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1、(10)申请公布号 CN 102174138 A (43)申请公布日 2011.09.07 CN 102174138 A *CN102174138A* (21)申请号 201110027123.0 (22)申请日 2011.01.25 C08F 212/36(2006.01) C08F 226/06(2006.01) C08J 9/26(2006.01) B01J 20/26(2006.01) B01J 20/285(2006.01) B01J 20/30(2006.01) B01D 15/08(2006.01) B01D 15/22(2006.01) (71)申请人 尹小英 地址 33000。
2、8 江西省南昌市洛阳东路 77 号 东方塞纳 25 栋 2 单元 502 室 (72)发明人 尹小英 罗永明 江一帆 衷友泉 (54) 发明名称 党参内酯分子印迹固相萃取柱的制备及应用 (57) 摘要 本发明公开了从中药党参提取液中直接定向 提取分离党参内酯的分子印迹聚合物的制备及其 应用方法。可将该聚合物作为填充料制成固相萃 取柱从中药提取液中提取分离、 纯化党参内酯。 与 C18键合固相萃取柱， 硅胶固相萃取柱相比， 党参 内酯分子印迹固相萃取柱对提取液中的党参内酯 有更好的选择性， 更高的柱容量， 达 8.6mol/g， 是后两者的2-3倍， 同时洗脱率达到93， 亦高于 其它两种固相萃。
3、取柱。本方法用于党参内酯的提 取分离所得产品纯度高， 操作过程简单， 极易实现 工业化。同时减少了溶剂使用量， 工艺更为安全、 环保， 能够达到去除杂质、 纯化及富集党参内酯的 目的。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 2 页 附图 2 页 CN 102174142 A1/1 页 2 1. 本发明的目的在于提供一种制备党参内酯分了印迹聚合物的方法， 并提供利用该聚 合物作为固相萃取固定相从中药粗提物中定向分离、 富集、 纯化党参内酯的方法。 其特征在 于可通过以下步骤得到 ： (1) 首先将党参内酯、 功能单体 (1。
4、- 乙烯基咪唑 ) 和交联剂 (80 - 二乙烯基苯， DVB-80) 按 1 3-5 20 溶解在装有致孔剂乙腈溶液的圆底烧瓶中 ； 加入引发剂偶氮二异 丁腈， 在60水浴中聚合24h ； 反应后的聚合物经甲醇-冰醋酸溶液通过索氏提取的方法洗 去模板分子及未反应完全的试剂， 以紫外光谱进行检查， 直至检测不到以上物质的吸收为 止， 再用甲醇洗去残留的冰醋酸， 即得到党参内酯分子印迹聚合物。 (2) 固相萃取分离纯化中药粗提物中的党参内酯 ： 称取党参药材粉末 ( 过 50 目 筛)5.0g， 加入甲醇40mL， 浸泡1h后， 放入超声波中超声40min， 冷却至室温后称量用甲醇补 足重量， 。
5、过滤即得到党参药材粗提取液 ； 将上述得到的党参内酯分子印迹聚合物采用干法 装柱填充到固相萃取柱中， 用甲醇溶液平衡柱子 ； 取党参药材粗提取液上样后， 用甲醇洗脱 保留在萃取柱中的党参内酯， 将洗脱液收集并浓缩、 干燥， 即得到高纯度的党参内酯。 2. 根据权利要求 1 的要求， 该分子印迹聚合物制备采用的模板分子是党参内酯。 3. 根据权利要求 1 的要求， 分子印迹聚合物制备采用的功能单体是 1- 乙烯基咪唑， 用 量为每 0.6mmol 党参内酯需 1.2-3.0mmol1- 乙烯基咪唑。 4. 根据权利要求 1 的要求， 分子印迹聚合物制备采用的交联剂是二乙烯基苯 (DVB-80)，。
