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1、(10)授权公告号 CN 101921280 B (45)授权公告日 2012.08.22 CN 101921280 B *CN101921280B* (21)申请号 200910016224.0 (22)申请日 2009.06.13 C07D 493/04(2006.01) A01N 43/90(2006.01) A01P 7/00(2006.01) (73)专利权人 烟台海岸带可持续发展研究所 地址 264003 山东省烟台市莱山区春晖路 17 号 (72)发明人 季乃云 (74)专利代理机构 沈阳科苑专利商标代理有限 公司 21002 代理人 许宗富 周秀梅 Nai-Yun Ji et 。
2、al.Halogenated Terpenes and a C15-Acetogenin from the Marine Red Alga Laurencia saitoi.Molecules .2008, 第 13 卷 2894-2899. Nai-Yun Ji et al.Halogenated Terpenes and a C15-Acetogenin from the Marine Red Alga Laurencia saitoi.Molecules .2008, 第 13 卷 2894-2899. (54) 发明名称 一种海藻聚醚类化合物及其制备方法和应用 (57) 摘要 本发明涉。
3、及杀虫药物领域， 具体说是一种海 藻聚醚类化合物及其制备方法和应用。具体结 构式 (I) 所示， 其制备方法为将海洋红藻齐腾凹 顶藻经海水冲洗干净、 除去表面附着的沙砾及 杂藻， 阴干、 粉碎后浸取、 溶剂分配和反复的层析 分离， 得到单体化合物。本发明所得化合物可 作杀虫剂的药物。并且本发明通过海洋红藻齐 腾凹顶藻经提取、 分离纯化获得的聚醚类天然 结构属于小分子天然有机化合物， 容易制备获 得， 并具有显著的杀虫活性， 可作为杀虫药物。 结 构 式 (I) 其中 ： R OH 或 OAc。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 徐文亮 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19。
4、)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 一种海藻聚醚类化合物的制备方法， 其特征在于 ： 1) 将海洋红藻齐腾凹顶藻 (Laurencia saitoi) 冲洗、 阴干、 粉碎， 而后用有机溶液提 取 2-5 次， 合并提取液进行浓缩， 得到粗提物 ； 2) 取步骤 1) 中所得粗提物的 10-15 倍体积的水加入步骤 1) 的粗提物中， 而后用水体 积 1-1.5 倍的乙酸乙酯萃取 2-5 次， 萃取物浓缩得提取物， 备用 ； 3) 取步骤 2) 中的提取物进行硅胶柱层析， 用有机溶剂进行洗脱， 收集洗脱液， 洗脱液 经薄层。
5、层析检测 ； 所述机溶剂为 100 0-0 100 梯度的石油醚 - 乙酸乙酯或石油醚 - 丙酮 ； 4)将步骤3)中以0-10100梯度洗脱下的组分进行凝胶柱并薄层层析分离纯化得结 构式 (I) 目标化合物， 所述 0-10 100 梯度洗脱液为石油醚 - 乙酸乙酯或石油醚 - 丙酮 ； 式 (I) 所示， 结构式 (I)， 其中 ： R OH 或 OAc。 2. 按权利要求 1 所述的聚醚类化合物的制备方法， 其特征在于 ： 步骤 1) 中的有机溶液 为氯仿、 丙酮、 乙酸乙酯、 乙醇或甲醇中一种或几种。 3. 按权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于 ： 所述步骤 4) 所述薄层层析。
6、分离纯化 时， 展开剂为乙酸乙酯， Rf 为 0.45-0.5 的组分， 即为纯化后的结构式 (I)R 为 OH 的目标化 合物 ； 展开剂为乙酸乙酯， Rf 为 0.65-0.7 的组分， 即为纯化后的结构式 (I)R 为 OAc 的目标 化合物。 权 利 要 求 书 CN 101921280 B 2 1/4 页 3 一种海藻聚醚类化合物及其制备方法和应用 技术领域 0001 本发明涉及杀虫药物领域， 具体说是一种海藻聚醚类化合物及其制备方法和应 用。 背景技术 0002 近年来， 由于人们对环境质量的要求越来越高， 而且一些常用杀虫剂因残留问题 而出现副作用， 以及不断产生的昆虫抗药性等等。
