制备由喹诺金衍生的药物活性物质的方法 本发明涉及制备喹诺金(N-(2-喹啉羰基)-天冬酰胺)和喹诺金(quinargine)衍生物的新方法。
现已公知喹诺金，例如EP 0611714中所述。它是制备药物活性化合物时有用的中间体。因此，在前述欧洲专利说明书的实施例7中，喹诺金转化为药物活性化合物，该化合物基本适合于处置病毒感染，特别是HIV或其他反转录病毒感染。
已有各种反应路线叙述制备前述类型的喹哪啶酸衍生物。例如，Davis叙述了通常能够得到良好产率的一种反应，其中喹哪啶酸酰氯与一级和二级胺，氨基酸和氨基酸酯按照Schotten-Baumann条件反应(J．Org．Chem (1959)，241691-1694)。在Schotten-Baumann反应中，待酰化的物质在10％氢氧化钠溶液内与一种酸酰氯摇荡，直至其消耗完毕。进行该反应要用大量的碱和酸酰氯。然而在制备喹诺金及其衍生物中，这个方法仅仅导致一种中等产率。
Anderson等人公开了在肽合成中使用N-羟基琥珀酰亚胺酯(Anderson等人(1964)J．Am．Chem．Soc．83，1839-1842)。考虑到较大的水溶解度，这些酯一般比相应的N-羟基邻苯二甲酰亚胺酯能更好地在合成中使用。N-酰基-氨基酸N-羟基琥珀酰亚胺酯的制备，一般是将N-酰基-氨基酸与N-羟基琥珀酰亚胺按照混和酸酐的方法进行反应，特别是使用二环己基碳化二亚胺(P．Stelzel在Houben-Weyl公开：“Methoden der organishen Chemie；Synthese vonPeptiden”，Vol．15，Part 2，p．214(1974))。然后使N-羟基琥珀酰亚胺与相应的氨基酸在有机-水溶剂混合物内反应。
Wendlberger也公开了在肽合成中使用羟基琥珀酰亚胺酯(Houben-Weyl：“Methoden der organishen Chemie；Synthese vonPeptiden”，Vol．15，Part 2，p．130(1974))。N-羟基琥珀酰亚胺酯的高氨基稳定性与水解和醇解的低敏感性相比，使得肽合成不仅可在有机溶剂中而且可在有机-水溶剂混合物中进行，诸如乙醇／水和二噁烷／水混合物。与N-羟基琥珀酰亚胺酯的肽合成也可在诸如二氯甲烷／水等的两相体系中进行。
国际专利申请W095／20962公开了制备2S-N-(喹啉-2-基羰基)氨基-3-氧代-3-氨基丙酸。其中相应的五氟苯基酯与天冬酰胺在二噁烷／水中进行反应。
在用来制备喹诺金及其相应衍生物时，所有上述方法都有缺点。主要由于水解的大量副产物，因此，反应的产率远远低于定量。结果，要进行大量工作处理反应混合物。而且在分别制备喹诺金及其衍生物期间，得到诸如五氟酚的麻烦副产物(W095／20962)，使得采用现有技术的规模进行大规模生产不能令人满意。
本发明避开了现有技术公知的缺点。
本发明是制备式Ⅰ的喹诺金及其衍生物：其中R1、R2、R3、R4、R5和R6每个分别是氢，卤素，C1-3烷基，卤代-C1-3烷基，羟基-C1-3烷基，C1-3烷氧基，C1-3烷硫基，C1-3烷硫基-C1-3烷基，硝基或三氟甲基，但优选氢；它是基于式Ⅱ地琥珀酰亚胺酯在水性反应介质于中性PH值与天冬酰胺或天冬酰铵盐反应得到的，其中R1、R2、R3、R4、R5和R6的符号含义同上。
该方法特别适合喹诺金(N-(2-喹啉羰基)天冬酰胺)。S-或R-喹诺金的获得取决于所用天冬酰胺或天冬酰铵盐。
式Ⅱ的原料是公知的，可以制备，例如按照Anderson等人(上面所示)所述的方法制备．进行琥珀酰亚胺酯的制备，例如可将相应的酸成分与N-羟基琥珀酰亚胺外加二环己基碳化二亚胺反应。
本发明的方法包括式Ⅱ的琥珀酰亚胺酯于水性介质在大约中性PH值进行反应。反应最好在PH=6-8时进行，优选PH=大约7。可用常规缓冲体系调节PH值，例如碳酸盐或磷酸盐缓冲剂，优选碳酸氢钠水溶液。
