基乙 4 缩醛 ( 其中 R ＝ H、 L ＝ NMe2) 或叔 - 丁氧基 - 二 ( 二甲氨基 ) 甲烷反应获得 (Bredereck， H. ； .et al.Chemische Berichte 1964， 97， (12)， 3397)。
优 选 地， 酮 类 VI’ (Y ＝ CH3) 或 酰 胺 类 (Y ＝ NH2) 是 通 过 II’ (L1 ＝ Cl， Br) 和 1 1 2 1 III’ ( 如上文中定义， 酰胺类而 X ＝ O， 硫代酰胺类而 X ＝ S、 X ＝ N、 R ＝烷基、 NH- 烷基 ) 的环化反应获得。化合物 VI’ 也可以通过酮类 VI’ 和 III’ 被傅 - 克酰基化 (Y ＝ CH3) 或胺基化 (Y ＝ NH2) 而制得。
优选地， 利用 Katritzky， A.R. 等人的实验方法， 胍类化合物 VIII’ 可以通过氨腈 或它的某些衍生物反应获得。
优选地， 在方法 (6) 中， XIII 式化合物通过苯基异硫氰酸与氰胺氢钠反应得到 N- 氰基硫脲 XII’
更优选地， 该方法如下面方案 2 所描述的 ：
该发明另一方面还提供了如上文中定义的式 I， I’ 和 I” 、 IV、 VI、 VII、 XI、 XII、 VI’ 、 VII’ 、 VIII’ 、 XI’ 或 XIII’ 化合物的最新化学中间体。
治疗用途
该发明另一方面提供了一个或多个如上文中定义的式 I 化合物或其盐、 溶剂化 物、 衍生物在制剂生产中的用途。该药剂可以治疗由一个或多个如上文中定义的 CDK、 极光 激酶、 GSK、 PLK 和由酪氨酸激酶介导引起的症状， 优选地， 这种药剂可以抑制这些酶。该发 明的化合物可能抑制细胞周期的任何步骤或者阶段。
在一个实施方案中， 该药剂适于抑制 CDK 或 PLK 介导的增殖紊乱， 优选在增殖疾病 如癌症、 白血病和其它与不受控制的细胞增殖相关的疾病如银屑病和再狭窄、 病毒性疾病、 心血管疾病、 中枢神经系统疾病、 自身免疫性疾病、 激素有关的疾病、 代谢紊乱、 中风、 脱发、 炎症性疾病或传染性疾病的治疗中都有作用
优选地， 式 I 化合物可以抑制细胞增殖、 病毒复制、 心血管疾病、 神经退行性病变、 自身免疫性疾病、 代谢紊乱、 中风、 脱发、 炎症性疾病或传染性疾病的宿主细胞中的一个或 多个激酶。
增殖性失调需要对敏感肿瘤进行治疗， 敏感肿瘤可以是慢性淋巴细胞白血病、 淋 巴瘤、 白血病、 乳腺癌、 肺癌、 前列腺癌、 结肠癌、 黑色素瘤、 胰腺癌、 卵巢癌、 鳞状上皮癌、 头 颈癌、 子宫内膜癌和食管癌。
优选地， 增生性失调是癌症或白血病。这里所说的增值性失调的范围比较广， 包 括所有需要控制细胞周期的疾病如心血管疾病如再狭窄和心肌病， 自身免疫性疾病如肾小 球炎和风湿性关节炎， 皮肤疾病如银屑病， 抗炎、 抗真菌、 抗寄生虫疾病如疟疾、 肺气肿和脱 发。该发明的化合物可以诱导这些疾病的细胞凋亡或使细胞周期阻滞。
正如此中所定义的， 在当前发明的范围内， 抗激酶所介导的增殖紊乱的作用可能 通过体外抑制细胞增殖实验或抑制 CDK 激酶 ( 如 CDK1、 CDK2、 CDK4、 CDK5、 CDK6、 CDK7、 CDK8、 CDK9、 CDK11 或其他蛋白激酶 ) 实验而表现出来。整个细胞检测所用的细胞系包括但不仅 限于 A549、 A2780、 HT29、 Saos-2、 HCT-116、 HeLa、 MCF-7、 NCI-H460。这些检测在下面生物活 性一节中有更为详尽的描述， 其中包括测定性能的方法等。
研究显示了人类 PLKs 对有丝分裂的一些基本方面进行调节。 PLK1 和 PLK2 可能在 有丝分裂后期有其他功能。失调的 PLK 表达会导致细胞周期停滞和细胞凋亡。因此， 该发 明的化合物被认为用于治疗 PLK 介导的情况， 尤其是增殖性紊乱。
进一步实施方案涉及到该发明的化合物或其可药用盐在制剂生产中的用途。 该制 剂可以治疗由一个或多个 CDK 介导引起的病毒性疾病。 CDK 与病毒复制相关， 即上文中定义 的 CDK1、 CDK2、 CDK4、 CDK7、 CDK8、 CDK9 或 CDK11。优选地， 该制剂在治疗病毒性疾病方面很 有效。确定 CDk 活性的检测在随之的例子中有更多详细的描述。使用这种酶检测方法可 能可以在本发明背景下的确定化合物是否抗病毒。
优选地， 该制剂在治疗病毒性疾病如人巨细胞病毒 (HCMV)、 1 型单纯疱疹病毒 (HSV-1)、 1 型人体免疫缺陷病毒 (HIV-1) 和水痘带状疱疹病毒 (VZV) 中有很有效。
通常这类疾病是 CDK 依赖型或敏感型。CDK 依赖型疾病与一个或多个 CDK 酶的活 性超过正常水平有关， 代表性的酶有 CDK1、 CDK2、 CDK4、 CDK7、 CDK8、 CDK9 和 / 或 CDK11。CDK 敏感型疾病的主因不是 CDK 水平的异常， 而是下游的主要代谢失常。在这种情况下， CDK1、 CDK2、 CDK4、 CDK7、 CDK8、 CDK9 和 / 或 CDK11 可以说是敏感的代谢途径的一部分， 所以抑制这 些酶可以有效的治疗这类疾病。
在治疗病毒性疾病中， 优选地， 该发明的制剂可以抑制 CDK2、 CDK7 和 / 或 CDK9。
另外实施方案涉及该发明的化合物或其可药用盐在制剂生产中的用途。 该制剂可 以治疗由一个或多个 CDK 介导的心血管疾病。优选地， 该制剂治疗心血管疾病较有效。
心血管疾病可在缺血性心脏病 ( 也称为心肌梗死或心绞痛 )、 高血压、 心力衰竭、 再狭窄和心肌病中选择。心脏肥大的特点是在 mRNA 和蛋白质合成的全面增长。CDK9 的活 性已被证实是心肌细胞肥大的必要条件。发现， CDK9 被细胞周期蛋白 T1 特异性活化从而 导致心肌细胞肥大。该发明的化合物可以抑制 CDK9， 因此被认为可用于预防和治疗心脏肥 大。
另外实施方案涉及该发明的化合物在制剂生产中的用途。 该制剂可以治疗由一个 或多个 GSKs 或 CDK 介导的神经退行性疾病。优选地， 该制剂对治疗神经退行性疾病如阿尔 茨海默病较有效。
Tau 蛋白是 GSK-3 的底物， 它与阿尔茨海默病的病因相关， 在正常神经细胞中， Tau 蛋白与微管蛋白结合聚合形成微管。然而， 在阿尔茨海默病中， Tau 蛋白形成大量缠结的细 丝从而破坏了神经细胞中的微管结构， 因此影响了营养物质的运输和神经元信息的传输。 GSK3 抑制剂被认为可以防止和 / 或逆转微管相关蛋白 tau 蛋白异常的高度磷酸化。 微管相 关蛋白 tau 蛋白异常的高度磷酸化是阿尔茨海默病和其他的许多神经退行性疾病如进行 性核上性麻痹、 皮质基底节变性和匹克病变的特征。 Tau 蛋白基因突变导致遗传性的额颞痴 呆症的形成， 这进一步增强了神经退化过程与 tau 蛋白功能障碍的相关性。
与阿尔茨海默病相关的双股螺旋形细丝的形成是由 tau 蛋白中 CDK5-p25 高度磷 酸化 tau 蛋白引起的。该发明的化合物被认为可以抑制 CDK5， 因此被认为可以用于预防和 治疗神经退行性疾病。
另外个实施方案涉及发明的化合物或其可药用盐在一种制剂生产中的用途。 该制 剂可以治疗由一个或多个 GSKs 介导的代谢性疾病。优选地， 该制剂在治疗代谢性疾病方面 有效。
