一种能够抑制土传病害的秸秆腐熟剂的制备方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201310612137.8

申请日:

20131128

公开号:

CN103642782B

公开日:

20160518

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:

IPC分类号:

C12N11/02,A01P3/00,C05F17/00,C05F11/08,C12R1/125,C12R1/07,C12R1/69,C12R1/66

主分类号:

C12N11/02,A01P3/00,C05F17/00,C05F11/08,C12R1/125,C12R1/07,C12R1/69,C12R1/66

申请人:

南京宁粮生物工程有限公司

发明人:

吴昊,梁晓辉,陈立华,管永祥,梁永红,邵孝侯,薛平

地址:

210000 江苏省南京市江宁区东山泉水工业园区

优先权:

CN201310612137A

专利代理机构:

江苏圣典律师事务所

代理人:

杨文晰;孙忠浩

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内容摘要

本发明公开了一种能够抑制土传病害的秸秆腐熟剂的制备方法,其特征在于用具有纤维素分解功能的构巢曲霉、米曲霉、枯草芽孢杆菌、酵母菌和具有生物防治功能短小芽孢杆菌固体复合制备。该制品能够有效地加速还田秸秆的腐烂速度,同时能够抑制水稻纹枯病、水稻稻瘟病、小麦纹枯病等病原菌的生长。田间施用该腐熟剂后秸秆分解速度加快,其中秸秆失重率显著增加、秸秆拉力显著降低;土壤病原菌拮抗芽孢杆菌数量显著增加,病原性微生物数量显著降低。

权利要求书

1.一种抑制土传病害秸秆腐熟剂的制备方法,包括如下步骤:步骤一,构巢曲霉固体吸附菌剂的制备,首先制备PDA培养液,以配制1L培养基计,用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮,沸腾后煮30min,用纱布过滤后,滤液加20g普通蔗糖,定容至1000ml,121℃灭菌20min既得;将构巢曲霉接种到PDA培养液中,进行液体发酵生产,其发酵生产的条件为:初始pH自然,培养温度为25℃,溶氧,所述溶氧的通气量范围为30-100%,170rpm,发酵中后期形成菌丝片段,发酵液菌株的菌落形成单位≥1×10cfuml;构巢曲霉的发酵液按照40%(v:w)加入麦麸,最后采用真空干燥机干燥至含水量低于5%,粉碎机粉碎成菌种粉,制得构巢曲霉固体吸附菌剂,低温保存备用;步骤二,米曲霉固体吸附菌剂的制备,首先PDA培养液配制,以配制1L培养基计,用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮,沸腾后煮30min,用纱布过滤后,滤液加20g普通蔗糖,定容至1000ml,121℃灭菌20min,既得;将米曲霉接种到PDA培养液中,进行液体发酵生产,其发酵生产的条件为:培养温度28℃,溶氧,所述溶氧的通气量范围为40-90%,120-180rpm,发酵中后期形成菌丝片段,发酵液菌株的菌落形成单位≥1×10cfuml;米曲霉发酵液按照40%(v:w)加入麦麸,真空干燥机干燥至含水量低于5%,粉碎机粉碎成菌种粉,制得米曲霉固体吸附菌剂,低温保存备用;步骤三,枯草芽孢杆菌固体吸附菌剂的制备首先配制牛肉膏蛋白胨培养基,配方为,以配置1L培养基计:采用牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl10g,自来水1000ml,混合,121℃灭菌20min既得;将枯草芽孢杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培养基培养,所述的培养条件为:培养温度37℃,摇床转速150rpm,培养时间24小时,种子含菌量大于1×10cfuml,制得种子;将种子按照5%比例接种到牛肉膏蛋白胨培养基进行液体发酵生产,其发酵生产的条件为:初始pH范围为7.0-7.5,培养温度28~37℃,溶氧通气量范围为30-100%,150-220rpm,发酵后期发酵液该菌株的菌落形成单位≥1×10cfuml;枯草芽孢杆菌发酵液按照50%(v:w)加入麦麸,真空干燥机干燥至含水量低于5%,粉碎机粉碎成菌种粉,制得枯草芽孢杆菌固体吸附菌剂,低温保存备用;步骤四,酵母菌固体吸附菌剂的制备首先配制豆芽汁培养基,其配方为,以1L培养基计:称新鲜黄豆芽100g,葡萄糖35g,加入1000ml水,混合后煮沸30min,纱布过滤,滤液加35g葡萄糖,115℃灭菌30min,既得;将酵母菌接种到豆芽汁培养基培养,培养条件为:培养温度30℃,摇床转速130-160rpm,培养时间36小时,种子含菌量大于1×10cfuml,种子按照8%比例接种到装有豆芽汁培养基的发酵罐进行液体发酵生产,其发酵生产的条件为:初始pH自然,培养温度28~32℃,溶氧通气量范围为30-100%,120-190rpm,发酵液该菌株的菌落形成单位≥1×10cfuml,发酵液浓度变稠;酵母菌发酵液按照40%(v:w)加入麦麸,真空干燥机干燥至含水量低于5%,粉碎机粉碎成菌种粉,制得酵母菌固体吸附菌剂,低温保存备用;步骤五,短小芽孢杆菌固体吸附菌剂的制备首先配制牛肉膏蛋白胨培养基,其配方为,以1L培养基计:将牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl10g和自来水1000ml混合,于121℃灭菌20min既得;将短小芽孢杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培养基培养,培养条件为:培养温度37℃,摇床转速130-160rpm,培养时间24小时,种子含菌量大于1×10cfuml,种子按照7%比例接种到装有牛肉膏蛋白胨培养基的发酵罐进行液体发酵生产,其发酵生产的条件为:初始pH范围为7.0-7.5,培养温度28-35℃,溶氧通气量范围为30-100%,120-160rpm,发酵后期部分菌株形成芽孢,发酵液该菌株的菌落形成单位≥1×10cfuml,发酵液浓度变稠;短小芽孢杆菌发酵液按照40%(v:w)加入麦麸,真空干燥机干燥至含水量低于5%,粉碎机粉碎后,制得短小芽孢杆菌固体吸附菌剂,低温保存备用;步骤六将构巢曲霉固体吸附菌剂、米曲霉固体吸附菌剂、枯草芽孢杆菌固体吸附菌剂、酵母菌固体吸附菌剂和短小芽孢杆菌固体吸附菌剂按照质量比1:1.5:1:1.5:2在无菌条件下复合搅拌,在无菌条件下包装,成品即为一种能够抑制土传病害的秸秆腐熟剂。 2.如权利要求1所述的一种抑制土传病害秸秆腐熟剂的制备方法,其特征在于所制得的抑制土传病害秸秆腐熟剂,对水稻和小麦纹枯病病原菌一立枯丝核菌的抑制率分别为97%和95%,对水稻稻瘟病病原菌稻梨孢抑制率90%。 3.如权利要求1所述的一种抑制土传病害秸秆腐熟剂的制备方法,其特征在于,所制得的抑制土传病害秸秆腐熟剂中构巢曲霉含量大于0.2×10cfug、米曲霉含量大于0.2×10cfug、枯草芽孢杆菌大于0.8×10cfug、酵母菌大于0.2×10cfug、短小芽孢杆菌大于1.0×10cfug,有机质含量高于50%,含水率低于15%。

