双氯芬酸偶联衍生物、其合成方法及抗炎作用 本发明涉及双氯芬酸(DC，下同)与取代的呋咱和硝氧甲基苯酚相偶联的化合物，它们的合成方法及其在制备抗炎、镇痛药方面的应用。
非甾体抗炎药(NSAIDs)是一类临床上广为应用的抗炎、镇痛药物，但其消化道副作用较为严重，如胃溃疡、穿孔、出血等。究其原因主要是NSAIDs在抑制炎症部位前列腺素(PGs)的同时，也抑制了胃肠道具有粘膜保护作用的PGs的合成。降低胃肠道副作用是近年来研究和开发新型NSAIDs的基本出发点。90年代初环氧酶(COX)两种亚型COX-1和COX-2的发现是NSAIDs发展史上的一大突破，使人们有可能研究抑制炎症部位PGs的COX-2选择性抑制剂，但其对肾脏和中枢神经系统是否产生毒性须长期临床观察后才能定论。90年代NSAIDs的另一重大进展是一氧化氮(NO)供体型NSAIDs，它的问世得益于80年代后期对NO的深入研究，其设计思想是基于NO与PGs在胃肠道作用的类似性和互补性，将具有NO释放性质的基团偶联到传统地NSAIDs分子中，这种NO-NSAIDs(一氧化氮供体型非甾体抗炎药，下同)在体内释放NO和原药NSAIDs，保留或增强抗炎作用，减少或消除NSAIDs引起的胃肠道副作用。
近年来已有数项专利涉及硝酸酯类的NO-NSAIDs，主要是硝酸烷基酯的制备及其抗炎和抗血栓活性。英国Metgrove公司合成了DC的饱和硝酸酯(PCT，专利号WO94/04484),Arena等人合成了芳基丙酸类NSAIDs的硝酸丁酯(PCT，专利号WO94/12463),Serra Masia等合成了醋氯芬酸及其衍生物的饱和硝氧烷基酯(EP,专利号0738 706A1),Mimoso等人合成了一系列NO-NSAIDs，其中NSAIDs包括芳基丙酸类，芳基乙酸类及昔康类，NO释放基团为亚硝酸酯，硫代亚硝酸酯及斯德酮亚胺等(PCT，专利号US96/32946),Del soldato等人制备了一系列阿司匹林类化合物的芳基硝酸酯(PCT，专利号97/16405)，中国的蔡雄等也制备了多种NSAIDs的饱和及不饱和的硝酸酯(CN，公开号1144092A)。这些专利化合物在体内释放一氧化氮和原药NSAID，具有和原药相当的抗炎和抗血栓活性，但胃肠道副作用明显减小。例如Nitrofenac，为一已知硝酸酯类NO-DC(专利号WO94/04484)，其抗炎活性与DC相当，胃肠道副作用小于DC(Wallace JL,CirinoG.A diclofenac derivative without ulcerogenic properties.Eur JPharmacol1994,257:249-255)(Elliott SN,Mcknight W,Cirino G,et al.A nitricoxide-releasing nonsteroidal anti-inflammatory drug accelerates gastriculcer healing in rats.Gastroenterology 1995,109:524-530)。
本发明的目的在于提供一种比现有药物更好的新型NO-NSAID，它们在体内释放NO和DC，发挥抗炎作用，同时也减少或消除DC的胃肠道毒副作用，可作为抗炎镇痛药，用于治疗风湿性、类风湿性关节炎、骨关节炎等疾病。
本发明的目的还在于提供一种新型NO-NSAID的可工业化生产的制备方法。
本发明的技术方案如下：
通式Ⅰ化合物：其中：R1代表O,NH；R2代表-(CH2)n-,n=3-5；CH2C≡CCH2；CH2CH(CH3)CH2CH2；CH2CH2OCH2CH2；-PhCH2-(m,p)。通式Ⅱ化合物：其中：R3代表-PhCH2-(o,m,p)；-Ph-(m,p)。通式Ⅲ化合物：其中：R3代表-PhCH2-(o,m,p)；-Ph-(m,p)。通式Ⅳ化合物：
通式Ⅰ化合物制备方法，其特征在于：双氯芬酸钠(DC-Na)与卤代醇反应后再与取代的呋咱氮氧化物缩合，或者DC与含羟基或氨基的呋咱氮氧化物(Ⅰp)在二环己基碳酰亚胺(DCC)存在下缩合，
