苯并噻唑蛋白酪氨酸激酶抑制剂 【发明领域】
本发明涉及苯并噻唑及其盐、用这些化合物治疗与蛋白酪氨酸激酶有关疾病如免疫疾病的方法、以及含这些化合物的药物组合物。
【发明背景】
蛋白酪氨酸激酶(PTKs)是与ATP结合的酶，作为底物，磷酸化的酪氨酸存在于肽和蛋白质中。这些酶在调节细胞信号包括细胞增殖和细胞分化中是关键的因素。PTKs特别包括受体酪氨酸激酶(RPTKs)，包括表皮生长因子激酶族的一些成员(例如，HER1和HER2)、血小板衍生生长因子(PDGF)和在血管生成中起作用的激酶(Tie-2和KDR)；此外还包括非受体酪氨酸激酶，包括Syk、JAK和Src(例如，src，fyn，lyn，Lck和blk)族的一些(见Bolen，J．B．，Rowley，R．B．，Spana，C．和Tsygankov，A．Y．，“在生血信号传导中酪氨酸蛋白激酶的src族”，FASEB J．，6，3403-3409(1992)；Ullrich，A．和Schlessinger，J．，“具有酪氨酸激酶活性的受体进行的信号传导”，Cell，61，203-212(1990)；及Ihle，J．N．，“生血细胞因子信号传导中的双面蛋白酪氨酸激酶”，Sem．Immunol．，7，247-254(1995))。
PTKs活性的提高已涉及了多种恶性和非恶性的增殖疾病。此外，PTKs在免疫系统的细胞调节中扮演了中心角色。PTK抑制剂于是可影响多种肿瘤性和免疫性疾病。这些疾病可以通过选择性抑制某些受体或非受体PTK如Lck而减轻，或由于PTK类中的同源性，某种抑制剂可以抑制一种以上的PTK。
特别引人注目的PTK是Lck，其发现于T细胞中，其参与了关键蛋白质底物的磷酸化。它是产生抗原受体信号和细胞活化需要的。缺乏Lck活性时，T细胞受体(TCR)ζ链不发生磷酸化，激酶ZAP-70没有活化，并且不发生T细胞活化必需的钙离子活动化(见Weiss，A．和Littman，D．R．，“淋巴细胞抗原受体进行地信号传导”，Cell，76，263-274(1994)；Iwashima，M．，Irving，B．A．，van Oers，N．S．C．，Chan，A．C．和Weiss，A．，“TCR与两个不同的细胞质酪氨酸激酶的连续作用”，Science，263，1136-1139(1994)；以及Chan，A．C．，Dalton M．，Johnson，R．，Kong，G．，Wang，T．，Thoma，R．，和Kurosaki，T．，“通过将酪氨酸493磷酸化来激活ZAP-70激酶活性是淋巴细胞抗原受体功能需要的”，EMBO J．，14，2499-2508(1995))。因此，Lck抑制剂用于治疗T细胞介导的疾病如具有重要的T细胞因素的慢性疾病，例如，类风湿性关节炎、多发性硬化和狼疮，以及已知T细胞扮演基本角色的急性疾病，例如，急性移植排斥反应和迟发型超敏(DTH)反应。
发明概述
本发明提供了下式Ⅰ的苯并噻唑化合物及其盐，用作蛋白酪氨酸激酶抑制剂：
其中
p是0、1、2或3；
X1和X2各为氢原子、或一起形成=O或=S；
每个R1独立地选自：
(1)氢原子或R6，
其中R6是烷基、链烯基、链炔基、环烷基、环烷基烷基、环烯基、环烯基烷基、芳基、芳烷基、杂环基或杂环基烷基，其每个未被取代或被Z1、Z2及一个或多个(优选1或2个)Z3取代；
(2)-OH或-OR6；
(3)-SH或-SR6；
(4)-C(O)qH、-C(O)qR6或-O-C(O)qR6，其中q是1或2；
(5)-SO3H或-S(O)qR6；
(6)卤素；
(7)氰基；
(8)硝基；
(9)-Z4-NR7R8；
(10)-Z4-N(R9)-Z5-NR10R11；
(11)-Z4-N(R12)-Z5-R6；
(12)-P(O)(OR6)2；