代谢性疾病包括 II 型糖尿病 ( 非胰岛素依赖型糖尿病 ) 和糖尿病神经病变。因 此该发明的化合物被认为可以抑制 GSK-3， 而 GSK-3 与 II 型糖尿病有关。
GSK3 是几种磷酸化糖原合成酶的蛋白激酶的一种并参与对由骨骼肌中胰岛素生 成的糖原的激活。GSK3 作用于糖原合成酶导致糖原合成酶失活， 从而抑制肌肉中葡萄糖转 化为糖原。II 型糖尿病 ( 非胰岛素依赖型糖尿病 ) 是一个多因子的疾病。高血糖症归结 于在肝脏、 肌肉和其他组织的胰岛素抗性以及胰岛素分泌受损。骨骼肌是胰岛素激活的葡萄糖摄取的主要场所， 在这里葡萄糖不是从循环中消除就是转换为糖原。肌糖原沉积是葡 萄糖动态平衡中的决定因素， 而 II 型糖尿病患者存在肌糖原储存的缺陷。有证据表明， GSK 活性增加在 II 型糖尿病中非常重要。
另外实施方案涉及该发明化合物或， 或其可药用盐在某种制剂生产中的用途。该 制剂可以治疗由一个或多个激酶介导的双向型障碍疾病。优选地， 该制剂在治疗双向型障 碍疾病很有效。
另外实施方案涉及该发明的化合物或其可药用盐在某种制剂生产中的用途。 该制 剂可以治疗由一个或多个 GSKs 介导的中风。优选地， 该制剂在治疗中风很有效。
在头部外伤、 中风、 癫痫、 运动神经元病中， 减少神经细胞凋亡是一个重要的治疗 目标。神经细胞促凋亡因子 GSK3 是治疗这些疾病抑制类药物设计的治疗靶点。
另外实施方案涉及该发明的化合物或其可药用盐在某种制剂生产中的用途。 该制 剂可以治疗由一个或多个 GSKs 介导的脱发。优选地， 该制剂在治疗脱发很有用。
GSK3 抑制剂的异位用途可以用于治疗脱发和恢复化疗引起的脱发后的头发生长。
该发明的另一方面涉及到了一种治疗由一个或多个酶介导的疾病的方法， 这些酶 包括 ： 上文中定义的 CDK、 极光激酶、 GSK、 PLK、 酪氨酸激酶。
另外优选实施方案， 该疾病是 GSK3 依赖型疾病， 提到的方法包括给予一个有需要 的受试者一个上文提到的足以抑制 GSK3 的该发明的化合物或其可药用盐。
优选地， 给予该发明的化合物或其可药用盐一个足以抑制 GSK3β 的数量。
另外优选实施方案， 该发明涉及到一种治疗 PLK 依赖型疾病的方法， 该方法包括 给予一个需要的受试者如上面所定义的足以抑制 PLK 的该发明的化合物或可药用盐。
优选地， 给予该发明的化合物或其可药用盐一个足以抑制 PLK1、 PLK2 和 / 或 PLK3 的量。
另一优选实施方案中， 该发明的涉及到一种治疗极光激酶依赖型疾病的方法， 该 方法包括给予一个需要的受试者一个如上面所定义的足以抑制极光激酶的该发明的化合 物或其可药用盐。
优选地， 给予该发明的化合物予一个足以抑制极光激酶 A、 极光激酶 B 或极光激酶 C 的量。
在另外一个优选实施方案中， 该发明涉及到一种治疗酪氨酸激酶依赖型疾病的方 法， 该方法包括给予一个需要的受试者一个足以抑制酪氨酸激酶的该发明的化合物或其可 药用盐。
优选地， 给予该发明的化合物在一个足以抑制至少 BCR-ABL、 IKK、 FLT3、 JAK、 LCK、 PDGF、 Src 或 VEGF 这些激酶中的一个的量。
在另外个优选实施方案中， 该发明涉及到一种选择性治疗蛋白激酶依赖型的疾病 的方法。 该方法包括给予一个需要的受试者一个如上面所定义的足以抑制一个被选择的蛋 白激酶的该发明的化合物或其可药用盐在。 该方法包括联系提到的蛋白激酶和该发明的化 合物。
优选地， 该发明的化合物被给予一个足以抑制 CDK、 GSK、 极光激酶、 PLK 或酪氨酸 激酶这些激酶中至少一个的量。其中酪氨酸激酶包括但不仅局限于 BCR-ABL、 IKK、 FLT3、 JAK、 LCK、 PDGF、 Src 或 VEGF。此部分一个优选实施方案中， 蛋白激酶是 CDK。蛋白激酶优选CDK1、 CDK2、 CDK3、 CDK4、 CDK5、 CDK6、 CDK7、 CDK8、 CDK9 和 CDK11， 为 CDK2、 CDK7 或 CDK9 时更 优。
已知正在开发的 CDK 抑制剂遇到了许多问题， 包括混杂的激酶抑制剂属性， 除了 对多种 CDK 的抑制， 同时也可能抑制其他激酶， 从而引起毒性。处于临床和后期临床前期开 发的其他 CDK 抑制剂也是泛特异性的， 属于寡特异性的 CDK2-CDK7-CDK9 类或者 CDK4/6。 虽 然处于研发阶段的有适度的 CDK9 选择性的化合物已被报道， 但是决定 CDK9 选择性的因素 目前还不明确。
我们的这项研究使我们可以区分某些化合物的表型和生化特征， 这些化合物包括 RNAP-ll CDK 的抑制剂以及可以显著抑制细胞周期 CDK(CDK1、 CDK2、 CDK4、 CDK6) 或者是与 之关联的有丝分裂激酶。
在本发明的一个实施方案中， 化学式 I 的化合物至少可以抑制 CDK 酶， 优选抑制 CDK2、 CDK7、 CDK9 中的至少一种。
优选地， 式 I 化合物的可抑制 CDK， 尤其是 IC50 值都在亚微摩尔级的 CDK2、 CDK7、 CDK9， IC50 值低于 0.5 微摩尔更优， 其值低于 0.25 微摩尔最优。
此式 I 化合物包括式 I’ 化合物 ：
如上文和下面表 1 中所示， 其中 X1 ＝ S， ， X2 ＝ N
和表 2， 其中 ： X1 ＝ N， ， X2 ＝ S
和式 I” 化合物 ：
如表 3 中所示
和式 I’ 化合物 ：
如表 4 中所示， 其中 ： X1 ＝ S， X2 ＝ N
其中， 表格中缩写的取代基在前文都已给出。
在进一步的优选实施方案中， 式 I 化合物显示出在人体细胞系中抑制肿瘤细胞增 殖效果， 结果由标准 48-72 小时 MTT 细胞毒性测定。优选 IC50 值控制在 1 微摩尔以下的式 I 化合物
此式 I 化合物包括式 I’ 化合物 ：
如上文和下面表 1 所示， 其中 ： X1 ＝ S， X2 ＝ N
和表 2， 其中 ： X1 ＝ N， ， X2 ＝ S
和式 I” 化合物 ：
如表 3a 中所示其中， 表格中缩写的取代基在前文都已给出。
该发明另一方面还提供一种治疗增生疾病、 病毒性疾病、 心血管疾病、 中枢神经系 统疾病、 自身免疫性疾病、 代谢紊乱、 中风、 脱发、 炎症性疾病或传染性疾病病的方法， 上述 方法包括给予需要的受试者有效量的上面定义的式 I 化合物。
在如上文中定义的制剂生产中， 本发明中的化合物的用途包括直接使用化合物， 或在生产的任何阶段使用该化合物， 或者在体外按照筛选程序来识别并且对上文中定义的 疾病或情况进行进一步的预防或者治疗。
该发明的另一方面涉及了在鉴别候选化合物的试验中， 式 I 化合物或其可药用 盐、 溶剂化物、 生理学上可水解的、 可增溶的或其衍生物的用途。这些候选化合物可以治疗 一种或多种如上文中定义的失调或疾病。优选可以用来鉴别候选化合物的一种化合物， 而 这些候选化合物可以抑制一种蛋白激酶， 更优选可以抑制 CDK、 极光激酶、 GSK、 PLK 或者酪 氨酸激酶中的一种或多种。
药物组合物
