用作法呢基-蛋白转移酶抑制剂的化合物 背景
1995年4月20日公开的专利申请WO95/10516公开用于抑制法呢基蛋白转移酶的三环类化合物。
鉴于法呢基蛋白转移酶抑制剂的现实意义，对本领域的一个宝贵贡的贡献将是用于抑制法呢基蛋白转移酶的另一些化合物。本发明即提供了此种贡献。
本发明概述
本发明提供用于抑制法呢基蛋白转移酶(FPT)的化合物。本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物由下式代表：其中：a、b、c和d之一代表N或NR9，其中R9为O-、-CH3或-(CH2)nCO2H(其中n是1-3)，而其余的a、b、c和d基团代表CR1或CR2；或a、b、c和d各自独立选自CR1或CR2；每个R1和每个R2独立选自H、卤代、-CF3、-OR10(如-OCH3)、-COR10、-SR10(如-SCH3和-SCH2C6H5)、-S(O)tR11(其中t是0、1或2，如-SOCH3和-SO2CH3)、-SCN、-N(R10)2、-NR10R11、-NO2、-OC(O)R10、-CO2R10、-OCO2R11、-CN、-NHC(O)R10、-NHSO2R10、-CONHR10、-CONHCH2CH2OH、-NR10COOR11、-SR11C(O)OR11(如-SCH2CO2CH3)、-SR11N(R75)2，其中每个R75独立选自H和-C(O)OR11(如-S(CHO2)2NHC(O)O-叔-丁基和-S(CH2)2NH2)、苯并三唑-1-基氧基、四唑-5-基硫代或取代的四唑-5-基硫代(例如，烷基取代的四唑-5-基硫代如1-甲基-四唑-5-基硫代)、链炔基、链烯基或烷基，所述烷基或链烯基任选被卤代、-OR10或-CO2R10取代；R3和R4是相同的或不同的，且各自独立代表H、R1和R2的任何取代基，或者R3和R4一起代表与苯环(环Ⅲ)稠合的饱和或不饱和C5-C7环；R5、R6、R7和R8各自独立代表H、-CF3、-COR10、烷基或芳基，所述烷基或芳基任选被下列基团取代：-OR10、-SR10、-S(O)tR11、-NR10COOR11、-N(R10)2、-NO2、-COR10、-OCOR10、-OCO2R11、-CO2R10、-OPO3R10或R5和R6结合代表=O或=S和/或R7与R8结合代表=O或=S；R10代表H、烷基、芳基或芳烷基(如苄基)；R11代表烷基或芳基；X代表N、CH或C，其中C可以任选含有连接于碳原子11的双键(由虚线表示)；碳原子5和6之间的虚线代表任选的双键，如此当存在双键时，A和B独立代表-R10、卤代、-OR11、-OCO2R11或-OC(O)R10，当碳原子5和6之间无双键存在时，A和B各自独立代表H2、-(OR11)2、H和卤代、二卤代、烷基和H、(烷基)2、-H和-OC(O)R10、H和-OR10、=O、芳基和H、=NOR10或-O-(CH2)p-O-，其中p是2、3或4；及W选自：(1)氰基(即CN)；(2)-OC(O)R12，其中R12选自：(a)杂芳基，例如吡啶基(如3-吡啶基)、吲哚基(如2-吲哚基)、吡咯基(如2-吡咯基)和N-取代的吡咯基(例如N-烷基吡咯基，像N-烷基吡咯基-2-基，像N-甲基-2-吡咯基)；(b)H；(c)烷基(如甲基)；或(d)下式的取代基：或其中R28选自-OC(O)R29、-OH、-OC(O)NHC(O)CCl3、或-OC(O)NH2,其中R29为烷基(如甲基)；(3)下式表示的亚胺酸酯(imidate)：其中R13选自：(a)H,(b)CN,(c)-SO2-烷基(如-SO2CH3-),(d)-C(O)-芳基(如-C(O)C6H5，即-C(O)苯基)，(e)-SO2NR10R15(如-SO2NH2),(f)-S(O)NR10R15(如-C(O)NH2),(g)-OR10(如-OH和-OCH3)和(h)-C(O)NR10C(O)NR10R15(如-C(O)NHC(O)NH2)；R14为芳基；R10和R15独立选自H、烷基、芳基和芳烷基；(4)由下式表示地亚胺酰胺基(imidamido)：其中R13选自：(a)H,(b)CN,(c)-SO2-烷基(如-SO2CH3-),(d)-C(O)-芳基(如-C(O)C6H5，即-C(O)苯基)，(e)-SO2R10R15(如-SO2NH2),(f)-S(O)NR10R15(如-C(O)NH2),(g)-OR10(如-OH和-OCH3)和(h)-C(O)NR10C(O)NR10R15(如-C(O)NHC(O)NH2)；R16选自烷基、芳烷基、芳基、环烷基、杂芳基、杂芳烷基和杂环烷基；R10和R15如上所定义；及R10和R16独立选自上面定义的基团；(5)下式的1-氨基-2-硝基乙烯衍生物其中R10如上所定义；及(6)下式的取代基：
本发明的化合物：(ⅰ)体外可有效地抑制法呢基蛋白转移酶，但不抑制香叶基香叶基蛋白转移酶Ⅰ；(ⅱ)阻断为法呢基受体的转化Ras形式诱导的表型的改变，但不阻断改造为香叶基香叶基受体的转化Ras形式诱导的表型的改变；(ⅲ)阻断为法呢基受体的Ras的细胞内加工，但不阻断改造为香叶基香叶基受体的Ras的细胞内加工；及(ⅳ)阻断由转化Ras诱导的异常细胞在培养物中的生长。
本发明的化合物抑制法呢基蛋白转移酶和癌基因蛋白Ras的法呢基化。因此本发明进一步提供通过给予有效量的上述的三环类化合物抑制哺乳动物，尤其是人中的法呢基蛋白转移酶(如ras法呢基蛋白转移酶)的方法。给予患者本发明的化合物以抑制法呢基蛋白转移酶在下述癌症的治疗中是有用的。
本发明提供通过给予有效量的本发明化合物抑制或治疗细胞(包括转化的细胞)异常生长的方法。细胞的异常生长指不依赖于正常调节机制(如接触抑制的丧失)的细胞生长。这包括下列的异常生长：(1)表达激活的Ras癌基因的瘤细胞(肿瘤)；(2)其中Ras蛋白因另一种基因的致癌突变而被激活的瘤细胞；及(3)其中出现异常的Ras激活的其它增生性疾病的良性和恶性细胞。
本发明也提供通过给予需要此治疗的哺乳动物(如人)有效量的本文所述的三环类化合物抑制或治疗肿瘤生长的方法。具体地说，本发明提供通过给予有效量的本文上述的化合物抑制或治疗表达激活的Ras癌基因的肿瘤生长的方法。可以被抑制或治疗的肿瘤的实例包括(但不限于)肺癌(如肺腺癌)、胰癌(如胰腺癌像外分泌性的胰腺癌)、结肠癌(如结肠直肠癌像结肠腺癌和结肠癌)、骨髓性白血病(如急性骨髓性白血病(AML)、甲状腺滤泡癌、脊髓发育不良综合征(MDS)、膀胱癌、表皮癌、乳腺癌和前列腺癌。
相信本发明也提供通过给予需要此治疗的哺乳动物(如人)本文所述的有效量的三环类化合物抑制或治疗良性和恶性增生性疾病的方法，在这些增生性疾病中，Ras蛋白因其它基因的致癌突变而被异常激活，即所述Ras基因本身不被突变所激活为致癌形式。例如，通过本文所述的三环类化合物可以抑制或治疗良性增生性紊乱神经纤维瘤病或其中Ras因酪氨酸激酶癌基因(如neu、src、abl、lck和fyn)的突变或过度表达而被激活的肿瘤。
用于本发明方法中的三环类化合物可以抑制或治疗细胞的异常生长。不希望受到理论的束缚，相信这些化合物可以通过阻断G-蛋白异戊二烯化而抑制G-蛋白(如ras p21)的功能而起作用，从而使它们用于治疗增生性疾病如肿瘤生长和癌症。不希望受到理论的束缚，相信这些化合物可以抑制ras法呢基蛋白转移酶，从而使它们显示对ras转化的细胞的抗增生活性。
本发明详述
除非另外指明，用于本文的下列术语按如下定义：
Ac-代表乙酰基；
MH+-代表质谱中分子的分子离子加氢；
M+-代表质谱中分子的分子离子；
苯并三唑-1-基氧基表示
1-甲基-三唑-5-基硫代表示
酰基-代表-C(O)-烷基、-C(O)-链烯基、-C(O)-链炔基、-C(O)-环烷基、-C(O)-环烯基或-C(O)-环炔基；
链烯基-代表具有至少一个碳-碳双键且含有2-12个碳原子(优选2-6个碳原子，最优选3-6个碳原子)的直链和支链碳链；
链炔基-代表具有至少一个碳-碳三键且含有2-12个碳原子(优选2-6个碳原子)的直链和支链碳链；
烷基-(包括烷氧基、芳烷基和杂芳烷基的烷基部分)-代表含有1-20个碳原子，优选1-6个碳原子直链和支链碳链；
芳烷基-代表连接于如上定义的烷基(优选的)烷基为-CH2-)的如下定义的芳基，如苄基；
芳基(包括芳烷基、芳氧基和芳烷氧基的芳基部分)-代表含有6-15个碳原子并具有至少一个芳环(如芳基是苯环)的碳环基，所述碳环基上的所有可取代的碳原子都可看作为可能的连接点，所述碳环基任选由下列的一个或多个基团取代(如1-3次)：卤代、烷基、羟基、烷氧基、苯氧基、-CF3、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、-COOR10或-NO2；
环烷基-代表3-20个碳原子(优选3-7个碳原子)的分支或未分支的饱和碳环；
Et-代表乙基；
卤代-代表氟、氯、溴和碘；
杂芳基-代表具有至少一个选自氧、硫或氮的杂原子的环基，可任选由R3和R4取代，所述杂原子间断碳环结构且具有足够的离域pi电子以提供芳族特性，所述芳族杂环基(优选含有2-14个碳原子)，例如，(1)噻吩基(如2-或3-噻吩基)，(2)咪唑基(如(2-、4-或5-)咪唑基)，(3)三唑基(如3-或5-[1,2,4-三唑基]，(4)四唑基，(5)取代的四唑基，如其中R27代表：(a)芳基(如苯基)，(b)烷基(如甲基)，或(c)芳基烷基(芳烷基)(如苄基)，(6)呋喃基(如2-或3-呋喃基)，(7)噻唑基(如2-、4-或5-噻唑基)，(8)嘧啶基(如2-、4-或5-嘧啶基)，(9)吡嗪基(如2-吡嗪基)，(10)哒嗪基(如3-或4-哒嗪基)，(11)三嗪基(如2-、4-或6-[1,3,5-三嗪基]),(12)3-或5-[1,2,4-噻二唑基],(13)2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并呋喃基，(14)苯并噁唑基(如2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并噁唑基)，(15)吲哚基(苯并吡咯基)(如2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基)，(16)吡唑基(如3-、4-或5-吡唑基)，(17)噁唑基(如3-、4-或5-噁唑基)，(18)2-、3-或4-吡啶基或吡啶基N-氧化物(任选由R3和R4取代)，其中吡啶基N-氧化物可以表示为：或(19)苯并异噁唑基，(20)吡咯基，(21)苯并咪唑基，(22)异喹啉基，(23)喹啉基，(24)吡啶并吡嗪基，(25)萘啶基，(26)吡喃基，(27)苯并噻吩基，(28)异苯并呋喃基，(29)异噻唑基，(30)异噁唑基和(31)N-取代的吡咯基其中R30选自：烷基(如乙基)、芳烷基(如-CH2C6H5)、CH2C(O)NH2、-SO2CH3或-CH2C(O)OR31，其中R31为H或烷基(C(CH3)3)；
杂芳基烷基(杂芳烷基)-代表连接于如上定义的烷基(优选的烷基为-CH2-)的如上定义的杂芳基，如-CH2-(4-或5-)咪唑基；
杂环烷基-代表含有3-15个碳原子、优选4-6个碳原子的饱和(支链或无支链)碳环，所述碳环可被1-3个选自-O-、-S-、-NR10-(其中R10如上所定义)的杂基团间隔；适当的杂环烷基包括：(1)四氢呋喃基(如2-或3-四氢呋喃基)，(2)四氢噻吩基，如(2-或3-四氢噻吩基)，(3)哌啶基(如2-、3-或4-哌啶基)，(4)吡咯烷基(如2-或3-吡咯烷基)，(5)2-或3-哌嗪基，(6)2-或4-二噁烷基，(7)四氢吡喃基和(8)取代的四氢吡喃基，其中所述取代基选自羟基和羟基烷基(如羟甲基)，例如，和