(13)任何两个R1基团可一起为亚烷基或亚烯基，与它们连接的碳原子一起构成3至8元饱和或不饱和环，该环未被取代或被Z1、Z2和Z3取代；或
(14)任何两个R1基团可与它们连接的碳原子一起形成杂环，该杂环未取代或被Z1、Z2和Z3取代；
R2和R3彼此独立地为：
(1)氢原子或R6；
(2)-Z4-R6；或
(3)-Z13-NR7R8；
R4和R5：
(1)彼此独立地为氢原子或R6；或
(2)与它们连接的氮原子一起形成3至8元饱和或不饱和杂环，其未被取代或被Z1、Z2和Z3取代，该杂环可选择性地稠合到苯环上，该苯环未被取代或被Z1、Z2和Z3取代；
R7、R8、R9、R10、R11和R12：
(1)彼此独立地为氢原子或R6；
(2)R7和R8可以一起为亚烷基或亚烯基，与它们连接的氮原子构成3至8元饱和或不饱和环，该环未被取代或被Z1、Z2和Z3取代；或
(3)R9、R10和R11中的任何两个可以一起为亚烷基或亚烯基，与它们连接的氮原子一起形成3至8元饱和或不饱和环，该环未被取代或被Z1、Z2和Z3取代；
R13是：
(1)氰基；
(2)硝基；
(3)氨基；
(4)-NHO烷基；
(5)羟基；
(6)-NHO芳基；
(7)-NHCOO烷基；
(8)-NHCOO芳基；
(9)-NHSO2烷基；
(10)-NHSO2芳基；
(11)芳基；
(12)杂芳基；
(13)-O烷基；或
(14)-O芳基；
R14是：
(1)硝基；
(2)-COO烷基；或
(3)-COO芳基；
Z1、Z2和Z3彼此独立地为：
(1)氢原子或Z6，其中Z6是(ⅰ)烷基、链烯基、链炔基、环烷基、环烷基烷基、环烯基、环烯基烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、环烷基芳基、杂环基或杂环基烷基；(ⅱ)基团(ⅰ)，其本身被一个或多个相同或不同的基团(ⅰ)取代；或(ⅲ)基团(ⅰ)或(ⅱ)，其被一个或多个下列基团(2)至(16)中定义的Z1、Z2和Z3取代；
(2)-OH或-OZ6；
(3)-SH或-SZ6；
(4)-C(O)qH、-C(O)qZ6或-O-C(O)qZ6；
(5)-SO3H或-S(O)qZ6；
(6)卤素；
(7)氰基；
(8)硝基；
(9)-Z4-NZ7Z8；
(10)-Z4-N(Z9)-Z5-NZ7Z8；
(11)-Z4-N(Z10)-Z5-Z6；
(12)-Z4-N(Z10)-Z5-H；
(13)氧代基团；
(14)-O-C(O)-Z6；
(15)Z1、Z2和Z3中的任何两个可一起为亚烷基或亚烯基，与它们连接的原子一起构成3至8元饱和或不饱和环；或
(16)Z1、Z2和Z3中的任何两个可一起为-O-(CH2)q-O-；
Z4和Z5彼此独立地为：
(1)单键；
(2)-Z11-S(O)q-Z12-；
(3)-Z11-C(O)-Z12-；
(4)-Z11-C(S)-Z12-；
(5)-Z11-O-Z12-；
(6)-Z11-S-Z12-；
(7)-Z11-O-C(O)-Z12-；或
(8)-Z11-C(O)-O-Z12-；
Z7、Z8、Z9和Z10：
(1)彼此独立地为氢原子或Z6；
(2)Z7和Z8或者Z6和Z10，可以一起为亚烷基或亚烯基，与它们连接的原子构成3至8元饱和或不饱和环，该环未被取代或被Z1、Z2和Z3取代；或
(3)Z7或Z8，与Z9一起可以为亚烷基或亚烯基，与它们连接的氮原子一起形成3至8元饱和或不饱和环，该环未被取代或被Z1、Z2和Z3取代；
Z11和Z12彼此独立地为：
(1)单键；
(2)亚烷基；
(3)亚烯基；或
(4)亚炔基；
Z13是：
(1)单键；
(2)-Z11-S(O)q-Z12-；
(3)-Z11-C(O)-Z12-；
(4)-Z11-C(S)-Z12-；
(5)-Z11-O-Z12-；
