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1、10申请公布号CN103087013A43申请公布日20130508CN103087013ACN103087013A21申请号201110332197522申请日20111028C07D305/1420060171申请人中国科学院大连化学物理研究所地址116023辽宁省大连市中山路457号72发明人杨凌杜逊甫刘兴宝盛武林74专利代理机构沈阳晨创科技专利代理有限责任公司21001代理人张晨54发明名称一种紫杉醇的制备方法57摘要本发明提供一种紫杉醇的制备方法，将原料7木糖10去乙酰紫杉醇（10DAXT）经过预处理转化得到紫杉醇混合物（预处理步骤包括臭氧氧化、C7位去木糖基反应、C10位引入乙酰基。
2、反应等步骤），将得到的紫杉醇混合物进行柱层析、重结晶等步骤得到紫杉醇纯品，该方法是一种能有效分离来源于10DAXT的紫杉醇混合物的方法。本发明可以高效、廉价、环保的制备紫杉醇，为充分利用红豆杉资源提供了一条适应工业化生产的有效途径。51INTCL权利要求书1页说明书4页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页附图1页10申请公布号CN103087013ACN103087013A1/1页21一种紫杉醇的制备方法，将原料7木糖10去乙酰紫杉醇经过预处理转化得到紫杉醇混合物，预处理步骤包括臭氧氧化、C7位去木糖基反应、C10位引入乙酰基反应，其特征在于将经过预。
3、处理得到的紫杉醇混合物进行柱层析、重结晶步骤；具体如下（1）臭氧氧化7木糖10去乙酰紫杉醇原料溶解在甲醇中，制成浓度为110MG/ML的溶液，然后通入臭氧，将原料中含有的杂质10去乙酰7木糖三尖杉宁碱氧化为极性更高的衍生物，便于最终产品的分离；（2）柱层析将紫杉醇混合物采用硅胶柱层析进行分离，流动相为极性溶剂和非极性溶剂的混合溶剂，洗脱速度为12个柱体积/小时，洗脱液用量为515个柱体积；（3）重结晶将柱层析收集的馏分，浓缩蒸干，溶解于甲醇中，制成浓度为0031G/ML溶液，然后向其中加入去离子水，加入去离子水的量为甲醇去离子水05121，放置过夜，结晶产品经过过滤后再减压烘干，得紫杉醇纯品。。
4、2按照权利要求1所述紫杉醇的制备方法，其特征在于所述原料来源于红豆杉属植物，且原料中7木糖10去乙酰紫杉醇含量在1080之间，10去乙酰7木糖紫杉醇C的含量为10，10去乙酰7木糖三尖杉宁碱含量为0220。3按照权利要求1所述紫杉醇的制备方法，其特征在于所述步骤（1）中臭氧通入速度为每升反应体系每小时通入臭氧量为0110G，反应温度1040度，反应时间为055H。4按照权利要求1所述紫杉醇的制备方法，其特征在于所述步骤（1）中紫杉醇混合物中紫杉醇的含量2080，紫杉醇C的含量10，三尖杉宁碱的含量02。5按照权利要求1所述紫杉醇的制备方法，其特征在于所述步骤（2）中硅胶柱为动态轴向压缩柱，硅胶。
5、粒度200800目，径高比1115，装柱压力为530MPA，装柱方式为干法或湿法装柱，紫杉醇混合物样品与硅胶的质量比为1201200。6按照权利要求1所述紫杉醇的制备方法，其特征在于所述步骤（2）中非极性溶剂为二氯甲烷，三氯甲烷，正己烷中一种或多种，极性溶剂为乙酸乙酯，甲醇中一种或多种。7按照权利要求1所述紫杉醇的制备方法，其特征在于所述步骤（3）中紫杉醇纯品的含量995，其余单个杂质含量均小于01。8按照权利要求3所述紫杉醇的制备方法，其特征在于所述步骤（1）中臭氧通入速度为每升反应体系每小时通入臭氧量为210G，反应温度1535度，反应时间为0525H。9按照权利要求5所述紫杉醇的制备方法。