说明书

技术领域

本发明专利涉及一种能够抑制土传病害的秸秆腐熟剂及其制备方法,属于农 业微生物应用技术领域。

背景技术

我国秸秆年产量约10亿吨,秸秆主要成分为纤维素类多糖,其次还含有氮、 磷、钾等植物所需的元素。秸秆腐烂之后能增加土壤有机质和土壤不同粒级团聚 体数量,从而增加土壤通透性和持水能力,减少土壤板结;纤维素分解可以为微 生物繁殖提供能源,从而增加土壤微生物数量及多样性,增加土壤有机物转化、 能量转移的能力,提升土壤质量。

随着农村劳动力向城市的大量转移和农业机械化程度的提高,水稻和小麦等 主要农作物的机械收割比例越来越高,机械收割之后有大量秸秆滞留农田。秸秆 滞留农田,严重影响当季作物的种植,如麦杆影响下一季水稻苗的定植,即使栽 种下水稻苗也容易“漂秧”,使水稻秧苗集中于田间部分位置,造成田间秧苗密 度分布不均,影响水稻产量。同样,水稻或者麦子的秸秆容易缠绕翻地旋耕机械, 影响土壤耕作,同时秸秆容易造成表层土壤空隙过大,土壤极易失水,影响麦子 出苗。秸秆是很多病原菌的附着体和病害传播的媒介,尤其土传类病害,如引起 水稻和小麦纹枯病的立枯丝核菌能够形成菌核附着在秸秆残体上长期存活,一旦 条件成熟就能够萌发感染植株。

农村处理秸杆问题的常见方法多采用原地焚烧,这种处理方式不仅造成大量 的资源浪费,而且引起很严重的空气污染。采用秸秆腐熟剂加速秸秆腐烂,有效 的遏制焚烧现象。但很多腐熟剂不能够抑制病原菌,种植户因担心病害的传播, 会将秸秆从农田搬出堆置在田头,秸秆腐烂后大量的污水随着农田排水和自然降 水进入自然水体造成水体污染。

针对以上问题,本发明采用具有高效降解秸秆能力的微生物菌株和高效抑制 土传病害的生物防治菌株制作秸秆腐熟剂,该腐熟剂在分解秸秆的过程中可以繁 殖大量的生物防治菌株,有效的抑制土传病原菌的萌发。

发明内容

本发明专利的目的在于提供一种抑制土传病害秸秆腐熟剂的制 备方法,包括如下步骤:

步骤一,构巢曲霉固体吸附菌剂的制备,

首先制备PDA培养液,以配制1L培养基计,用200g土豆削皮 后切成小块放到水里煮,沸腾后煮30min,用纱布过滤后,滤液加 20g普通蔗糖,定容至1000ml,121℃灭菌20min既得。

将构巢曲霉接种到PDA培养液中,进行液体发酵生产,其发酵 生产的条件为:初始pH自然,培养温度为25℃,溶氧,所述溶氧的 通气量范围为30~100%,170rpm,发酵中后期形成菌丝片段,发酵 液菌株的菌落形成单位≥1×107cfuml-1。构巢曲霉的发酵液按照40% (v:w)加入麦麸,最后采用真空干燥机干燥至含水量低于5%,粉 碎机粉碎成菌种粉,制得构巢曲霉固体吸附菌剂,低温保存备用。

步骤二,米曲霉固体吸附菌剂的制备,

首先PDA培养液配制,以配制1L培养基计,用200g土豆削皮 后切成小块放到水里煮,沸腾后煮30min,用纱布过滤后,滤液加 20g普通蔗糖,定容至1000ml,121℃灭菌20min,既得。

将米曲霉接种到PDA培养液中,进行液体发酵生产,其发酵生 产的条件为:培养温度28℃,溶氧,所述溶氧的通气量范围为40~ 90%,120-180rpm,发酵中后期形成菌丝片段,发酵液菌株的菌落形 成单位≥1×107cfuml-1。米曲霉发酵液按照40%(v:w)加入麦麸, 真空干燥机干燥至含水量低于5%,粉碎机粉碎成菌种粉,制得米曲 霉固体吸附菌剂,低温保存备用。

步骤三,枯草芽孢杆菌固体吸附菌剂的制备

首先液体种子培养基和液体发酵培养基采用牛肉膏蛋白胨培养 基,其配方为,以配置1L培养基计:采用牛肉膏3g,蛋白胨10g, NaCl10g,自来水1000ml,混合,121℃灭菌20min既得。

将枯草芽孢杆菌接种到液体种子培养基培养,所述的培养条件 为:培养温度37℃,摇床转速150rpm,培养时间24小时,种子含菌 量大于1×109cfuml-1,制得种子,

将种子按照5%比例接种到液体发酵培养基进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为:初始pH范围为7.0~7.5,培养温度28~37℃, 溶氧通气量范围为30~100%,150-220rpm,发酵后期发酵液该菌株 的菌落形成单位≥1×109cfuml-1。枯草芽孢杆菌发酵液按照50%(v: w)加入麦麸,真空干燥机干燥至含水量低于5%,粉碎机粉碎成菌 种粉,制得枯草芽孢杆菌固体吸附菌剂,低温保存备用。

步骤四,酵母菌固体吸附菌剂的制备

首先种子培养和发酵用的用豆芽汁培养基的制备,以1L培养基 计:称新鲜黄豆芽100g,葡萄糖35g,加入1000ml水,混合后煮沸 30min,纱布过滤,滤液加35g葡萄糖,115℃灭菌30min,既得。