(6)-Z11-S-Z12-；
(7)-Z11-O-C(O)-Z12-；
(8)-Z11-C(O)-O-Z12-；
(9)-C(NR13)-；
(10)-C(CHR14)-；或
(11)-C(C(R14)2)-。
发明详述
下面是说明书中所用术语的定义。除非特别指出，为基团或术语提供的最初定义单独或作为其它基团的一部分用于整个本说明书的基团或术语。
术语“alk”或“烷基”指直链或支链烃基，其含1至12个碳原子，优选含1至8个碳原子。术语“低级烷基”指含1至4个碳原子的烷基。
术语“链烯基”指含2至10个碳原子，优选2至4个碳原子的直链或支链烃基，其中至少含有一个双键。当链烯基结合至氮原子上时，优选该基团不直接通过带双键的碳原子键接。
术语“链炔基”指含2至10个碳原子，优选2至4个碳原子的直链或支链烃基，其中至少含有一个三键。当链炔基结合至氮原子上时，优选该基团不直接通过带三键的碳原子键接。
术语“亚烷基”指通过单键连接的含1至5个碳原子的直链(例如，-(CH2)x-，其中x是1至5)，其可以被1至3个低级烷基取代。
术语“亚烯基”指含2至5个碳原子的直链，其中含1或两个双键，它们通过单键连接，并可以被1至3个低级烷基取代。亚烯基的实例为-CH=CH-CH=CH-，-CH2-CH=CH-，-CH2-CH=CH-CH2-，-C(CH3)2CH=CH-和-CH(C2H5)-CH=CH-。
术语“亚炔基”指含2至5个碳原子的直链，其中含1个三键，它们通过单键连接，并可以被1至3个低级烷基取代。亚炔基的实例为-C≡C-，-CH2-C≡C-，-CH(CH3)-C≡C-和-C≡C-CH(C2H5)CH2-。
术语“ar”或“芳基”指苯基、萘基和联苯基。
术语“环烷基”和“环烯基”指含3至12个碳原子的环烃基。
术语“卤素”和“halo”指氟、氯、溴和碘。
术语“不饱和环”包括部分不饱和环和芳香环。
术语“杂环”、“杂环的”或“杂环基”指全饱和或不饱和的，包括芳香性的(“杂芳基”)或非芳香环基，例如，4至7元单环、7至11元双环，或10至15元三环系统，其中在至少一个含碳原子环中含有至少一个杂原子。含有杂原子的杂环基团的每个环可以含有1、2、3或4个杂原子，杂原子选自氮原子、氧原子和／或硫原子，其中氮和硫杂原子可以选择性地被氧化，且氮杂原子可以选择性地季铵化。该杂环基团可以在环或环系中的任何杂原子或碳原子上连接。
单环杂环基的实例包括吡咯烷基、吡咯基、吡唑基、氧杂环丁烷基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑啉基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代-1H-氮杂环庚三烯基、1H-氮杂环庚三烯基、4-哌啶酮基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜、1，3-二氧杂环戊烷基和四氢-1，1-二氧代噻吩基等。
双环杂环基的实例包括吲哚基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并二氧杂环戊烷基、苯并噻吩基、喹宁啶基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、中氮茚、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基(如呋喃并[2，3-c]吡啶基、呋喃并[3，2-b]吡啶基或呋喃并[2，3-b]吡啶基)、二氢异吲哚基、二氢喹唑啉基(如3，4-二氢-4-氧代-喹唑啉基)、四氢喹啉基等。
三环杂环基的实例包括咔唑基，苯并吲哚基(benzidolyl)，菲咯啉基，吖啶基，菲啶基，夹氧蒽基等。