Ph-代表苯基。
本文涉及的下列溶剂和试剂用缩写表示为：四氢呋喃(THF)；异丙醇(iPrOH)；乙醇(EtOH)；甲醇(MeOH)；乙酸(HOAc或AcOH)；乙酸乙酯(EtOAc)；N,N-二甲基甲酰胺(DMF)；三氟乙酸(TFA)；三氟乙酐(TFAA)；1-羟基苯并三唑(HOBT)；1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(DEC)；二异丁基氢化铝(DIBAL)；4-甲基吗啉(NMM)。
所述取代基R1、R2、R3及R4的位置根据下面的编号环结构进行参照：
本领域的专业人员可以理解在C-11键的S和R立体化学构型为：式(1.0)化合物包括其中下部哌啶基为4-或3-哌啶基的化合物，即或
式(1.0)化合物包括其中R2和R4为H，而R1和R3为卤代(优选独立选自溴或氯)的化合物。例如，R1为溴而R3为氯。这些化合物包括其中R1在3-位而R3在8-位(如3-Br和8-Cl)的化合物。式(1.0)化合物也包括其中R2是H，而R1、R3和R4为卤代(优选独立选自溴或氯)的化合物。
优选式(1.0)化合物由式1.1化合物表示：其中所有的取代基如式1.0所定义。
优选R2为H，而R1、R3和R4为卤代；a为N而b、c和d为碳；A和B各自代表H2；任选C5和C6之间的键不存在；X为CH；而R5、R6、R7和R8为H。更优选R1、R3和R4独立选自溴或氯。最优选R1为溴，而R3和R4独立选自氯和溴。
更优选式1.0化合物由式1.2和式1.3化合物代表：而最优选式1.0化合物由式1.4和1.5化合物代表：其中R1、R3和R4独立选自卤代，优选溴或氯；而A、B、X和W如式1.0化合物所定义。更优选A和B各自代表H2；任选C5和C6之间的键不存在；X为CH。最优选R1为溴，而R3和R4独立选自溴或氯，还优选R3为氯而R4为溴；A和B各自代表H2；任选C5和C6之间的键不存在；X为CH；而R5、R6、R7和R8为H。
W的-C(O)R12取代基的例子包括其中R12选自下列的基团：和
对于取代基W而言，亚胺酸酯的例子包括其中R13选自下列的基团：(1)CN；(2)H；(3)-SO2R10R15；其中R10和R15选自H和烷基(如甲基)；(4)-C(O)NR10R15；其中R10和R15选自H和烷基(如甲基)；(5)-SO2-烷基和(6)-C(O)-芳基。亚胺酸酯的例子还包括其中R14为芳基(如苯基)的基团。
例如，对于取代基W的亚胺酸酯的例子包括其中R13选自下列的基团：CN、C(O)NH2、H、-SO2NH2、-SO2NHCH3、-SO2N(CH3)2、-C(O)NHCH3、-SO2NH3和-C(O)C6H5。亚胺酸酯的例子还包括其中R14为苯基，而R13选自下列的基团：CN、C(O)NH2、H、-SO2NH2、-SO2NHCH3、-SO2N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-SO2NH3和-C(O)C6H5。
对于取代基W的亚胺酰胺基的例子包括其中R13选自下列的基团：(1)CN；(2)H；(3)-OR10；(4)-C(O)NR10C(O)NR10R15，其中R10和R15为H；(5)-SO2NR10R15，其中R10和R15独立选自H和烷基(如甲基)；(6)-C(O)NR10R15，其中R10和R15独立选自H和烷基(如甲基)；(7)-SO2-烷基；和(8)-C(O)-芳基。亚胺酰胺基的例子还包括其中R10和R15选自H和烷基(如甲基)的基团；及其中R16选自H和杂芳烷基(如3-吡啶基甲基)的基团。
例如，对于取代基W的亚胺酰胺基包括其中R13选自下列的基团：CN、H、-OCH3、-OH、-C(O)NHC(O)NH2、-SO2NH2、-SO2NHCH3、-SO2N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-SO2CH3和-C(O)C6H5。亚胺酰胺基的例子还包括其中R10和R16选自下H和(即3-吡啶基甲基)的基团。
亚胺酰胺基取代基的例子还包括这样一些基团，其中：R10和R16选自下H和3-吡啶基甲基；而R13选自：CN、H、-OCH3、-OH、-C(O)NHC(O)NH2、-SO2NH2、-SO2NHCH3、-SO2N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-SO2NH3和-C(O)C6H5。
此外，亚胺酰胺基取代基的例子还包括这样一些基团，其中：(1)R13和R10为H，而R13为3-吡啶基甲基；及(2)R10和R16为H；而R13选自：CN、H、-OCH3、-OH、-C(O)NHC(O)NH2、-SO2NH2及-C(O)NHCH3、-SO2NH3和-C(O)C6H5。
对于取代基W,1-氨基-2-硝基乙烯衍生物的例子包括其中R10为烷基(如甲基)的基团。
优选当X为CH或N，而R1、R3和R4为卤代的式1.2A和1.3A化合物：
本发明的优选化合物由下式的化合物代表：其中R1、R3和R4为卤代，而其余的取代基如上所定义，更优选式1.5A化合物。
其中W为亚胺酸酯的代表性式1.0化合物包括：和其中W为亚胺酸酯的代表性式1.0化合物还包括：和其中W为亚胺酰胺基的代表性式1.0化合物包括：和其中W为亚胺酰胺基的代表性式1.0化合物还包括：其中W为氰基的代表性式1.0化合物包括：其中W为氰基的代表性式1.0化合物还包括：和其中W为1-氨基-2-硝基乙烯衍生物的代表性式1.0化合物包括：和其中W为1-氨基-2-硝基乙烯衍生物的代表性式1.0化合物还包括：其中W为-C(O)R12基团的代表性式1.0化合物包括：式1.0化合物还包括下式的化合物：
本发明的化合物也包括1-N-氧化物，即，例如下式的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：其中代表所述化合物的剩余部分。
于25℃，在甲醇或乙醇中测定所述化合物((+)-或(-)-)的旋光性。
本发明包括无定形态或结晶态的上述化合物。
画入环体系的线表明已指定的键可以连接到任何可取代的环碳原子上。
本发明的一些化合物可以以不同的异构体形式(如对映体或非对映体)包括阻转异构体(即其中7-元环为一固定构象的化合物，如此则由于10-溴取代基的存在使11-碳原子定位于稠合苯环平面的上方或下方)存在。本发明设想了所有此类纯形式和混合物的异构体，包括外消旋混合物。也包括烯醇形式。
某些三环化合物应具有酸性，例如具有羧基或酚羟基的那些三环化合物。这些化合物可以形成药学上可接受的盐。此类盐的实例包括钠盐、钾盐、钙盐、铝盐、金盐和银盐。也考虑了与药学上可接受的胺如氨、烷基胺、羟基烷基胺、N-甲基葡糖胺等形成的盐。
某些碱性的三环化合物也可形成药学上可接受的盐，如酸加成盐。例如，吡啶-氮原子可与强酸形成盐，而具有碱性取代基如氨基的化合物也可与弱酸形成盐。用于形成盐的适合酸的例子为盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸和其它本领域熟知的无机酸和羧酸。通过方便的方法使游离碱的形式与足量的所需酸接触产生盐来制备所述盐。通过用适当的稀碱水溶液，如稀氢氧化钠、碳酸钾、氨和碳酸氢钠水溶液处理所述盐可以再生成所述游离碱形式。这些游离碱形式在某些物理性质，如在极性溶剂中的溶解度方面与它们各自的盐形式有些不同，但对于本发明的目的而言，所述酸和碱的盐与它们各自的游离碱形式却是等同的。
所有这些酸和碱的盐都在本发明药学上可接受的盐的范围内，且对本发明的目的而言，认为所有的酸和碱的盐与相应化合物的游离碱形式是等同的。
根据WO95/10516(1995年4月20日公开)、申请序列号08/410187号(1995年3月24日递交)、申请序列号08/577951号(1995年12月22日递交)(现已放弃)、申请序列号08/615760号(1996年3月13日递交)(现已放弃)、WO97/23478(1997年7月3日公开)(该专利公开申请序列号08/577951和08/615760号的主题)、申请序列号08/713297号(1996年9月13日递交)及申请序列号08/877453号(1997年6月17日递交)(每一公开结合在此作为参考)中所述方法以及根据以下描述的方法可以制备本发明化合物。
本发明化合物可以通过如下制备，即使下式化合物：其中所有的取代基如式1.0所定义，在DMF中与适当保护的哌啶基乙酸(如1-N-叔-丁氧基-羰基哌啶基乙酸)和DEC/HOBT/NMM于25℃反应约18小时产生下式化合物：然后在二噁烷和甲醇中，使式44.0化合物与TFA或10％硫酸反应，接着与氢氧化钠反应产生下式化合物：
例如，可以通过使式43.0化合物与如上所述的1-N-叔-丁氧基-羰基哌啶基-4-乙酸反应来制备下式化合物：例如，式46.0化合物包括：和这些化合物的制备在以下的制备实施例3、4、5、6、7、8、9、10、11、12和13中分别予以描述。
本发明化合物可以通过下述制备，即使下式化合物：在DMF中与适当保护的哌啶基乙酸(如1-N-叔-丁氧基-羰基哌啶基乙酸)和DEC/HOBT/NMM于约25℃反应约18小时产生下式化合物：然后在二噁烷和甲醇中，使式44.1化合物与TFA或10％硫酸反应，接着与氢氧化钠反应产生式46.1化合物：
在偶合剂如在二甲基甲酰胺中的DEC和HOBT存在下，使式46.1化合物与适当的羧酸反应，可以制备由式1.7代表的本发明的酰胺化合物：或者使式46.1化合物在如吡啶的溶剂中与酰氯或酸酐反应。
具有1-N-O基团的化合物：可通过用间-氯代过苯甲酸氧化下式的相应的吡啶基化合物来制备该反应在适合的有机溶剂如二氯甲烷(通常为无水的)中、在适宜的温度下进行，以产生在所述三环体系中环Ⅰ的1位具有N-O取代基的本发明化合物。
一般来说，在加入间-氯代过苯甲酸之前，先将原料三环反应物的有机溶剂溶液冷却至约0℃。然后使该反应物在反应期间温热至室温。通过标准的分离方法可以回收所需产物。例如，反应混合物可以用适合的碱如饱和碳酸氢钠水溶液或氢氧化钠(如1N氢氧化钠)洗涤，然后经无水硫酸镁干燥。真空浓缩含有产物的溶液。通过标准方法如硅胶层析(如快速柱层析)可以纯化产物。
或者，通过用间-氯代过苯甲酸和其中Q为保护基团例如BOC，进行以上的氧化过程，由中间体：制备N-O化合物。氧化后，通过本领域熟知的技术除去保护基团。然后使N-O中间体进一步反应产生本发明化合物。
式43.0化合物包括式43.1的化合物：通过本领域熟知的方法例如WO95/10516、U.S.5151423公开的方法和以下叙述的那些方法，可以制备式43.1化合物。以上中间体化合物也可以通过包含下列步骤的方法制备：(a)在强碱存在下，使下式的酰胺：其中R11a为溴，R5a为氢及R6a为C1-C6烷基、芳基或杂芳基；R5a为C1-C6烷基、芳基或杂芳基及R6a为氢；R5a和R6a独立选自C1-C6烷基和芳基；或R5a和R6a与它们所连接的氮原子一起形成含有4-6个碳原子或含有3-5个碳原子和一个选自-O-和-NR9a-(其中R9a为氢、C1-C6烷基或苯基)的杂部分的环，与下式的化合物反应其中R1a、R2a、R3a和R4a独立选自氢和卤代而R7a为氯或溴，得到下式化合物 (b)使步骤(a)的化合物与