将酵母菌接种到种子培养基培养,培养条件为:培养温度30℃, 摇床转速130~160rpm,培养时间36小时,种子含菌量大于1×108cfu ml-1,种子按照8%比例接种到发酵罐进行液体发酵生产,其发酵生 产的条件为:初始pH自然,培养温度28~32℃,溶氧通气量范围为 30~100%,120~190rpm,发酵液该菌株的菌落形成单位≥1×108cfu ml-1,发酵液浓度变稠;酵母菌发酵液按照40%(v:w)加入麦麸, 真空干燥机干燥至含水量低于5%,粉碎机粉碎成菌种粉,制得酵母 菌固体吸附菌剂,低温保存备用。

步骤五,短小芽孢杆菌固体吸附菌剂的制备

首先种子培养和发酵培养所用的牛肉膏蛋白胨液体培养基的制 备,以1L培养基计:将牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl10g和自来水 1000ml混合,于121℃灭菌20min既得。

将短小芽孢杆菌接种到种子培养基培养,培养条件为:培养温度 37℃,摇床转速130~160rpm,培养时间24小时,种子含菌量大于1×109cfuml-1,种子按照7%比例接种到发酵罐进行液体发酵生产,其发酵 生产的条件为:初始pH范围为7.0~7.5,培养温度28~35℃,溶氧通 气量范围为30~100%,120~160rpm,发酵后期部分菌株形成芽孢, 发酵液该菌株的菌落形成单位≥1×109cfuml-1,发酵液浓度变稠;短 小芽孢杆菌发酵液按照40%(v:w)加入麦麸,真空干燥机干燥至 含水量低于5%,粉碎机粉碎成菌种粉,短小芽孢杆菌固体吸附菌剂, 低温保存备用。

步骤六

将构巢曲霉固体吸附菌剂、米曲霉固体吸附菌剂、枯草芽孢杆菌 固体吸附菌剂、酵母菌固体吸附菌剂和短小芽孢杆菌固体吸附菌剂按 照质量比1:1.5:1:1.5:2在无菌条件下复合搅拌,在无菌条件下 包装,成品即为一种能够抑制土传病害的秸秆腐熟剂。

其特征在于所制得的抑制土传病害秸秆腐熟剂,对水稻和小麦纹 枯病病原菌-立枯丝核菌的抑制率分别为97%和95%,对水稻稻瘟病 病原菌稻梨孢抑制率90%。

其特征在于,所制得的抑制土传病害秸秆腐熟剂中构巢曲霉含量 大于0.2×108cfug-1、米曲霉含量大于0.2×108cfug-1、枯草芽孢杆菌 大于0.8×108cfug-1、酵母菌大于0.2×108cfug-1、短小芽孢杆菌大于 1.0×108cfug-1,有机质质量比含量高于50%,含水率低于15%

有益效果

该秸秆腐熟剂可用于纤维素含量较高的作物秸秆的分解,在秸秆 分解过程中形成大量的抑制土传病害的生物防治菌株,能够有效的杀 灭附着在植株秸秆上的病原菌,本发明产品与市场产品比较具有以下 优点:

施用后土壤中立枯丝核菌数量、尖孢镰刀菌数量较施用常规市售 腐熟剂处理低80%左右。

施用该腐熟剂后,土壤中抑制立枯丝核菌数量、尖孢镰刀菌芽孢 杆菌数量较施用常规腐熟剂处理增加80~100倍。

附图说明

下面结合附图及实施方式对本发明作进一步详细的说明:

图1为不同处理秸秆拉力变化;

图2为不同处理秸秆失重率变化;

图3为不同处理麦田土壤微生物数量变化;

图4为不同处理田间水稻秧苗漂秧率;

图5为不同处理稻田土壤微生物数量变化。

具体实施方式

下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。

菌剂生产通过以下实例来实现

1.将构巢曲霉接种到PDA培养液中,进行液体发酵生产,其发 酵生产的条件为:初始pH自然,培养温度25℃,溶氧:通气量范围 为30~100%,170rpm,发酵中后期形成菌丝片段,发酵液菌株的菌 落形成单位≥1×107cfuml-1;所用PDA培养液配制方法为(以配制 1L培养基为例):用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮,沸腾后 煮30min,用纱布过滤后,滤液加20g普通蔗糖,定容至1000ml, 121℃灭菌20min。构巢曲霉的发酵液按照40%(v:w)加入麦麸, 真空干燥机干燥至含水量低于5%,粉碎机粉碎成菌种粉,低温保存 备用。

2.将米曲霉接种到PDA培养液中,进行液体发酵生产,其发酵 生产的条件为:培养温度28℃,溶氧:通气量范围为40~90%, 120-180rpm,发酵中后期形成菌丝片段,发酵液菌株的菌落形成单位 ≥1×107cfuml-1;所用PDA培养液配制方法为(以配制1L培养基为 例):用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮,沸腾后煮30min, 用纱布过滤后,滤液加20g普通蔗糖,定容至1000ml,121℃灭菌 20min。米曲霉发酵液按照40%(v:w)加入麦麸,真空干燥机干燥 至含水量低于5%,粉碎机粉碎成菌种粉,低温保存备用。

3.将枯草芽孢杆菌接种到液体种子培养基培养,培养条件为: 培养温度37℃,摇床转速150rpm,培养时间24小时,种子含菌量大 于1×109cfuml-1,种子按照5%比例接种到发酵罐进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为:初始pH范围为7.0~7.5,培养温度28~37℃, 溶氧通气量范围为30~100%,150-220rpm,发酵后期发酵液该菌株 的菌落形成单位≥1×109cfuml-1。所用的液体的种子培养基和液体发 酵培养基的配方均为,按照1L培养基配制:牛肉膏3g,蛋白胨10g, NaCl10g,自来水1000ml,121℃灭菌20min。枯草芽孢杆菌发酵液 按照50%(v:w)加入麦麸,真空干燥机干燥至含水量低于5%,粉 碎机粉碎成菌种粉,低温保存备用。

4.将酵母菌接种到豆芽汁种子培养基培养,培养条件为:培养 温度30℃,摇床转速130~160rpm,培养时间36小时,种子含菌量大 于1×108cfuml-1,种子按照8%比例接种到发酵罐进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为:初始pH自然,培养温度28~32℃,溶氧通气 量范围为30~100%,120~190rpm,发酵液该菌株的菌落形成单位≥ 1×108cfuml-1,发酵液浓度变稠;所用的液体的种子培养基和发酵培 养基的配方为,按照1L培养基配制:称新鲜黄豆芽100g,葡萄糖35g, 加入1000ml水,煮沸30min,纱布过滤,滤液加35g葡萄糖,115 ℃灭菌30min。酵母菌发酵液按照40%(v:w)加入麦麸,真空干燥 机干燥至含水量低于5%,粉碎机粉碎成菌种粉,低温保存备用。