该发明的另一方面还提供了药物组合物， 包含有效治疗量的化学式 I 的化合物或 其可药用盐和上文中定义的生理学上可水解的衍生物、 以及一种或多种药物载体、 赋形剂 或稀释剂。可以考虑选择合适的载体、 赋形剂、 稀释剂来进行预期施用和标准操作。药物的 组分可以是人用也可以作为兽药用， 优选对上文中定义的某种状况、 疾病或者紊乱的治疗 或者是抑制一种或更多种的蛋白激酶， 更优选抑制一种或多种 CDK、 极光激酶、 GSK、 PLK 或 者酪氨酸激酶。
合适的载体包括乳糖、 淀粉、 葡萄糖、 甲基纤维素、 镁条、 甘露醇、 山梨醇及类似物 等。从 0.1％到 99.9％ W/W 均为有效治疗量。
该发明中的组合物适用于任何要求的施用模式， 包括口腔的、 直肠的、 阴道的、 肠 外排的、 肌肉的、 腹膜内的、 动脉的、 支气管的、 囊内的、 皮下的、 皮肤内的、 静脉的、 鼻的、 颊 的、 舌下的等等。
口服组合物适宜制成压缩片、 片剂、 胶囊、 软胶囊、 粉末、 溶液、 分散液、 悬浊液、 滴 剂等等。这些剂型可以根据已知的方法制得， 制备过程中可能会使用适当的粘合剂、 润滑 剂、 混悬剂、 包衣材料、 增溶剂或者其组合。
以注射方式给药的组合物合适地从合适的溶液或粉末配制为无菌溶液或乳剂。 另一种方法是制成栓剂、 阴道栓、 悬浮剂、 乳剂、 乳液、 乳膏剂、 软膏剂、 皮肤斑块、 凝胶剂、 溶胶、 喷雾剂、 溶液或者隔离剂。每日指示服药剂量是从 1mg 到 1000mg， 每剂中一般包含 0.25mg 至 250mg 的活性成分。
组合物可能包含一个或者多个额外有效成分或者与包含其他有效成分的组成一 起施用以治疗同样或者不同的状况。协同施药可以是相同时间的， 连续的或者是循序渐进 的。
另外的有效成分是可以从现存的抗癌剂中适当的筛选得到。这对防止主要毒性 的， 作用机理， 耐药机理的叠加以及对药物在最短间隔时间内服用的最大耐受剂量下施药 都很有帮助。联合施药也可以使增加附加的或可能产生的协同效应。选择其他的有效成分
和施药体制可能要考虑到一种已知的对源自目标癌症的细胞系有效的药剂的使用情况。
适当的抗增殖制剂可以用来发明物中的化合物相结合。这些化合物包括 DNA 的损 害剂、 抗代谢物、 抗生素、 二氢叶酸还原酶抑制剂、 嘧啶类似物、 抗嘌呤类物质、 细胞周期蛋 白依赖性激酶抑制剂、 胸甘酸合成酶抑制剂、 DNA 嵌入剂、 DNA 剪切剂、 拓扑异构酶抑制剂、 蒽环类物质、 vinca 药物、 丝裂霉素、 博来霉素、 抗核苷、 蝶啶类药物、 烯二炔、 足叶草毒素、 含 铂药物、 分化诱导剂以及紫杉醇类化合物。这些实例药物在技术领域都是已知的。
该发明中的化合物展示了在 CDK 和细胞株选择方面的特殊优势， 这种选择性是当 前所知抗癌药物所不能显现的， 因此为得到预期的选择性， 推荐联合用药。
上文中所定义的化合物可能是游离形式， 例如作为碱或者是以适当的盐或酯形式 存在。游离态的化合物可以被转化成盐或酯的形式， 按照通俗的惯例， 反过来也一样。适当 形式的盐包括盐酸盐、 二氢氯化物、 氢化甲酸盐、 氨基化合物、 琥珀酸盐、 半琥珀酸盐、 马来 酸盐、 醋酸盐、 三氟醋酸盐、 延胡索酸盐、 邻苯二甲酸酯、 四苯二甲酯、 苯酸盐、 磺酸盐、 硫酸 盐、 磷酸盐、 草酸盐、 丙二酸盐、 氢苯二酸盐、 抗坏血酸盐、 乙醇酸盐、 乳酸盐、 苹果酸盐、 酒石 酸盐、 柠檬酸盐、 天冬氨酸盐或者是谷氨酸盐以及有其的变异体。 用来作为酸式盐的适当的 酸可以是其盐相对应的酸， 也就是像盐酸、 甲酸、 琥珀酸、 顺丁烯二酸、 醋酸、 三氟醋酸、 反丁 烯二酸、 邻苯二甲酸、 酒石酸、 苯甲酸、 磺酸、 硫酸、 磷酸、 草酸、 丙二酸、 抗坏血酸、 乙醇酸、 乳 酸、 苹果酸、 酒石酸、 柠檬酸、 天冬氨酸或谷氨酸等等。
合适的酯类包括那些由上面的酸类与氢氧化物化物例如钠、 钾、 钙等等或者是醇 类反应得到的酯。
化学式 I 的化合物可看作为相关的一个或两个对映体或互变异构体， 或者是看作 立体的或者具有几何学特征的同分异构体形式。这些形态可以用已知的技术鉴定、 制造或 分离出来。此处引用到化学式 I 的化合物同样包含晶型， 多晶型物， 水合物以及无水物和前 体药物。
通过说明书中的描述以及要求， “包含” 和 “包括” 是两个不同的词， 例如 “包含” 都 表示 “含但不仅限于” 并非是 ( 不 ) 要排除其他部分、 添加物、 组分、 整体或者步骤。
特征、 整体性、 性质、 成分、 化学根或基团与某特定的方面、 实施方案或者实施例一 起被描述并可一起用于任何其他方面， 实施方案或实施例， 除非彼此矛盾。
读者的注意力是针对在这说明同时期或者之前的发布的与此相关所有的文件和 文档， 这些文件和文档是对公众开放并可检查相关联的内容， 这些文件和文档的内容都在 此以参考文献列出。
所有说明书中写的特征 ( 包括任何相关要求、 摘要以及绘图 ) 以及公开的任何方 法所包括的步骤或者程序， 除了那些至少有一些特征或者步骤是相互独立的组合可以与任 何组合相结合。
在说明书中写的每种特征 ( 包括任何相伴随的要求、 摘要和绘图 ) 都可能被相同 或相似的特征所取代， 除非另有明确规定。因此， 除非另有明确规定， 在实施例中阐述的每 种特征都只是揭示通用的相同或相似特征的一个例子。
这项发明对上述实施方案都没有限制。 这项发明可延伸到说明书中描述的任何新 的单个或者组合 ( 包括任何随之的要求， 摘要和绘图 ) 或者是公开的步骤或方法中的任何 新的单个或组合。实例
化合物合成 1
一般的， H-NMR 波谱由 Bruker-400 光谱仪得到。所测得的化学位移用内标物四甲 基硅烷的相对百分率来表示。耦合常数 (J) 常被引用到最近的 0.1Hz。下面使用到的缩写 有： s， 单峰 ； d， 双峰 ； t， 三重峰 ； q， 四重峰 ； qu， 五重峰 ； m， 多重峰 ； br， 宽峰。质谱由电喷射 离子化 (ESI) 的 Waters 2795 四极质谱仪获得。通过 CEM 发现型号 (Biotage Ltd.UK) 实 行微波辅助化学反应物质。TCL( 薄层色谱法 ) 使用铺有硅胶 G60 的铝板。显像的薄层板在 空气中晾干， 然后用紫外灯 (254/365nm) 分析。快速色谱法使用了硅胶 (EMKieselgel 60， 0.040-0.063mm， Merck) 或 ISOLUTE 填充柱。熔点 (mp) 采用电热熔点器测定， 熔点是未校 正的。
例 1- 制备式 I 化合物
1. 14-(4- 甲基 -2- 甲氨基 -5- 噻唑基 )-2-[4- 甲基 -3-( 吗啉 -4- 磺酰基 )- 苯 氨基 ] 嘧啶 -5- 腈 ： 将 1-(4- 甲基 -2- 甲氨基 -5- 噻唑基 )- 乙酮 (14.5mmol) 溶解于 3ml 乙酸和 10ml 二氯甲烷中， 用冰水冷却， 逐滴加入溴水 (14.5mmol)。搅拌混合物 1.5 小时， 使其充分反应。如果反应的混合物变成糕状， 需进一步加入 3ml 醋酸。溶液于真空中蒸馏。 残留液在二氯甲烷和饱和的碳酸氢钠溶液之间出现分层。有机层用盐水洗涤， 无水硫酸钠 干燥， 蒸馏得粗制的 2- 溴 -1-(4- 甲基 -2- 甲氨基 -5- 噻唑基 )- 乙酮。产物为黄色膏状固 体 (95％产率 ) ： 熔点 149-150℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ ： 2.35(s， 3H， CH3)， 2.45(s， 3H， CH3)， + 2.85(s， 3H， CH3)， 8.48(s， 1H， NH).HRMS(ESI)171.0577(M+H) 。