其中：R1代表OH,NH2；R2代表-(CH2)n-,n=3-5；CH2C≡CCH2；CH2CH(CH3)CH2CH2；CH2CH2OCH2CH2；-PhCH2-(m,p)。
具体反应步骤为：
其中：X代表Br,Cl；n=3-5；或者：
通式Ⅱ化合物制备方法，其特征在于：DC与含羟基的呋咱氮氧化物(Ⅱp)在DCC存在下缩合，
其中：R3代表-PhCH2-(o,m,p)；-Ph-(m,p)。具体反应步骤为：
通式Ⅲ化合物制备方法，其特征在于：DC与含羟基的呋咱氮氧化物(Ⅲp)在DCC存在下缩合，其中：R3代表-PhCH2-(o,m,p)；-Ph-(m,p)。
具体反应步骤为：
通式Ⅳ化合物制备方法，其特征在于：DC与硝氧甲基酚(Ⅳp)在DCC存在下缩合。
具体反应步骤为：
通式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ化合物用于制备抗炎、镇痛药。
通式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ化合物的药理实验如下。1．抗炎活性1.1对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
实验方法见：徐叔云，卞如濂，陈修主编，《药理实验方法学》第二版，北京人民卫生出版社，1991年版。
DC-Na购自湖北宜城五联制药厂，规格为药用，下同。
Nitrofenac按专利(EP，专利号738706)方法合成，其结构经波谱确证。Nitrofenac为已知硝酸酯类NO-DC(WO94/04484)，有文献报道，其抗炎活性与DC相当，且胃肠道副作用小于DC，故将其作为参比药物，下同。
所有药物均用0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配成1.57×10-3mol/L的混悬液，与DC-Na等摩尔浓度。油状物则先加入药液总体积5％的二甲基亚砜，再加入总体积95％的0.5％CMC-Na，充分混匀。DC-Na给药剂量设定为20mg/kg，此剂量由人用剂量换算而来。
实验前小鼠禁食12小时，但不禁水。对小鼠灌胃给药，给药体积为0.4ml/10g。给药1小时后将小鼠右耳廓两侧用微量进样器均匀涂布二甲苯20μl致炎，左耳廓作对照。致炎30分钟后将小鼠脱颈椎处死，沿耳廓基线取下两耳，用打孔器(直径为7mm)于同一部位各取一个耳片称重。致炎侧耳片重量减去
对照侧耳片重量即为肿胀度。将各组数据进行t检验，比较组间差异的显著性。
表1．化合物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(n=10, x±s)
化合物 肿胀度(1mg) 化合物 肿胀度(mg)
CMC-Na 11.31±3.23# Ⅰ4 9.97±2.39
DC-Na 7.30±2.10* Ⅰ5 7.32±2.30*
Nitrofenac 8.67±3.56 Ⅱ1 10.64±1.65#
Ⅰ1 8.74±1.20 Ⅱ2 7.25 ± 1.86**
Ⅰ2 9.91±2.87 Ⅱ3 9.55±0.74*
Ⅰ3 9.00±3.61 Ⅳ1 6.31±1.45*
与CMC-Na相比，*P＜0.05,#P＜0.01
与DC-Na相比，#P＜0.05
由表1可见，化合物Nitrofenac,Ⅰ1,Ⅰ2,Ⅰ3,Ⅰ4,Ⅰ5,Ⅱ2,Ⅱ3和Ⅳ1抗炎活性与DC-Na相当，无显著性差异(P＞0.05)。1.2对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响
实验方法见：Cirino G,Peers SH,Flower RJ,et al.Human recombinantlipocortin 1 has acute local anti-inflammatory properties in the rat pawedema test.Proc Natl Acad Sci USA,1989,86:3428。
