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1、(10)授权公告号 CN 103173399 B (45)授权公告日 2014.12.03 CN 103173399 B (21)申请号 201310125401.5 (22)申请日 2013.04.11 C12N 1/20(2006.01) C12N 1/16(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (73)专利权人 山东领航生物工程有限公司 地址 262700 山东省潍坊市寿光市经济开发 区东环路北段路东 (72)发明人 解建平 (74)专利代理机构 北京联瑞联丰知识产权代理 事务所 ( 普通合伙 ) 11411 代理人 郑自群 CN 101748064 A,2010.0。
2、6.23, CN 101724559 A,2010.06.09, CN 101186879 A,2008.05.28, 贾聪俊等 . 接种微生物菌剂对猪粪堆肥效果 的影响 .家畜生态学报 .2011, 第 32 卷 ( 第 5 期 ), 周可等 . 不同微生物菌剂处理对鸡粪堆肥发 酵的影响 .天津农业科学 .2009, 第 15 卷 ( 第 3 期 ), (54) 发明名称 一种复合微生物菌剂及其生产方法 (57) 摘要 本发明提出了一种复合微生物菌剂及其生产 方法。本发明的技术方案是将相同体积的枯草芽 孢杆菌菌液、 酵母菌菌液和乳酸菌菌液按顺序依 次接种到发酵罐内先进行有氧发酵培养， 再进行。
3、 厌氧发酵培养， 得到复合微生物菌剂 ； 复合微生 物菌剂中， 枯草芽孢杆菌、 酵母菌和乳酸菌单个菌 种数量 106 10 7个 /mL， 总菌数量 107 108个 / mL。 本发明提供了一种价廉、 质优的复合微生物菌 剂， 可以用于快速发酵农家肥、 抑止土壤中有害细 菌的繁殖、 水产养殖用水中硫化物的分解等领域， 生产方法简便、 易操作， 可以实现商业化推广。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 王溯铭 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 (10)授权公告号 CN 1。
4、03173399 B CN 103173399 B 1/1 页 2 1. 一种生产复合微生物菌剂的方法， 其特征在于， 生产 100L 所述复合微生物菌剂， 所 述复合微生物菌剂的活性组分包括 ： 枯草芽孢杆菌、 酵母菌和乳酸菌 ； 枯草芽孢杆菌、 酵母 菌和乳酸菌单个菌种数量 106 107个 /mL， 总菌数量 107 108个 /mL， 包括如下生产步骤 ： 步骤一 ： 发酵前处理， 包括设备灭菌、 培养基灭菌和培养基液配制 ： 设备灭菌 ： 将发酵罐及培养基器皿 100 110灭菌 30min 60min， 之后加入容器体 积 80的过滤后的沸水， 并冷却至 30 45 ； 培养基灭菌。
5、 ： 所述培养基包括低糖培养基和高糖培养基两种 ； 所述低糖培养基中包括 下列重量的组分 ： 红糖 0.2 0.3g， 蛋白胨 0.06 0.12g， 磷酸二氢钾 0.1 0.3g， 硫酸 镁 0.01 0.03g， 氯化钾 0.03 0.05g， 氯化钠 0.03 0.05g， 酵母浸膏 0.3 0.5g， 卤片 0.01 0.02g， 玉米淀粉 0.1 0.3g ； 所述高糖培养基中包括下列重量份的组分 ： 葡萄糖 0.20.5g， 红糖0.40.8g， 糖蜜0.10.3g， 酵母浸膏0.20.5g， 尿素0.010.03g， 维生素 C0.01 0.03g ； 将低糖培养基和高糖培养基放。