将 2- 溴 -1-(4- 甲基 -2- 甲氨基 -5- 噻唑基 )- 乙酮 (10mmol) 溶解于在乙醇 (8ml) 中， 另在 4ml 水中溶解氰化钠 (20mmol)， 将氰化钠溶液滴加于乙醇溶液中。室温下， 搅拌混 合物 1 小时， 使其充分反应。过滤混合溶液， 滤液于真空中蒸馏。将残留液加入到 30mL 的 冰水中， 搅拌 3 小时。滤出沉淀并干燥， 得 3-(4- 甲基 -2- 甲氨基 -5- 噻唑基 )-3- 氧代丙 1 腈。产物为淡黄色固体 ： H-NMR(DMSO-d6)δ ： 2.45(s， 3H， CH3)， 2.86(s， 3H， CH3)， 4.38(s， 2H， CH2)， 8.65(s， 1H， NH).HRMS(ESI)194.0365(M-H) 。
将 3-(4- 甲 基 -2- 甲 氨 基 -5- 噻 唑 基 )-3- 羰 基 丙 腈 (8mmol) 在 24mmol 的 N， N- 二甲基甲酰胺二甲基缩醛中回流处理 3 小时。在真空蒸馏反应的混合物， 经柱色谱纯 化， 得 3- 二甲氨基 -2-(4- 甲基 -2- 甲氨基 - 噻唑 -5- 羰基 )- 丙烯腈。产物为橙色固体 ： 1 H-NMR(DMSO-d6)δ2.33(s， 3H， CH3)， 2.82(d， J ＝ 4.8Hz， 3H， CH3)， 3.26(s， 3H， CH3)， 3.32(s， + 3H， CH3)， 7.80(s， 1H， CH)， 8.09(t， J ＝ 4.8Hz， 1H， NH).HRMS(ESI)250.9323(M+H) 。
将 3- 二甲氨基 -2-(4- 甲基 -2- 甲氨基 - 噻唑 -5- 羰基 )- 丙烯腈和等摩尔的 N-[4- 甲基 -3-( 吗啉 -4- 磺酰基 )- 苯基 ]- 胍混合于 2- 甲氧乙醇中， 在 140℃下微波处理 30 分钟。 在真空蒸馏该混合物， 用乙酸乙酯洗脱柱色谱， 纯化得所需的 4-(4- 甲基 -2- 甲氨 基 -5- 噻唑基 )-2-[4- 甲基 -3-( 吗啉 -4- 磺酰基 )- 苯氨基 ]- 嘧啶 -5- 腈。产物为黄色 固体。熔点 245-246℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ ： 2.46(s， 3H， CH3)， 2.89(d， 3H， J ＝ 4.4Hz， CH3)， 3.05(t， 4H， J ＝ 4.4Hz， CH2×2)， 3.63(t， 4H， J ＝ 4.4Hz， CH2×2)， 7.43(d， 1H， J ＝ 8.4Hz， Ph-H)， 7.95(dd， 1H， J ＝ 8.4， 1.6Hz， Ph-H)， 8.18(d， 1H， J ＝ 2.0Hz， Ph-H)， 8.29(q， 1H， J + ＝ 4.8Hz， NH)， 8.82(s， 1H， Pyimidinyl-H)， 10.46(bs， 1H， NH).HRMS(ESI)486.1421(M+H . C21H23N7O3S2 峰值 486.1304)。以类似方法合成下列化合物。
1.2 2-(4- 羟基 - 苯氨基 )-4-(4- 甲基 -2- 甲基氨基 -5- 噻唑基 )- 嘧啶 -5- 腈由 3- 二甲氨基 -2-(4- 甲基 -2- 甲氨基 - 噻唑 -5- 羰基 )- 丙烯腈和 N-(4- 羟基 - 苯基 )- 盐 酸胍制得。HRMS(ESI)339.1089(M+H+.C16H14N6OS 峰值 339.0950)。
1.3 2-(3- 羟基 - 苯氨基 )-4-(4- 甲基 -2- 甲氨基 -5- 噻唑基 )- 嘧啶 -5- 腈
由 3- 二甲氨基 -2-(4- 甲基 -2- 甲氨基 - 噻唑 -5- 羰基 )- 丙烯晴和 N-(3- 羟苯 基 )- 盐酸胍制得。HRMS(ESI)339.1078(M+H+.C16H14N6OS 峰值 339.0950)。
1.4 4-(4- 甲基 -2- 甲氨基 -5- 噻唑基 )-2-[3-( 吗啉 -4- 羰基 )- 苯氨基 ]- 嘧 啶 -5- 腈由 3- 二甲氨基 -2-(4- 甲基 -2- 甲氨基 - 噻唑 -5- 羰基 )- 丙烯腈和 N-[3-( 吗 啉 -4- 羰基 )- 苯基 ]- 盐酸胍制得。HRMS(ESI)436.1616(M+H+.C21H21N7O2S 峰值 436.1477)。
1.5 2-[3-(4- 乙酰哌嗪 -1- 羰基 )- 苯胺基 ]-4-[4- 甲基 -2-( 甲氨基 )-5- 噻 唑 基 ]- 嘧 啶 -5- 腈 由 - 二 甲 氨 基 -2-(4- 甲 基 -2- 甲 氨 基 - 噻 唑 -5- 羰 基 )- 丙 烯 腈 和 1-[3-(4- 乙 酰 基 - 哌 嗪 -1- 羰 基 )- 苯 基 ]- 胍 制 得。 产 物 为 黄 色 固 体。 HRMS(ESI)477.1973(M+H+.C23H24N8O2S 峰值 477.1743)。
1.6 3-[5- 氰基 -4-(4- 甲基 -2-( 甲氨基 )-5- 噻唑基 )- 嘧啶 -2- 氨基 ]- 苯甲酸
由 2-[3-(4- 乙 酰 哌 嗪 -1- 羰 基 )- 苯 胺 基 ]4-[4- 甲 基 -2-( 甲 氨 基 )-5- 噻 唑 基 ]- 嘧 啶 -5- 腈 制 得。 产 物 为 黄 色 固 体。HRMS(ESI)367.1093(M+H+.C17H14N6O2S 峰 值 367.0899)。
1.7 4-(4- 甲基 -2-( 甲氨基 )-5- 噻唑基 )-2-(3- 硝基苯氨基 )- 嘧啶 -5- 腈
由 3- 二甲氨基 -2-(4- 甲基 -2- 甲氨基 - 噻唑 -5- 羰基 )- 丙烯腈和 1-(3- 硝基 苯基 )- 盐酸胍制得。HRMS(ESI)366.0768(M-H-.C16H13N7O2S 峰值 366.0851)。
1.8 4-[5- 氰基 -4-(4- 甲基 -2-( 甲氨基 )-5- 噻唑基 )- 嘧啶 -2- 氨基 ]- 苯磺酰 胺由 3- 二甲氨基 -2-(4- 甲基 -2- 甲氨基 - 噻唑 -5- 羰基 )- 丙烯腈和 4- 胍基苯磺酰胺制 得。HRMS(ESI)400.0634(M-H-.C16H15N7O2S2 峰值 400.0729)。
1.9 3-[5- 氰基 -4-(4- 甲基 -2-( 甲氨基 )-5- 噻唑基 )- 嘧啶 -2- 氨基 ]- 苯磺酰 胺由 3- 二甲氨基 -2-(4- 甲基 -2- 甲氨基 - 噻唑 -5- 羰基 )- 丙烯腈和 3- 胍基苯磺酰胺制 得。HRMS(ESI)401.8300(M+H+.C16H15N7O2S2 峰值 401.0729)。
1.10 4-(4- 甲基 -2-( 甲氨基 )-5- 噻唑基 )-2-(3-(4- 甲基哌嗪 -1- 羰基 )- 苯 胺基 )- 嘧啶 -5- 腈由 3- 二甲氨基 -2-(4- 甲基 -2- 甲氨基 - 噻唑 -5- 羰基 )- 丙烯腈和 1-(3-(4- 甲基哌嗪 -1- 羰基 )- 苯基 )- 胍制得。 产物为黄色固体。 HRMS(ESI)448.8561(M+H+. C22H24N8OS 峰值 448.1794)。