5.将短小芽孢杆菌接种到液体种子培养基培养,培养条件为: 培养温度37℃,摇床转速130~160rpm,培养时间24小时,种子含菌 量大于1×109cfuml-1,种子按照7%比例接种到发酵罐进行液体发酵 生产,其发酵生产的条件为:初始pH范围为7.0~7.5,培养温度28~35 ℃,溶氧通气量范围为30~100%,120~160rpm,发酵后期部分菌株 形成芽孢,发酵液该菌株的菌落形成单位≥1×109cfuml-1,发酵液浓 度变稠;所用的液体的种子培养基和发酵培养基的配方为,按照1L 培养基配制:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl10g,自来水1000ml, 121℃灭菌20min。短小芽孢杆菌发酵液按照40%(v:w)加入麦麸, 真空干燥机干燥至含水量低于5%,粉碎机粉碎成菌种粉,低温保存 备用。

6.构巢曲霉固体吸附菌剂、米曲霉固体吸附菌剂、枯草芽孢杆 菌固体吸附菌剂、酵母菌固体吸附菌剂和短小芽孢杆菌固体吸附菌剂 按照质量比1:1.5:1:1.5:2在无菌条件下复合搅拌,在无菌条件 下包装,成品即为抑制土传病害的秸秆腐熟剂。

腐熟剂应用试验1秸秆腐熟剂加速水稻秸秆腐熟和抑制土传病 害效果验证:

供试土壤为黏质土,供试秸秆为水稻秸杆,下一季作物为小麦。 设置如下处理:处理1.对照,土壤不施用任何腐熟剂;处理2.施用市 场上销售腐熟剂2kg/亩;处理3.施用本发明腐熟剂2kg/亩。每处理小 区面积1m×1m,12个重复。三个处理添加秸秆产量按照水稻经济系 数为0.5计算,为每小区施用1.0kg秸秆。每小区施用3g秸秆腐熟剂。 实验测定小麦种植以及生长过程中秸秆拉力和失重率的变化,土壤尖 孢镰刀菌(容易引起植物枯萎土传性病原真菌)和立枯丝核菌(可以 引起水稻和小麦纹枯病)数量,土壤中抑制尖孢镰刀菌和立枯丝核菌 芽孢杆菌数量。

实验结果表明,实验开始后第15天、35天和60天,相较于对 照处理,施用本发明秸秆腐熟剂的处理秸秆拉力显著降低;而且施用 本发明秸秆腐熟剂处理的秸秆拉力比市售秸秆腐熟剂处理秸秆的拉 力降低10%-38%(图1)。秸秆的失重率测定显示,施用本发明秸秆 腐熟剂处理的秸秆失重率显著高于对照处理,秸秆失重率增加1.7-2.2 倍;本发明处理秸秆失重率也高于市售腐熟剂处理的秸秆(图2)。 麦子收割后土壤微生物测定显示,施用本发明处理土壤中尖孢镰刀菌 和立枯丝核菌数量显著地低于对照处理,分别只有对照处理的11%和 20%;本发明处理土壤尖孢镰刀菌和立枯丝核菌数量也显著地低于市 售秸秆腐熟剂处理,分别只有对照处理的20%和22%,市售秸秆腐熟 剂对土壤病原性真菌没有很好的抑制效果。土壤中可以抑制病原菌的 芽孢杆菌数量测定显示,市售秸秆腐熟剂处理和对照处理没有显著差 别,但是本发明处理土壤抑制病原菌的芽孢杆菌数量比对照处理高约 100倍(图3)。

腐熟剂应用试验2秸秆腐熟剂加速小麦秸秆腐熟和抑制土传病 害效果验证:

供试土壤为黏质土,供试秸秆为小麦秸杆,下一季作物为水稻。 设置如下处理:处理1.对照,土壤不施用任何腐熟剂;处理2.施用市 场上销售腐熟剂2kg/亩;处理3.施用本发明腐熟剂2kg/亩。每处理在 秸秆全量还田大田中选取面积10m×10m面积作为测定的面积,每个 处理选取3个重复。实验测定水稻移栽后2~3天内降雨造成的“漂秧” 数量,土壤中尖孢镰刀菌(容易引起植物枯萎土传性病原真菌)和立 枯丝核菌(可以引起水稻和小麦纹枯病)数量,土壤中抑制尖孢镰刀 菌和立枯丝核菌芽孢杆菌数量。

实验结果表明,水稻秧苗移栽后2~3天内,由于降雨造成的“漂 秧”,施用本发明处理显著低于对照和市售腐熟剂处理(图4),施用 本发明处理秸秆手捏硬度比对照和市售腐熟剂处理秸秆的硬度低。水 稻收割后土壤微生物测定显示,施用本发明处理土壤中尖孢镰刀菌和 立枯丝核菌数量比对照处理分别降低了78%和88%;市售秸秆腐熟剂 对土壤病原性真菌没有很好的抑制效果。土壤中可以抑制病原菌的芽 孢杆菌数量测定显示,市售秸秆腐熟剂处理和对照处理没有显著差 别,但是本发明处理土壤抑制病原菌的芽孢杆菌数量比对照处理高约 85倍(图5)。

应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范 围。此外应理解,在阅读了本发明讲授的内容之后,本领域技术人员 可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附 权利要求书所限定的范围。

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1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201310612137.8 (22)申请日 2013.11.28 C12N 11/02(2006.01) A01P 3/00(2006.01) C05F 17/00(2006.01) C05F 11/08(2006.01) C12R 1/125(2006.01) C12R 1/07(2006.01) C12R 1/69(2006.01) C12R 1/66(2006.01) (73)专利权人 南京宁粮生物工程有限公司 地址 210000 江苏省南京市江宁区东山泉水 工业园区 (72)发明人 吴昊 梁晓辉 陈立华 管永祥 梁永红 邵孝侯 。

2、薛平 (74)专利代理机构 江苏圣典律师事务所 32237 代理人 杨文晰 孙忠浩 CN 1616648 A,2005.05.18, CN 101724560 A,2010.06.09, CN 102827773 A,2012.12.19, (54) 发明名称 一种能够抑制土传病害的秸秆腐熟剂的制备 方法 (57) 摘要 本发明公开了一种能够抑制土传病害的秸秆 腐熟剂的制备方法, 其特征在于用具有纤维素分 解功能的构巢曲霉、 米曲霉、 枯草芽孢杆菌、 酵母 菌和具有生物防治功能短小芽孢杆菌固体复合制 备。 该制品能够有效地加速还田秸秆的腐烂速度, 同时能够抑制水稻纹枯病、 水稻稻瘟病、 小麦纹。