7、， 环境友好的杀虫剂越来越受到人们的重 视， 其中， 植物源杀虫剂具有高效、 低毒和易降解等优点， 其研究与开发尤其引人注目， 显示 出良好的生态、 经济和社会效益， 展现出广阔的发展前景。 发明内容 0003 本发明的目的是提供一种海藻聚醚类化合物及其制备方法和应用。 0004 为实现上述目的， 本发明采用的技术方案为 ： 0005 海藻聚醚类化合物 ： 结构式 (I) 所示， 0006 0007 结构式 (I)， 其中 ： R OH 或 OAc。 0008 海藻聚醚类化合物的制备方法 ： 0009 1) 将海洋红藻齐腾凹顶藻 (Laurencia saitoi) 冲洗、 阴干、 粉碎， 而。
8、后用有机溶 液提取 2-5 次， 合并提取液进行浓缩， 得到粗提物 ； 0010 2) 取步骤 1) 中所得粗提物的 10-15 倍体积的水加入步骤 1) 的粗提物中， 而后用 水体积 1-1.5 倍的乙酸乙酯萃取 2-5 次， 萃取物浓缩得提取物， 备用 ； 0011 3) 取步骤 2) 中的提取物进行硅胶柱层析， 用有机溶剂进行洗脱， 收集洗脱液， 洗 脱液经薄层层析检测 ； 0012 所述机溶剂为 100 0-0 100 梯度的石油醚 - 乙酸乙酯或石油醚 - 丙酮 ； 0013 4)将步骤3)中以0-10100梯度洗脱下的组分进行凝胶柱并薄层层析分离纯化 得结构式 (I) 目标化合物。。
9、 0014 步骤 1) 中的有机溶液可为氯仿、 丙酮、 乙酸乙酯、 乙醇或甲醇中一种或几种。 0015 所述步骤4)中硅胶层析所用的洗脱液可为石油醚-乙酸乙酯或石油醚-丙酮 ； 所 述步骤 4) 所述薄层层析分离纯化时， 展开剂为乙酸乙酯， Rf 为 0.45-0.5 的组分， 即为纯化 后的结构式 (I)R 为 OH 的目标化合物 ； 展开剂为乙酸乙酯， Rf 为 0.65-0.7 的组分， 即为纯 化后的结构式 (I)R 为 OAc 的目标化合物。 0016 所述化合物可作杀虫剂的药物。 说 明 书 CN 101921280 B 3 2/4 页 4 0017 本发明具有以下优点 ： 001。
10、8 本发明涉及的海洋红藻齐腾凹顶藻 (Laurencia saitoi) 属于红藻门、 松节藻科、 凹顶藻属海藻， 广泛分布于西太平洋沿岸的中国、 日本和朝鲜半岛等地区， 一般生长在潮间 带的岩石上。本发明通过海洋红藻齐腾凹顶藻经提取、 分离获得的聚醚类天然化合物属于 小分子天然有机化合物， 容易制备获得， 经实验表明它们在 10 微克 / 毫升时对卤虫的致死 率均为 100， 具有显著的杀虫活性， 可作为杀虫药物。 具体实施方式 ： 0019 下面结合实施实例对本发明做进一步阐述。 0020 实施例 1 0021 海藻聚醚类化合物的制备方法 ： 0022 1) 将采集新鲜的齐腾凹顶藻 (La。
11、urencia saitoi) 经海水清洗， 除去表面附着的 沙砾及杂藻， 阴凉处凉干备用。取凉干后的样品 70 克， 粉碎到 60-80 目后用约 300 毫升氯 仿 - 甲醇 ( 体积比为 2 1) 在常温下提取三次， 每次 48 时， 合并提取液， 在温度 40左右 减压浓缩获得粗提物。 0023 2)取步骤1)中所得粗提物的10倍体积的水加入步骤1)的粗提物中， 而后用水体 积 1 倍的乙酸乙酯萃取 3 次， 萃取物浓缩得提取物， 备用 ； 0024 3) 将浓缩后的乙酸乙酯提取物 (1.1 克 ) 进行硅胶柱 (200-300 目 ) 层析， 用石 油醚 - 乙酸乙酯以 100 0、。
12、 100 1、 30 1、 10 1、 4 1 到 0 100 的梯度进行洗 脱， 分别收集洗脱液， 洗脱液用薄层层析 (TLC) 检测， 根据 Rf 值来判断、 合并相同或类似 部分， 薄层层析 (TLC) 检测时用茴香醛 - 硫酸作为显色剂， 展开剂为石油醚 - 乙酸乙酯 (100 0-0 100)， 获得六个组分 (I-VI)。 0025 4) 将组分 VI， Rf 0.2-0.9( 乙酸乙酯为展开剂 )， 即以纯乙酸乙酯洗脱下的组分 再进行凝胶柱层析分离， TLC 检测， 收集 Rf 为 0.45-0.5 的组分且显黄色斑点的组分， 并通 过薄层 ( 展开剂为氯仿 - 乙酸乙酯 4 3。