1.11 4-(4- 甲基 -2-( 甲氨基 )-5- 噻唑基 )-2-(4- 吗啉代苯氨基 )- 嘧啶 -5- 腈由 3- 二甲氨基 -2-(4- 甲基 -2- 甲氨基 - 噻唑 -5- 羰基 )- 丙烯腈和 1-(4- 吗啉代苯基 )- 胍 制得。产物为黄色固体。HRMS(ESI)407.8810(M+H+.C20H21N7OS 峰值 407.1528)。
1.12 4-(4- 甲基 -2-( 甲氨基 )- 噻唑基 )-2-(3-( 吗啉代磺酰基 )- 苯基 - 氨 基 )- 嘧 啶 -5- 腈 由 3- 二 甲 氨 基 -2-(4- 甲 基 -2- 甲 氨 基 - 噻 唑 -5- 羰 基 ) 丙 烯 腈 和 1-(3-( 吗啉代磺酰基 )- 苯基 )- 胍制得。产物为黄色固体。HRMS(ESI)471.7335(M+H+. C20H21N7O3S2 峰值 471.1147)。
1.13 4-(4- 甲基 -2-( 甲氨基 )-5- 噻唑基 )-2-(4-( 吗啉代磺酰基 )- 苯基 - 氨基 )- 嘧 啶 -5- 腈 由 3- 二 甲 氨 基 -2-(4- 甲 基 -2- 甲 氨 基 - 噻 唑 -5- 羰 基 )- 丙 烯 腈 和 1-(4-( 吗啉代磺酰基 )- 苯基 )- 胍制得。
产物为黄色固体。HRMS(ESI)471.7248(M+H+.C20H21N7O3S2 峰值 471.1147)。
1.14 4-(4- 甲基 -2-( 甲氨基 )-5- 噻唑基 )-2-(3-( 甲磺酰基 )- 苯氨基 )- 嘧 啶 -5- 腈由 3- 二甲氨基 -2-(4- 甲基 -2- 甲氨基 - 噻唑 -5- 羰基 )- 丙烯腈和 1-(3-( 甲 磺酰基 )- 苯基 )- 胍制得。产物为黄色固体。HRMS(ESI)400.8207(M+H+.C17H16N6O2S2 峰值 400.0776)。
2.0 4-[4- 氯 -6-(3- 甲氧基 - 苯基 )-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 氨基 ]- 苯酚
将 2， 4， 6- 三氯 -[1， 3， 5]- 三嗪 (20 毫摩尔 ) 溶解于甲苯中， 以冰水浴冷却， 逐滴 加入 3- 甲氧基苯基溴化镁 (20 毫摩尔 )。搅拌混合物 2 小时， 使之完全反应后加热至室温。 该化合物于真空中蒸馏干燥， 得到白色固体 2， 4- 二氯 -6-(3- 甲氧基苯基 )-[1， 3， 5] 三嗪。 + + MS(ESI )m/z 256.00(M+H) 。
将上述化合物溶于乙腈中， 在存在二异丙胺的条件下， 室温下与等摩尔的 4- 氨基 酚反应 2 小时。 用快速色谱法纯化反应的混合物， 以乙酸乙酯 - 石油醚 (2 ∶ 1， v/v) 为洗脱 液， 得黄色固体 4-[4- 氯 -6-(3- 甲氧基 - 苯基 )-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 氨基 ]- 苯酚。MS(ESI+) m/z 328.06。
2.1 4-(4- 氯 -6-(3- 甲氧基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 氨基 )- 苯酚
将镁 (1.07 克， 44.58 毫摩尔， 1.8 当量 ) 放入干燥的四氢呋喃 (15 毫升 ) 中以激 活其金属特性， 并在此烧瓶中放一小块碘。待颜色消失后， 保持反应的温度不变， 溶解三溴 苯甲醚 (4.64 克， 24.81 毫摩尔， 1 当量 ) 于干燥的四氢呋喃 (15 毫升 ) 中， 配置成溶液， 滴 加到混合物中。滴加完全后， 搅拌反应物 30 分钟 ( 由薄层色谱监测该反应过程 )。
在装有滴液漏斗、 吸收瓶和温度计的三颈烧瓶中， 用 20 毫升干燥的四氢呋喃溶解 氰尿酰氯 (4.58 克， 24.81 毫摩尔， 1 当量 )。将反应后的溶液冷却至 -20℃， 通过滴液漏斗 加入格氏试剂， 滴加过程中， 保持反应混合物的温度低于 15℃。滴加完成后， 在 -15℃搅拌 烧瓶中的反应物 45 分钟。放入水 (100 毫升 )， 使反应的混合物迅速冷却， 然后用乙酸乙 酯 (3×50 毫升 ) 萃取。用盐水 (50 毫升 ) 洗涤有机层， 然后用无水硫酸镁干燥。将溶液 减压蒸馏， 用快速柱色谱纯化残留液， 经石油醚 (40-60℃ ) ∶乙醚＝ 90 ∶ 10 的混合物洗 脱， 得白色固体 2， 4- 二氯 -6-(3′ - 甲氧基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪， 产量 2.65 克 (42％ )， 熔点 113.8-114.0℃ ( 从石油醚 (40-60℃ ) 中测得 ) ； δH(400MHz， CDCl3)8.11(1H， ddd， J 7.8， 1.4 and 1.0， 6’ -H)， 7.99(1H， dd， J2.7and 1.4， 2’ -H)， 7.43(1H， app.t， J 8.0， 5’ -H)， 7.19(1H， ddd， 8.2， 2.7and 1.0， 4’ -H)， 3.91(3H， s， OCH3)。
在烧瓶中存在碳酸氢钠 (0.249 克， 2.96 毫摩尔， 2 当量 ) 和 4- 氨基酚 (1.48 毫摩 尔， 1 当量 ) 的条件下， 将 2， 4- 二氯 -6-(3’ - 甲氧基 - 苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 (0.379 克， 1.48 毫摩尔， 1 当量 ) 溶于二甲基甲酰胺 (7 毫升 ) 中。允许在室温条件下搅拌反应混合物， 直 到薄层色谱显示最初的反应物质完全反应为止。反应混合物用水 (30 毫升 ) 迅速冷却。过 滤析出的沉淀用水洗涤数次。水溶液用乙酸乙酯 (3×10 毫升 ) 萃取。用盐水 (10 毫升 ) 洗涤有机层， 然后用无水硫酸镁干燥。减压蒸馏溶液， 用快速柱色谱纯化残留液， 经石油醚 (40-60℃ ) ∶乙酸乙酯＝ 70 ∶ 30 的混合物洗脱， 得产量 0.481 克 (99％ ) 的黄色固体产 物。熔点 164.1-164.3℃ ( 从甲苯中测得 ) ； δH(400MHz， DMSO-d6)10.50 and 1046(1H， 2xs)， 9.38and 9.38(1H， 2xs)， 7.79-7.93(2H， m， Ar)， 7.39-7.51(3H， m， Ar)， 7.19-7.21(1H， m， Ar)， 6.76-6.81(2H， m， Ar)， 3.83and 3.82(3H， 2xs， OCH3) ； HRMS(ESI)329.0823(M+H+. C16H14N435ClO2 峰值 329.0805)。
以类似方法合成下列化合物。
2.2 4- 氯 -6-(3- 甲氧基苯基 )-N-(3- 硝基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 胺