6、入高压锅内灭菌 1h 3h ； 配制培养基液 ： 将灭菌后的低糖培养基和高糖培养基分别与 1L 无菌水混合， 放入所述 培养基器皿中， 搅拌 30min 备用 ； 步骤二 ： 发酵培养， 包括好氧培养和厌氧培养 ： 将配置好的低糖培养基液引流至发酵罐内， 之后将培养活化好的相同体积的枯草芽孢 杆菌菌液、 酵母菌菌液和乳酸菌菌液按顺序依次接种到发酵罐内， 三种菌液的体积为 4 7L ； 打开滤气泵， 供氧气 3 4 天进行好氧培养 ； 当 PH 5 6 时， 关闭所述滤气泵， 之后将高糖培养基液引流至发酵罐中， 将设备自循 环继电器调至 12h/ 次进行厌氧培养 3 4 天 ； 步骤三 ： 发酵。
7、后处理 ： 当 PH 3 4 时， 关掉所述自循环继电器。 2. 如权利要求 1 所述的一种生产复合微生物菌剂的方法， 其特征在于 ： 所述枯草芽 孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌的重量比为 30 40， 所述酵母菌菌液中酵母菌的重量比为 20 30， 所述乳酸菌菌液中乳酸菌的重量比为 30 40。 3. 如权利要求 1 所述的一种生产复合微生物菌剂的方法， 其特征在于， 所述枯草芽孢 杆菌菌液中枯草芽孢杆菌的重量比为 30， 所述酵母菌菌液中酵母菌的重量比为 30， 所 述乳酸菌菌液中乳酸菌的重量比为 30。 权 利 要 求 书 CN 103173399 B 2 1/5 页 3 一种复合微生物菌剂及。
8、其生产方法 技术领域 0001 本发明涉及复合微生物菌剂领域， 特别是指一种可用于快速发酵农家肥的一种复 合微生物菌剂及其生产方法。 背景技术 0002 随着农业生产的发展和化学肥料的大量使用， 土壤理化性能变差、 环境污染现象 加重。农家肥以其绿色、 环保、 无公害得到了广泛的应用， 但是农家肥成分复杂、 分解慢、 肥 效迟、 不易腐熟， 为了克服这些弊端， 科学家一直努力探索提高农家肥的分解速度。 发明内容 0003 本发明提出了一种复合微生物菌剂及其生产方法， 用以解决农家肥分解慢、 不易 腐熟的问题。 0004 一种复合微生物菌剂， 活性组分包括 ： 枯草芽孢杆菌、 酵母菌和乳酸菌 ；。
9、 枯草芽孢 杆菌、 酵母菌和乳酸菌单个菌种数量 106 107个 /mL， 总菌数量 107 108个 /mL。 0005 本发明还提出了一种生产复合微生物菌剂的方法， 生产 100L 复合微生物菌剂， 包 括如下生产步骤 ： 0006 步骤一 ： 发酵前处理， 包括设备灭菌、 培养基灭菌和培养基液配制 ： 0007 设备灭菌 ： 将发酵罐及培养基器皿高温 100 110灭菌 30min 60min， 之后加 入容器体积 80% 的过滤后的沸水， 并冷却至 30 45 ； 0008 培养基灭菌 ： 培养基包括低糖培养基和高糖培养基两种， 将低糖培养基和高糖培 养基放入高压锅内灭菌 1h 3h 。
10、； 0009 配制培养基液 ： 将灭菌后的低糖培养基和高糖培养基分别与 1L 无菌水混合， 放入 培养基器皿中， 搅拌 30min 备用 ； 0010 步骤二 ： 发酵培养， 包括好氧培养和厌氧培养 ： 0011 将配置好的低糖培养基液引流至发酵罐内， 之后将培养活化好的相同体积的枯草 芽孢杆菌菌液、 酵母菌菌液和乳酸菌菌液按顺序依次接种到发酵罐内， 三种菌液的体积为 4 7L ； 打开滤气泵， 供氧气 3 4 天进行好氧培养 ； 0012 当PH=56时， 关闭滤气泵， 之后将高糖培养基液引流至发酵罐中， 将设备自循环 继电器调至 12h/ 次进行厌氧培养 3 4 天 ； 0013 步骤三 。
11、： 发酵后处理 ： 当 PH=3 4 时， 关掉自循环继电器。 0014 作为一种优选的技术方案， 低糖培养基中包括下列重量的组分 ： 红糖 0.2 0.3g， 蛋白胨0.060.12g， 磷酸二氢钾0.10.3g， 硫酸镁0.010.03g， 氯化钾0.030.05g， 氯化钠 0.03 0.05g， 酵母浸膏 0.3 0.5g， 卤片 0.01 0.02g， 玉米淀粉 0.1 0.3g。 0015 作为一种优选的技术方案， 高糖培养基中包括下列重量的组分 ： 葡萄糖 0.2 0.5g， 红糖 0.4 0.8g， 糖蜜 0.1 0.3g， 酵母浸膏 0.2 0.5g， 尿素 0.01 0.0。