13、) 层析分离， 即得纯化后的结构式 (I)R 为 OH 的目 标化合物为 8.5 毫克， Rf 为 0.65-0.7 的组分， 即得纯化后的结构式 (I)R 为 OAc 的目标化 合物 31.7 毫克， 经 TLC 检测， 均呈单个、 均匀黄色斑点， 确定为纯化合物。 0026 经 波 谱 分 析，其 结 构 鉴 定 为 如 (I) 所 示， R 分 别 为 OH(thyrsiferol) 或 OAc(thyrsiferyl 23-acetate)。 0027 0028 R 为 OH 或 OAc 时的理化性质 ： 0029 结构式 (I)R 为 OH 的目标化合物 ： 无色晶体， 核磁共振氢谱。
14、数据 ： 1.09(s)， 1.12(s)， 1.15(s)， 1.18(s)， 1.19(s)， 1.21(s)， 1.26(s)， 1.39(s)， 3.04(dd， 11.5， 2.1Hz)， 3.45(brd， 9.7)， 3.57(dd， 11.0， 7.2Hz)， 3.70(dd， 12.8， 2.5Hz)， 3.75(dd， 9.8， 6.2Hz)， 3.89(dd， 12.3， 4.0Hz)ppm ； 核 磁 共 振 碳 谱 数 据 ： 31.0(q)， 75.0(s)， 59.0(d)， 28.3(t)， 说 明 书 CN 101921280 B 4 3/4 页 5 37.0。
15、(t)， 74.4(s)， 86.6(d)， 23.0(t)， 38.6(t)， 72.0(s)， 76.4(d)， 21.2(t)， 20.7(t)， 76.1(d)， 73.3(s)， 33.6(t)， 25.5(t)， 77.7(d)， 86.1(s)， 32.5(t)， 26.6(t)， 87.5(d)， 70.5(s)， 24.0(q)， 23.7(q)， 20.1(q)， 21.4(q)， 22.9(q)， 23.4(q)， 27.6(q)ppm。 0030 结构式 (I)R 为 OAc 的目标化合物 ： 无色晶体， 核磁共振氢谱数据 ： 1.08(s)， 1.15(s)， 1.1。
16、7(s)， 1.18(s)， 1.26(s)， 1.38(s)， 1.43(s)， 1.47(s)， 1.98(s)， 3.03(dd， 11.5， 2.5Hz)， 3.44(dd， 10.1， 1.76Hz)， 3.56(dd， 11.0， 7.2Hz)， 3.69(dd， 12.8， 2.8Hz)， 3.88(dd， 12.3， 4.1Hz)， 4.00(dd， 9.7， 6.1Hz)ppm ； 核磁共振碳谱数据 ： 31.0(q)， 75.0(s)， 58.9(d)， 28.2(t)， 37.0(t)， 74.4(s)， 86.5(d)， 23.0(t)， 38.5(t)， 71.9(s。
17、)， 76.3(d)， 21.2(t)， 20.7(t)， 76.1(d)， 73.2(s)， 33.6(t)， 25.4(t)， 77.5(d)， 86.3(s)， 31.9(t)， 26.8(t)， 85.8(d)， 82.5(s)， 22.1(q)， 23.7(q)， 20.1(q)， 21.4(q)， 22.9(q)， 23.2(q)， 22.4(q)， 22.0(q)， 170.4(s)ppm。 0031 实施例 2 0032 海藻聚醚类化合物的制备方法 ： 0033 1) 将采集新鲜的齐腾凹顶藻 (La urencia saitoi) 经海水清洗， 除去表面附着的 沙砾及杂藻， 阴。