用 2， 4- 二 氯 -6-(3 ′ - 甲 氧 基 苯 基 )-1， 3， 5- 三 嗪 (0.379 克， 1.48 毫 摩 尔 )， 碳酸氢钠 (0.249 克， 2.96 毫摩尔 ) 和 3- 硝基苯胺 (0.204 克， 1.48 毫摩尔 ) 制备， 经石 油醚 (40-60℃ ) ∶乙酸乙酯＝ 80 ∶ 20 的混合物为洗脱， 得黄色固体产物， 产量 0.518 克 + 35 (98％ ) ； 熔点 154.7-154.9℃ ； HRMS(ESI)358.0749(M+H .C16H13N5O3 Cl 峰值 358.0707)。
2.3 N-(3- 溴苯基 )-4- 氯 -6-(3- 甲氧基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 胺
用 2， 4- 二氯 -6-(3’ - 甲氧基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 (0.379 克， 1.48 毫摩尔 )， 碳酸氢 钠 (0.249 克， 2.96 毫摩尔 ) 和 3- 溴苯胺 (0.16 毫升， 1.48 毫摩尔 ) 制备， 得白色固体产物 ； 产量 0.429 克 (74％ ) ； 熔点 177.5-177.7℃ ( 从甲苯中测得 ) ； HRMS(ESI)391.0059(M+H+. C16H13N4O35Cl79Br 峰值 390.9961)。
2.4 4- 氯 -6-(3- 甲氧基苯基 )-N-(4- 甲基 -3-( 吗啉代磺酰基 )- 苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 胺用 2， - 二氯 -6-(3’ - 甲氧基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 (0.379 克， 1.48 毫摩尔 )， 碳酸氢钠 (0.249 克， 2.96 毫摩尔 ) 和 4- 甲基 -3-( 吗啉 -4- 磺酰基 )- 苯胺 (0.379 克， 1.48 毫摩尔 ) 制得白色固体产物， 产量 0.348 克 (49％ ) ； 熔点 174.1-174.5℃ ( 从甲苯中 + 35 测得 ) ； HRMS(ESI)476.1213(M+H .C21H23N5O4 ClS 峰值 476.1159)。
制备 6-(3- 甲氧基苯基 )N- 芳基 -[1， 3， 5] 三嗪 -2， 4- 二胺的常用方法。
将 35％的氨水 (1 毫升 ) 加入到 2- 苯胺 -4-(3’ - 甲氧基苯基 )-6- 氯 -1， 3， 5- 三 嗪 (0.152 毫摩尔 ) 的 1， 4 二氧杂环己烷 (2 毫升 ) 溶液中， 缓慢加热反应的混合物， 至少经 过 2 小时升到 60℃。加水 (2 毫升 ) 稀释烧瓶中的反应物， 用乙醚 (3×2 毫升 ) 萃取。无水 硫酸镁干燥有机层， 减压蒸馏溶液， 并用快速柱色谱纯化残留液。
2.5 4-(4- 氨基 -6-(3- 甲氧基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 氨基 )- 苯酚
用 4-(4- 氯 -6-(3- 甲氧基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 氨基 )- 苯酚 (50 毫克， 0.152 毫摩 尔 ) 制备， 经石油醚 (40-60℃ ) ∶乙酸乙酯＝ 70 ∶ 30 洗脱， 得浅黄色固体产物， 产量 33 毫 + 克 (70％ )。 熔点 93.5-94.0℃ ( 分解 ) ； HRMS(ESI)310.1288(M+H .C16H16N5O2 峰值 310.1304)。
2.6 6-(3- 甲氧基苯基 -N2-(3- 硝基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2， 4- 二胺
用 4- 氯 -6-(3- 甲氧基苯基 )-N-(3- 硝基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 胺 (54 毫克， 0.152 毫摩尔 ) 制备， 经石油醚 (40-60℃ ) ∶乙酸乙酯＝ 70 ∶ 30 的混合物洗脱， 得浅黄色 + 固体产物 ； 产量 35 毫克 (68％ ) ； 熔点 196.9-197.2℃ ； HRMS(ESI)339.1213(M+H .C16H15N6O3 峰值 339.1206)。
2.7 6-(3- 甲氧基苯基 )-N2- 甲基 -N4-(3- 硝基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2， 4- 二胺
用 4- 氯 -6-(3- 甲氧基苯基 )-N-(3- 硝基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 胺 (49 毫克， 0.137 毫摩尔 )， 甲胺盐酸盐 (14 毫克， 0.206 毫摩尔 ) 和碳酸钠制备， 得浅黄色固体产 物； 产量 39 克 (81 ％ ) ； 熔点 170.9-171.3 ℃ ( 从石油醚 (40-60 ℃ )/ 乙酸乙酯测得 ) ； + HRMS(ESI)353.1328(M+H .C17H17N6O3 峰值 353.1362)。
2.8 4-( 羟氨基 )-6-(3- 甲氧基苯基 )-N-(3- 硝基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 胺用 4- 氯 -6-(3- 甲氧基苯基 )-N-(3- 硝基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 胺 (61 毫克， 0.171 毫摩尔 )， 羟胺盐酸盐 (18 毫克， 0.256 毫摩尔 )， 碳酸钠 (27 毫克， 0.256 毫摩尔 ) 的二 甲基甲酰胺 (3ml) 溶液制备， 得淡黄色固体产物， 产量 50 毫克 (83％ )， 熔点 197.1-197.5℃； + HRMS(ESI)355.1166(M+H .C16H15N6O4 峰值 355.1155)。
2.9 N2-(3- 溴苯基 )-6-(3- 甲氧基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2， 4- 二胺
用 N-(3- 溴 苯 基 )-4- 氯 -6-(3- 甲 氧 基 苯 基 )-1， 3， 5- 三 嗪 -2- 胺 (73 毫 克， 0.186 毫摩尔 ) 制备， 经石油醚 (40-60℃ ) ∶乙酸乙酯＝ 70 ∶ 30 洗脱， 得白色固体产物 ； + 产量 45 毫克 (65％ ) ； 熔点 141.9-142.1℃ ；； HRMS(ESI)372.0458(M+H .C16H15N5O79Br 峰值 372.0460)。