(ⅰ)POCl3反应，获得下式的氰基化合物；或与(ⅱ)DIBALH反应，获得下式的醛化合物(c)使所述氰基化合物或醛与下式的哌啶衍生物反应其中L为选自氯和溴的离去基团，分别获得下式的酮或醇：或(d)(ⅰ)用CF3SO3H使该酮环化获得式13.0a化合物，其中虚线代表双键；或(d)(ⅱ)用多磷酸使该醇环化获得中间体化合物，其中虚线代表单键。
WO95/10516、U.S.5151423公开和以下叙述中制备所述中间体化合物的方法使用了三环酮中间体。下式的这些中间体其中R11b、R1a、R2a、R3a和R4a独立选自氢和卤代，可通过以下方法制备，该方法包括：(a)使下式的化合物
(ⅰ)在钯催化剂和一氧化碳存在下，与式NHR5aR6a的胺(其中R5a和R6a如上述方法中所定义)反应，得到下式的酰胺：；或
(ⅱ)在钯催化剂和一氧化碳存在下，与式R10aOH的醇(其中R10a为C1-C6低级烷基或C3-C6环烷基)反应，得到下式的酯：随后使该酯与式NHR5aR6a的胺反应得到所述酰胺；(b)在强碱存在下，使所述酰胺与下式的碘取代的苄基化合物反应其中R1a、R2a、R3a、R4a和R7a如上所定义，获得下式化合物；和
(c)用式R8aMgL试剂(其中R8a为C1-C8烷基、芳基或杂芳基，L为溴或氯)使步骤(b)的化合物环化，前提是在环化前，其中R5a或R6a为氢的化合物与适宜的N-保护基反应。
式43.2化合物的(+)-异构体可采用包括酶催化的酯基转移的方法用高对映体选择性(enantioselectivity)来制备。优选使式43.3的外消旋化合物与酶如Toyobo LIP-300和酰化剂如异丁酸三氟乙酯反应；然后通过本领域熟知的技术从(-)-对映体的胺分离生成的(+)-对映体的酰胺，接着，例如通过与酸如硫酸一起回流水解所述(+)-酰胺，再通过本领域熟知的技术用DIBAL还原生成的化合物获得相应的旋光性式43.2的富集的(+)-异构体。或者，首先使式43.3的外消旋化合物还原为相应的式43.2的外消旋化合物，然后用如上所述的酶(Toyobo LIP-300)和酰化剂处理得到(+)-酰胺，该酰胺经水解后得到旋光性的富集的(+)-异构体。
本领域技术人员将能理解，通过上述的酶方法可以制备具有其它的R1、R2、R3和R4取代基的式1.0化合物。
为制备其中W为亚胺酸酯的式1.0的化合物，可以使式45.0或46.0化合物在适宜的温度(如约80℃)下、在适合的溶剂(如异丙醇)存在下与反应合适时间(如约24小时)。
例如，可以使其中X为N的式46.0化合物在异丙醇中与于80℃反应24小时，产生其中R13为CN而R14为苯基的式1.0化合物。类似地，与(M.Haake和B.Schummelfeder.Synthesis，第753-758页，1991年9月)反应可以产生其中R13为-SO2NH2而R14为苯基的式1.0化合物。
根据Zweifel等(Synthesis，第150页(1980))公开的方法，通过使式45.0或式46.0化合物(例如，其中X为CH)与CNOC6H5在二异丙基乙胺中反应，可以产生其中R13为H而R14为苯基的式1.0化合物。
在适合的溶剂(如二氯甲烷)中，通过使式1.0化合物(其中W为亚胺酸酯)与强碱如氢化钠反应，可以制备其中W为-CN的式1.0化合物。例如，在二氯甲烷中，可以使式1.0化合物(其中W为亚胺酸酯，R13为H,R14为苯基，X为CH)与氢化钠反应，产生其中W为-CN的式1.0化合物。
在适宜的温度下(如约25℃)，在适当的溶剂(如异丙醇)中，通过使式1.0化合物(其中W为亚胺酸酯)与浓氢氧化铵反应适当的时间(如约24小时)，可以产生其中W为亚胺酰胺基的式1.0化合物。例如，在异丙醇中，于25℃使式1.0的亚胺酸酯化合物(其中R13为-CN,R14为苯基和X为N)与浓氢氧化铵反应24小时，可以产生相应的亚胺酰胺基(其中R13为-CN,R10和R16均为H)。
在合适的温度(如约87℃)下，在适当的压力容器中，通过使式1.0化合物(其中W为亚胺酸酯基团)与浓氢氧化铵、氯化铵和水反应，也可以产生其中W为亚胺酰胺基的式1.0化合物的盐酸盐。例如，在约87℃，在适当的压力容器中，使式1.0的亚胺酸酯(其中X为CH,R13为H,R14为苯基)与浓氢氧化铵、氯化铵和水反应，可以产生相应的亚胺酰胺基盐酸盐(其中R13为-CN,R10和R16均为H)。
在合适的温度(如约70℃)下，在适当的溶剂(如THF)中，通过使式1.0化合物(其中W为亚胺酸酯基团)与胺(如NHR10R16)反应，可以产生其中W为亚胺酰胺基的式1.0的化合物。例如，在约70℃下、THF中，可以使式1.0化合物(其中X为CH,R13为H和R14为苯基)与(3-氨基甲基吡啶)反应，产生相应的胍(其中R13为H,R10为H和R16为3-甲基吡啶基)。
其中W为亚胺酰胺基的式1.0的化合物也可以通过使式1.0的亚胺酸酯与硫酰胺结合来制备。例如，可以使式1.0的亚胺酸酯(其中R13为-CN,R14为苯基，X为N)与硫酰胺结合产生相应的胍(其中R17为-SO2NH2,R18和R19均为H)。
其中W为亚胺酰胺基的式1.0的化合物也可以通过使式1.0的氰化物(如X为N)与硫酰胺结合产生相应的亚胺酰胺基(其中R13为-SO2NH2,R10和R16均为H)来制备。
在适宜的温度(如0℃至约25℃)下，在含有适当碱(如三乙胺)的适当溶剂(如乙腈、苯或甲苯)中，通过使式1.0的亚胺酸酯(其中R13为H)与氨磺酰氯反应，也可以制备式1.0化合物(其中W为亚胺酸酯基团和R13为N-甲基氨磺酰基)。例如，可以使式1.0的亚胺酸酯(其中R13为H,R14为苯基和X为N)与N-甲基氨磺酰氯或二甲基氨磺酰氯反应产生相应的亚胺酸酯(其中R13分别为-SO2NHCH3或-SO2N(CH3)2，而R14为苯基)。
通过使式1.0的亚胺酸酯与羟胺盐酸盐和氢氧化钠水溶液，或甲氧基胺和氢氧化钠水溶液反应产生亚胺酰胺基(其中R13为分别为-OH或-OCH3，而R10和R16均为H)也可以制备其中W为亚胺酰胺基的式1.0的化合物。例如，所用的式1.0的亚胺酸酯可以是其中X可为N,R13可为H及R14可为苯基的式1.0的亚胺酸酯。
在适宜的温度(如约25℃)下，在适当的溶剂(如无水二氯甲烷)中，通过使式1.0的亚胺酸酯(其中R13为H)分别与三甲基硅烷基异氰酸酯或异氰酸甲酯反应适当的时间(约48小时)也可以制备式1.0化合物(其中W为亚胺酸酯基团和R13为-C(O)NH2或-C(O)NHCH3)。例如，所用的式1.0的亚胺酸酯可以是其中X可为N,R13可为H及R14可为苯基的式1.0的亚胺酸酯。
其中W为亚胺酰胺基的式1.0的化合物也可以通过使式1.0的亚胺酸酯与脲结合产生亚胺酰胺基(其中R13为-C(O)NH2,R10和R16均为H)来制备。例如，所用的式1.0的亚胺酸酯可以是其中X可为N,R13可为H及R14可为苯基的式1.0的亚胺酸酯。
根据在加拿大专利1178289号(1984)中所述方法，通过使式45.0或46.0化合物与1-甲硫基-1-甲氨基-2-硝基乙烯，N(C2H5)3和CuCl反应，可以制备其中W为1-氨基-2-硝基乙烯的式1.0的化合物。
于回流下，通过使下式的化合物与甲基碘在甲醇中反应，然后将生成的产物与硝基甲烷一起回流也可以制备其中W为-氨基-2-硝基乙烯的式1.0化合物(见Indian J.Chem.,15B,297(1977))。
通过使式45.0或46.0化合物与适宜的羧酸，HOOCR12及HOBT/DEC/DMF反应可以制备其中W为-C(O)R12的式1.0的化合物。
用下面的实施例来示范说明本发明化合物，这些不应构成对本公开范围的限制。制备实施例1步骤A.：
于-20℃，将10g(60.5mmol)4-吡啶基乙酸乙酯和120ml无水二氯甲烷乙酸乙酯混合，加入10.45g(60.5mmol)MCPBA，并于-20℃搅拌1小时，再于25℃搅拌67小时。再加入3.48g(20.2mmol)MCPBA，并于25℃搅拌24小时。用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠(水溶液)洗涤然后用水洗涤。经硫酸镁干燥，真空浓缩为残留物，经层析(硅胶，2％-5.5％(10％氢氧化铵在甲醇中)/二氯甲烷)得到8.12g产物化合物。质谱：MH+=182.15
步骤B
将3.5g(19.3mmol)步骤A的产物、17.5ml乙醇和96.6ml 10％氢氧化钠(水溶液)混合，于67℃将该混合物加热2小时。加入2N盐酸(水溶液)调至pH=2.37，真空浓缩为残留物。加入200ml干燥乙醇，通过celite过滤，并用干燥乙醇(2×50ml)洗涤滤饼。真空浓缩合并的滤液得到2.43g目的化合物。制备实施例2通过PCT国际公开号WO95/10516中所述方法制备目的化合物。制备实施例3
步骤A：
将14.95g(39mmol)8-氯代-11-(1-乙氧基-羰基-4-哌啶基)-11H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶和150ml二氯甲烷混合，然后加入13.07g(42.9mmol)的(nBu)4NNO3，并将该混合物冷却至0℃。用1.5小时缓慢加入(滴加)在20ml二氯甲烷中的6.09ml(42.9mmol)TFAA溶液。将该混合物保持于0℃过夜，然后用饱和碳酸氢钠(水溶液)、水和盐水连续洗涤。用硫酸钠干燥有机溶液，真空浓缩为残留物，并层析该残留物(硅胶，EtOAc/己烷梯度)分别得到4.32g和1.90g的两种产物化合物3A(ⅰ)和3A(ⅱ)。
3A(ⅰ)化合物质谱：MH+=428.2；
3A(ⅱ)化合物质谱：MH+=428.3；
步骤B：
将得自步骤A的22.0g(51.4mmol)产物3A(ⅰ)、150ml 85％乙醇(水溶液)、25.85g(0.463mol)铁粉和2.42g(21.8mmol)氯化钙混合，于回流下加热过夜。加入12.4g(0.222mol)铁粉和1.2g(10.8mmol)氯化钙并于回流下加热2小时。再加入12.4g(0.222mol)铁粉和1.2g(10.8mmol)氯化钙，并于回流下再加热2小时。通过celite过滤热的混合物，用50ml热乙醇洗涤celite，真空浓缩为残留物。加入100ml无水乙醇，浓缩为残留物并层析该残留物(硅胶，甲醇/己烷梯度)得到16.47g的产物化合物。
步骤C：
将16.47g(41.4mmol)得自步骤B的产物和150ml 48％HBr(水溶液)混合并冷却至-3℃。缓慢加入(滴加)18ml溴，然后缓慢加入(滴加)在85ml水中的8.55g(0.124mol)亚硝酸钠。于-3℃至0℃搅拌45分钟，然后通过加入50％氢氧化钠(水溶液)调至pH=10。用乙酸乙酯提取，用盐水洗涤提取物并用硫酸钠干燥提取物。浓缩为残留物并层析该残留物(硅胶，乙酸乙酯/己烷梯度)分别得到10.6g和3.28g的化合物3C(ⅰ)和3C(ⅱ)两种产物。
3C(ⅰ)化合物质谱：MH+=461.2；
3C(ⅱ)化合物质谱：MH+=539；
步骤D：
通过溶解于浓盐酸中使步骤C的产物3C(ⅰ)水解，加热至约100℃16小时。冷却该混合物，用1M氢氧化钠(水溶液)中和。用二氯甲烷提取，用硫酸镁干燥提取物，过滤和真空浓缩至目的化合物。
质谱：MH+=466.9.