3、枯 病等病原菌的生长。田间施用该腐熟剂后秸秆分 解速度加快, 其中秸秆失重率显著增加、 秸秆拉力 显著降低 ; 土壤病原菌拮抗芽孢杆菌数量显著增 加, 病原性微生物数量显著降低。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 张锦广 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书2页 说明书5页 附图3页 CN 103642782 B 2016.05.18 CN 103642782 B 1.一种抑制土传病害秸秆腐熟剂的制备方法, 包括如下步骤: 步骤一, 构巢曲霉固体吸附菌剂的制备, 首先制备PDA培养液, 以配制1L培养基计, 用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮,。

4、 沸腾后煮30min, 用纱布过滤后, 滤液加20g普通蔗糖, 定容至1000ml, 121灭菌20min既 得; 将构巢曲霉接种到PDA培养液中, 进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为: 初始pH自 然, 培养温度为25, 溶氧, 所述溶氧的通气量范围为30-100, 170rpm, 发酵中后期形成菌 丝片段, 发酵液菌株的菌落形成单位 1107cfuml-1; 构巢曲霉的发酵液按照40(v: w)加入麦麸, 最后采用真空干燥机干燥至含水量低于5, 粉碎机粉碎成菌种粉, 制得构巢 曲霉固体吸附菌剂, 低温保存备用; 步骤二, 米曲霉固体吸附菌剂的制备, 首先PDA培养液配制, 以配制1L培。

5、养基计, 用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮, 沸腾后煮30min, 用纱布过滤后, 滤液加20g普通蔗糖, 定容至1000ml, 121灭菌20min, 既 得; 将米曲霉接种到PDA培养液中, 进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为: 培养温度28 , 溶氧, 所述溶氧的通气量范围为40-90, 120-180rpm, 发酵中后期形成菌丝片段, 发酵 液菌株的菌落形成单位 1107cfuml-1; 米曲霉发酵液按照40(v:w)加入麦麸, 真空干 燥机干燥至含水量低于5, 粉碎机粉碎成菌种粉, 制得米曲霉固体吸附菌剂, 低温保存备 用; 步骤三, 枯草芽孢杆菌固体吸附菌剂的制备 首先配。

6、制牛肉膏蛋白胨培养基, 配方为, 以配置1L培养基计: 采用牛肉膏3g, 蛋白胨 10g, NaCl10g, 自来水1000ml, 混合, 121灭菌20min既得; 将枯草芽孢杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培养基培养, 所述的培养条件为: 培养温度37, 摇床转速150rpm, 培养时间24小时, 种子含菌量大于1109cfuml-1, 制得种子; 将种子按照5比例接种到牛肉膏蛋白胨培养基进行液体发酵生产, 其发酵生产的条 件为: 初始pH范围为7.0-7.5, 培养温度2837, 溶氧通气量范围为30-100, 150- 220rpm, 发酵后期发酵液该菌株的菌落形成单位 1109cfuml-1;。

7、 枯草芽孢杆菌发酵液 按照50(v:w)加入麦麸, 真空干燥机干燥至含水量低于5, 粉碎机粉碎成菌种粉, 制得枯 草芽孢杆菌固体吸附菌剂, 低温保存备用; 步骤四, 酵母菌固体吸附菌剂的制备 首先配制豆芽汁培养基, 其配方为, 以1L培养基计: 称新鲜黄豆芽100g, 葡萄糖35g, 加 入1000ml水, 混合后煮沸30min, 纱布过滤, 滤液加35g葡萄糖, 115灭菌30min, 既得; 将酵母菌接种到豆芽汁培养基培养, 培养条件为: 培养温度30, 摇床转速130- 160rpm, 培养时间36小时, 种子含菌量大于1108cfuml-1, 种子按照8比例接种到装有 豆芽汁培养基的发。

8、酵罐进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为: 初始pH自然, 培养温度 2832, 溶氧通气量范围为30-100, 120-190rpm, 发酵液该菌株的菌落形成单位 1 108cfuml-1, 发酵液浓度变稠; 酵母菌发酵液按照40(v:w)加入麦麸, 真空干燥机干燥至 含水量低于5, 粉碎机粉碎成菌种粉, 制得酵母菌固体吸附菌剂, 低温保存备用; 步骤五, 短小芽孢杆菌固体吸附菌剂的制备 权利要求书 1/2 页 2 CN 103642782 B 2 首先配制牛肉膏蛋白胨培养基, 其配方为, 以1L培养基计: 将牛肉膏3g, 蛋白胨10g, NaCl10g和自来水1000ml混合, 于121。

9、灭菌20min既得; 将短小芽孢杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培养基培养, 培养条件为: 培养温度37, 摇床转 速130-160rpm, 培养时间24小时, 种子含菌量大于1109cfuml-1, 种子按照7比例接种 到装有牛肉膏蛋白胨培养基的发酵罐进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为: 初始pH范 围为7.0-7.5, 培养温度28-35, 溶氧通气量范围为30-100, 120-160rpm, 发酵后期部分 菌株形成芽孢, 发酵液该菌株的菌落形成单位 1109cfuml-1, 发酵液浓度变稠; 短小芽 孢杆菌发酵液按照40(v: w)加入麦麸, 真空干燥机干燥至含水量低于5, 粉碎机粉碎 后,。

10、 制得短小芽孢杆菌固体吸附菌剂, 低温保存备用; 步骤六 将构巢曲霉固体吸附菌剂、 米曲霉固体吸附菌剂、 枯草芽孢杆菌固体吸附菌剂、 酵母菌 固体吸附菌剂和短小芽孢杆菌固体吸附菌剂按照质量比1:1.5:1:1.5:2在无菌条件下复 合搅拌, 在无菌条件下包装, 成品即为一种能够抑制土传病害的秸秆腐熟剂。 2.如权利要求1所述的一种抑制土传病害秸秆腐熟剂的制备方法, 其特征在于所制得 的抑制土传病害秸秆腐熟剂, 对水稻和小麦纹枯病病原菌一立枯丝核菌的抑制率分别为 97和95, 对水稻稻瘟病病原菌稻梨孢抑制率90。 3.如权利要求1所述的一种抑制土传病害秸秆腐熟剂的制备方法, 其特征在于, 所制 。