12、3g， 维生 素 C0.01 0.03g。 说 明 书 CN 103173399 B 3 2/5 页 4 0016 作为一种优选的技术方案， 枯草芽孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌的重量比为 30 40%， 酵母菌菌液中酵母菌的重量比为 20 30%， 乳酸菌菌液中乳酸菌的重量比为 30 40%。 0017 作为对上述技术方案的改进， 枯草芽孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌的重量比为 30%， 所述酵母菌菌液中酵母菌的重量比为 30%， 所述乳酸菌菌液中乳酸菌的重量比为 30%。 0018 本发明提供了一种价廉、 质优的复合微生物菌剂， 可以用于快速发酵农家肥、 抑止 土壤中有害细菌的繁殖、 水产养殖用水中硫。
13、化物的分解等领域， 生产方法简便、 易操作， 可 以实现商业化推广。 附图说明 0019 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案， 下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍， 显而易见地， 下面描述中的附图仅仅是本 发明的一些实施例， 对于本领域普通技术人员来讲， 在不付出创造性劳动性的前提下， 还可 以根据这些附图获得其他的附图。 0020 图 1 为本发明提出的一种复合微生物菌剂的生产流程示意图。 具体实施方式 0021 下面将结合本发明实施例中的附图， 对本发明实施例中的技术方案进行清楚、 完 整地描述， 显然， 所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例， 。
14、而不是全部的实施例。基于 本发明中的实施例， 本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他 实施例， 都属于本发明保护的范围。 0022 本发明提出了一种复合微生物菌剂， 活性组分包括 ： 枯草芽孢杆菌、 酵母菌和乳酸 菌 ； 枯草芽孢杆菌、 酵母菌和乳酸菌单个菌种数量 106 107个 /mL， 总菌数量 107 108个 /mL。 0023 如图 1 所示 ： 本发明还提出了一种生产复合微生物菌剂的方法， 生产 100L 复合微 生物菌剂， 包括如下生产步骤 ： 0024 步骤一 ： 发酵前处理， 包括设备灭菌、 培养基灭菌和培养基液配制 ： 0025 设备灭菌 ： 将发酵。
15、罐及培养基器皿高温 100 110灭菌 30min 60min， 之后加 入容器体积 80% 的过滤后的沸水， 并冷却至 30 45 ； 0026 培养基灭菌 ： 培养基包括低糖培养基和高糖培养基两种， 将低糖培养基和高糖培 养基放入高压锅内灭菌 1h 3h ； 0027 配制培养基液 ： 将灭菌后的低糖培养基和高糖培养基分别与 1L 无菌水混合， 放入 培养基器皿中， 搅拌 30min 备用 ； 0028 步骤二 ： 发酵培养， 包括好氧培养和厌氧培养 ： 0029 将配置好的低糖培养基液引流至发酵罐内， 之后将培养活化好的相同体积的枯草 芽孢杆菌菌液、 酵母菌菌液和乳酸菌菌液按顺序依次接种。
16、到发酵罐内， 三种菌液的体积为 4 7L ； 打开滤气泵， 供氧气 3 4 天进行好氧培养 ； 0030 当PH=56时， 关闭滤气泵， 之后将高糖培养基液引流至发酵罐中， 将设备自循环 继电器调至 12h/ 次进行厌氧培养 3 4 天 ； 说 明 书 CN 103173399 B 4 3/5 页 5 0031 步骤三 ： 发酵后处理 ： 当 PH=3 4 时， 关掉自循环继电器。 0032 优选的， 低糖培养基中包括下列重量的组分 ： 红糖 0.2 0.3g， 蛋白胨 0.06 0.12g， 磷酸二氢钾0.10.3g， 硫酸镁0.010.03g， 氯化钾0.030.05g， 氯化钠0.03 。