6、，其特征在于所述步骤（2）中硅胶柱为动态轴向压缩柱，硅胶粒度300400目，径高比1215，装柱压力为2030MPA，装柱方式为干法或湿法装柱，紫杉醇混合物样品与硅胶的质量比为1501100。权利要求书CN103087013A1/4页3一种紫杉醇的制备方法技术领域0001本发明属于医药工业领域，具体的说涉及一种利用高效柱色谱及结晶技术从10DAXT转化产物中分离高纯紫杉醇的方法。背景技术0002紫杉醇1是一类二萜化合物，作为临床一线用药而广泛应用于多种肿瘤的治疗。目前，生产紫杉醇的途径主要有从红豆杉植物中直接提取紫杉醇；从红豆杉属植物中提取分离到具有紫杉醇母核结构的化合物10去乙酰巴卡亭（简写。
7、10DAB，2），再用化学方法半合成紫杉醇。00030003除了10DAB外，在我国广泛种植的几个红豆杉品种（云南，南方，中华红豆杉）的枝叶中，还大量存在另一种具有紫杉醇母核结构的化合物，即10去乙酰7木糖紫杉醇（10DAXT）（3），其含量可达植物干重的1，为紫杉醇的510倍（PLANTAMEDICA,200874773779）。该化合物与紫杉醇的差别仅在于C7位多一个木糖基，C10位缺少一个乙酰基，因此如果通过有效方法去除C7木糖基，并在C10引入乙酰基，就可以将其转化为紫杉醇，从而达到对我国红豆杉资源的有效利用。因此该工艺将是未来紫杉醇产业中不可缺说明书CN103087013A2/4页4。
8、少的工艺之一。0004利用10DAXT合成紫杉醇工艺中路径包括10DAXT去木糖获得10去乙酰紫杉醇（10DAT）（4），以及10DAT乙酰化生成紫杉醇。目前已有很多报道公开了C7木糖基去除（US5412116，US6028206，US5856532，US6437154）及C10乙酰基引入（ZL2007100107422，ZL2007100107390）的技术，但这些报道中均未提出相应的紫杉醇分离纯化方案以及最终产品的质量标准。由于植物来源的10DAXT中通常会伴随其他种类的紫杉烷木糖苷化合物，如10去乙酰7木糖三尖杉宁碱10DAXC，10去乙酰7木糖紫杉醇C（10DAXTC），二者会在10D。
9、AXT转化过程中一起参与反应，最终生成三尖杉宁碱和紫杉醇C，这些化合物同紫杉醇结构极其类似，普通方法难于分离；另外，由于采用了新原料和新工艺，其原料及各步骤中势必会引入许多现有工艺中未出现过的杂质，因此必须要采用高效的分离手段，才能去除这些杂质，保证产品符合各国的药典标准。发明内容0005本发明的目的是提供一种紫杉醇的制备方法，该方法是一种能有效分离来源于7木糖10去乙酰紫杉醇（简称10DAXT）的紫杉醇混合物的方法，获得的产品符合各国药典的标准。0006一种紫杉醇的制备方法，将原料7木糖10去乙酰紫杉（10DAXT）醇经过预处理转化得到紫杉醇混合物，预处理步骤包括臭氧氧化、C7位去木糖基反应。
10、、C10位引入乙酰基反应，其特征在于将得到的紫杉醇混合物进行柱层析、重结晶步骤；具体如下本发明提供了一种紫杉醇的制备方法，将原料7木糖10去乙酰紫杉醇（10DAXT）经过预处理转化得到紫杉醇混合物（预处理步骤包括臭氧氧化、C7位去木糖基反应、C10位引入乙酰基反应等步骤），将得到的紫杉醇混合物进行柱层析、重结晶等步骤；具体如下（1）原料的预处理10DAXT原料溶解在甲醇中，制成浓度为110MG/ML的溶液，然后通入臭氧，臭氧通入速度为每升反应体系每小时通入臭氧量为0110G，反应温度1040度，反应时间为055H，转化率达到98以上，通过处理，将原料中含有的杂质10去乙酰7木糖三尖杉宁碱（简称。