当q是1或2时，“-C(O)qH”指-C(O)-H或-C(O)-OH；“-C(O)qR6”或“-C(O)qZ6”分别指-C(O)-R6或-C(O)-OR6，或者-C(O)-Z6或-C(O)-OZ6；“-O-C(O)qR6”或“-O-C(O)qZ6”分别指-O-C(O)-R6或-O-C(O)-OR6，或者-O-C(O)-Z6或-O-C(O)-OZ6；而“-S(O)qR6”或“-S(O)qZ6”分别指-SO-R6或-SO2-R6，或者-SO-Z6或-SO2-Z6。
在一些情况下，式Ⅰ的化合物可以形成盐，这些盐也在本发明的范围内。除了特别说明外，就式Ⅰ化合物而言，在本文中理解为包括其盐。本文中使用的术语“盐(一种或多种)”指与无机和／或有机酸和碱形成的酸性盐和／或碱性盐。两性离子(内部或内盐)包括在本文中所用术语“盐(一种或多种)”中(并可以，例如，在R取代基中含有酸性部分如羧基时形成)。此处还包括季铵盐如烷基季铵盐。虽然其它盐是可利用的，例如，在制备过程中可以使用的分离或纯化步骤中，但是优选药用(即，无毒、生理可接受的)盐。例如，通过式Ⅰ的化合物与一定量(如等当量)的酸或碱在，例如，该盐在其中可沉淀的介质中反应形成式Ⅰ化合物的盐，或者在含水介质中反应随后冻干形成盐。
酸加成盐的实例包括乙酸盐(如与乙酸或三卤代乙酸如三氟乙酸形成的盐)、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天门冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊基丙酸盐、葡萄糖酸氢盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡萄庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢氯酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(如与硫酸形成的盐)、磺酸盐(如本文中所述)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐如甲苯磺酸盐、十一烷酸盐等。
碱盐(例如，当R取代基含有酸性部分如羧基时形成的)的实例包括铵盐、碱金属盐如钠盐、锂盐和钾盐、碱土金属盐如钙和镁盐、与有机碱(如有机胺)形成的盐如苄星青霉素G、二环己基胺、哈胺(hydrabamine)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-葡糖酰胺、叔丁基胺，以及与氨基酸如精氨酸、赖氨酸等形成的盐。此碱性含氮基团可以用以下试剂季铵化，例如，低级烷基卤化物(例如，甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、二烷基硫酸酯(例如，二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯)、长链卤化物(例如，癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如，苄基和苯乙基溴化物)，等等。
本发明化合物的前药和溶剂化物也在本文中考虑。本文中所用术语“前药”指给患者使用后通过代谢或化学过程进行化学转化得到式Ⅰ化合物的化合物或其盐和／或溶剂化物。式Ⅰ化合物的溶剂化物优选水合物。
本发明化合物的所有立体异构体，例如由于在式Ⅰ化合物的R取代基上存在不对称碳原子而产生的，包括对映异构体和非对映异构体，在本发明的范围内。本发明化合物的单个立体异构体，例如，可以基本上不含其它异构体的形式，或可以是混合的形式，例如，外消旋体，或与所有其它立体异构体或经选择的其它立体异构体混合。本发明的手性中心可以具有S或R构型，如IUPAC1974协议所定义的。