步骤E
将使得自步骤D的1.160g(2.98mmol)目的化合物溶解于20mlDMF中，于室温下搅拌，加入0.3914g(3.87mmol)4-甲基-吗啉、0.7418g(3.87mmol)、DEC0.5229g(3.87mmol)HOBT及0.8795g(3.87mmol)1-N-t-丁氧基羰基-哌啶基-4-乙酸。于室温下将该混合物搅拌2天，然后真空浓缩为残留物并使残留物在二氯甲烷和水中分配。用饱和碳酸氢钠(水溶液)、10％磷酸二氢钠和盐水连续洗涤有机相。经硫酸镁干燥有机相，过滤并真空浓缩为残留物。层析该残留物(硅胶，2％甲醇/二氯甲烷+氨)得到1.72g产物。m.p.=94.0-94.5℃，质谱：MH+=616.3，
元素分析：计算值-C,60.54；H,6.06；N,6.83
实测值-C,59.93；H,6.62；N,7.45。
步骤F：
将得自步骤E的1.67g(2.7mmol产物和20ml二氯甲烷混合，于0℃搅拌，加入20mlTFA，搅拌该混合物2小时，然后用1N氢氧化钠(水溶液)碱化该混合物。用二氯甲烷提取，经硫酸镁干燥有机相，过滤并真空浓缩得到1.16g产物。m.p.=140.2-140.8℃，质谱：MH+=516.2。制备实施例4
步骤A：
于-5℃，将25.86g(55.9mmol)4-(8-氯代-3-溴代-5,6-二氢-11H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶-1-甲酸乙酯和250ml浓硫酸混合，然后加入4.8g(56.4mmol)的硝酸钠并搅拌2小时。将该混合物倾入600g冰中，用浓氢氧化铵(水溶液)碱化。过滤该混合物，用300ml水洗涤，然后用500ml二氯甲烷提取。用200ml水洗涤提取物，用硫酸镁干燥，然后过滤并真空浓缩为残留物。使该残留物层析(硅胶，10％EtOAc/二氯甲烷)分别得到24.4g(产率86％)的产物。m.p.=165-167℃，质谱：MH+=506(CI)，元素分析：计算值-C,52.13；H,4.17；N,8.29
实测值-C,52.18；H,4.51；N,8.16。
步骤B：
于20℃，将20g(40.5mmol)步骤A的产物和200ml浓硫酸混合，然后冷却该混合物至0℃。将7.12g(24.89mmol)的1,3-二溴代-5,5-二甲基-乙丙酰脲加入该混合物中，并于20℃搅拌3小时。冷却至0℃，再加入1.0g(3.5mmol)二溴代乙丙酰脲并于20℃搅拌2小时。将该混合物倾入400g冰中，于0℃用浓氢氧化铵(水溶液)碱化，过滤收集生成的固体。用300ml水洗涤该固体，在200ml丙酮中制成淤浆，过滤提供19.79g(产率85.6％)的产物。m.p.=236-237℃，质谱：MH+=5 84(CI)，元素分析：计算值-C,45.11；H,3.44；N,7.17
实测值-C,44.95；H,3.57；N,7.16。
步骤C：
于50℃，将25g(447mmol)铁屑、10g(90mmol)氯化钙和在700ml90:10 EtOH/水中的步骤B的20g(34.19mmol)产物混合。于回流下加热该混合物过夜，通过celite过滤混合物，用2×200ml热乙醇洗涤滤饼。混合滤液和洗涤液，真空浓缩为残留物。用600ml二氯甲烷萃取残留物，用300ml水洗涤，经硫酸镁干燥。过滤并真空浓缩为残留物，然后层析(硅胶，30％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到11.4g(产率60％)的产物。m.p.=211-212℃，
质谱：MH+=554(CI)，元素分析：计算值-C,47.55；H,3.99；N,7.56
实测值-C,47.45；H,4.31；N,7.49。
步骤D：
于-10℃，将20g(35.9mmol)步骤C的产物缓慢加入(分次)在120ml浓盐酸(水溶液)中的8g(116mmol)亚硝酸钠溶液中。于0℃搅拌生成的混合物2小时，然后于0℃用1小时缓慢加入(滴加)150ml(1.44mol)50％H3PO2。于0℃搅拌3小时，然后倾入600g冰中，用浓氢氧化铵(水溶液)碱化。用2×300ml二氯甲烷提取，用硫酸镁干燥提取物，然后过滤并真空浓缩为残留物。将该残留物层析(硅胶，25％EtOAc/己烷)得到13.67g(产率70％)的产物。m.p.=163-165℃，质谱：MH+=539(CI)，元素分析：计算值-C,48.97；H,4.05；N,5.22
实测值-C,48.86；H,3.91；N,5.18。
步骤E：
将6.8g(12.59mmol)步骤D的产物和100ml浓盐酸(水溶液)混合，于85℃搅拌过夜。冷却该混合物，将其倾入300g冰中，用浓氢氧化铵(水溶液)碱化，用2×300ml二氯甲烷提取，用硫酸镁干燥提取物。过滤，真空浓缩为残留物。然后层析(硅胶，10％甲醇/乙酸乙酯+2％氢氧化铵(水溶液))得到5.4g(产率92％)的目的化合物。m.p.=172-174℃，质谱：MH+=467(FAB)，元素分析：计算值-C,48.69；H,3.65；N,5.97
实测值-C,48.83；H,3.80；N,5.97。
步骤F：
按照与以下制备实施例5步骤C基本相同的方法，使上面步骤E的目的化合物与1-N-叔-丁氧基羰基哌啶基-4-乙酸反应产生下式化合物
步骤G：
按照与以下制备实施例5步骤D基本相同的方法，使得自上面步骤F的目的化合物去保护，产生制备实施例4的目的化合物。制备实施例5
步骤A：
通过与制备实施例3步骤D所述基本相同的方法，使2.42g 4-(8-氯代-3-溴代-5,6-二氢-11H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶-1-甲酸乙酯水解，得到1.39g(产率69％)的产物。
步骤B：
将1g(2.48mmol)步骤A的产物和25ml干燥甲苯混合，加入在甲苯中的2.5ml的1M DIBAL，并在回流下加热该混合物。半小时后，再加入在甲苯中的2.5ml的1M DIBAL，并在回流下加热1小时(通过TLC监测反应，用50％甲醇/二氯甲烷+氢氧化铵(水溶液)展开)。冷却该混合物至室温，加入50ml 1N盐酸(水溶液)并搅拌5分钟。加入100ml 1N氢氧化钠(水溶液)，然后用乙酸乙酯(3×150ml)提取。用硫酸镁干燥提取物，过滤并真空浓缩得到1.1g的目的化合物。
步骤C：
将0.501g(1.28mmol)的步骤B的化合物和20ml干燥DMF混合，然后加入0.405g(1.664mmol)1-N-叔-丁氧基羰基哌啶基-4-乙酸、0.319g(1.664mmol)DEC、0.225g(1.664mmol)HOBT和0.168g(1.664mmol)4-甲基吗啉，于室温下搅拌该混合物过夜。真空浓缩该混合物至残留物，然后使残留物在150ml二氯甲烷和150ml饱和碳酸氢钠(水溶液)中分配。用另外的150ml二氯甲烷提取水相。用硫酸镁干燥，真空浓缩为残留物。将残留物层析(硅胶，500ml己烷，1L1％甲醇/二氯甲烷+0.1％氢氧化铵(水溶液)，然后1L2％甲醇/二氯甲烷+0.1％氢氧化铵(水溶液))得到0.575g的产物。m.p.=115℃-125℃，质谱：MH+=616。
步骤D：
将0.555g(0.9mmol)步骤C的产物和15ml二氯甲烷混合，冷却该化合物至0℃。加入15ml TFA，并于0℃搅拌2小时。于40-45℃真空浓缩为残留物，然后使残留物在150ml二氯甲烷和100ml饱和碳酸氢钠(水溶液)中分配。用100ml二氯甲烷提取水层，合并提取物，用硫酸镁干燥，真空浓缩得到0.47g的所述产物。m.p.=140℃-150℃，质谱：MH+=516。
制备实施例6
[外消旋的及(+)-和(-)-异构体]
步骤A：
将16.6g(0.03mol)制备实施例4步骤D的产物与乙腈和水的3∶1溶液(212.65ml乙腈和70.8ml水)混合，于室温下搅拌生成的淤浆过夜。加入32.833g(0.153mol)NaIO4，然后加入0.31g(2.30mmol)RuO2，并于室温下搅拌得到1.39g(产率69％)的所述产物(RuO的加入伴随放热反应，温度由20℃升至30℃)。搅拌该混合物1.3小时(约30分钟后温度回复至25℃)，然后过滤除去固体，用二氯甲烷洗涤该固体。真空浓缩滤液至残留物，将该残留物溶于二氯甲烷中。过滤除去不溶固体，用二氯甲烷洗涤该固体。用水洗涤滤液，浓缩至约200ml体积，用漂白剂(bleach)然后用水洗涤。用6N盐酸(水溶液)提取。冷却含水提取液至0℃，缓慢加入50％氢氧化钠(水溶液)以调节pH=4，同时保持温度＜30℃。用二氯甲烷提取，经硫酸镁干燥并真空浓缩为残留物。使残留物在20ml乙醇中形成淤浆并冷却至0℃。过滤收集生成的固体，真空干燥该固体得到7.95g产物。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.7(s,1H),7.85(m,6H),7.5(d,2H),3.45(m,2H),3.15(m,2H).
步骤B：
将21.58g(53.75mmol)步骤A的产物和500ml乙醇和甲苯的1∶1无水混合物混合，加入1.43g(37.8mmol)硼氢化钠，于回流下加热该混合物10分钟。冷却该混合物至0℃，加入100ml水，然后用1M盐酸(水溶液)调节pH≈4-5，同时保持该温度＜10℃。加入250ml乙酸乙酯并分离各层。用盐水(3×50ml)洗涤有机层，然后用硫酸钠干燥。真空浓缩为残留物(24.01g)，使残留物经层析(硅胶，30％己烷/二氯甲烷)得到所述产物。通过再层析纯化不纯的部分。共获得18.57g所述产物。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):8.5(s,1H),7.9(s,1H),7.5(双重双峰，2H),6.2(s,1H),6.1(s,1H),3.5(m,1H),3.4(m,1H),3.2(m,2H).
步骤C：
将18.57g(46.02mmol)步骤B的产物和500ml三氯甲烷混合，然后加入6.70ml(91.2mmol)SOCl2，于室温下搅拌该混合物4小时。用5分钟加入在800ml THF中的35.6g(0.413mol)哌嗪，于室温下搅拌该混合物1小时。于回流下加热该混合物过夜，然后冷却至室温，用1L二氯甲烷稀释该混合物。用水(5×200ml)洗涤。用三氯甲烷(3×100ml)提取水洗涤液。合并所有的有机溶液，用盐水(3×200ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空浓缩为残留物，层析(硅胶，5％、7.5％、10％甲醇/二氯甲烷+氢氧化铵梯度)得到18.49g目的化合物，为外消旋混合物。
步骤D-对映体的分离：
通过制备性手性层析(Chiralpack AD,5cm×50cm柱，流速100ml/分，20％异丙醇/己烷+0.2％二乙胺)分离步骤C的外消旋目的化合物，得到9.14g(+)-异构体和9.30g(-)-异构体。
(+)-异构体的理化数据：m.p.=74.5℃-77.5℃；质谱：MH+=471.9；[α]25D=+97.4℃(8.48mg/2ml甲醇)；
(-)-异构体的理化数据：m.p.=82.9℃-84.5℃；质谱：MH+=471.8；[α]25D=-97.4°(8.32mg/2ml甲醇)。
步骤E：
使3.21g(6.80mmol)步骤D的(-)-异构体产物和150ml无水DMF混合。加入2.15g(8.8mmol)1-N-叔-丁氧基羰基哌啶基-4-乙酸、1.69g(8.8mmol)的DEC、1.19g(8.8mmol)HOBT和0.97ml(8.8mmol)N-甲基吗啉，于室温下搅拌该混合物过夜。真空浓缩除去DMF，并加入50ml饱和碳酸氢钠(水溶液)。用二氯甲烷(2×250ml)提取，用50ml盐水洗涤提取物并经硫酸镁干燥。真空浓缩为残留物，层析(硅胶，2％甲醇/二氯甲烷+10％氢氧化铵)得到4.75g产物。m.p.=75.7℃-78.5℃；质谱：MH+=697；[α]25D=-5.5°(6.6mg/2ml甲醇)。
步骤F：
使4.70g(6.74mmol)步骤E的产物和30ml甲醇混合，然后用1小时以每份10ml分次加入50ml 10％硫酸/二氧六环。将该混合物倾入50ml水中，加入15ml 50％氢氧化钠(水溶液)调节至pH≈10-11。过滤除去生成的固体，用二氯甲烷(2×250ml)提取滤液。真空浓缩水层除去甲醇，并再用250ml二氯甲烷提取。经硫酸镁干燥合并的提取物，真空浓缩得到产物。m.p.=128.1℃-131.5℃；质谱：MH+=597；[α]25D=-6.02°(9.3mg/2ml甲醇)。
制备实施例7
步骤A：