2.10 6-(3- 甲氧基苯基 )-N2-(4- 甲基 -3-( 吗啉代磺酰基 )- 苯基 )-1， 3， 5- 三 嗪 -2， 4- 二胺用 4- 氯 -6-(3- 甲氧基苯基 )-N-(4- 甲基 -3-( 吗啉代磺酰基 )- 苯基 )-1， 3， 5- 三 嗪 -2- 胺 (76 毫 克， 0.160 毫 摩 尔 ) 制 备， 经 石 油 醚 (40-60 ℃ ) ∶ 乙 酸 乙 酯 ＝ 30 ∶ 70 的混合物洗脱， 得白色固体产物 ； 产量 35 毫克 (48 ％ ) ； 熔点～ 100 ℃ ( 分解 ) ； + HRMS(ESI)457.1691(M+H .C21H25N6O4S 峰值 457.1658)。
3.2 叔丁基 -5-(4- 氯 -6-(3- 硝基苯胺 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 )-4- 苯基噻唑 -2- 基 ( 甲基 ) 氨基甲酸将噻唑 (0.528 克， 1.82 毫摩尔， 1 当量 ) 溶解于干燥的四氢呋喃 (5 毫升 ) 中， 制成溶液， 加入 1.8 摩尔 / 升的 LDA 四氢呋喃溶液 (1.1 毫升， 2.00 毫摩尔， 1.1 当量 )， 冷却到 -78℃ ( 干冰 - 丙酮浴 )。搅拌混合物 45 分钟， 使之反应充分。在另一烧瓶中， 溶解 三聚氯氰 (0.402 克， 2.18 毫摩尔， 1.2 当量 ) 在干燥的四氢呋喃 (5 毫升 ) 中， 冷却此溶液 至 -78℃。形成的阴离子溶液通过管道转移到第二瓶的反应物中， 再搅拌 30 分钟， 加水 (20 毫升 ) 使溶液迅速冷却， 用乙酸乙酯 (3×30 毫升 ) 萃取， 用盐水 (50 毫升 ) 洗涤有机层， 再 用无水硫酸镁干燥， 减压蒸馏此溶液， 残留液用快速柱色谱纯化， 经石油醚 (40-60℃ ) ∶乙 酸乙酯＝ 95 ∶ 5 的混合物洗脱， 得 0.387 克 (49％ ) 的黄色固体产物 ； 熔点 163℃ ( 分解 ) ； + 35 HRMS(ESI)438.0739(M+H .C18H18N5O2 Cl2 峰值 438.0558)。
用叔丁基 -5-(4， 6- 二氯 -1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 )-4- 苯基噻唑 -2- 基 ( 甲基 ) 氨基 甲酸 (98 毫克， 0.224 毫摩尔 )， 碳酸氢钠 (38 毫克， 0.448 毫摩尔 ) 和 3- 硝基苯胺 (31 毫 克， 0.224 毫摩尔 ) 制备， 经石油醚 (40-60℃ ) ∶乙酸乙酯＝ 85 ∶ 15 的混合物洗脱， 得预 + 35 想的黄色固体产物 ； 产量 60 毫克 (50 ％ ) ； HRMS(ESI)540.1460(M+H .C24H23N7O4 Cl S 峰值 540.1221)。
3.3 叔 丁 基 -5-(4- 氨 基 -6-(3- 硝 基 苯 胺 )-1， 3， 5- 三 嗪 -2- 基 )-4- 苯 基 噻 唑 -2- 基 ( 甲基 ) 氨基甲酸 δH(400MHz， CDCl3)8.34(1H， br.s)， 7.79(1H， d， J 7.5， Ar)， 7.73-7.70(2H， m， Ar)， 7.57(1H， d， J 7.9， Ar)， 7.35-7.25(4H， m， Ar)， 5.29(2H， br.s， NH2)， 3.58(3H， s， NCH3)， 1.61(9H， s， C(CH3)3) ； δC(100MHz， CDCl3)168.5， 166.4， 163.9， 162.2， 153.0， 148.4， 139.6， 135.7， 130.1， 128.4， 127.6， 125.3， 124.3， 117.3， 114.4， 83.7， 60.4， 33.8， 28.2。
3.4 6-(2-( 甲氨基 )-4- 苯基噻唑 -5- 基 )-N2-(3- 硝基苯基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2， 4- 二胺在 1 毫升二氯甲烷中， 为制成上述化合物叔丁基 -5-(4- 氨基 -6-(3- 硝基苯胺 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 )-4- 苯基噻唑 -2- 基 ( 甲基 ) 氨基甲酸 (37 毫克， 0.071 毫摩尔 ) 的悬浊 液， 需加入三氟乙酸 (1 毫升 )， 然后在室温下搅拌混合物 24 小时， 使反应完全。减压蒸馏该溶剂， 用 5 毫升饱和碳酸钠中和残留液， 再用醋酸乙酯 (3×5 毫升 ) 萃取。用无水硫酸镁 干燥后， 减压蒸馏该混合物， 用硅胶过滤残留液， 得 30 毫克 (100％ ) 的黄色固体产物 ； 熔点 + 277℃ ； HRMS(ESI)421.1265(M+H .C19H17N8O2S 峰值 421.1195)。
例 1a- 制备化学式 IV 的化合物
1.1a 按如下方法制备 N-[4- 甲基 -3-( 吗啉 -4- 磺酰基 )- 苯基 ]- 胍
将 2- 甲基 -5- 硝基氯化苯 (20 毫摩尔 ) 溶解于 20 毫升四氢呋喃中， 在存在三乙 胺 (25 毫摩尔 ) 的条件下， 与吗啉 (40 毫摩尔 ) 反应。在室温下搅拌 2 小时后， 在真空中 蒸馏反应混合物， 得褐色固体 4-(2- 甲基 -5- 硝基 - 苯磺酰基 )- 吗啉 ( 产率 95％ )， 熔点 + + 114-115℃。MS(ESI )m/z 287.82(M+H) 。
在后制得的混合物 (7mmol) 中加入乙醇 (10 毫升 )、 醋酸 (5 毫升 )。 加热该混合物 到 65℃后， 分批加入铁粉末 (28mmol)。回流反应混合物 1.5 小时后， 冷却至室温， 过滤并用 最小量的乙酸乙酯 / 乙醇洗涤。滤液蒸发至干。用过量的氢氧化钠溶液碱化析出沉淀。用 乙酸乙酯萃取水相数次后， 与有机相合并， 蒸馏， 得 4- 甲基 -3-( 吗啉 -4- 磺酰基 )- 苯胺。 + 产物为褐色固体 ( 产率 39％ )， MS(ESI )m/z 257.09(M+H)+。
将 4- 甲基 -3-( 吗啉 -4- 磺酰基 )- 苯胺 (15mmol) 溶解于乙醇 (20 毫升 ) 中， 冰 水浴冷却， 用盐酸 (1.3 毫升， 37％的水溶液 ) 处理后， 逐滴加入氰胺 (2.2 毫升， 50％的水溶 液， 60 毫摩尔 )， 并在 100℃下加热 17 小时。反应完成后， 浓缩混合物。沉淀物经石油醚 / 乙酸乙酯 (4 ∶ 1) 洗脱， 过滤， 干燥得棕色固体 N-[4- 甲基 -3-( 吗啉 -4- 磺酰基 )- 苯基 ] 1 胍。 H NMR(DMSO-d6)δ2.43(s， 3H， CH3)， 3.05(s， 4H， CH2×2)， 3.63(s， 4H， CH2×2)， 7.45(m， 4H， NH2，NH×2)， 7.94(d， 1H， J ＝ 8.0Hz， Ph-H)， 8.17(s， 1H， Ph-H)， 8.28(d， 1H， J ＝ 8.0Hz， + + Ph-H).MS(ESI )m/z 299.11(M+H) 。
用类似方法合成以下化合物。
1-(3- 硝基苯基 ) 胍。1H NMR(DMSO-d6) ： δ7.70(m， 5H， Ph-H×2， NH， NH2)， 8.09(m， + + 1H， Ph-H)， 8.19(m， 1H， Ph-H).MS(ESI )m/z 181.07(M+H) 。