在整个说明书中，选择基团及其取代基以提供稳定的部分和化合物。
优选的化合物
式Ⅰ的化合物及其盐，其中一个或多个、特别是所有的p，X1，X2，R1，R2，R3，R4和R5选自如下定义，是本发明优选的化合物：
p是0或1；
每个R1独立地选自氢原子、卤素、烷基或烷氧基；
X1和X2一起形成=O或=S；
R2是氢原子；
R3选自氢原子、烷基、-Z4-R6或-Z13-NR7R8；
R4是氢原子；而
R5选自芳基，其被Z1、Z2和一个或多个(如一个或两个)Z3取代。其中基团-C(X1)(X2)-N(R4)(R5)连接在苯并噻唑的6位的式Ⅰ化合物是特别优选的。
制备方法
式Ⅰ的化合物可以通过如下方案A至C和Ⅰ至Ⅹ中所示的方法制备。本领域技术人员可以容易地选择溶剂、温度、压力和其它反应条件。本文中所有引用的文献作为整体引入以供参考。起始物质可以商购或由本领域技术人员容易地制备。
因此，本领域技术人员在阅读说明书和本文中引用的文献的基础上，完全能得到如何制备本文中要求保护的化合物的教导。
方案A
方案A说明了形成化合物Ⅰa的总方法，其是X1和X2一起形成=O的式Ⅰ化合物。如方案A所示，可以通过适当取代的氨基苯甲酸酯ⅰ与硫氰酸钠或钾和溴在酸性溶剂如乙酸中反应制备2-氨基取代的苯并噻唑酸酯ⅱ(见美国专利5496816)。R*是羧基保护基如烷基或芳烷基。
可以通过将ⅱ皂化，再通过本领域已知方法与胺ⅳ反应，制备其中R2和R3是氢原子的化合物Ⅰa。或者，ⅱ可以与R2L，其中L是离去基团如卤素反应(例如，以等摩尔量)，接着选择性地与R3L反应(例如，以等摩尔量)形成ⅲ。化合物ⅲ可以再被皂化，并与胺ⅳ反应形成其中R2和／或R3不是氢的式Ⅰa。
制备带有优选取代基的化合物Ⅰ的方法见如下方案Ⅰ至Ⅹ。
方案B
方案B说明了形成化合物Ⅰb的总方法，其是X1和X2一起形成=S的式Ⅰ化合物。如方案B所示，用试剂如Lawesson试剂(2，4-双(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫杂-2，4-二磷杂环己烷(diphosphetane)-2，4-二硫化物(见Bull．Soc．Chim．Belg．，87，223(1978))。
制备带有优选取代基的化合物Ⅰ的方法见如下方案Ⅰ至Ⅹ。
方案C
方案C说明了合成化合物Ⅰc的总方法，其是X1和X2各为氢原子的式Ⅰ化合物。如方案C所示，得自方案B的式Ⅰb化合物可以通过还原，例如，通过与阮内镍反应，转变为相应的胺Ⅰc。
制备带有优选取代基的化合物Ⅰ的方法见如下方案Ⅰ至Ⅹ。
方案Ⅰ
如方案Ⅰ所示，羧酸酯ⅱ可以与氯甲酸酯或二碳酸酯反应形成1。化合物1可以用碱如氢化钠、六甲基二甲硅烷基叠氮化钠／钾或二异丙基氨化锂(LDA)和烷基化试剂如R2X处理，其中X是卤素而R2优选烷基、芳烷基或环烷基烷基，并再用碱如氢氧化钾水溶液皂化得到2。或者，化合物1可以只用碱如氢氧化钾水溶液皂化得到3，其中R2是氢原子。
酸2可以与胺ⅳ反应，反应条件是肽键合成领域熟知的(例如，见Bodanszky和Bodanszky，肽化学的实践，Springer-Verlag，1984；Bodanszdy，肽合成的原理，Springer-Verlag，1984)，得到化合物Ⅰd，其是X1和X2一起形成=O，R3是COOR6的式Ⅰ化合物，并且由于2是起始物，故R2优选烷基、芳烷基或环烷基烷基。例如，活化2的羧基以与胺ⅳ反应，包括双-(2-氧代-3-噁唑烷基)-次膦酰氯(BOP氯)、苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)六氟磷酸鏻(BOP试剂)、六氟磷酸[O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲](HATU)，以及碳二亚胺如二环己基碳二亚胺(DCC)或3-乙基-3′-(二甲基氨基)丙基碳二亚胺(EDCI)，它们可单独或与羟基苯并三唑联合。