选择活性化合物Ⅰ1,Ⅰ2,Ⅰ3,Ⅰ4,Ⅰ5,Ⅱ2,Ⅳ1和Nitrofenac作为受试物，并均用0.5％ CMC-Na配成3.14×l0-3mol/L的混悬液，与DC-Na等摩尔浓度。油状物则先加入药液总体积5％的二甲基亚砜，再加入总体积95％的0.5％ CMC-Na，充分混匀，DC-Na给药剂量设定为10mg/kg，此剂量由人用剂量换算而来。每组10只大鼠，实验前禁食18-22小时，但不禁水。对大鼠灌胃给药，给药体积为1ml/100g。给药30分钟后，向大鼠右后足跖腱膜下注射1％角叉菜胶(灭菌生理盐水配制)0.1ml，测定致炎前和致炎后1,2,3,4,5小时大鼠右后足跖体积，以其致炎前后的足跖体积差值为肿胀程度，进行t检验，比较组间差异的显著性。
注射角叉菜胶致炎后的5小时内大鼠右后足跖容积明显增加。预先给予DC-Na，能够显著降低足跖容积的增加量。与CMC-Na组相比，Ⅳ1在2小时、3小时和4小时点明显减轻了足肿胀度(2小时点P＜0.001；3、4小时点P＜0.05)，尤其在2小时点，Ⅳ1的抗炎作用强于DC-Na(P＜0.01)。与CMC-Na组相比，Nitrofenac在3小时点(P＜0.01)和4、5小时点有显著差异(P＜0.05)；Ⅰ4在3、4小时点有显著差异(P＜0.05)；Ⅰ5在4小时点有显著差异(P＜0.01)。Nitrofenac和Ⅰ4、Ⅰ5的抗炎活性与DC-Na相当。Ⅱ2在5小时点的抗炎作用明显强于DC-Na(P＜0.05)。2．对大鼠胃肠道的影响
实验方法参照徐叔云，卞如濂，陈修主编的《药理实验方法学》第二版，北京人民卫生出版社，1991。
选择化合物Ⅰ4,Ⅰ5,Ⅱ2,Ⅳ1和Nitrofenac作为受试物。给药剂量及药物配制同1.2。每组8只大鼠(DC-Na组11只)，连续灌胃给药7天，测定给药前和给药末期体重的变化，于末次给药后观察并比较药物对大鼠胃肠道的影响。
所有大鼠禁食12小时后，摘眼球取血测定血液学指标(红细胞计数、血红蛋白含量)，用颈椎脱臼法处死大鼠，立即打开腹腔，从直肠收集粪便按试剂盒法进行隐血试验，并取出胃肠道，纵向剖开进行肉眼观察，综合评价动物胃肠道出血情况。2.1对大鼠体重的影响
表2．化合物对大鼠体重的影响
化合物 初期体重(g) 末期体重(g)
CMC-Na 203.88±16.62 227.57±24.60
DC-Na 201.67±19.99 191.00±17.49* Nitrofenac 208.63±14.72 211.14±10.30
Ⅰ4 196.57± 9.76 210.12±15.20
Ⅰ5 200.88±17.98 217.00±25.33
Ⅱ2 197.12±19.00 210.00±23.92
Ⅳ1 201.50±14.74 213.12±15.66
与CMC-Na相比，*P＜0.05
由表2可见，DC-Na组大鼠在给药末期体重明显降低(P＜0.05)，而其它所有化合物组大鼠的体重与给药前相比均无显著差异(P＞0.05)。2.2大鼠胃肠道的解剖学观察
表3．化合物对大鼠胃肠道的影响
化合物 给药期间动物 存活动物胃肠道
死亡率 评价等级
CMC-Na 0/8 0
DC-Na 5/11 3 Nitrofenac 1/8 2
Ⅰ4 0/8 1
Ⅰ5 0/8 1
Ⅱ2 0/8 0
Ⅳ1 0/8 0
0级：无溃疡
1级：粘膜表面糜烂
2级：深部溃疡或腔面弥漫性坏死
3级：溃疡穿孔
由表3可见，DC-Na组有5只大鼠死亡，Nitrofenac组1只大鼠死亡，其他组均未见死亡现象。由胃肠道评分值可知，Ⅰ4、Ⅰ5、Ⅱ2、Ⅳ1组大鼠的胃肠道副作用均小于DC-Na组和Nitrofenac组。2.3隐血试验
实验采用改良的Pyramidon滤纸法进行。
隐血试剂盒Fecal OB-Ⅱ购自Baso Diagnostic Inc.