17、0.05g， 酵母浸膏 0.3 0.5g， 卤片 0.01 0.02g， 玉米淀粉 0.1 0.3g。 0033 优选的， 高糖培养基中包括下列重量的组分 ： 葡萄糖 0.2 0.5g， 红糖 0.4 0.8g， 糖蜜 0.1 0.3g， 酵母浸膏 0.2 0.5g， 尿素 0.01 0.03g， 维生素 C0.01 0.03g。 0034 优选的， 枯草芽孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌的重量比为 30 40%， 酵母菌菌液中 酵母菌的重量比为 20 30%， 乳酸菌菌液中乳酸菌的重量比为 30 40%。 0035 更为优选的， 枯草芽孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌的重量比为 30%， 酵母菌菌液中酵 母。
18、菌的重量比为 30%， 乳酸菌菌液中乳酸菌的重量比为 30%。 0036 本发明提供了一种价廉、 质优的复合微生物菌剂， 可以用于快速发酵农家肥、 抑止 土壤中有害细菌的繁殖、 水产养殖用水中硫化物的分解等领域， 生产方法简便、 易操作， 可 以实现商业化推广。 0037 实施例 1 ： 0038 步骤一 ： 发酵前处理， 包括设备灭菌、 培养基灭菌和培养基液配制 ： 0039 设备灭菌 ： 将发酵罐及培养基器皿高温 100 110灭菌 30min 60min， 之后加 入容器体积 80% 的过滤后的沸水， 并冷却至 30 45 ； 0040 培养基灭菌 ： 所述培养基包括低糖培养基和高糖培养。
19、基两种 ： 低糖培养基中包括 下列重量的组分 ： 红糖 0.2g， 蛋白胨 0.06g， 磷酸二氢钾 0.1g， 硫酸镁 0.01g， 氯化钾 0.03g， 氯化钠0.03g， 酵母浸膏0.3g， 卤片0.01g， 玉米淀粉0.1g ； 高糖培养基中包括下列重量的组 分 ： 葡萄糖 0.2g， 红糖 0.4g， 糖蜜 0.1g， 酵母浸膏 0.2g， 尿素 0.01g， 维生素 C0.01g ； 将低糖 培养基和高糖培养基放入高压锅内灭菌 1h 3h ； 0041 配制培养基液 ： 将灭菌后的低糖培养基和高糖培养基分别与 1L 无菌水混合， 放入 培养基器皿中， 搅拌 30min 备用 ； 0。
20、042 步骤二 ： 发酵培养， 包括好氧培养和厌氧培养 ： 0043 将配置好的低糖培养基液引流至发酵罐内， 之后将培养活化好的相同体积的枯草 芽孢杆菌菌液、 酵母菌菌液和乳酸菌菌液按顺序依次接种到发酵罐内， 其中 ： 枯草芽孢杆菌 菌液中枯草芽孢杆菌的重量比为 30%， 酵母菌菌液中酵母菌的重量比为 20%， 乳酸菌菌液中 乳酸菌的重量比为 30%， 三种菌液的体积为 4 7L ； 打开滤气泵， 供氧气 3 4 天进行好氧 培养 ； 0044 当PH=56时， 关闭滤气泵， 之后将高糖培养基液引流至发酵罐中， 将设备自循环 继电器调至 12h/ 次进行厌氧培养 3 4 天 ； 0045 步骤。
21、三 ： 发酵后处理 ： 当 PH=3 4 时， 关掉自循环继电器。 0046 本发明提供了一种价廉、 质优的复合微生物菌剂， 可以用于快速发酵农家肥、 抑止 土壤中有害细菌的繁殖、 水产养殖用水中硫化物的分解等领域， 生产方法简便、 易操作， 可 以实现商业化推广。 0047 实施例 2 ： 0048 步骤一 ： 发酵前处理， 包括设备灭菌、 培养基灭菌和培养基液配制 ： 0049 设备灭菌 ： 将发酵罐及培养基器皿高温 100 110灭菌 30min 60min， 之后加 说 明 书 CN 103173399 B 5 4/5 页 6 入容器体积 80% 的过滤后的沸水， 并冷却至 30 45。
22、 ； 0050 培养基灭菌 ： 所述培养基包括低糖培养基和高糖培养基两种， 低糖培养基中包括 下列重量的组分 ： 红糖 0.3g， 蛋白胨 0.12g， 磷酸二氢钾 0.3g， 硫酸镁 0.03g， 氯化钾 0.05g， 氯化钠0.05g， 酵母浸膏0.5g， 卤片0.02g， 玉米淀粉0.3g ； 高糖培养基中包括下列重量的组 分 ： 葡萄糖 0.5g， 红糖 0.8g， 糖蜜 0.3g， 酵母浸膏 0.5g， 尿素 0.03g， 维生素 C0.03g。将低 糖培养基和高糖培养基放入高压锅内灭菌 1h 3h ； 0051 配制培养基液 ： 将灭菌后的低糖培养基和高糖培养基分别与 1L 无菌水。