或者，可以分离被活化的酯中间体并再用适当的胺ⅳ，在非质子溶剂如四氢呋喃(THF)或二甲基甲酰胺(DMF)中，在碱的存在下处理，如有机碱如六甲基二甲硅烷基叠氮化钠／钾、三乙胺、二异丙基乙胺或1，8-二氮杂双环[5．4．0]十一-7-烯(DBU)，或者无机碱如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯，或者氢化钠或氢化钾。或者，例如，通过与亚硫酰氯或草酰氯反应制备酰卤化物2，随后与胺ⅳ反应提供化合物Ⅰd。
类似于上述将2转变为Ⅰd的反应方法可以用于将3转变为R2是氢原子的Ⅰd。
方案Ⅱ
如方案Ⅱ所示，将R2和R3不是氢并对它们进行选择以便使它们连接的氮原子是非碱性的酸4，通过本领域熟知的方法还原为醛5(见March，Advanced Organic Chemistry，Wiley，1985)。例如，用二异丁基氢化铝还原后可以将酸4转变为相应的酯。或者，例如，通过用硼烷／THF，氢化锂铝处理可将酸4还原为相应的伯醇，或通过经混合酸酐还原，随后用Cr(Ⅵ)(例如，氯代铬酸吡啶，“PCC”)或在Swern或Moffatt条件下(例如，(COCl)2／二甲基亚砜)氧化为醛5。例如，可通过将ⅲ皂化得到起始酸4。
在还原剂如NaBH3CN、NaBH(OAc)3(Ac=乙酰基)或氢气和钯催化剂的存在下，用胺ⅳ将醛5还原氨化(见Hudlicky，有机化学中的还原反应，Wiley，1984)制备胺化合物Ⅰe，其是X1和X2各是氢原子而R2和R3各不是氢原子的式Ⅰ化合物。
方案Ⅲ
如方案Ⅲ所示，将酸4还原为伯醇(例如，通过用硼烷／四氢呋喃，氢化锂铝处理，或通过混合酸酐还原)，然后用本领域熟知方法进行转化(见March，Advanced Organic Chemistry，Wiley，1985)得到6，其中含有离去基团如卤化物、甲苯磺酸酯(OTs)、甲磺酸酯(OMs)或三氟甲磺酸酯(OTf)。选择R2和R3使它们连接的氮原子是非碱性的。然后，通过与胺ⅳ进行重排反应将化合物6转变为化合物Ⅰf，其是X1和X2各是氢原子的式Ⅰ化合物，优选胺ⅳ过量。
方案Ⅳ
R2=所定义的任何基团
R3=酰基或硫酰基
酰胺／硫酰胺
方案Ⅳ说明了用于制备式Ⅰ化合物(即Ⅰh，Ⅰi，Ⅰj，Ⅰk和Ⅰl)，其中R2是所定义的任何基团，而R3是酰基或硫酰基，X1和X2不是氢原子，而R1不是伯或仲胺。该起始化合物Ⅰg可以用本文中描述的适当方法制备。
在活化该羧基以进行如上述反应的试剂存在下，用羧酸7处理胺化合物Ⅰg来制备酰胺Ⅰh，其中活化羧酸的试剂如BOP试剂、HATU和碳二亚胺如DCC或EDCI，它们单独或与羟基苯并三唑联合使用。或者，在酸清除剂如二异丙基乙胺的存在下酰卤化物8可以与胺化合物Ⅰg反应。可以通过用如上所述的Lawesson试剂处理酰胺Ⅰh(其中X1，X2不是O)制备相应的硫酰胺Ⅰi。
用氯甲酸酯9或二碳酸酯10在酸清除剂如二异丙基乙胺的存在下处理胺化合物Ⅰg，可以制备氨基甲酸酯Ⅰj。
通过如下一种方法处理胺化合物Ⅰg可以制备脲Ⅰk：1)用氯代甲酸酯9，如苯基氯代甲酸酯，然后与胺11反应；2)在酸清除剂如二异丙基乙胺的存在下用氨基甲酰氯12处理；或3)与异氰酸酯13a(其中在Ⅰk中Rc=H)反应。用硫代异氰酸酯13b处理胺化合物Ⅰg可以制备相应的硫脲Ⅰl。
Ra选择包括在R6定义中的那些基团，以便基团-C(=A)-Ra是R3所定义范围内的酰基或硫酰基。Rb和Rc选自包括在R7和R8定义中的那些基团，以便基团-C(=A)-N(Rb)(Rc)是R3定义中的酰基或硫酰基。