于-5℃，使15g(38.5mmol)4-(8-氯代-3-溴代-5,6-二氢-11H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶-1-甲酸乙酯和150ml浓硫酸混合，然后加入3.89g(38.5mmol)硝酸钾并搅拌4小时。将该混合物倾入3L冰中，用50％氢氧化钠(水溶液)碱化。用二氯甲烷提取，经硫酸镁干燥，然后过滤并真空浓缩为残留物。从丙酮中重结晶残留物得到6.69g产物。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.5(s,1H),7.75(s,1H),7.6(s,1H),7.35(s,1H),4.15(q,2H),3.8(m,2H),3.5-3.1(m,4H),3.0-2.8(m,2H),2.6-2.2(m,4H),1.25(t,3H)。
步骤B：
使6.69g(13.1mmol)步骤A的产物和100ml 85％乙醇/水混合，然后加入0.66g(5.9mmol)氯化钙和6.56g(117.9mmol)铁，于回流下加热该混合物过夜。通过celite过滤热的反应混合物，用热的乙醇冲洗滤饼。真空浓缩滤液得到7.72g产物。质谱：MH+=478.0。
步骤C：
使7.70g步骤B的产物和35ml乙酸混合，然后加入45ml溴在乙酸中的溶液，于室温下搅拌该混合物过夜。加入300ml 1N氢氧化钠(水溶液)，然后加入75ml 50％氢氧化钠(水溶液)，用乙酸乙酯提取。用硫酸镁干燥提取物，真空浓缩为残留物。层析残留物(硅胶，20％-30％乙酸乙酯/己烷)得到3.47g产物(同时还有1.28g部分纯化的产物)。质谱：MH+=555.9。1H NMR(CDCl3,300MHz):8.5(s,1H),7.5(s,1H),7.15(s,1H),4.5(s,2H),4.15(m,3H),3.8(brs,2H),3.4-3.1(m,4H),9-2.75(m,1H),2.7-2.5(m,2H),2.4-2.2(m,2H),1.25(m,3H)。
步骤D：
使0.557g(5.4mmol)亚硝酸叔-丁酯和3ml DMF混合，于60℃-70℃加热该混合物。缓慢加入(滴加)2.00g(3.6mmol)步骤C的产物和4mlDMF的混合物，然后冷却该混合物至室温。于40℃加入另外0.64ml亚硝酸叔-丁酯，于60℃-70℃再加热该混合物0.5小时。冷却至室温，将该混合物倾入150ml水中。用二氯甲烷提取，用硫酸镁干燥提取物并真空浓缩为残留物。层析残留物(硅胶，10％-20％乙酸乙酯/己烷)得到0.74g产物。质谱：MH+=541.0。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.52(s,1H),7.5(d,2H),7.2(s,1H),4.15(q,2H),3.9-3.7(m,2H),3.5-3.1(m,4H),3.0-2.5(m,2H),2.4-2.2(m,2H),2.1-1.9(m,2H),1.26(t,3H)。
步骤E：
使0.70g(1.4mmol)步骤D的产物和8ml浓盐酸(水溶液)混合，于回流下加热该混合物过夜。加入30ml 1N氢氧化钠(水溶液)，然后加入5ml 50％氢氧化钠(水溶液)，用二氯甲烷提取。用硫酸镁干燥提取物，真空浓缩得到0.59g目的化合物。质谱：MH+=468.7；m.p.=123.9℃-124.2℃。
步骤F：
采用与制备实施例5步骤C所述基本相同的方法，使得自步骤E的6.0g(12.8mmol)目的化合物与3.78g(16.6mmol)1-N-叔-丁氧基羰基哌啶基-4-乙酸反应，得到8.52g产物。质谱：MH+=694.0(FAB)。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.5(d,1H),7.5(d,2H),7.2(d,1H),4.15-3.9(m,3H),3.8-3.6(m,1H),3.5-3.15(m,3H),2.9(d,2H),2.8-2.5(m,4H),2.4-1.8(m,6H),1.8-1.6(brd,2H),1.4(s,9H),1.25-1.0(m,2H)。
步骤G：
使8.50g步骤F的产物和60ml二氯甲烷混合，然后冷却至0℃，加入55ml TFA。于0℃搅拌该混合物3小时，然后加入500ml 1N氢氧化钠(水溶液)，接着加入30ml 50％氢氧化钠(水溶液)。用二氯甲烷提取，用硫酸镁干燥，真空浓缩得到7.86g产物。质谱：M+=593.9(FAB)。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.51(d,1H),7.52(双重双峰，2H),7.20(d,1H),4.1-3.95(m,2H),3.8-3.65(m,2H),3.5-3.05(m,5H),3.0-2.5(m,6H),2.45-1.6(m,6H),1.4-1.1(m,2H)。
制备实施例8[外消旋的及(+)-和(-)-异构体]
步骤A：
制备8.1g得自制备实施例7步骤E的目的化合物的甲苯溶液，加入在甲苯中的17.3ml的1M DIBAL溶液。在回流下加热该混合物并用40分钟缓慢加入(滴加)另外21ml 1M DIBAL/甲苯溶液。使反应混合物冷却至约0℃，加入700ml 1M盐酸(水溶液)。分离并弃去有机相。用二氯甲烷洗涤水相，弃去提取物，然后通过加入50％氢氧化钠(水溶液)碱化水相。用二氯甲烷提取，用硫酸镁干燥，真空浓缩得到7.30g目的化合物，为对映体的外消旋混合物。
步骤B-对映体的分离：
通过制备性手性层析(Chiralpack AD,5cm×50cm柱，20％异丙醇/己烷+0.2％二乙胺)分离步骤A的外消旋目的化合物，得到目的化合物的(+)-异构体和(-)-异构体。
(+)-异构体的理化数据：m.p.=148.8℃；质谱：MH+=469；[α]25D=+65.6℃(12.93mg/2ml甲醇)；
(-)-异构体的理化数据：m.p.=112℃；质谱：MH+=469；[α]25D=-65.2°(3.65mg/2ml甲醇)。
步骤C：
采用与制备实施例5步骤C所述基本相同的方法，使得自制备实施例8步骤B的1.33g目的化合物的(+)-异构体与1.37g 1-N-叔-丁氧基羰基哌啶基-4-乙酸反应，得到2.78g产物。质谱：MH+=694.0(FAB)；[α]25D=+34.1℃(5.45mg/2ml甲醇)。
步骤D：
通过与制备实施例5步骤D所述基本相同的方法处理2.78g步骤C的产物，得到1.72g产物。m.p.=104.1℃；质谱：MH+=594；[α]25D=+53.4℃(11.42mg/2ml甲醇)。
制备实施例9
[外消旋的及(+)-和(-)-异构体]
步骤A：
使40.0g(0.124mol)的原料酮与200ml硫酸混合，冷却至0℃。用1.5小时缓慢加入13.78g(0.136mol)硝酸钾，然后温热至室温并搅拌过夜。采用与制备实施例4步骤A所述基本相同的方法处理该反应物。层析(硅胶，20％、30％、40％、50％乙酸乙酯/己烷，然后100％乙酸乙酯)得到28g 9-硝基产物，伴有少量7-硝基产物，以及19g 7-硝基化合物和9-硝基化合物的混合物。
步骤B：
采用与制备实施例4步骤C所述基本相同的方法，使步骤A的28g(76.2mmol)9-硝基化合物、400ml 85％乙醇/水、3.8g(34.3mmol)氯化钙和38.28g(0.685mol)铁反应，得到24g产物。
步骤C：
使13g(38.5mmol)步骤B的产物和140ml乙酸混合，用20分钟缓慢加入2.95ml(57.8mmol)溴的10ml乙酸溶液。于室温下搅拌反应物，然后真空浓缩为残留物。加入二氯甲烷和水，然后用50％氢氧化钠(水溶液)调节至pH=8.9。用水洗涤有机相，然后用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，真空浓缩得到11.3g产物。
步骤D：
冷却100ml浓盐酸(水溶液)至0℃，然后加入5.61g(81.4mmol)亚硝酸钠并搅拌10分钟。缓慢(分次)加入11.3g(27.1mmol)步骤C的产物，并于0℃-3℃搅拌该混合物2.25小时。缓慢加入(滴加)180ml50％H3PO2(水溶液)，使该混合物于0℃放置过夜。用30分钟缓慢加入(滴加)150ml 50％氢氧化钠(水溶液)调节至pH=9，然后用二氯甲烷提取。用水洗涤提取物，然后用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，真空浓缩为残留物，层析(硅胶，2％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到8.6g产物。
步骤E：
使8.6g(21.4mmol)步骤D的产物与300ml甲醇混合并冷却至0℃-2℃。加入1.21g(32.1mmol)硼氢化钠，于约0℃搅拌1小时。再加入0.121g(3.21mmol)硼氢化钠，于0℃搅拌2小时。然后于0℃放置过夜。真空浓缩为残留物，然后使残留物在二氯甲烷和水之间分配。分离有机相，真空(50℃)浓缩得到8.2g产物。
步骤F：
使8.2g(20.3mmol)步骤E的产物与160ml二氯甲烷混合，冷却至0℃，然后用30分钟缓慢加入(滴加)14.8ml(203mmol)SOCl2。将混合物温热至室温并搅拌4.5小时，然后真空浓缩为残留物，加入二氯甲烷，用1N氢氧化钠(水溶液)洗涤，然后用盐水洗涤，硫酸钠干燥。真空浓缩为残留物，接着加入无水THF和8.7g(101mmol)哌嗪，于室温搅拌过夜。真空浓缩为残留物，加入二氯甲烷，用0.25N氢氧化钠(水溶液)、水、然后用盐水洗涤。用硫酸钠干燥，真空浓缩得到9.46g粗品产物。层析(硅胶，5％甲醇/二氯甲烷+氨)得到3.59g目的化合物，为外消旋体。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.43(d,1H),7.55(d,1H),7.45(d,1H),7.11(d,1H),5.31(s,1H),4.86-4.65(m,1H),3.57-3.40(m,1H),2.98-2.55(m,6H),2.45-2.20(m,5H)。
步骤G-对映体的分离
根据制备实施例6步骤D所述，层析得自步骤F的外消旋目的化合物(5.7g)，用30％异丙醇/己烷+0.2％二乙胺洗脱得到2.88g R-(+)-异构体和2.77g S-(-)-异构体的目的化合物。
R-(+)-异构体的理化数据：质谱：MH+=470.0；[α]25D=+12.1°(10.9mg/2ml甲醇)；
S-(-)-异构体的理化数据：质谱：MH+=470.0；[α]25D=-13.2°(11.51mg/2ml甲醇)。
步骤H：
采用与制备实施例5步骤C和D所述基本相同的方法，由步骤F的外消旋化合物获得制备实施例9的外消旋目的化合物。类似地，用得自步骤G的(-)-或(+)-异构体，可以分别获得制备实施例9的目的化合物的(-)-或(+)-异构体。
制备实施例10
[外消旋的及(+)-和(-)-异构体]
步骤A：
于20℃将得自制备实施例4步骤E的13g(33.3mmol)目的化合物与300ml甲苯混合，加入32.5ml(32.5mmol)1M的DIBAL的甲苯溶液。于回流下加热该混合物1小时，冷却至20℃。再加入32.5ml 1MDIBAL溶液并于回流下加热1小时。将该混合物冷却至20℃并将其倾入400g冰、500ml乙酸乙酯和300ml 10％氢氧化钠(水溶液)的混合物中。用二氯甲烷(3×200ml)提取水层，硫酸镁干燥有机层，然后真空浓缩为残留物。层析(硅胶，12％甲醇/二氯甲烷+4％氢氧化铵)得到10.4g目的化合物，为外消旋体。质谱：MH+=469(FAB)。部分1HNMR(CDCl3,400MHz):8.38(s,1H),7.57(s,1H),7.27(d,1H),7.06(d,1H),3.95(d,1H).
步骤B-异构体的分离：
通过制备性手性层析(Chiralpack AD,5cm×50cm柱，5％异丙醇/己烷+0.2％二乙胺)分离步骤A的外消旋目的化合物，得到目的化合物的(+)-异构体和(-)-异构体。
(+)-异构体的理化数据：质谱：MH+=469(FAB)；[α]25D=+43.5°(c=0.402，乙醇)；部分1HNMR(CDCl3,400MHz):8.38(s,1H),7.57(s,1H),7.27(d,1H),7.05(d,1H),3.95(d,1H).
(-)-异构体的理化数据：质谱：MH+=469(FAB)[α]25D=-41.8°(C=0.328乙醇)；部分1H NMR(CDCl3,400MHz):8.38(s,1H),7.57(s,1H),7.27(d,1H),7.05(d,1H),3.95(d,1H).