6、 用量为每 0.6mmol 党参内酯需 10-14mmol DVB-80。 5. 根据权利要求 1 的要求， 分子印迹聚合物制备采用的引发剂是偶氮二异丁腈 (AIBN)， 按照模板分子及功能单体的用量需 75-80mg 偶氮二异丁腈。 6. 根据权利要求 1 的要求， 分子印迹聚合物制备采用的致孔剂是乙腈， 根据功能单体 与交联剂的用量， 需 55-70mL 乙腈。 7. 根据权利要求 1 的要求， 洗除聚合物中模板分子及没有聚合的交联剂、 功能单体和 引发剂采用的是甲醇 - 冰醋酸 (9 1， V/V) 混合液。 8. 根据权利要求 1 的要求， 该聚合物可作为固相萃取固定相从中药粗提物中定。
7、向分 离、 富集、 纯化党参内酯。 9. 根据权利要求 1 的要求， 该聚合物可作为填充料用于制备固相萃取柱。 10. 根据权利要求 1 的要求， 固相萃取中采用甲醇洗脱保留在萃取柱中的党参内酯。 权 利 要 求 书 CN 102174138 A CN 102174142 A1/2 页 3 党参内酯分子印迹固相萃取柱的制备及应用 技术领域 ： 0001 本发明专利涉及的是高分子合成及其在中药活性成分分离中应用的技术领域， 具 体涉及党参内酯分子印迹聚合物的制备及利用该聚合物为固相萃取剂分离、 纯化天然产物 中的党参内酯的方法。 背景技术 ： 0002 (1) 党 参，桔 梗 科 植 物 党 参。
8、 Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.、素 花党参 Codonopsis pilosula Nannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen 或川党参 Codonpsistangshen Oliv. 的干燥根。党参内酯是其主要有效成份， 具有增强免疫力、 扩张 血管、 降压、 改善微循环、 增强造血功能等作用。 0003 (2) 中草药所含成分十分复杂， 既有有效成分， 又有无效成分和有毒成分。为了提 高中草药的治疗效果， 就要尽最大限度提取有效成分， 去除无效成分及有毒成分。因此， 中 草药活性成分分离提取对于提高中药制剂的内在质量和临床疗效。
9、都极为重要。 传统中药活 性成分的分离提取常采用硅胶柱、 C18键合相柱、 Al2O3柱等利用成分的吸附系数差异实现分 离， 但最大缺点是选择性差， 富集容量低， 尤其对一些结构复杂， 多手性碳原子， 且含量低的 活性化合物， 分离提纯难度大， 采用这些常规分离手段往往需要反复操作， 提取率极低， 手 性构型可能因此改变而失活。分子印迹聚合物是为模板分子量身定做的高分子聚合物， 由 于其经洗脱模板分子后， 能留下在形状、 大小以及识别位点都与模板分子相匹配的空穴， 该 空穴能重新识别模板分。 由于其兼有高效、 稳定和特异选择性且合成价格低廉的特点， 因而 具有较广泛应用前景。 发明内容 ： 0。
10、004 本发明的目的在于避免上述传统提取方法技术存在的问题， 建立一种基于党参内 酯分子印迹聚合物为新型吸附分离材料， 并以此作固相萃取柱的固定相从中药粗提物中定 向分离、 富集、 纯化党参内酯的方法， 由此可以获得高提取率的目标成分。本发明通过以下 的技术方案实现的， 具体包括步骤如下 ： 0005 1. 党参内酯分子印迹聚合物的制备 ： 0006 (1)将党参内酯、 功能单体和交联剂按照摩尔比1420溶解在装有68mL致孔 剂乙腈溶液的圆底烧瓶中 ； 0007 (2) 再加入引发剂偶氮二异丁腈 78mg 后， 通氮气脱氧 15min ； 0008 (3) 将密封好的圆底烧瓶放入 60的水浴。