表4隐血试验结果
CMC-Na Nitrofenac Ⅰ4 Ⅰ5 Ⅱ2 Ⅳ1
平均分 8 14.00 11.25 11.38 11.75 9.88
Gradit 1.0 2.1667 1.7083 1.7292 1.7917 1.4792
Ridit 0.5 1.0833 0.8542 0.8646 0.8958 0.7396显著性检验 1.0 2.78** 1.55 1.61 1.79 0.90与CMC-Na相比，**P＜0.01
由表4可见，除Nitrofenac组外，所有受试化合物组与CMC-Na组相比均无显著性差异(P＞0.05)。2.4血液学指标
表5．化合物对大鼠血液学指标的影响
化合物 红细胞计数(×1012/L) 血红蛋白含量(g/L)
CMC-Na 7.77±0.706# 131.33±9.83## Nitrofenac 6.93±0.538* 113.71±6.52**
Ⅰ4 7.44±0.840 129.38±9.13##
Ⅰ5 7.85±1.047 130.62±11.88##
Ⅱ2 9.00±0.837### 144.20±6.18###
Ⅳ1 8.46±0.864## 142.86±8.40###
与CMC-Na相比，*P＜0.05,**P＜0.01,
与Nitrofenac相比，#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001
由表5可见，受试化合物Ⅰ4,Ⅰ5,Ⅱ2和Ⅳ1组大鼠的血红蛋白含量以及Ⅱ2和Ⅳ1组大鼠的红细胞计数较Nitrofenac高，提示Ⅰ4,Ⅰ5,Ⅱ2和Ⅳ1组大鼠的失血情况较轻。3．NO体内释放研究
实验按试剂盒方法—硝酸还原酶法进行。
NO试剂盒购自南京聚力生物医学工程研究所。
选择化合物Ⅰ4,Ⅰ5,Ⅱ2,Ⅳ1和Nitrofenac作为受试物。其给药剂量、方式及药液配制同1.2，测定大鼠血清中NO的含量。
表6．大鼠血清中NO含量(μmol/L)测定结果(n=6,x±s)
化合物 1小时 3小时
CMC-Na 18.63±8.07### 15.93±5.80###Nitrofenac 54.08±6.05*** 49.77±9.91***
Ⅰ4 25.94±6.52### 28.72±9.75*##
Ⅰ5 29.62±11.74## 28.89±7.08**##
Ⅱ2 27.24±8.21### 27.78±2.75**###
Ⅳ1 28.87±8.75### 51.77±23.25**
与CMC-Na相比，**P＜0.01,***P＜0.001
与Nitrofenac相比，#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001
由表6可见，与CMC-Na相比，Nitrofenac在1小时和3小时NO释放量明显增加(P＜0.001)，化合物Ⅰ4、Ⅰ5、Ⅱ2在3小时点NO释放量明显增加。Ⅳ1在3小时点的NO释放量与Nitrofenac相当(P＞0.05)。
以下为本发明化合物的实施例，这些实施例并不意味着对本发明的限制。实施例1a)制备2-(2,6-二氯苯胺基)苯乙酸-2-羟基乙酯(Ⅰp1)将DC-Na(0.63g,2mmol)，碳酸氢钠(0.34g,4mmol),2-氯乙醇(0.68ml,0.8g,10mmol)和少量碘化钾溶于10ml N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加热至80℃，反应液为红棕色。冷却后，将反应液倾入60ml水中，用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。合并有机层，用5∶2乙酸乙酯∶石油醚(60-90℃)重结晶，得橙色粉末状固体0.65g，收率91％，mp60-62℃。IR(KBr,cm-1):3276,17201H NMR(CDCl3),δ(ppm):3.85-3.88(m,4H),4.28-4.31(t,2H),6.55-6.58(d,1H),6.94-7.02(m,2H),7.11-7.17(m,1H),7.23-7.25(dd,1H),7.26-7.36(d,2H).ESI-MS:340.1(M+H)+b)制备2-(2,6-二氯苯胺基)苯乙酸-4-(3-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧乙酯(Ⅰ1) 将3,4-二苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物(0.37g,1mmol)和Ⅰp1(0.34g,1.2mmol)溶于10ml四氢呋喃(THF)中,滴入25％氢氧化钠水溶液(0.08ml,1.2mmol)，渐有浑浊生成。将反应液倒入100ml水中，加入6N盐酸调pH=7。用乙酸乙酯(3×20ml)萃取，有机层合并后加饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥。过滤后将滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析，1∶6乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)混合液洗脱得白色粉末状固体0.51g，收率76％,mp124-125℃。