方案Ⅴ
R2=除酰基以外的所定义的任何基团
R3=烷基，环烷基，环烷基烷基，环烯基烷基，芳烷基或饱和杂环
方案Ⅴ说明了可以用于制备Ⅰn的方法，Ⅰn中R2是除酰基外的任何定义基团，且对其的选择使其连接的氮原子为碱性，R3是烷基、环烷基、环烷基烷基、环烯基烷基、芳烷基或饱和杂环而X1和X2一起为氧原子。可以通过本文中描述的适当方法制备起始化合物Ⅰm和Ⅰo。
如方案Ⅴ所示，胺化合物Ⅰm在所述的还原氨化条件下与醛或酮14反应，得到胺Ⅰn。也可以通过用亚硝酸叔丁基酯或亚硝酸钠在卤化铜(Ⅰ)的存在下处理氨基苯并噻唑Ⅰo，其中R2和R3是氢原子，得到卤代苯并噻唑15，然后在碱如氢化钠或氢化钾等的存在下用胺16进行排代反应(见Lee等，J．Heterocyclic Chemistry，22，1621(1985))制得Ⅰh。
Rd和Re独立地选自氢原子、烷基、芳基、环烷基或环烯基，或一起为亚烷基或亚烯基闭合的3至8元饱和或不饱和环，以便基团-CH(Rd)(Re)是R3定义中的基团。
方案Ⅵ
R2=除酰基外所定义的任何基团
R3=芳基、杂芳基
如方案Ⅵ所示，当R2是除酰基外所定义的任何基团，且其选择使其连接的氮原子是碱性，R3是芳基或杂芳基，而X1和X2不是氢原子时，胺化合物Ⅰp可以与卤代苯基或卤代杂芳基17在钯(O)催化剂的存在下反应(见J．Am．Chem．Soc．，118，7215(1996))得到胺Ⅰq，其中Ⅰq是如此方案所述具有特定取代基的式Ⅰ化合物。可以用本文中所述的适当方法制备起始化合物Ⅰp。
方案Ⅶ
R2=所定义的任何基团
R3=杂芳基
如方案Ⅶ所示，当R2是所定义的任何基团而R3是杂芳基时，胺化合物Ⅰr可以与2-卤代杂芳基化合物17反应，其中Q与其键接的原子一起形成5或6元单环或10至12元双环杂芳基(如形成2-氯吡啶或2-氯嘧啶)，得到胺Ⅰs，其中Ⅰs是此方案所述的具有特定取代基的式Ⅰ化合物。可以通过本文中描述的适当方法制备起始化合物Ⅰr。
方案Ⅷ
如方案Ⅷ所示，硫脲化合物Ⅰl(其中X1和X2不是氢原子)可以与适当的胺在双-(2-氧代-3-噁唑烷基)-次膦酰氯(BOP氯)、苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)六氟磷酸鏻(BOP试剂)、六氟磷酸[O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲](HATU)，以及碳二亚胺如二环己基碳二亚胺(DCC)或3-乙基-3′-(二甲基氨基)丙基碳二亚胺(EDCI)或二异丙基碳二亚胺(DIC)的存在下，在有机碱如三乙胺、二异丙基乙胺或二甲基氨基吡啶的存在下，在溶剂如二甲基甲酰胺、二氯甲烷或四氢呋喃中反应，形成化合物Ⅰt。
或者，化合物Ⅰl可以与适当的胺在汞(Ⅱ)盐如氯化汞的存在下反应或通过文献中已知的其它方法反应形成Ⅰt。
方案Ⅸ
如方案Ⅸ所示，胺Ⅰp(其中X1和X2不是氢原子)可以与二苯基氰基碳二亚胺单独反应，或者在碱如氢化钠、六甲基二甲硅烷基叠氮化钠或二甲基氨基吡啶的存在下，在乙腈或四氢呋喃、二甲基甲酰胺中，在室温下或升高的温度下反应，形成中间体化合物Ⅰu，其可以与胺(R7R8NH)反应形成化合物Ⅰt(其中R=氰化物)。
方案Ⅹ
如方案Ⅹ所示，化合物Ⅰp(其中X1和X2不是氢原子)可以与17或18单独反应，或者在碱如氢化钠、六甲基二甲硅烷基叠氮化钠或二甲基氨基吡啶的存在下，在二甲基甲酰胺或四氢呋喃中，在室温下或升高的温度下反应，分别形成化合物Ⅰv或Ⅰw，它们可以与胺(R7R8NH)在室温下或升高的温度下反应分别形成化合物Ⅰx或Ⅰy。
应用