11、中， 恒温聚合 24h 得到聚合物 ； 0009 (4) 将制得的聚合物用甲醇 - 冰醋酸 (9 1， V/V) 混合液为萃取剂， 通过索氏提 取的方法洗去模板分子及没有聚合的功能单体及交联剂， 以紫外光谱进行检查直至检测不 到以上物质的吸收为止， 然后用甲醇除去残留的冰醋酸 ； 0010 (5) 将除去模板分子的聚合物在 60干燥 2h， 获得党参内酯分子印迹聚合物 ； 0011 (6) 非印迹聚合物的制备方法， 除不加入模板分子外， 其余步骤同上。 说 明 书 CN 102174138 A CN 102174142 A2/2 页 4 0012 2. 固相萃取分离纯化中药粗提液中的党参内酯 。
12、： 0013 (1) 固相萃取分离纯化中药粗提物中的党参内酯 ： 称取党参药材粉末 ( 过 50 目 筛 )5.0g， 加入甲醇提取液 40mL， 浸泡 1h 后， 放入超声波中超声 40min 后， 旋转蒸发至干， 用 甲醇溶解并定容至 5mL， 备用 ； 0014 (2) 将上述得到的党参内酯分子印迹聚合物采用干法装柱填充到固相萃取柱中， 并用甲醇溶液平衡柱子 ； 取党参药材粗提取液 5mL 上样后， 用甲醇洗脱保留在萃取柱中的 党参内酯， 将洗脱液收集并浓缩、 干燥， 即得到高纯度的党参内酯。 0015 本发明制备的分子印迹聚合物形貌为规则球形且单分散， 粒径 5m 左右， 对党参 内酯。
13、具有很好的识别性能， 作为固相萃取的填料， 可用于中药中党参内酯成分的高效分离、 富集及纯化。 0016 与 C18键合固相萃取柱， 硅胶固相萃取柱及 Al2O3固相萃取柱相比， 党参分子印迹 固相萃取柱对提取液中的党参内酯有更好的选择性， 柱容量最高， 达到 8.6mol/g， 是 C18 键合固相萃取柱和硅胶固相萃取柱的 2-3 倍， Al2O3固相萃取柱的 10 倍。同时洗脱率达到 93， 亦高于其它吸附剂固相萃取柱。 附图说明 ： 0017 附图1为党参内酯分子印迹聚合物合成示意图， 表明党参内酯与功能单体1-乙烯 基咪唑之间通过氢键发生分子间作用力， 交联剂在引发剂热引发下发生聚合反。
14、应后， 固定 了党参内酯和 1- 乙烯基咪唑形成的复合物， 洗脱模板分子后留下作用位点的空腔， 得到印 迹聚合物 ； 图 2 是聚合物微粒的形态电镜扫描图， 放大 6000 倍， 粒径在 5m 左右。 具体实施方式 ： 0018 下面对本发明的实施例作详细说明 ： 本实施例在以本发明技术方案为前提下进行 实施， 给出了详细的实施方案和具体的操作过程， 但本发明的保护范围不限于下述的实施 例。 0019 实施例 1 ： 0020 1. 党参内酯分子印迹聚合物的优选制备方法 ： 党参内酯 0.6mmol， 功能单体 1- 乙 烯基咪唑 2.4mmol 和交联剂 DVB-80 12mmol 混合， 。
15、溶解于装有 61mL 致孔剂乙腈液的圆底烧 瓶中， 加入引发剂 AIBN 78mg， 通氮气脱氧 15min， 在氮气保护下迅速封口。将密封好的试管 放入 60的水浴中恒温聚合24h后， 得到聚合物。 将聚合物放入索式提取器中， 用甲醇-冰 醋酸 (9 1， V/V) 混合液洗脱模板分子和没有聚合的功能单体及交联剂， 再用甲醇洗去残 留冰醋酸， 在 60干燥 2h， 得到党参内酯分子印迹聚合物。 0021 2. 固相萃取分离纯化中药粗提液中的党参内酯 ： 0022 称取党参粉末5.0g， 加人甲醇溶液40ml， 放入超声波中超声40min后， 称重用甲醇 补足重量， 过滤即得党参粗提取液。称取 200mg 洗脱好的党参内酯印迹聚合物， 采用干法装 柱， 依次加入甲醇和 40甲醇溶液平衡固相萃取柱后， 取党参粗提取液 5mL， 上样， 往柱中 加压， 控制流速为 0.5mL/min， 再用 10mL 甲醇溶液洗脱保留在萃取柱上的党参内酯。经浓 缩、 干燥得到党参内酯 1.6mg。 说 明 书 CN 102174138 A CN 102174142 A1/2 页 5 图 1 说 明 书 附 图 CN 102174138 A CN 102174142 A2/2 页 6 图 2 说 明 书 附 图 CN 102174138 A 。