IR(KBr,cm-1):3333,17241H NMR(CDCl3),δ(ppm):3.87(s,2H),4.40-4.90(m,4H),6.40-8.10(m,13H)ESI-MS:564.3(M+H)+实施例2a)制备4-(3-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧丁醇(Ⅰp2)将1,4-丁二醇(0.9ml,10mmol)和3,4-二苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物(0.73g,2mmol)溶于15ml THF中，滴入25％氢氧化钠水溶液(0.36ml,3mmol)，渐有浑浊生成。反应1小时后将固体过滤。浓缩滤液，往残余物中加入50ml水，用乙酸乙酯(3×20ml)萃取两次，有机层合并后加饱和食盐水洗一次，用无水硫酸镁干燥。过滤后将滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析，1∶4乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)混合液洗脱得白色粉末状固体0.48g，收率76％,mp70-72℃。IR(KBr,cm-1):33531H NMR(CDCl3),δ(ppm):1.74-1.79(m,2H),1.98-2.03(m,2H),2.06(s,1H),3.76-3.78(t,2H),4.47-4.79(t,2H),7.61-7.64(t,2H),7.76-7.79(t,1H),8.05-8.07(d,2H).ESI-MS:315.2(M+H)+b)制备2-(2,6-二氯苯胺基)苯乙酸-4-(3-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧丁酯(Ⅰ2)将Ⅰp2溶于15ml无水二氯甲烷中，加入DC(0.53g,1.8mmol)，二环己基碳酰亚胺(DCC,0.37g,1.8mol)，4-N,N-二甲氨基吡啶(DMAP)数粒。室温搅拌2小时，有白色沉淀生成。过滤，将滤液浓缩，残留物用硅胶柱层析，1∶9乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)混合液洗脱得黄色油状物0.73g，收率82％。IR(film,cm-1):3320,17221H NMR(CDCl3),δ(ppm):1.82-1.88(m,2H),1.90-1.95(m,2H),3.83(s,2H),4.23-4.25(t,2H),4.41-4.43(t,2H),6.54-6.58(d,1H),6.87(s,1H),6.93-7.00(m,2H),7.12-7.14(t,1H),7.22(d,1H),7.33-7.34(m,2H),7.57-7.60(t,2H),7.71-7.74(t,1H),8.03-8.05(d,2H).ESI-MS:614.0(M+Na)+实施例3a)制备(3-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧-3-丁醇(Ⅰp4)参照Ⅰp2的制备方法由1,3-丁二醇制得。用1∶1乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)重结晶得白色絮状固体，收率77％,mp101-103℃。IR(KBr,cm-1):34371H NMR(CDCl3),δ(ppm):1.30-1.32(d,3H),1.67(s,1H),1.92-2.08(m,2H),4.07-4.13(m,1H),4.51-4.69(m,2H),7.59-7.65(t,2H),7.73-7.79(t,1H),8.04-8.07(dd,2H).ESI-MS:315.1(M+H)+b)制备2-(2,6-二氯苯胺基)苯乙酸-(3-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧-3-丁酯(Ⅰ4)参照Ⅰ2的制备方法由Ⅰp4制得。1∶8乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)柱层析得无色油状物，收率82％。IR(film,cm-1):3327,17221H NMR(CDCl3),δ(ppm):1.35-1.37(d,3H),2.12-2.18(m,2H),3.80(s,2H),4.36-4.44(m,2H),5.15-5.21(m,1H),6.53-7.34(m,8H),7.55-7.85(m,5H).ESI-MS:614.0(M+Na)+实施例4a)制备2-[2-(3-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧乙基氧]乙醇(Ⅰp5)参照Ⅰp2的制备方法由一缩二乙二醇制得。1∶3乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)柱层析得淡黄色油状物，收率80％。