11、得的抑制土传病害秸秆腐熟剂中构巢曲霉含量大于0.2108cfug-1、 米曲霉含量大于0.2 108cfug-1、 枯草芽孢杆菌大于0.8108cfug-1、 酵母菌大于0.2108cfug-1、 短小芽孢 杆菌大于1.0108cfug-1, 有机质含量高于50, 含水率低于15。 权利要求书 2/2 页 3 CN 103642782 B 3 一种能够抑制土传病害的秸秆腐熟剂的制备方法 技术领域 0001 本发明专利涉及一种能够抑制土传病害的秸秆腐熟剂及其制备方法, 属于农业微 生物应用技术领域。 背景技术 0002 我国秸秆年产量约10亿吨, 秸秆主要成分为纤维素类多糖, 其次还含有氮、 磷。

12、、 钾 等植物所需的元素。 秸秆腐烂之后能增加土壤有机质和土壤不同粒级团聚体数量, 从而增 加土壤通透性和持水能力, 减少土壤板结; 纤维素分解可以为微生物繁殖提供能源, 从而增 加土壤微生物数量及多样性, 增加土壤有机物转化、 能量转移的能力, 提升土壤质量。 0003 随着农村劳动力向城市的大量转移和农业机械化程度的提高, 水稻和小麦等主要 农作物的机械收割比例越来越高, 机械收割之后有大量秸秆滞留农田。 秸秆滞留农田, 严重 影响当季作物的种植, 如麦杆影响下一季水稻苗的定植, 即使栽种下水稻苗也容易 “漂秧” , 使水稻秧苗集中于田间部分位置, 造成田间秧苗密度分布不均, 影响水稻产量。

13、。 同样, 水稻 或者麦子的秸秆容易缠绕翻地旋耕机械, 影响土壤耕作, 同时秸秆容易造成表层土壤空隙 过大, 土壤极易失水, 影响麦子出苗。 秸秆是很多病原菌的附着体和病害传播的媒介, 尤其 土传类病害, 如引起水稻和小麦纹枯病的立枯丝核菌能够形成菌核附着在秸秆残体上长期 存活, 一旦条件成熟就能够萌发感染植株。 0004 农村处理秸杆问题的常见方法多采用原地焚烧, 这种处理方式不仅造成大量的资 源浪费, 而且引起很严重的空气污染。 采用秸秆腐熟剂加速秸秆腐烂, 有效的遏制焚烧现 象。 但很多腐熟剂不能够抑制病原菌, 种植户因担心病害的传播, 会将秸秆从农田搬出堆置 在田头, 秸秆腐烂后大量的。

14、污水随着农田排水和自然降水进入自然水体造成水体污染。 0005 针对以上问题, 本发明采用具有高效降解秸秆能力的微生物菌株和高效抑制土传 病害的生物防治菌株制作秸秆腐熟剂, 该腐熟剂在分解秸秆的过程中可以繁殖大量的生物 防治菌株, 有效的抑制土传病原菌的萌发。 发明内容 0006 本发明专利的目的在于提供一种抑制土传病害秸秆腐熟剂的制备方法, 包括如下 步骤: 0007 步骤一, 构巢曲霉固体吸附菌剂的制备, 0008 首先制备PDA培养液, 以配制1L培养基计, 用200g土豆削皮后切成小块放到水里 煮, 沸腾后煮30min, 用纱布过滤后, 滤液加20g普通蔗糖, 定容至1000ml, 1。

15、21灭菌20min既 得。 0009 将构巢曲霉接种到PDA培养液中, 进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为: 初始 pH自然, 培养温度为25, 溶氧, 所述溶氧的通气量范围为30100, 170rpm, 发酵中后期 形成菌丝片段, 发酵液菌株的菌落形成单位 1107cfuml-1。 构巢曲霉的发酵液按照40 (v: w)加入麦麸, 最后采用真空干燥机干燥至含水量低于5, 粉碎机粉碎成菌种粉, 制得构 说明书 1/5 页 4 CN 103642782 B 4 巢曲霉固体吸附菌剂, 低温保存备用。 0010 步骤二, 米曲霉固体吸附菌剂的制备, 0011 首先PDA培养液配制, 以配制1L培。

16、养基计, 用200g土豆削皮后切成小块放到水里 煮, 沸腾后煮30min, 用纱布过滤后, 滤液加20g普通蔗糖, 定容至1000ml, 121灭菌20min, 既得。 0012 将米曲霉接种到PDA培养液中, 进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为: 培养温 度28, 溶氧, 所述溶氧的通气量范围为4090, 120-180rpm, 发酵中后期形成菌丝片段, 发酵液菌株的菌落形成单位 1107cfuml-1。 米曲霉发酵液按照40(v: w)加入麦麸, 真 空干燥机干燥至含水量低于5, 粉碎机粉碎成菌种粉, 制得米曲霉固体吸附菌剂, 低温保 存备用。 0013 步骤三, 枯草芽孢杆菌固体吸附。

17、菌剂的制备 0014 首先液体种子培养基和液体发酵培养基采用牛肉膏蛋白胨培养基, 其配方为, 以 配置1L培养基计: 采用牛肉膏3g, 蛋白胨10g, NaCl10g, 自来水1000ml, 混合, 121灭菌 20min既得。 0015 将枯草芽孢杆菌接种到液体种子培养基培养, 所述的培养条件为: 培养温度37, 摇床转速150rpm, 培养时间24小时, 种子含菌量大于1109cfuml-1, 制得种子, 0016 将种子按照5比例接种到液体发酵培养基进行液体发酵生产, 其发酵生产的条 件为: 初始pH范围为7.07.5, 培养温度2837, 溶氧通气量范围为30100, 150- 220。

18、rpm, 发酵后期发酵液该菌株的菌落形成单位 1109cfuml-1。 枯草芽孢杆菌发酵液按 照50(v: w)加入麦麸, 真空干燥机干燥至含水量低于5, 粉碎机粉碎成菌种粉, 制得枯草 芽孢杆菌固体吸附菌剂, 低温保存备用。 0017 步骤四, 酵母菌固体吸附菌剂的制备 0018 首先种子培养和发酵用的用豆芽汁培养基的制备, 以1L培养基计: 称新鲜黄豆芽 100g, 葡萄糖35g, 加入1000ml水, 混合后煮沸30min, 纱布过滤, 滤液加35g葡萄糖, 115灭 菌30min, 既得。 0019 将酵母菌接种到种子培养基培养, 培养条件为: 培养温度30, 摇床转速130 160r。