18、凉处凉干备用。取凉干后的样品， 粉碎到 60-80 目后用丙酮 - 乙酸乙酯 ( 体 积比为 2 1) 在常温下提取五次， 每次 48 时， 合并提取液， 在温度 40左右减压浓缩获得 粗提物。 0034 2)取步骤1)中所得粗提物的15倍体积的水加入步骤1)的粗提物中， 而后用水体 积 1.5 倍的乙酸乙酯萃取 5 次， 萃取物浓缩得提取物， 备用 ； 0035 3)将浓缩后的乙酸乙酯提取物进行硅胶柱(200-300目)层析， 用石油醚-乙酸乙 酯以 100 0、 100 1、 30 1、 10 1、 4 1 到 0 100 的梯度进行洗脱， 分别收集洗脱 液， 洗脱液用薄层层析(TLC)检。
19、测， 根据Rf值来判断、 合并相同或类似部分， 薄层层析(TLC) 检测时用茴香醛 - 硫酸作为显色剂， 展开剂为石油醚 - 乙酸乙酯 (100 0-0 100)， 获得 六个组分 (I-VI)。 0036 4) 将组分 VI， Rf 0.2-0.9( 乙酸乙酯为展开剂 )， 即以纯乙酸乙酯洗脱下的组分 再进行凝胶柱层析分离， TLC 检测， 收集 Rf 为 0.45-0.5 的组分且显黄色斑点的组分， 并通 过薄层 ( 展开剂为氯仿 - 乙酸乙酯 4 3) 层析分离， 即得纯化后的结构式 (I)R 为 OH 的目 标化合物， Rf 为 0.65-0.7 的组分， 即得纯化后的结构式 (I)R。
20、 为 OAc 的目标化合物， 经 TLC 检测， 均呈单个、 均匀黄色斑点， 确定为纯化合物。 0037 实施例 3 0038 海藻聚醚类化合物的制备方法 ： 0039 1) 将采集新鲜的齐腾凹顶藻 (La urencia saitoi) 经海水清洗， 除去表面附着的 沙砾及杂藻， 阴凉处凉干备用。取凉干后的样品， 粉碎到 60-80 目后用乙醇在常温下提取二 次， 每次 48 时， 合并提取液， 在温度 40左右减压浓缩获得粗提物。 0040 2)取步骤1)中所得粗提物的12倍体积的水加入步骤1)的粗提物中， 而后用水体 积 1.2 倍的乙酸乙酯萃取 2 次， 萃取物浓缩得提取物， 备用 ；。
21、 0041 3)将浓缩后的乙酸乙酯提取物进行硅胶柱(200-300目)层析， 用石油醚-乙酸乙 酯以 100 0、 100 1、 30 1、 10 1、 4 1 到 0 100 的梯度进行洗脱， 分别收集洗脱 液， 洗脱液用薄层层析(TLC)检测， 根据Rf值来判断、 合并相同或类似部分， 薄层层析(TLC) 说 明 书 CN 101921280 B 5 4/4 页 6 检测时用茴香醛 - 硫酸作为显色剂， 展开剂为石油醚 - 乙酸乙酯 (100 0-0 100)， 获得 六个组分 (I-VI)。 0042 4) 将组分 VI， Rf 0.2-0.9( 乙酸乙酯为展开剂 )， 即以纯乙酸乙酯洗。
22、脱下的组分 再进行凝胶柱层析分离， TLC 检测， 收集 Rf 为 0.45-0.5 的组分且显黄色斑点的组分， 并通 过薄层 ( 展开剂为氯仿 - 乙酸乙酯 4 3) 层析分离， 即得纯化后的结构式 (I)R 为 OH 的目 标化合物， Rf 为 0.65-0.7 的组分， 即得纯化后的结构式 (I)R 为 OAc 的目标化合物， 经 TLC 检测， 均呈单个、 均匀黄色斑点， 确定为纯化合物。 0043 实施例 4 0044 杀虫活性实验 ： 0045 卤虫毒性实验可用来评价化合物杀虫活性的强弱， 操作简便， 重现性好。 0046 实验方法 ： 0047 卤虫卵的孵化 ： 取卤虫卵 100。
23、 毫克置于 500 毫升烧杯中， 加入人工海水 400 毫升， 用一小充气泵缓缓充气， 室温孵化 24 小时， 除去卵壳及未孵化的卵， 卤虫幼虫继续培养 24 小时， 备用。 0048 卤虫生物致死法 ： 依照Solis的改良法， 取96孔细胞培养板， 每孔加195微升含10 个左右卤虫幼虫的人工海水液， 制成测试培养板。空白对照组和每个浓度的样品组各设三 个平行孔， 空白对照组加5微升溶剂DMSO， 样品组加5微升上述实施例中的聚醚类化合物待 测样品。测试样品溶解于 DMSO， 浓度为 0.4 毫克 / 毫升。室温培养 24 小时后， 在双目解剖 镜下检测计数卤虫死亡个体数目。 0049 卤虫生物致死活性以校正死亡率表示， 计算公式如下 ： 0050 校正死亡率 ( 对照组存活率 - 处理组存活率 )/ 对照组存活率 100 0051 实验结果 ： 上述实施例中的获得的聚醚类化合物在10微克/毫升时对卤虫的致死 率均为 100。 说 明 书 CN 101921280 B 6 。