IR(film,cm-1):34191H NMR(CDCl3),δ(ppm):2.19(s,1H),3.50-3.80(m,4H),3.80-4.00(m,2H),4.50-4.70(m,2H),7.61-8.13(m,5H).ESI-MS:353.0(M+Na)+b)制备2-(2,6-二氯苯胺基)苯乙酸-2-[2-(3-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧乙基]氧乙酯(Ⅰ5)参照Ⅰ2的制备方法由Ⅰp5制得。1∶3乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)柱层析得白色粉末状固体，收率83％,mp93-96℃。IR(KBr,cm-1):3367,17401H NMR(CDCl3),δ(ppm):3.80-3.82(t,2H),3.85-3.86(m,4H),4.34-4.36(t,2H),4.50-4.52(t,2H),6.53-7.34(m,8H),7.58-8.07(m,5H).ESI-MS:630.0(M+Na)+实施例5a)制备3-(3-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧丙胺(Ⅰp8)参照Ⅰp2的制备方法由正丙醇胺制得。1∶20甲醇-氯仿柱层析得淡黄色油状物，收率43％。IR(film,cm-1):34101H NMR(CDCl3),δ(ppm):2.03-2.12(m,2H),2.86(s,2H),2.98-3.03(t,2H),4.51-4.55(t,2H),7.58-8.06(m,5H).ESI-MS:300.0(M+H)+b)制备N-[3-(3-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧丙基]-2-(2,6-二氯苯胺基)苯乙酰胺(Ⅰ8)参照Ⅰ2的制备方法由Ⅰp8制得。3∶7乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)柱层析得白色粉末状固体，收率83％,mp165-168℃(dec)，收率71％。IR(KBr,cm-1):3417,3296,16481H NMR(CDCl3),δ(ppm):2.10-2.27(m,2H),3.45(s,1H),3.56-3.59(t,2H),3.78(s,2H),4.52-4.54(t,2H),6.50-7.34(m,8H),7.63-8.09(m,5H).ESI-MS:599.0(M+Na)+实施例6a)制备3-(4-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲醇(Ⅱp1)将3-羟甲基-4-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物(0.25g,1.3mmol)溶于10ml二氯甲烷中，加无水吡啶(0.24ml,3.4mmol)后，滴入二氯亚砜(0.25ml,3.4mmol)，反应液为黄色澄清透明溶液，室温搅拌过夜。将反应液用40ml冰水洗一遍，用饱和碳酸氢钠水溶液洗至水层为中性，再用饱和食盐水洗，干燥有机层。过滤浓缩得橙黄色油状物。将该产物溶于15ml DMF中，加入间羟基苯甲醇(0.2g,1.6mmol)，无水碳酸钾(1g,7.2mmol)和少量碘化钾，室温下反应3小时。将反应液倾入水中，用乙醚(3×20ml)萃取，醚层用20ml氢氧化钠水溶液洗，再用水洗至中性，用饱和食盐水洗后，干燥有机层。过滤，将滤液浓缩后柱层析[3∶7乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)]得橙红色油状物，真空干燥后得黄色固体0.24g，收率62％,mp66-68℃。IR(KBr,cm-1):34601H NMR(CDCl3),δ(ppm):1.07(s,1H),4.70(s,2H),5.11(s,2H),6.90-7.33(m,4H),7.50-7.87(m,5H).ESI-MS:321.2(M+Na)+b)制备2-(2,6-二氯苯胺基)苯乙酸-3-(4-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯(Ⅱ1)参照Ⅰ2的制备方法由Ⅱp1制得。1∶2二氯甲烷-石油醚(60-90℃)柱层析得白色粉末状固体，收率75％,mp116-118℃。IR(KBr,cm-1):3417,3296,16481H NMR(CDCl3),δ(ppm):3.88(s,2H),4.97(s,2H),5.17(s,2H),6.47-7.32(m,12H),7.49-7.82(m,5H).ESI-MS:576.3(M+Na)+实施例7a)制备4-(4-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲醇(Ⅱp2)参照Ⅱp1的制备方法由羟基苯甲醇制得。1∶4乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)柱层析得白色固体，收率69％,mp64-66℃。