步骤C：
按照制备实施例9步骤H的方法，可以获得制备实施例10的目的化合物的(+)-或(-)-异构体。
制备实施例11
[外消旋的及R-(+)-和S-(-)-异构体]化合物可以根据WO95/10516(1995年4月20日公开)中制备实施例40的方法，接着按照WO95/10516中制备实施例193的方法制备。
按照与制备实施例6步骤D基本相同的方法可以分离(+)-或(-)-异构体。
R-(+)-异构体的理化数据：13C NMR(CDCl3):155.8(C),146.4(CH),140.5(CH),140.2(C),136.2(C)135.3(C),133.4(C),132.0(CH),129.9(CH),125.6(CH),119.3(C),79.1(CH),52.3(CH2),52.3(CH),45.6(CH2),45.6(CH2),30.0(CH2),29.8(CH2)。[α]25D=+25.8°(8.46mg/2ml甲醇)。
S-(-)-异构体的理化数据：13C NMR(CDCl3):155.9(C),146.4(CH),140.5(CH),140.2(C),136.2(C)135.3(C),133.3(C),132.0(CH),129.9(CH),125.5(CH),119.2(C),79.1(CH),52.5(CH2),52.5(CH),45.7(CH2),45.7(CH2),30.0(CH2),29.8(CH2)。[α]25D=-27.9°(8.90mg/2ml甲醇)。
按照与制备实施例5步骤C和D所述基本相同的方法，可由相应的外消旋化合物，即下式化合物的(+)-异构体或(-)-异构体获得制备实施例11的外消旋化合物，目的化合物的(+)-异构体或(-)-异构体。制备实施例12
将得自WO95/10516中实施例193的14.73g(27.3mmol)化合物与125ml无水甲醇混合，加入(分次)300ml 10％浓硫酸的二氧六环溶液。于25℃搅拌该混合物2小时，然后倾入水中并用50％氢氧化钠(水溶液)调至pH=13。用二氯甲烷提取，用水洗涤提取物，用硫酸镁干燥。真空浓缩为残留物，经层析(硅胶，10％(10％氢氧化铵在甲醇中)/二氯甲烷中)得到8.9g目的化合物。质谱：MH+=539
实施例1
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-氰基-1-哌啶-碳亚胺酸(哌啶碳亚胺酸)苯酯
将1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[(4-哌啶基)乙酰基]-哌嗪(式47.0)(如制备实施例11所述制备)(2.5g)(1当量)和二苯基氰基碳亚胺酸酯(carbonimidate)(1.38g)(1.2当量)溶于2-丙醇(65ml)，于80℃回流和氮气下加热该溶液24小时。蒸发该混合物至干燥，产物经硅胶柱(60×2.5cm)层析，用纯乙酸乙酯作为洗脱剂得到目的化合物(2.7921g；87％),FABMS:m/z661(MH+)。 式2.0的δC(CDCl3)三环CH2:CH:C30.5,30.6147.1,141.4,132.5,126.3,130.5,79.0120.1,140.9,134.3,135.3,136.8,155.5哌嗪CH2:41.7,51.4,51.9,45.6哌嗪N-取代基CH2:CH:C:46.4,32.1,32.1,46.4,38.8,32.5,118.5,118.5,130.1,130.1,125.7113.5,152.5,157.4,169.3
实施例2
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-氰基-1-哌啶甲亚胺酰胺(carboximidamide)
将4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-氰基-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(2.62g)(式2.0，如以上实施例1所述制备)溶于2-丙醇(50ml)中。加入浓氢氧化铵(4ml)。于25℃搅拌该混合物24小时，然后蒸发该混合物至干燥，用乙醚(2×250ml)研磨残留物，弃去乙醚。剩余的产物经硅胶柱(60×2.5cm)层析，用4％(10％浓缩氢氧化铵在甲醇中)-二氯甲烷作为洗脱剂得到目的化合物(式3.0)(1.967g；85％)。FABMS:m/z584.2(MH+)。 式3.0的δC(d6-DMSO)三环CH2:CH:C29.0,29.4146.1,140.7,132.4,125.4,129.9,77.7119.1,141.1,132.4,135.4,136.7,155.5,哌嗪CH2:40.6,50.8,51.3,44.6哌嗪N-取代基CH2:CH:C:44.3,44.3,30.9,30.9,38.3,31.9118.1,159.3,168.8
实施例3
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶碳亚胺酸苯酯
使1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[(4-哌啶基)乙酰基]-哌嗪(6g,1当量)(式47.0得自以上制备实施例11)溶于无水二氯甲烷(71.1ml)。加入氰酸苯酯(2.2752ml)(2当量)和二异丙基乙胺(100滴)，于25℃搅拌该混合物15分钟。将反应混合物直接引入硅胶柱(15×5cm)，用10％增至20％(10％浓氢氧化铵在甲醇中)-二氯甲烷洗脱得到目的化合物(6.66g；92％),FABMS:m/z635.9(MH+)。 式4.0的δC(CDCl3)三环CH2:CH:C30.6,30.5147.1,141.3,132.5,126.3,130.5,79.0120.1,140.9,134.2,135.3,136.8,155.6哌嗪CH2:41.6,51.4,51.9,45.8哌嗪N-取代基CH2:CH:C:45.3,45.3,32.0,32.0,39.5,32.2,122.1,122.1,130.0,130.0,125.7151.4,159.3,170.0
实施例4
1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[4-(1-氰基-4-哌啶基)乙酰基]-哌嗪
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(0.3g)(1当量)(式4.0，如以上实施例3所述制备)溶于无水THF(11.2ml)中。加入60％的氢化钠(0.0753g)(4当量)在油中的悬浮液，于25℃搅拌该混合物2小时。用二氯甲烷稀释该混合物，用1.0N氢氧化钠洗涤。用硫酸镁干燥二氯甲烷层，过滤并蒸发至干燥。产物经硅胶柱(30×2.5cm)层析，用1.5％(10％浓缩氢氧化铵在甲醇中)-二氯甲烷作为洗脱剂，得到目的化合物(式5.0)(0.1824g；71％)。FABMS:m/z542.2(MH+)。 式5.0的δC(CDCl3)三环CH2:CH:C30.6,30.5147.1,141.4,132.5,126.3,130.6,79.0120.1,140.9,134.3,135.3,136.9,155.6哌嗪CH2:41.6,51.4,51.9,45.6哌嗪N-取代基CH2:CH:C:49.7,49.7,31.1,31.1,39.1,31.8118.4.169.3
实施例5
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-氨磺酰基-1-哌啶碳亚胺酸苯酯
方法1：
如果按照方法1则可获得式6.0化合物。
使1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[(4-哌啶基)乙酰基]哌嗪(1当量)(制备实施例11的式47.0)和二苯基氨磺酰基碳亚胺酸酯(1.2当量)[如M.Haake和B.Schummelfeder.Synthesis,753-758,(1991)中所述制备]溶于2-丙醇，如以上实施例1所述加热该混合物得到目的化合物(式6.0)。
方法2：
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(0.05g)(1当量)(式4.0，如以上实施例3所述制备)溶于无水二氯甲烷(2ml)中。加入三乙胺(0.0328ml)(3当量)。加入氨磺酰氯(0.0091g)(1当量)[如RAppel和G.Berger在Chem.Ber.,91,1339-1341(1958)中所述制备]，并于25℃、氩气下搅拌该混合物18小时。加入另外的氨磺酰氯(0.0091g)(1当量)并继续搅拌共90小时。用二氯甲烷稀释该混合物，用1.0N氢氧化钠提取。用硫酸镁干燥二氯甲烷层，过滤并蒸发至干燥。产物经硅胶柱(15×1cm)层析，用2％增至4％(10％浓缩氢氧化铵在甲醇中)-二氯甲烷作为洗脱剂，得到目的化合物(式6.0)(0.0054g；10％)。FABMS:m/z715.4(MH+)。δH(CDCl3)7.03(2H,m,ArH),7.09-7.18(4H,m,ArH),7.37(1H,m,ArH),7.39(1H,m,ArH),7.59(1H,s,ArH)和8.37(1H,s,ArH)。
实施例6
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-氨磺酰基-1-哌啶-甲亚胺酰胺
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-氨磺酰基-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(式6.0)(如以上实施例5所述制备)(0.089g,0.1mmol)溶于无水THF(1ml)中。加入在无水THF(4ml)中的氨饱和溶液，于25℃在密封的反应器中搅拌该混合物19小时。蒸发该混合物至干燥，经硅胶层析，用2％-6％在二氯甲烷中的甲醇作为洗脱剂得到目的化合物(式7.0)(0.0667g；84％)。ESIMS:m/z638.0(MH+)。 δC(CDCl3)三环CH2:CH:C30.5,30.678.9,126.3,130.5,132.6,141.4,147.0120.1,134.2,135.3,136.9,140.9,155.6哌嗪CH2:41.7,45.7,51.4,51.9哌嗪N-取代基CH2:CH:C:31.8,31.8,39.0,44.9,44.9,32.8169.8
实施例7
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(N-甲基氨磺酰基)-1-哌啶碳亚胺酸苯酯
方法1：
如果按照方法1则可获得式8.0化合物。
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(1当量)(式4.0)(如以上实施例3所述制备)溶于惰性无水溶剂如乙腈、苯或甲苯中，加入三乙胺(2当量)。使该溶液冷却至0℃，加入N-甲基氨磺酰氯(1.2当量)[如J.A.Kloek和K.L.Leschinsky在J.Org.Chem.,41(25)，4028-4029(1976)中所述制备]。将该混合物于0℃-25℃搅拌3小时并经处理后得到目的化合物(式8.0)。
方法2：
如果按照方法2则可获得式8.0化合物。
使1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[(4-哌啶基)乙酰基]哌嗪(1当量)(式47.0，根据实施例11所述制备)和二苯基甲基氨磺酰基碳亚胺酸酯(1.2当量)[如A.Buschauer,Arch.Pharm.,377-378,(1987)中所述的相同方法制备，但仅使用甲基氨磺酰氯]溶于2-丙醇中，如以上实施例1所述加热该混合物得到目的化合物。
实施例8
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(N-甲基氨磺酰基)-1-哌啶甲亚胺酰胺
如果按照该方法则可获得式9.0化合物。
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(N-甲基氨磺酰基)-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(式8.0，如以上实施例7所述制备)溶于2-丙醇中，并加入浓氢氧化铵。于25℃搅拌该混合物24小时，然后蒸发至干燥。用乙醚(2×250ml)研磨残留物，弃去乙醚。剩余的产物经硅胶柱层析得到目的化合物(式9.0)。
或者，在上述反应中，也可使用在适当的惰性溶剂如甲醇或THF中的无水氨代替氢氧化铵。
实施例9
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(N,N-二甲基氨磺酰基)-1-哌啶碳亚胺酸苯酯
方法1：
如果按照方法1则可获得式10.0化合物。
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(1当量)(式4.0)(如以上实施例3所述制备)溶于惰性无水溶剂如乙腈、苯或甲苯中，加入三乙胺(2当量)。使该溶液冷却至0℃，加入N,N-二甲基氨磺酰氯(1.2当量)。将该混合物于0℃-25℃搅拌3小时，并经处理后得到目的化合物。
方法2：
如果按照方法2则可获得式10.0化合物。
使1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[(4-哌啶基)乙酰基]哌嗪(1当量)(式47.0，根据制备实施例11所述制备)和二苯基二甲基氨磺酰基碳亚胺酸酯(1.2当量)[如A.Buschauer,Arch.Pharm.,377-378,(1987)中所述的相同方法制备，但仅使用二甲基氨磺酰氯]溶于2-丙醇中，如以上实施例1所述加热该混合物得到目的化合物(式10.0)。
实施例10
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(N,N-二甲基氨磺酰基)-1-哌啶碳亚胺酸苯酯
如果按照该方法则可获得式11.0化合物。
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(N,N-二甲基氨磺酰基)-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(式10.0)(如以上实施例9所述制备)溶于2-丙醇中，加入氢氧化铵。于25℃搅拌该混合物24小时，然后蒸发至干燥。用乙醚(2×250ml)研磨残留物，弃去乙醚。剩余的产物经硅胶柱层析得到目的化合物(式11.0)。
或者，在上述反应中，也可使用在适当的惰性溶剂如甲醇或THF中的无水氨代替氢氧化铵。
实施例11
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-羟基-1-哌啶碳亚胺酸苯酯