1-(3- 羟 基 苯 基 )- 胍。1H NMR(DMSO-d6)δ6.82(m， 2H， Ph-H×2)， 7.02(m， 2H， + + Ph-H×2)， 7.30(s， 4H， NH2&NH×2)， 9.75(s， 1H， OH).MS(ESI )m/z 152.08(M+H) 。 1
1-(4- 羟 基 苯 基 )- 胍。 H NMR(DMSO-d6) ： δ6.63(m， 2H， Ph-H×2)， 6.70(m， 1H， + Ph-H)， 7.20(t， 1H， J ＝ 8.0Hz， Ph-H)， 7.44(s， 4H， NH2， NH×2)， 9.80(s， 1H， OH).MS(ESI )m/z + 152.31(M+H) 。
1-(3-( 吗啉 -4- 羰基 )- 苯基 )- 胍。1H NMR(DMSO-d6)δ3.61(s， 8H， CH2)， 4.28(m， 1H， NH)， 7.24(t， 1H， J ＝ 1.6Hz， Ph-H)， 7.31(t， 1H， J ＝ 2Hz， Ph-H)， 7.33(t， 1H， J ＝ + 2.4Hz， Ph-H)， 7.49(t， 1H， J ＝ 8Hz， Ph-H)， 7.57(s， 2H， NH2)， 10.00(s， 1H， NH).MS(ESI )m/z + 249.10(M+H) 。
4- 胍 基 苯 磺 酰 胺。1H NMR(DMSO-d6， 400MHz) ： δ6.80(d， 1H， J ＝ 8.4Hz， NH)， 7.24(s， 1H， NH)， 7.39(d， 2H， J ＝ 8.8Hz， Ph-H)， 7.39(d， 2H， J ＝ 8.4Hz， Ph-H)， 7.77(s， 2H， + + 1 NH2).MS(ESI )m/z 215.07(M+H) 。3- 胍基苯磺酰胺。 H NMR(DMSO-d6， 400MHz) ： δ7.46(m， 3H， NH&NH2)， 7.63(t， 1H， J ＝ 8.0Hz， Ph-H)， 7.65(m， 1H， Ph-H)， 7.69(m， 2H， Ph-H×2)， + + 7.72(s， 2H， NH2)， 10.36(s， 1H， NH).MS(ESI )m/z 215.06(M+H) 。
生物活性激酶检测法。用 Wang， S.et al.J Med Chem 2004， 47， 1662. 里阐述的方法研究上 述例子中化合物的性质， 从而抑制各种蛋白激酶的酶活性。即用放射性标记三磷酸腺苷中 磷酸盐的方法获得适当的多肽底物。可直接购买或自己制造重组蛋白激酶和激酶复合物。 实验表明， 应使用 96 孔板和适当的检测缓冲液 ( 通常包括 25mM 的甘油磷酸， 20mM 的 3- 吗 啉基丙磺酸， 5mM 的 EGTA， 1mM 的二巯基苏糖醇， 1mM 的矾酸钠， ， 其 pH 值为 7.4)， 并在其中 加入 2-4 微克适当底物的活性酶。该反应从加入镁 / 三磷酸腺苷的混合物 (15mM 的氯化 镁 +100μM 的三磷酸腺苷， 每孔的 [γ-32P]-ATP 有 30-50kBq) 开始， 且要求在 30℃下形成 该混合物。反应在冰中结束， 然后用 81 孔过滤板或 GF/C 滤纸 (Whatman Polyfiltronics， Kent， UK) 过滤。用 75mM 的磷酸溶液洗涤， 干燥过滤板， 加入液闪剂， 在液闪箱 (TopCount， Packard Instruments， Pangbourne， Berks， UK) 内测定相关的放射性。用于激酶检测的 化合物在 DMSO 中制备成 10μM 的浓度， 并在试验缓冲溶液中用 10％的二甲亚砜稀释。采 用曲线拟合软件 (GraphPad Prism version 3.00 for Windows， GraphPad Software， San Diego California USA) 分析数据， 以确定其半数抑制浓度 ( 被测化合物能抑制 50％的激 酶活性的浓度 )。MTT 细胞毒性检测法。用标准细胞增殖试验测定上述例子中的化合物， 曾 有文章 (Haselsberger， K.et al.Anti Cancer Drugs 1996， 7， (3)， 331-8.Loveland， B.E.et al.Biochemistry International 1992， 27， (3)， 501-10) 描述过此方法。人类肿瘤细胞株 从 ECACC( 欧洲生物制品收藏中心 ) 购得。用标准的 72-h MTT( 噻唑蓝， 3-[4， 5- 二甲基噻 唑 -2- 基 ]-2， 5- 二苯基溴化四氮唑， 2mg/ml 的磷酸盐缓冲溶液 ) 进行试验。简而言之 ： 根 据倍增时间和夜晚 37℃的培养温度， 将细胞接种到 96 孔板上。 在二甲亚砜中形成被测化合 物， 并在 100 微升的细胞培养基中培养 1/3 的稀释序列， 加入细胞 ( 在三份中都加入 )， 37℃ 下培养 72 个小时。在细胞培养基中， MTT 的形成浓度是 5mg/ml， 且需经过过滤灭菌。用 200 微升的 PBS 洗涤， 将细胞中的培养基除去。然后每孔加入 20 微升的 MTT 溶液， 在 37℃下避 光培养 4 小时。除去 MTT 溶液， 并再次用 200 微升的 PBS 洗涤细胞。摇动酶标板， 使 MTT 染 料溶解于每孔 200 微升的二甲亚砜中。利用 Anthos Labtec 系统酶标仪， 在 550nm 处测得 TM 吸光值。用 Deltasoft 3 程序分析数据， 并用 MicrosoftExcel 确定反应半抑制浓度或细 胞生长半抑制浓度 ( 被测化合物能抑制 50％的细胞增长的浓度 )。
慢性淋巴细胞白血病细胞凋亡检测方法。在冰中溶解化合物， 等分量加入到 0.5 毫升的微型离心管中， 在 -20℃保存以避免多次冻融循环。在冰中溶解等分量的化合物， 药物试验前按要求迅速用无菌 PBS 稀释。采用标准的 Ficoll 方法 (Ficoll-Paque Plus， GE Healthcare) 从 ACD 全血中分离出原发性慢性淋巴细胞白血病细胞， 并在 RosetteSep B 细胞的混合物中分离和富集 B 细胞 (StemCell Tech.)。在每分钟 1640 转 1E6-3E6 个细 胞每毫升的条件下培养细胞， 并在 37℃下于 24 孔板中加入 10％的人类血清和抗生素。在 试验开始时加入抑制剂化合物， 且样本只存在于培养皿中。24 小时后， 将细胞转移到试管 中进行膜联蛋白 - 碘化丙锭成活率测试。以 1500rpm 的速度离心细胞 5 分钟， 加入适当的 反应物、 钙结合缓冲液后避光培养 5 分钟。培养结束后， 加入 800ul 的结合缓冲液， 然后在 EPICS-XL(Beckman-Coulter) 上用流式细胞仪进行分析。
本领域普通技术人员应能理解， 只要不背离本发明的范围或精神， 可对本发明进 行各种修改和改变。 尽管已经联合特定优选的实施方案描述了本发明， 但是应该理解， 本发 明不应过多地局限于此特定实施方案。实际上， 相关领域的技术人员对于本发明所用模式的各种修改都是在权利要求范围内进行。
例 A1
实例中的化合物的生物活性在表 A1 和 A2 中
表 A1
表 A2- 例 1.1 的化合物的抗增殖活性