19、pm, 培养时间36小时, 种子含菌量大于1108cfuml-1, 种子按照8比例接种到发酵罐 进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为: 初始pH自然, 培养温度2832, 溶氧通气量范 围为30100, 120190rpm, 发酵液该菌株的菌落形成单位 1108cfuml-1, 发酵液浓 度变稠; 酵母菌发酵液按照40(v: w)加入麦麸, 真空干燥机干燥至含水量低于5, 粉碎机 粉碎成菌种粉, 制得酵母菌固体吸附菌剂, 低温保存备用。 0020 步骤五, 短小芽孢杆菌固体吸附菌剂的制备 0021 首先种子培养和发酵培养所用的牛肉膏蛋白胨液体培养基的制备, 以1L培养基 计: 将牛肉膏3g,。

20、 蛋白胨10g, NaCl10g和自来水1000ml混合, 于121灭菌20min既得。 0022 将短小芽孢杆菌接种到种子培养基培养, 培养条件为: 培养温度37, 摇床转速 130160rpm, 培养时间24小时, 种子含菌量大于1109cfuml-1, 种子按照7比例接种到 发酵罐进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为: 初始pH范围为7.07.5, 培养温度2835 , 溶氧通气量范围为30100, 120160rpm, 发酵后期部分菌株形成芽孢, 发酵液该菌 株的菌落形成单位 1109cfuml-1, 发酵液浓度变稠; 短小芽孢杆菌发酵液按照40(v: 说明书 2/5 页 5 CN 。

21、103642782 B 5 w)加入麦麸, 真空干燥机干燥至含水量低于5, 粉碎机粉碎成菌种粉, 短小芽孢杆菌固体 吸附菌剂, 低温保存备用。 0023 步骤六 0024 将构巢曲霉固体吸附菌剂、 米曲霉固体吸附菌剂、 枯草芽孢杆菌固体吸附菌剂、 酵 母菌固体吸附菌剂和短小芽孢杆菌固体吸附菌剂按照质量比1: 1.5: 1: 1.5: 2在无菌条件下 复合搅拌, 在无菌条件下包装, 成品即为一种能够抑制土传病害的秸秆腐熟剂。 0025 其特征在于所制得的抑制土传病害秸秆腐熟剂, 对水稻和小麦纹枯病病原菌-立 枯丝核菌的抑制率分别为97和95, 对水稻稻瘟病病原菌稻梨孢抑制率90。 0026 其特。

22、征在于, 所制得的抑制土传病害秸秆腐熟剂中构巢曲霉含量大于0 .2 108cfug-1、 米曲霉含量大于0.2108cfug-1、 枯草芽孢杆菌大于0.8108cfug-1、 酵母菌 大于0.2108cfug-1、 短小芽孢杆菌大于1.0108cfug-1, 有机质质量比含量高于50, 含 水率低于15 0027 有益效果 0028 该秸秆腐熟剂可用于纤维素含量较高的作物秸秆的分解, 在秸秆分解过程中形成 大量的抑制土传病害的生物防治菌株, 能够有效的杀灭附着在植株秸秆上的病原菌, 本发 明产品与市场产品比较具有以下优点: 0029 施用后土壤中立枯丝核菌数量、 尖孢镰刀菌数量较施用常规市售腐。

23、熟剂处理低 80左右。 0030 施用该腐熟剂后, 土壤中抑制立枯丝核菌数量、 尖孢镰刀菌芽孢杆菌数量较施用 常规腐熟剂处理增加80100倍。 附图说明 0031 下面结合附图及实施方式对本发明作进一步详细的说明: 0032 图1为不同处理秸秆拉力变化; 0033 图2为不同处理秸秆失重率变化; 0034 图3为不同处理麦田土壤微生物数量变化; 0035 图4为不同处理田间水稻秧苗漂秧率; 0036 图5为不同处理稻田土壤微生物数量变化。 具体实施方式 0037 下面结合具体实施例, 进一步阐述本发明。 0038 菌剂生产通过以下实例来实现 0039 1.将构巢曲霉接种到PDA培养液中, 进行。

24、液体发酵生产, 其发酵生产的条件为: 初 始pH自然, 培养温度25, 溶氧: 通气量范围为30100, 170rpm, 发酵中后期形成菌丝片 段, 发酵液菌株的菌落形成单位 1107cfuml-1; 所用PDA培养液配制方法为(以配制1L培 养基为例): 用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮, 沸腾后煮30min, 用纱布过滤后, 滤液 加20g普通蔗糖, 定容至1000ml, 121灭菌20min。 构巢曲霉的发酵液按照40(v: w)加入麦 麸, 真空干燥机干燥至含水量低于5, 粉碎机粉碎成菌种粉, 低温保存备用。 0040 2.将米曲霉接种到PDA培养液中, 进行液体发酵生产, 其发。

25、酵生产的条件为: 培养 说明书 3/5 页 6 CN 103642782 B 6 温度28, 溶氧: 通气量范围为4090, 120-180rpm, 发酵中后期形成菌丝片段, 发酵液菌 株的菌落形成单位 1107cfuml-1; 所用PDA培养液配制方法为(以配制1L培养基为例): 用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮, 沸腾后煮30min, 用纱布过滤后, 滤液加20g普通蔗 糖, 定容至1000ml, 121灭菌20min。 米曲霉发酵液按照40(v: w)加入麦麸, 真空干燥机干 燥至含水量低于5, 粉碎机粉碎成菌种粉, 低温保存备用。 0041 3.将枯草芽孢杆菌接种到液体种子培养基。

26、培养, 培养条件为: 培养温度37, 摇床 转速150rpm, 培养时间24小时, 种子含菌量大于1109cfuml-1, 种子按照5比例接种到发 酵罐进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为: 初始pH范围为7.07.5, 培养温度2837 , 溶氧通气量范围为30100, 150-220rpm, 发酵后期发酵液该菌株的菌落形成单位 1 109cfuml-1。 所用的液体的种子培养基和液体发酵培养基的配方均为, 按照1L培养基配 制: 牛肉膏3g, 蛋白胨10g, NaCl10g, 自来水1000ml, 121灭菌20min。 枯草芽孢杆菌发酵液 按照50(v: w)加入麦麸, 真空干燥机干燥。