方法1：
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(式4.0)(如以上实施例3所述制备)(0.15g,0.26mmol)溶于甲醇(0.75ml)中，加入羟胺水溶液[通过使羟胺盐酸盐(0.0164g,0.26mmol)溶于50％(w/v)氢氧化钠(0.0188g,0.26mmol)中来制备]和水(0.258ml)，于25℃搅拌该混合物3小时。再加入甲醇(1.2ml)并于25℃搅拌共26小时。蒸发该溶液至干燥，残留物经硅胶层析，用2％-4％-5％-10％-25％-35％甲醇(在二氯甲烷中)作为洗脱剂，得到目的化合物(式12.0)(0.0323g；24％)，与下面方法2制备的相同。
方法2：
使1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[4-(1-氰基-4-哌啶基)乙酰基]哌嗪(式5.0)(根据以上实施例4所述制备)(0.4g,0.737mmol)溶于甲醇(2ml)中。加入羟基胺水溶液[通过使羟基胺盐酸盐(0.0512g,0.737mmol)溶于50％(w/v)氢氧化钠(0.0592g,0.737mmol)中来制备]和水(0.8ml)，于25℃搅拌该混合物3小时。加入另外的甲醇(3.2ml)并于25℃搅拌该混合物共18小时。蒸发该溶液至干燥，残留物经硅胶层析，用在二氯甲烷中的5％甲醇作为洗脱剂得到目的化合物(式12.0)(0.2965g；70％)。FABMS:m/z575.0(MH+)。 式12.0的δC(CDCl3)三环CH2:CH:C30.6,30.6147.0,141.4,132.6,126.3,130.5,79.0120.1,140.9,134.2,135.3,136.9,155.6哌嗪CH2:41.7,51.4,51.9,45.8哌嗪N-取代基CH2:CH:C:46.8,46.8,31.5,31.5,39.232.8157.6,170.0
实施例12
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-甲氧基-1-哌啶碳亚胺酸酯
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(式4.0)(如以上实施例3所述制备)(0.1g,0.157mmol)和甲氧基胺盐酸盐(0.0154g，0.157mmol)溶于无水吡啶(1ml)中。于25℃搅拌该混合物2小时。蒸发该溶液至干燥。产物经硅胶层析，用在二氯甲烷中的2％-4％-10％甲醇作为洗脱剂得到目的化合物(式13.0)(0.0741g；80％)。FABMS:m/z589.1(MH+)。 δC(CDCl3)三环CH2:CH:C30.4,30.579.0,126.2,130.4,132.4,141.2,147.0120.0,134.1,135.3,136.7,140.8,155.5哌嗪CH2:41.5,45.7,51.3,51.8哌嗪N-取代基CH3:CH2:CH:C:61.039.4,31.7,31.7,46.8,46.8,33.2156.7
实施例13
N-[[(氨基羰基)氨基]羰基]-4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶碳亚胺酸苯酯使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(式4.0)(如以上实施例3所述制备)(0.35g,0.549mmol)溶于无水二氯甲烷(7ml)中。加入三甲基硅烷基异氰酸酯(1.484ml,10.98mmol)。于25℃搅拌该混合物21小时。用二氯甲烷稀释该混合物，用饱和氢氧化钠水溶液、水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干燥。残留物经硅胶层析，用在二氯甲烷中的2％-3％甲醇作为洗脱剂得到目的化合物(式16.1)(0.1302g；33％)。FABMS:m/z721.9(MH+)。 δC(CDCl3)三环CH2:CH:C:30.5,30.679.0,126.4,130.6,132.5,141.4,147.1120.1,134.3,135.3,136.8,140.9,155.5哌嗪CH2:41.7,45.7,51.4,51.9哌嗪N-取代基CH2:CH:C:32.0,32.0,38.9,46.3,46.332.7,119.0,119.0,125.0,129.6,129.6,153.0,155.2,157.6,169.4
实施例14
N-[[(氨基羰基)氨基]羰基]-4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶甲亚酰胺
使N-[[(氨基羰基)氨基]羰基]-4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶碳亚胺酸酯(式16.1)(0.2943g,0.462mmol)溶于在无水THF(80ml)中的氨饱和溶液中，于25℃，在密闭容器中搅拌该混合物19小时。蒸发该溶液至干燥，残留物经硅胶层析，用3％(10％浓氢氧化铵在甲醇中)-二氯甲烷作为洗脱剂得到目的化合物(式17.1)(0.2663g,40％)。ESIMS:m/z645.2(MH+)。 δC(CDCl3)三环CH2:CH:C30.5,30.679.0,126.3,130.6,132.5,141.3,147.1120.1,134.3,135.3,136.8,140.9,155.5哌嗪CH2:41.7,45.7,51.4,51.9哌嗪N-取代基CH2:CH:C:31.9,31.9,39.1,44.3,44.332.9156.1,159.4,162.6,169.6
实施例15
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-甲酰氨基-1-哌啶碳亚胺酸苯酯如果按照方法1，则可以得到式16.0化合物。
使1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[(4-哌啶基)乙酰基]哌嗪(1当量)(式47.0，根据制备实施例11所述制备)和二苯基甲酰氨基碳亚胺酸酯(1.2当量)[如M.Haake和B.Schummelfeder,Synthesis.,753-758,(1991)中所述，用脲代替硫酰胺来制备]溶于2-丙醇中，于80℃、回流及氮气下加热该溶液24小时。蒸发该混合物至干燥，经硅胶柱层析得到目的化合物(式16.0)。
实施例16
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-甲酰氨基]-2-氧代乙基]-N-甲酰氨基-1-哌啶甲亚胺酰胺
如果按照方法1则可获得式17.0化合物。
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-甲酰氨基-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(式16.0)(如以上实施例15所述制备)溶于2-丙醇中，加入浓氢氧化铵。于25℃搅拌该混合物24小时，然后蒸发至干燥。用乙醚(2×250ml)研磨残留物，弃去乙醚。剩余的产物经硅胶柱层析得到目的化合物(式17.0)。
或者，在上述反应中，也可使用在适当的惰性溶剂如甲醇或THF中的无水氨代替氢氧化铵。
实施例17
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(N’-甲基甲酰氨基)-1-哌啶碳亚胺酸苯酯
如果按照该方法则可获得式18.0化合物。
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(1当量)(式4.0)(如以上实施例3所述制备)溶于无水二氯甲烷中。加入异氰酸甲酯(2当量)。于25℃搅拌该混合物48小时。将该混合物与碳酸氢钠水溶液一起振摇并用二氯甲烷提取。用硫酸镁干燥后者，过滤并蒸发至干燥，经硅胶层析后得到目的化合物(式18.0)。
实施例18
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-1 1-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(N’-甲基甲酰氨基)-1-哌啶甲亚胺酰胺如果按照该方法则可获得式19.0化合物。
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(N’-甲基甲酰氨基)-1-哌啶碳亚胺酸苯酯(式18.0，如以上实施例17所述制备)溶于2-丙醇中，加入浓氢氧化铵。于25℃搅拌该混合物24小时，然后蒸发至干燥。用乙醚(2×250ml)研磨残留物，弃去乙醚。剩余的产物经硅胶柱层析得到目的化合物(式19.0)。
或者，在上述反应中，也可使用在适当的惰性溶剂如甲醇或THF中的无水氨代替氢氧化铵。
实施例19
N-[4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶基]-N’-甲基-2-硝基-1-乙烯胺
如果按照该方法则可获得式20.0化合物。
使氯化铜(I)(1当量)溶于无水乙腈中。在搅拌下，用10分钟向该溶液滴加1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[(4-哌啶基]乙酰基]-哌嗪(1当量)(式47.0，如以上实施例11所述制备)、1-甲硫基-1-甲基-氨基-2-硝基乙烯(1当量)(如加拿大专利第1178289号(1984)中所述方法制备)和三乙胺在无水乙腈中的溶液。滤除固体，减小体积，加入二氯甲烷。用碳酸氢钠水溶液洗涤该混合物，用硫酸镁干燥二氯甲烷层，过滤并蒸发至干燥。残留物经硅胶层析得到目的化合物(式20.0)。
实施例20
N-[4-[2-[4-(8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶基]-N’-甲基2-硝基-1-乙烯胺
如果按照该方法则可获得式21.0化合物。
步骤A：
N-[4-[2-[4-(8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶基]-N’-甲基-甲硫基-碳亚胺酸酯
使4-[2-[4-(8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-甲基-1-哌啶羰基硫代酰胺(1当量)(式A-38)溶于甲醇中，用15分钟加入甲基碘(1.2当量)。然后回流下加热该混合物2小时。蒸发该溶液至干燥，使残留物溶于水中，用50％氢氧化钠碱化，然后用氯化钠饱和。用二氯甲烷提取该混合物，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干燥得到目的化合物(式B-38)。
通过使以上制备实施例12的化合物与CH3NCS反应制备式A-38化合物。该反应于25℃、通氩气及搅拌下在无水二氯甲烷中进行，直至反应完成。用二氯甲烷稀释反应混合物，用饱和碳酸氢钠(水溶液)，然后用水洗涤。经硫酸镁干燥，真空浓缩为残留物，层析(硅胶，5％(10％氢氧化铵在甲醇中)/二氯甲烷)得到式A-38化合物。
步骤B：
N-[4-[2-[4-(8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-1-哌啶基]-N’-甲基-2-硝基-1-乙烯胺
将得自以上步骤A的粗品产物(式B-38)与过量的硝基甲烷一起回流16小时，然后蒸发至干燥得到目的化合物(式21.0)。
实施例21
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(甲磺酰基)-1-哌啶碳亚胺酸苯酯
如果按照该方法则可获得式22.0化合物。
使1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[(4-哌啶基)乙酰基]哌嗪(1当量)(式47.0，根据以上制备实施例11所述制备)和二苯基甲磺酰基碳亚胺酸酯(1.2当量)[如A.Buschauer,Arch.Pharm.,377-378(1987)所述制备]溶于2-丙醇中，如以上实施例1所述加热该化合物得到目的化合物(式22.0)。
实施例22
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(甲磺酰基)-1-哌啶甲亚胺酰胺
如果按照该方法则可获得式23.0化合物。
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(甲磺酰基)-1-哌啶碳亚胺酸酯(式22.0，根据以上实施例21所述制备)溶于2-丙醇中，加入浓氢氧化铵。于25℃搅拌该混合物24小时，然后蒸发该混合物至干燥，用乙醚(2×250ml)研磨残留物，弃去乙醚。剩余的产物经硅胶柱层析得到目的化合物(式23.0)。
或者，在上述反应中，也可使用在适当的惰性溶剂如甲醇或THF中的无水氨代替氢氧化铵。
实施例23
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-苯甲酰基-1-哌啶碳亚胺酸苯酯
如果按照该方法则可获得式24.0化合物。
使1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[(4-哌啶基)乙酰基]哌嗪(1当量)(式47.0，根据以上实施例11所述制备)和二苯基甲基苯甲酰基碳亚胺酸酯(1.2当量)[如A.Buschauer,Arch.Pharm.,377-378(1987)所述制备]溶于2-丙醇中，如以上实施例1所述加热该化合物得到目的化合物(式24.0)。
实施例24
4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-苯甲酰基-1-哌啶甲亚胺酰胺
如果按照该方法则可获得式25.0化合物。
使4-[2-[4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌嗪基]-2-氧代乙基]-N-(苯甲酰基)-1-哌啶碳亚胺酸酯(式24.0，根据以上实施例23所述制备)溶于2-丙醇中，加入浓氢氧化铵。于25℃搅拌该混合物24小时，然后蒸发该混合物至干燥。用乙醚(2×250ml)研磨残留物，弃去乙醚。剩余的产物经硅胶柱层析得到目的化合物(式25.0)。
或者，在上述反应中，也可使用在适当的惰性溶剂如甲醇或THF中的无水氨代替氢氧化铵。
实施例25在室温、二异丙基乙胺(2滴)存在下，使下式化合物(式B-10，得自以上制备实施例10步骤D的(+)异构体)(0.15g)二氯甲烷(1.5ml)溶液与氰酸苯酯(Zweifel,Synthesis150(1980))(0.048ml)反应1小时。然后用硅胶(30ml)快速层析该反应混合物，用10％甲醇-二氯甲烷洗脱，随后蒸发得到式27.0化合物，为无色粉末(0.15g)。MS(FAB):m/e713(MH+)