11、10DAXC）氧化为极性更高的衍生物，再经过去木糖及乙酰化反应后，该氧化产物生成相应的三尖杉宁碱的氧化产物，容易同紫杉醇分离；将上述经臭氧化后的样品进行C7位去木糖基反应和C10位引入乙酰基反应。可按如下方法进行反应后样品浓缩至干，按1100的比例溶于甲醇氯仿41中，加入适量高碘酸钠和硫酸05MOL/L，二者与样品质量比为0641，室温下搅拌15H，反应混合物用水稀释后用二氯甲烷萃取3次，减压蒸干后再溶于适量甲醇和醋酸溶液50中，再向反应液中加入水合肼（与原料体积质量比为041）后在5060下搅拌2H，用水稀释反应液，再用二氯甲烷萃取反应液两次，减压浓缩得到10DAT产品。乙酰化反应可采用如下。
12、方法10DAT样品溶解于四氢呋喃溶液中，依次加入硝酸铈，乙酸酐，二者与样品的比例分别为1510，20度反应3H后加入饱和碳酸氢钠熄灭反应，随后加入双氧水（双氧水量占总反应体系量的20），20度反应5小时后，用乙酸乙酯萃取反应液三次，蒸干乙酸乙酯相后得到紫杉醇混合物。（2）柱层析将紫杉醇混合物样品进行硅胶柱层析，流动相为极性溶剂和非极性溶剂的混合溶剂，洗脱速度为12个柱体积/小时，洗脱液用量为515个柱体积；（3）重结晶将柱层析收集的馏分，浓缩蒸干，溶解于甲醇中，制成浓度为0031G/ML溶液，然后向其中加入去离子水，加入去说明书CN103087013A3/4页5离子水的量为甲醇去离子水0512。
13、1，放置过夜，结晶产品经过过滤后再减压烘干，得紫杉醇纯品。0007本发明提供的紫杉醇的制备方法，所述原料来源于红豆杉属植物，且原料中10DAXT含量在1080之间，10去乙酰7木糖紫杉醇C（简称10DAXTC）的含量为10，7木糖10去乙酰三尖杉宁碱（简称10DAXC）含量多少为0220。0008本发明提供的紫杉醇的制备方法，所述原料经过预处理得到的紫杉醇混合物中紫杉醇的含量2080，紫杉醇C的含量10，三尖杉宁碱的含量02。0009本发明提供的紫杉醇的制备方法，所述步骤（2）中硅胶柱为动态轴向压缩柱，硅胶粒度200800目，径高比1115，装柱压力为530MPA，装柱方式为干法或湿法装柱，紫。
14、杉醇混合物样品与硅胶的质量比为1201200。0010本发明提供的紫杉醇的制备方法，所述步骤（2）中非极性溶剂为二氯甲烷，三氯甲烷，正己烷中一种或多种，极性溶剂为乙酸乙酯，甲醇中一种或多种；流动相优选体系为甲醇/二氯甲烷或乙酸乙酯/正己烷体系。0011本发明提供的紫杉醇的制备方法，还提出了一种对柱层析收集的组份是否合格的评判标准，即观察紫杉醇和紫杉醇C的分离效果，当收集组份中紫杉醇含量大于85，且与紫杉醇C含量比10002时，即为合格产品，可以合并蒸干。0012本发明提供的紫杉醇的制备方法，所述步骤（3）中紫杉醇纯品的含量995，其余单个杂质含量均小于01。0013本发明提供的紫杉醇的制备方法。
15、，所述步骤（1）中臭氧通入速度为每升反应体系每小时通入臭氧量为210G，反应温度1540度，反应时间为0525H。0014本发明提供的紫杉醇的制备方法，所述步骤（2）中硅胶柱为动态轴向压缩柱，硅胶粒度300800目，径高比1215，装柱压力为2030MPA，装柱方式为干法或湿法装柱，紫杉醇混合物样品与硅胶的质量比为1501100。0015本发明所述的方法，可以高效、廉价、环保的制备紫杉醇，为充分利用红豆杉资源提供了一条适应工业化生产的有效途径。附图说明0016图1为臭氧化反应原料及产物的液相色谱图；其中A原料色谱图，B臭氧化反应后色谱图，色谱峰1为10DAXC，色谱峰2为10DAXC氧化产物；。