27、至含水量低于5, 粉碎机粉碎成菌种粉, 低温保 存备用。 0042 4.将酵母菌接种到豆芽汁种子培养基培养, 培养条件为: 培养温度30, 摇床转速 130160rpm, 培养时间36小时, 种子含菌量大于1108cfuml-1, 种子按照8比例接种到 发酵罐进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为: 初始pH自然, 培养温度2832, 溶氧通 气量范围为30100, 120190rpm, 发酵液该菌株的菌落形成单位 1108cfuml-1, 发 酵液浓度变稠; 所用的液体的种子培养基和发酵培养基的配方为, 按照1L培养基配制: 称新 鲜黄豆芽100g, 葡萄糖35g, 加入1000ml水, 煮。

28、沸30min, 纱布过滤, 滤液加35g葡萄糖, 115 灭菌30min。 酵母菌发酵液按照40(v: w)加入麦麸, 真空干燥机干燥至含水量低于5, 粉 碎机粉碎成菌种粉, 低温保存备用。 0043 5.将短小芽孢杆菌接种到液体种子培养基培养, 培养条件为: 培养温度37, 摇床 转速130160rpm, 培养时间24小时, 种子含菌量大于1109cfuml-1, 种子按照7比例接 种到发酵罐进行液体发酵生产, 其发酵生产的条件为: 初始pH范围为7.07.5, 培养温度28 35, 溶氧通气量范围为30100, 120160rpm, 发酵后期部分菌株形成芽孢, 发酵液 该菌株的菌落形成单位。

29、 1109cfuml-1, 发酵液浓度变稠; 所用的液体的种子培养基和发 酵培养基的配方为, 按照1L培养基配制: 牛肉膏3g, 蛋白胨10g, NaCl10g, 自来水1000ml, 121 灭菌20min。 短小芽孢杆菌发酵液按照40(v: w)加入麦麸, 真空干燥机干燥至含水量低 于5, 粉碎机粉碎成菌种粉, 低温保存备用。 0044 6.构巢曲霉固体吸附菌剂、 米曲霉固体吸附菌剂、 枯草芽孢杆菌固体吸附菌剂、 酵 母菌固体吸附菌剂和短小芽孢杆菌固体吸附菌剂按照质量比1: 1.5: 1: 1.5: 2在无菌条件下 复合搅拌, 在无菌条件下包装, 成品即为抑制土传病害的秸秆腐熟剂。 004。

30、5 腐熟剂应用试验1秸秆腐熟剂加速水稻秸秆腐熟和抑制土传病害效果验证: 0046 供试土壤为黏质土, 供试秸秆为水稻秸杆, 下一季作物为小麦。 设置如下处理: 处 理1.对照, 土壤不施用任何腐熟剂; 处理2.施用市场上销售腐熟剂2kg/亩; 处理3.施用本发 明腐熟剂2kg/亩。 每处理小区面积1m1m, 12个重复。 三个处理添加秸秆产量按照水稻经济 系数为0.5计算, 为每小区施用1.0kg秸秆。 每小区施用3g秸秆腐熟剂。 实验测定小麦种植以 及生长过程中秸秆拉力和失重率的变化, 土壤尖孢镰刀菌(容易引起植物枯萎土传性病原 真菌)和立枯丝核菌(可以引起水稻和小麦纹枯病)数量, 土壤中抑。

31、制尖孢镰刀菌和立枯丝 说明书 4/5 页 7 CN 103642782 B 7 核菌芽孢杆菌数量。 0047 实验结果表明, 实验开始后第15天、 35天和60天, 相较于对照处理, 施用本发明秸 秆腐熟剂的处理秸秆拉力显著降低; 而且施用本发明秸秆腐熟剂处理的秸秆拉力比市售秸 秆腐熟剂处理秸秆的拉力降低10-38(图1)。 秸秆的失重率测定显示, 施用本发明秸秆 腐熟剂处理的秸秆失重率显著高于对照处理, 秸秆失重率增加1.7-2.2倍; 本发明处理秸秆 失重率也高于市售腐熟剂处理的秸秆(图2)。 麦子收割后土壤微生物测定显示, 施用本发明 处理土壤中尖孢镰刀菌和立枯丝核菌数量显著地低于对照处。

32、理, 分别只有对照处理的11 和20; 本发明处理土壤尖孢镰刀菌和立枯丝核菌数量也显著地低于市售秸秆腐熟剂处 理, 分别只有对照处理的20和22, 市售秸秆腐熟剂对土壤病原性真菌没有很好的抑制 效果。 土壤中可以抑制病原菌的芽孢杆菌数量测定显示, 市售秸秆腐熟剂处理和对照处理 没有显著差别, 但是本发明处理土壤抑制病原菌的芽孢杆菌数量比对照处理高约100倍(图 3)。 0048 腐熟剂应用试验2秸秆腐熟剂加速小麦秸秆腐熟和抑制土传病害效果验证: 0049 供试土壤为黏质土, 供试秸秆为小麦秸杆, 下一季作物为水稻。 设置如下处理: 处 理1.对照, 土壤不施用任何腐熟剂; 处理2.施用市场上销。

33、售腐熟剂2kg/亩; 处理3.施用本发 明腐熟剂2kg/亩。 每处理在秸秆全量还田大田中选取面积10m10m面积作为测定的面积, 每个处理选取3个重复。 实验测定水稻移栽后23天内降雨造成的 “漂秧” 数量, 土壤中尖孢 镰刀菌(容易引起植物枯萎土传性病原真菌)和立枯丝核菌(可以引起水稻和小麦纹枯病) 数量, 土壤中抑制尖孢镰刀菌和立枯丝核菌芽孢杆菌数量。 0050 实验结果表明, 水稻秧苗移栽后23天内, 由于降雨造成的 “漂秧” , 施用本发明处 理显著低于对照和市售腐熟剂处理(图4), 施用本发明处理秸秆手捏硬度比对照和市售腐 熟剂处理秸秆的硬度低。 水稻收割后土壤微生物测定显示, 施用。

34、本发明处理土壤中尖孢镰 刀菌和立枯丝核菌数量比对照处理分别降低了78和88; 市售秸秆腐熟剂对土壤病原性 真菌没有很好的抑制效果。 土壤中可以抑制病原菌的芽孢杆菌数量测定显示, 市售秸秆腐 熟剂处理和对照处理没有显著差别, 但是本发明处理土壤抑制病原菌的芽孢杆菌数量比对 照处理高约85倍(图5)。 0051 应理解, 这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。 此外应理解, 在阅读了本发明讲授的内容之后, 本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改, 这些 等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。 说明书 5/5 页 8 CN 103642782 B 8 图1 图2 说明书附图 1/3 页 9 CN 103642782 B 9 图3 图4 说明书附图 2/3 页 10 CN 103642782 B 10 图5 说明书附图 3/3 页 11 CN 103642782 B 11 。

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