实施例26
于室温，氮气下，将式27.0化合物(实施例25)(0.06g)的二氯甲烷(2.0ml)溶液与60％氢化钠(0.016g)一起搅拌2小时。然后用冰水处理反应混合物，并用二氯甲烷(5×5ml)提取；干燥合并的提取物，蒸发，反应粗产物经硅胶(20ml)层析。用5％甲醇-二氯甲烷洗脱，随后蒸发得到式29.0，为无色粉末(0.042g)。MS(FAB):m/e619(MH+)
实施例27按照以上实施例25的方法，在二异丙基乙胺存在下，使胺
(式B-13，外消旋的，见制备实施例10)(0.09g)与氰酸苯酯(0.04ml)反应，得到式26.0化合物(0.078g)，为白色粉末。MS(FAB):m/e713(MH+)
实施例28
于90℃，将式26.0化合物(实施例27)(0.24g)和氯化铵(0.24g)的四氢呋喃(2.0ml)和氢氧化铵(2.0ml)的溶液在加压管中加热1.5小时。然后使反应化合物在冰中冷却，用水稀释，用二氯甲烷(3×10ml)提取。蒸发合并的提取物，粗产物经硅胶(20ml)层析，用10％甲醇-3％氨-二氯甲烷洗脱，蒸发后得到目的化合物(式30.0)，为白色固体(0.115g)。MS(FAB):m/e636(MH+)
实施例29
用3-氨基甲基吡啶(0.14ml)的水(0.5ml)溶液(含有在二氧六环(0.09ml)中的4M盐酸)处理式26.0化合物(实施例27)(0.25g)的四氢呋喃(3.0ml)溶液。于70℃加热反应混合物3.5小时，冷却至室温，用冰水稀释，用氢氧化钠水溶液将该混合物的pH调至10，用二氯甲烷(2×15ml)提取。粗产物经硅胶(10ml)层析，用10％甲醇-3％氨-二氯甲烷洗脱得到目的化合物(式31.0)，为无色粉末(0.28g)。MS(FAB):m/e727(MH+)
实施例30
按照上述实施例26中制备式29.0化合物的方法，使胺26.0(实施例27)(0.2g)与60％氢化钠(0.022g)反应，得到目的化合物(式28.0)，为白色粉末(0.087g)。MS(FAB):m/e619(MH+)
实施例31将式B-10化合物(+-异构体，见以上实施例25)(100mg,1eq)、HOBT(25mg,1.1eq)、DEC(35mg,1.1eq)、DMF(5ml)和羧酸(23mg,1.1eq)加入烧瓶中并于25℃搅拌18小时。当TLC显示反应完成时，加入水，搅拌生成的混合物约5分钟。过滤该混合物并用水洗涤沉淀。用二氯甲烷稀释生成的固体，用1N氢氧化钠(水溶液)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空除去溶剂。得到式35.0化合物，为白色固体(52mg)。
实施例32按照实施例31的方法，但是用作为羧酸(21mg,1.1eq)，得到式36.0化合物，为白色固体(86mg)。实施例33按照实施例31的方法，但是用作为羧酸(23mg,1.1eq)，得到式37.0化合物，为白色固体(84.4mg)。实施例34按照实施例31的方法，但是用作为羧酸(30mg,1.1eq)，得到式38.0化合物，为灰白色固体(0.105g)。
实施例35
将实施例8步骤D的(+)产物(0.139g,0.233mmol)溶于1.3ml DMF中，并于室温下搅拌，加入55.2mg(0.288mmol)DEC,41.5mg(0.307mmol)HOBT和42.2mg(0.324mmol)的和80μl(0.73mmol)N-甲基吗啉。于室温下搅拌该混合物1小时。将该混合物加入10ml水中，过滤生成的沉淀并用水洗涤。于40℃10mmHg下干燥18小时，得到123mg产物(m.p.=170.3-177.2℃，以每分钟上升2-3℃加热)。
实施例36-53
按照实施例35的方法，但是用下表1所示的酸代替实施例35中所用的酸，得到式1.7化合物。其中W在表1中定义。形成的化合物式号于W取代基下面的括号中给出。
表1
表1-续
表1-续
表1-续
实施例54
使1.0当量实施例32的产物溶于无水DMF中，加入2.0当量的氢化钠(60％在矿物油中)。搅拌半小时，加入1.5当量乙基碘，搅拌18小时，用1N盐酸调节至pH7.0。真空浓缩并在水和二氯甲烷中分配。硫酸镁干燥有机层，真空浓缩。经硅胶层析残留物，用甲醇-二氯甲烷(用氨饱和)(5-95)洗脱得到白色固体的产物，mp=112.6℃。
实施例55
按照实施例54(40.0-B)的方法，但是用苄基溴代替乙基碘，得到为白色固体的产物，mp=108℃。
实施例56
按照实施例54的方法，但是用溴代乙烯胺代替乙基碘，得到为白色固体的产物，mp=138.3℃。
实施例57
按照实施例54的方法，但是用甲磺酰氯代替乙基碘，得到为白色固体的产物，mp=136.3℃。
实施例58
按照实施例54的方法，但是用溴代乙酸叔丁酯代替乙基碘，得到为黄色固体的产物，mp=120-127℃。
实施例59
使实施例58的产物溶于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，搅拌1小时。真空浓缩。经制备性硅胶TLC层析残留物，用甲醇-二氯甲烷(10-90)展开，得到粉红色固体产物，mp=198℃。
实施例60
使1.0当量制备实施例8步骤D的(+)产物溶于含有1.0当量的2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基异硫代氰酸酯的二氯甲烷中。搅拌6天，然后用1N盐酸洗涤，接着用1N氢氧化钠洗涤。经硫酸镁干燥有机层，真空浓缩。经硅胶层析残留物，用氨饱和的甲醇-二氯甲烷(2-98)洗脱，，得到白色固体产物，mp=156.7-157.9℃。
实施例61
使制备实施例8步骤D的1.0当量(+)产物溶于含有2.5当量的无水碳酸钠和2.2当量的4-氯代吡啶盐酸盐的DMF中，于100℃加热5天。冷却至25℃，加入水并过滤沉淀。使该沉淀溶于二氯甲烷中，用1N盐酸洗涤，接着用1N氢氧化钠洗涤。经硫酸镁干燥有机层，真空浓缩。经硅胶层析残留物，得到白色固体的产物，mp=128.6℃。
实施例62
使制备实施例46的471.4mg(0.617mmol)产物溶于2ml的6M盐酸中，于室温下搅拌该溶液过夜。将反应混合物加入20ml水中，过滤生成的沉淀并用0.1M盐酸洗涤。经快速层析(C-18反相硅胶，50％甲醇/水-90％甲醇/水梯度洗脱)。使生成的物质溶于甲醇并加入到水中，经过滤和干燥后得到目的化合物，为白色固体(334.7mg,mp=147.1-154.3℃，以2℃-3℃速率/分钟加热)。
实施例63
使制备实施例62的产物(63.8mg,0.0884mmol)产物溶于二氯甲烷中，加入三氯乙酰基异氰酸酯(12μl)。24小时后，再加入三氯乙酰基异氰酸酯(12μl)。24小时后，通过制备性TLC(5％乙醇/二氯甲烷)纯化反应混合物。使分离的物质溶于二氯甲烷中，加入己烷中，蒸发生成的悬浮液，得到目的化合物，为白色固体(51.6mg,mp=165.4-178.5℃，以2℃-3℃速率/分钟加热)。
实施例64
使制备实施例62的产物(151.4mg,0.2097mmol)产物溶于二氯甲烷中，加入三氯乙酰基异氰酸酯(40μl)。15分钟后，再加入三氯乙酰基异氰酸酯(6μl)。再过15分钟后，加入甲醇，蒸发该混合物至干燥。使残留物悬浮于甲醇/THF中，加入碳酸钾(无水，15.9mg,0.115mmol)。3小时后，通过快速层析(5％乙醇/二氯甲烷)纯化反应混合物。使生成的物质溶于甲醇中，加入水中，经过滤和干燥后得到目的化合物，为白色固体(mp=165.4-178.5℃，以2℃-3℃/分钟速率加热)。
测试
根据WO95/10516(1995年4月20日公开)所述的测试方法测定FPTIC50(法呢基蛋白转移酶的抑制，体外酶测试)、GGPTIC50(香叶基香叶基蛋白转移酶的抑制，体外酶测试)和COS细胞IC50(细胞-基测试)。根据WO95/10516所述的测试方法可以测定细胞垫测试和抗肿瘤活性(体内抗肿瘤研究)。WO95/10516的公开内容通过引用结合到本文中。
按照与上述基本相同的方法可以进行其它一些测试，但是用另外的指示剂肿瘤细胞系代替T24-BAG细胞。这些测试可以用表达激活的K-ras基因的DLD-1-BAG人结肠癌细胞或表述激活的K-ras基因的SW620-BAG人结肠癌细胞进行。用本领域已知的其它肿瘤细胞系也可以证实本发明化合物抑制其它类型癌细胞的活性。
软琼脂测定：
无贴壁依赖性生长是致瘤细胞系的特征。将人肿瘤细胞悬浮于含有0.3％琼脂糖和指定浓度的法呢基转移酶抑制剂的生长培养基中。将溶液涂在用含有相同浓度的法呢基转移酶抑制剂作为上层的0.6％琼脂糖固化的生长培养基上。待上层固化后，将培养板于37℃、5％二氧化碳下孵育10-16天使集落生长。孵育后，用MTT(3-[4,5-二甲基-噻唑-2-基]-2,5-二苯基溴化四唑鎓，噻唑兰)(1mg/ml的PBS溶液)涂于所述琼脂上进行集落染色。对这些集落进行计数并计算IC50。
化合物2.0,3.0,4.0,5.0,7.0,12.0,13.0,16.1,17.1,27.0,29.0,26.0,28.0,30.0,31.0,4.0-B,5.0-B,15.0-B,25.0-B,27.0-B,28.0-B,29.0-B,31.0-B,36.0-B,40.0-B,41.0-B,42.0-B,43.0-B,45.0-B,46.0-B,47.0-B,48.0-B,61.0-B,62.0-B,66.0-B,73.0-B,78.0-B,80.0-B,83.0-B,84.0-B,91.0-B,93.0-B,94.0-B,98.0-B和100.0-B的FPTIC50(H-ras)在0.8-＞300nM(纳摩尔)范围内。
化合物27.0,28.0,31.0,4.0-B,5.0-B和98.0-B的FPTIC50(K-ras)在16-782nM范围内。
化合物27.0,28.0,29.0,30.0和31.0的Cos细胞IC50在12-＞1000nM范围内。
式31.0(实施例29)化合物的GGPTIC50为＞7.5μM和式28.0(实施例30的GGPTIC50为＞9.6μM。
化合物27.0,4.0-B,5.0-B,15.0-B,25.0-B,27.0-B,28.0-B,29.0-B,31.0-B,36.0-B,40.0-B,41.0-B,42.0-B,43.0-B,45.0-B,46.0-B,47.0-B,48.0-B,62.0-B,66.0-B,73.0-B,78.0-B,83.0-B,84.0-B,91.0-B,93.0-B,94.0-B,98.0-B和100.0-B的Cos细胞IC50在7-＞1000nM范围内。
化合物27.0,5.0-B,15.0-B,25.0-B,27.0-B,28.0-B,29.0-B,31.0-B,36.0-B,40.0-B,41.0-B,42.0-B,43.0-B,45.0-B,46.0-B,47.0-B,48.0-B,62.0-B,66.0-B,73.0-B,78.0-B,80.0-B,83.0-B,84.0-B,91.0-B,93.0-B,94.0-B,98.0-B和100.0-B的软琼脂IC50在90-＞500nM范围内。
在由本发明所述的化合物制备药用组合物时，惰性的药学上可接受的载体可以为固体或液体。固体制剂包括粉剂、片剂、分散颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。粉剂和片剂含有约5-约70％的活性组分。适当的固体载体是本领域已知的，如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖。片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊剂为适合口服给药的固体剂型。
制备栓剂时，首先将低熔点的蜡如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物融化，通过搅拌将活性组分均匀分散其中。然后将融化的均匀混合物倾至适当大小的模中，使其冷却而固化。
液体制剂包括溶液、悬浮液和乳液。适合胃肠外注射的实例为水或水-丙二醇溶液。
液体制剂也可以包括供鼻内给药的溶液。
适合吸入的气溶胶制剂可包括溶液和粉末形式的固体，它们可以与药学上可接受的载体例如惰性压缩气体混合。
也包括在使用前即刻将其转化为供口服或胃肠外给药的液体形式制剂的固体形式制剂。此类液体形式的制剂包括溶液、悬浮液和乳液。
也可以将本发明的化合物透皮给药。透皮组合物可以为霜剂、洗剂、气溶胶和/或乳剂，包括在本领域内为此目的而常用的基质或药库型的透皮贴剂。
优选该化合物口服给药。
优选该药用制剂为单位剂型。为此类剂型时，该制剂可以分为含有适当量(如达到所需目的的有效量)的活性组分的单位剂量。
制剂的单位剂型中活性化合物的量可以根据具体的使用情况在约0.1mg-1000mg、更优选在约1mg-300mg之间变化或调整。
根据病人的需要和治疗的疾病的严重程度可以改变使用的实际剂量。确定特殊情况下的合适剂量应在本领域技术人员的专业范围内。一般而言，治疗用比该化合物的最佳剂量稍小的剂量开始。此后，逐渐增加剂量至在特定情况下达到最佳效果。为方便起见，根据需要可以将每日总剂量分开，并在全天中分次给药。
在考虑了各种因素如病人的年龄、身体状况和大小(size)以及治疗的症状的严重程度后，根据医师的判断调整本发明的化合物及其药学上可接受的盐的用量和给药次数。口服给药的一般推荐剂量方案为每天10mg-2000mg、优选每天10-1000mg，每天分2-4次给药以阻断肿瘤生长。当在该剂量范围内给药时，所述化合物是无毒性的。
下列为含有本发明化合物的药用剂型的实施例。本发明的药用组合物方面的范围不受所提供的实施例的限制。
药物剂型实施例
实施例A-片剂序号 成分mg/片 mg/片1活性化合物100 5002乳糖USP122 1133玉米淀粉，食用级，为纯净水中10％的糊30 404玉米淀粉，食用级45 405硬脂酸镁3 7 合计300 700生产方法
将序号1和2的成分在适合的混合器中混合10-15分钟。将与序号3成分的混合物制粒。如果需要可通过粗筛(如1/4”,0.63cm)磨碎湿颗粒。干燥该湿颗粒。如果需要，过筛干燥的颗粒并使其与序号4的成分混合10-15分钟。加入序号5的成分并混合1-3分钟。在合适的压片机上将该混合物压片成适当的大小和重量。
实施例B-胶囊序号 成分mg/胶囊 mg/胶囊1活性化合物100 5002乳糖USP106 1233玉米淀粉，食用级 40 704硬脂酸镁NF 7 7 合计 253 700生产方法
将序号1、2和3的成分在适合的混合器中混合10-15分钟。加入序号4的成分并混合1-3分钟。在合适的包囊机上将该混合物填入两半-的硬明胶胶囊中。
尽管结合以上提出的具体实施方案描述了本发明，但是它的许多选择方案、修改和变化对本领域技术人员来说应是显而易见的。所有这些选择方案、修改和变化都将认为是在本发明的实质和范围内。