16、图2为最终产品紫杉醇的液相色谱图，其中色谱峰1为紫杉醇，含量为995。具体实施方式0017下面的实施例将对本发明予以进一步的说明，但并不因此而限制本发明。0018实施例1称取100G10DAXT粗品（含1010DAXT，3210DAXC，0310DAXTC），溶解于10L甲醇溶液中，10度条件下，向其中通入臭氧进行反应，通入速度为100G/H，反应30分钟结束，液相结果显示10DAXC的转化率达到99。0019实施例2称取100G10DAXT粗品（含5010DAXT，1010DAXC，7510DAXTC），溶解于100L甲醇说明书CN103087013A4/4页6溶液中，30度条件下，向其中通。
17、入臭氧进行反应，通入速度为50G/H，反应50分钟结束，液相结果显示10DAXC的转化率达到998。0020实施例3称取100G10DAXT粗品（含8010DAXT，1310DAXC，410DAXTC），溶解于20L甲醇溶液中，40度条件下，向其中通入臭氧进行反应，通入速度为2G/H，反应150分钟结束，液相结果显示10DAXC的转化率达到995。0021实施例4称取100G经10DAXT转化来的紫杉醇混合物原料（含68紫杉醇，31紫杉醇C，011三尖杉宁碱），进行柱层析。色谱柱为轴向压缩柱，内径为200MM，硅胶粒度300400目，将8KG硅胶倒入柱中，用20MPA的压力将柱子装实，流动相选。
18、用三氯甲烷甲醇98515（体积比），进行等度洗脱，收集含紫杉醇的流份，通过液相色谱进行检测，将合格组分合并蒸干后得到697G白色固体，紫杉醇含量为879，收率为76。697G白色固体溶解于500ML甲醇中，向其中滴加250ML去离子水，室温静置过夜，有大量白色晶体析出，过滤后50度真空（真空度005MPA）干燥12H得到紫杉醇产品523G，产品经液相色谱测定，紫杉醇含量达到995，其余杂质均小于01。0022实施例5称取200G经10DAXT转化来的紫杉醇混合物原料（含20紫杉醇，01紫杉醇C，无三尖杉宁碱），进行柱层析。色谱柱为轴向压缩柱，内径为200MM，硅胶粒度500800目，将10KG。
19、硅胶倒入柱中，用30MPA的压力将柱子装实，流动相选用正己烷乙酸乙酯11（体积比），进行等度洗脱，收集含紫杉醇的流份，通过液相色谱进行检测，将合格组分合并蒸干后得到370G白色固体，紫杉醇含量为935，收率为86。370G白色固体溶解于1200ML甲醇中，向其中滴加2400ML去离子水，室温静置过夜，有大量白色晶体析出，过滤后50度真空（真空度005MPA）干燥12H得到紫杉醇产品256G，产品经液相色谱测定，紫杉醇含量达到996，其余杂质均小于01。0023实施例6称取50G经10DAXT转化来的紫杉醇混合物原料（含80紫杉醇，48紫杉醇C，016三尖杉宁碱），进行柱层析。色谱柱为轴向压缩柱。
20、，内径为200MM，硅胶粒度300400目，采用湿法装柱。向5KG硅胶中加入10L二氯甲烷，搅拌均匀后，倒入柱中，用5MPA的压力将柱子压实，流动相选用二氯甲烷甲醇98515（体积比），进行等度洗脱，收集含紫杉醇的流份，通过液相色谱进行检测，将合格组分合并蒸干后得到368G白色固体，紫杉醇含量为914，收率为840。368G白色固体溶解于500ML甲醇中，向其中滴加500ML去离子水，室温静置过夜，有大量白色晶体析出，过滤后50度真空（真空度005MPA）干燥12H得到紫杉醇产品253G，产品经液相色谱测定，紫杉醇含量达到999，其余杂质均小于01。说明书CN103087013A1/1页7图1图2说明书附图CN103087013A。