IR(KBr,cm-1):33531H NMR(CDCl3),δ(ppm):2.08(s,1H),4.65(s,2H),5.11(s,2H),6.98-7.34(q,4H),7.51-7.86(m,5H).ESI-MS:321.2(M+Na)+b)制备2-(2,6-二氯苯胺基)苯乙酸-4-(4-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯(Ⅱ2)参照Ⅰ2的制备方法由Ⅱp2制得。1∶2二氯甲烷-石油醚(60-90℃)柱层析得白色粉末状固体，收率71％,mp91-94℃。IR(KBr,cm-1):3448,17151H NMR(CDCl3),δ(ppm):3.86(s,2H),5.12(s,2H),5.14(s,2H),6.55-7.35(m,12H),7.54-7.88(m,5H).FAB-MS:575.8(M+1)*实施例8a)制备2-(4-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲醇(Ⅱp3)参照Ⅱp1的制备方法由邻-羟基苯甲醇制得。1∶4乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)柱层析得白色固体，收率71％,mp82-86℃。IR(KBr,cm-1):35091H NMR(CDCl3),δ(ppm):2.28(s,1H),4.56(s,2H),5.19(s,2H),6.96-7.35(m,4H),7.53-7.81(m,5H).ESI-MS:321.2(M+Na)+b)制备2-(2,6-二氯苯胺基)苯乙酸-2-(4-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯(Ⅱ3)参照Ⅰ2的制备方法由Ⅱp3制得。1∶2二氯甲烷-石油醚(60-90℃)柱层析得白色粉末状固体，收率65％,mp98-100℃。IR(KBr,cm-1):3357,17411H NMR(CDCl3),δ(ppm):3.78(s,2H),5.09(s,2H),5.10(s,2H),6.50-7.34(m,12H),7.48-7.82(m,5H).ESI-MS:598.1(M+Na)+实施例9a)制备3-(3-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)甲氧基苯甲醇(Ⅲp1)将3-羟甲基-4-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物(1.0g,5.2mmol)溶于30ml甲苯中，回流3天。减压蒸去溶剂，残余物柱层析[1∶15乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)]得黄色油状物，冷冻后得淡黄色固体(3-苯基-4-羟甲基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物)，再参照Ⅱp1的制备方法，1∶4乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)柱层析得黄色油状物，收率60％。IR(film,cm-1):33801H NMR(CDCl3),δ(ppm):1.59(s,1H),4.70(s,2H),5.23(s,2H),6.92-7.35(m,4H),7.48-7.93(m,5H).ESI-MS:321.1(M+Na)+b)制备2-(2,6-二氯苯胺基)苯乙酸-3-(3-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)甲氧基苯甲酯(Ⅲ1)参照Ⅰ2的制备方法由Ⅲp1制得。1∶2二氯甲烷-石油醚(60-90℃)柱层析得白色粉末状固体，收率74％,mp132-135℃。IR(KBr,cm-1):3366,17391H NMR(CDCl3),δ(ppm):3.87(s,2H),5.07(s,2H),5.18(s,2H),6.47-7.32(m,12H),7.46-7.89(m,5H).ESI-MS:598.2(M+Na)+实施例10制备2-(2,6-二氯苯胺基)苯乙酸-(3-硝氧甲基)苯酯(Ⅳ1)将间羟基溴苄(0.5g,2.67mmol)溶于10ml乙腈，加入5ml硝酸银(0.54g,3.20mmol)的乙腈溶液，有淡黄色浑浊产生。搅拌反应48小时，滤去沉淀，将滤液浓缩，加10ml二氯甲烷溶解，滤去不溶物，滤液浓缩，得淡黄色油状物0.43g。将其溶于15ml无水二氯甲烷中，加入DC(0.9g,3.04mmol),DCC(0.63g,3.04mmol),DMAP数粒。室温搅拌过夜，有白色沉淀生成。过滤，将滤液浓缩，1∶15乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)柱层析得黄色粒状晶体0.89g，收率81％，mp85-88℃。IR(KBr,cm-1):3372,3340,17371H NMR(CDCl3),δ(ppm):4.09(s,2H),5.40(s,2H),6.63-6.64(d,1H),6.77(s,1H),6.98-7.02(t,H),7.03-7.06(t,1H),7.13-7.22(m,3H),7.27-7.28(d,1H),7.35-7.38(m,3H),7.40-7.43(t,1H)ESI-MS:470.0(M+Na)+