式Ⅱ琥珀酰亚胺酯的反应在大约20-72℃进行，优选50℃。反应历经2-8小时，对于定量转化，平均历时2．5小时足矣。
对于批量反应加工，可在提高的温度下加入甲醇和浓盐酸。以测定量加入浓盐酸，使得PH值调节到2．5-3。添加等摩尔量的盐酸最好在30-70℃进行，优选50℃。随后使反应混合物静置冷却到0-30℃，优选到大约10℃，以恒定的冷却速度历经大约2-8小时，优选2．5小时。然后将反应产物过滤。
根据这种方法，可以90-93％的产率得到式Ⅰ的反应产物，差不多是计算定量。对后续的反应，例如制备HIV抑制剂无需进一步纯化。
另外，本发明还涉及制备药物活性物质。例如 EP 0635493公开的，将N(2-喹啉羰基)-L天冬酰胺与2-[3(S)-氨基-2(R)-羟基-4-苯基丁基]-N-叔丁基-十氢(4aS，8aS)-异喹啉-3(S)-甲酰胺进行反应，其中存在诸如碳化二亚胺和N-羟基化合物类的偶联剂，以催化剂量来使用N-羟基化合物。如EP 0611774中实施例7所述，上述物质在存在二环己基碳化二亚胺时于诸如乙酸乙酯／四氢呋喃的惰性溶剂或溶剂混合物内使用催化剂量的1-羟基-2(lH)-吡啶酮的情况下，被转化成N-叔丁基-十氢-2-[2(R)-羟基-4-苯基-3(S)-【〖N-(2-喹啉羰基)-L-天冬酰胺基〗氨基】丁基]-(4aS，8aS)-异喹啉-3(S)-甲酰胺，或者是它衍生的药学可用盐或相应的酯。N-叔丁基-十氢-2-[2(R)-羟基-4-苯基-3(S)-【〖N-(2-喹啉羰基)-L-天冬酰胺基〗氨基】丁基]-(4aS，8aS)-异喹啉-3(S)-甲酰胺及其上述衍生物可用作抗病毒剂，特别是抗HIV病毒，如EP 0346847和0432695中所述。
因此，本发明涉及这些化合物的制备方法。这种方法包括制备上述喹诺金的第一个步骤。然后将这个物质在随后的步骤中与2-[3(S)-氨基-2(R)-羟基-4-苯基丁基]-N-叔丁基-十氢(4aS，8aS)-异喹啉-3(S)-甲酰胺进行反应，转化成上述的N-叔丁基-十氢-2-[2(R)-羟基-4-苯基-3(S)-【〖N-(2-喹啉羰基)-L-天冬酰胺基〗氨基】丁基]-(4aS，8aS)-异喹啉-3(S)-甲酰胺，或可选地转化成相应的盐，优选甲磺酸盐，或者是一种酯。
本发明还涉及利用上述方法制备后续产物，特别是HIV蛋白酶抑制剂，例如N-叔丁基-十氢-2-[2(R)-羟基-4-苯基-3(S)-【〖N-(2-喹啉羰基)-L-天冬酰胺基〗氨基】丁基]-(4aS，8aS)-异喹啉-3(S)-甲酰胺。
此外，本发明还涉及任何一种上述方法得到的物质。
实施例
实施例1：制备S-喹诺金
将200g喹啉羧酸琥珀酰亚胺酯与117g的L天冬酰胺一水合物在弱氮气流下反应，与此同时在碳酸氢钠水溶液(1．5升中66g)搅拌(600r／min)2小时。在恒定的加热速度在2小时内使白色悬浮液的内部温度从20℃增加到50℃。从而使白色悬浮液变成浅粉色。为了控制反应，以HPLC检测试样存在的喹啉羧酸琥珀酰胺酯(＜0．5％)。于50℃再搅拌混合物0．5小时。然后完成反应，向反应混合物添加750ml甲醇。5-10分钟后反应混合物差不多完全通过溶液。之后，大约90ml的浓盐酸剂量使得反应混合物的PH调节到2．5-3。慢慢分离出白色的S-喹诺金。保持搅拌速度。内部温度从50℃升高到54℃。所有盐酸加入后的同时，以恒定的冷却速度在2．5小时内使悬浮液从54℃冷却到10℃，于该温度再搅拌0．5小时。在玻璃制内吸滤器(10厘米直径，3孔隙度)滤出悬浮液。相当大的结晶可以快速过滤。用母液淋洗反应器几次，使之冷却到10℃。随后用每次总量为300ml的去离子水洗涤滤饼三次。吸干滤饼并将其在真空烘箱(15-20毫巴)中于60℃干燥24小时。产率：185．6-190．3g(90-93％)；纯度：97≥％。
实施例2：制备R-喹诺金
使用类似实施例1的步骤，得到含量99％具有-50．1℃(1％DMF)旋光度的R-喹诺金和含量0．1％的S-喹诺金。