23、混合， 放入 培养基器皿中， 搅拌 30min 备用 ； 0052 步骤二 ： 发酵培养， 包括好氧培养和厌氧培养 ： 0053 将配置好的低糖培养基液引流至发酵罐内， 之后将培养活化好的相同体积的枯草 芽孢杆菌菌液、 酵母菌菌液和乳酸菌菌液按顺序依次接种到发酵罐内， 其中 ： 枯草芽孢杆菌 菌液中枯草芽孢杆菌的重量比为 40%， 酵母菌菌液中酵母菌的重量比为 30%， 乳酸菌菌液中 乳酸菌的重量比为 40%， 三种菌液的体积为 4 7L ； 打开滤气泵， 供氧气 3 4 天进行好氧 培养 ； 0054 当PH=56时， 关闭滤气泵， 之后将高糖培养基液引流至发酵罐中， 将设备自循环 继电器调。
24、至 12h/ 次进行厌氧培养 3 4 天 ； 0055 步骤三 ： 发酵后处理 ： 当 PH=3 4 时， 关掉自循环继电器。 0056 本发明提供了一种价廉、 质优的复合微生物菌剂， 可以用于快速发酵农家肥、 抑止 土壤中有害细菌的繁殖、 水产养殖用水中硫化物的分解等领域， 生产方法简便、 易操作， 可 以实现商业化推广。 0057 实施例 3 ： 0058 步骤一 ： 发酵前处理， 包括设备灭菌、 培养基灭菌和培养基液配制 ： 0059 设备灭菌 ： 将发酵罐及培养基器皿高温 100 110灭菌 30min 60min， 之后加 入容器体积 80% 的过滤后的沸水， 并冷却至 30 45 。
25、； 0060 培养基灭菌 ： 所述培养基包括低糖培养基和高糖培养基两种， 低糖培养基中包 括下列重量的组分 ： 红糖 0.25g， 蛋白胨 0.08g， 磷酸二氢钾 0.2g， 硫酸镁 0.02g， 氯化钾 0.04g， 氯化钠 0.04g， 酵母浸膏 0.4g， 卤片 0.015g， 玉米淀粉 0.2g ； 高糖培养基中包括下 列重量的组分 ： 葡萄糖 0.3g， 红糖 0.6g， 糖蜜 0.2g， 酵母浸膏 0.3g， 尿素 0.02g， 维生素 C0.02g， 将低糖培养基和高糖培养基放入高压锅内灭菌 1h 3h ； 0061 配制培养基液 ： 将灭菌后的低糖培养基和高糖培养基分别与 1。
26、L 无菌水混合， 放入 培养基器皿中， 搅拌 30min 备用 ； 0062 步骤二 ： 发酵培养， 包括好氧培养和厌氧培养 ： 0063 将配置好的低糖培养基液引流至发酵罐内， 之后将培养活化好的相同体积的枯草 芽孢杆菌菌液、 酵母菌菌液和乳酸菌菌液按顺序依次接种到发酵罐内， 其中 ： 枯草芽孢杆菌 菌液中枯草芽孢杆菌的重量比为 30%， 酵母菌菌液中酵母菌的重量比为 30%， 乳酸菌菌液中 乳酸菌的重量比为 30% ； 0064 三种菌液的体积为 4 7L ； 打开滤气泵， 供氧气 3 4 天进行好氧培养 ； 0065 当PH=56时， 关闭滤气泵， 之后将高糖培养基液引流至发酵罐中， 将。
27、设备自循环 继电器调至 12h/ 次进行厌氧培养 3 4 天 ； 说 明 书 CN 103173399 B 6 5/5 页 7 0066 步骤三 ： 发酵后处理 ： 当 PH=3 4 时， 关掉自循环继电器。 0067 本发明提供了一种价廉、 质优的复合微生物菌剂， 可以用于快速发酵农家肥、 抑止 土壤中有害细菌的繁殖、 水产养殖用水中硫化物的分解等领域， 生产方法简便、 易操作， 可 以实现商业化推广。 0068 以上仅为本发明的较佳实施例而已， 并不用以限制本发明， 凡在本发明的精神和 原则之内， 所作的任何修改、 等同替换、 改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 CN 103173399 B 7 1/1 页 8 图 1 说 明 书 附 图 CN 103173399 B 8 。