本发明的化合物抑制蛋白酪氨酸激酶，特别是Lck，并不同程度上抑制其它Src族激酶如Fyn，Lyn，Src，Yes，Hck，Fgr和Blk。因此，它们用于治疗(包括预防和治疗)与蛋白酪氨酸激酶有关的疾病，如免疫性和肿瘤疾病。“与蛋白酪氨酸激酶有关的疾病”为酪氨酸激酶活性异常导致的和／或通过抑制一种或多种这样的酶减轻的疾病。例如，Lck抑制剂在治疗一些这样的疾病中是有价值的(例如，治疗自身免疫性疾病)，这是由于Lck抑制阻断了T细胞活化。
本发明的化合物抑制T细胞活化。治疗T细胞介导的疾病，包括抑制T细胞活化和增殖，是本发明特别优选的实施方案。优选选择性抑制T细胞活化和增殖的化合物。通过氧化应力阻断内皮细胞PTK活化，由此限制引起嗜中性白细胞结合的粘着分子的表面表达，并抑制嗜中性白细胞活化需要的PTK的本发明化合物，例如，用于治疗局部缺血和再灌注损伤。
因此，本发明提供了治疗与蛋白酪氨酸激酶有关的疾病的方法，包括给需要的患者使用有效量的至少一种式Ⅰ化合物的步骤。如下所述的其它治疗剂可以在本发明方法中与本发明化合物一起使用。在本发明的方法中，这些其它治疗剂(一种或多种)可以在本发明化合物给药前、同时或后给药。
本发明化合物在治疗与蛋白酪氨酸激酶有关疾病中的用途为，例如，但不限于治疗以下疾病：移植(如器官移植、急性移植或异种移植物或同种移植物(如在烧伤治疗中使用的))排斥；防止局部缺血或再灌注损伤如在器官移植、心肌梗塞、中风中发生的或其它原因引起的局部缺血或再灌注损伤；移植耐受性诱导；关节炎(如类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎或骨关节炎)；多发性硬化；炎性肠疾病，包括溃疡性结肠炎和克罗恩氏病；狼疮(系统性红斑狼疮)；移植物抗宿主疾病；T细胞介导的过敏性疾病，包括接触性过敏、延迟性过敏和面筋过敏性肠病(乳糜泻)；牛皮癣；接触性皮炎(包括毒葛)；桥本氏病；干燥综合征；自身免疫性甲状腺机能亢进，如格雷夫斯病；阿狄森氏病(肾上腺的自身免疫性疾病)；自身免疫性多腺疾病(也称为自身免疫性多腺综合征)；自身免疫性脱发；恶性贫血；白癜风；自身免疫性垂体机能减退；巴二氏综合征；其它自身免疫性疾病；癌症，其中Lck或其它Src族激酶如Src被活化或过度表达，如结肠癌和胸腺瘤，或其中Src族激酶活性有利于肿瘤生长或存活的癌症；肾小球性肾炎，血清病；uticaria；变应性疾病如呼吸系统变态反应(哮喘、枯草热、变应性鼻炎)或皮肤变态反应；巩膜瘤(scleracierma)；阿利贝利尔氏病；急性炎症反应(如急性呼吸窘迫综合征和局部缺血／再灌注损伤)；皮肤肌炎；斑秃；慢性光化性皮炎；湿疹；贝切特氏病；脓疱掌跖病；坏疽性脓皮病；Sezary综合征；特异性皮炎；系统性硬化及硬斑病。本发明还提供了治疗上述疾病如特异性皮炎的方法，该方法使用能抑制蛋白酪氨酸激酶的任何化合物。
除Lck外的Src族激酶，如Hck和Fgr，在引起嗜中性白细胞呼吸发作的Fcγ受体和应答单核细胞和巨噬细胞的Fcγ受体中是重要的。本发明化合物抑制在嗜中性白细胞中Fcγ诱发的呼吸系统发作反应。依赖于嗜中性白细胞的反应和潜在的其它细胞的反应，抑制Fcγ受体的能力可使本发明化合物除其对T细胞的作用外产生其它抗炎活性。对T细胞的活性和对其它细胞的潜在活性具有特别的价值，例如，在炎性疾病如关节炎和炎性肠疾病的治疗中。具体地讲，本发明化合物对治疗以下疾病具有价值：自身免疫性肾小球性肾炎以及免疫复合物沉积在肾脏而激发Fcγ受体反应导致肾损伤的其它肾小球性肾炎。
此外，除Lck外的Src族激酶，如Lyn和Src，在Fcε受体诱导的肥大细胞和嗜碱性细胞脱粒中是重要的，上述细胞在哮喘、变应性鼻炎和其它变应性疾病中起重要作用。Fcε受体由ⅠgE-抗原复合物刺激。本发明的化合物抑制Fcε受体引起的脱粒反应，包括在不表达Lck的嗜碱性细胞系RBL中。依赖于肥大细胞和嗜碱性细胞的反应，抑制Fcε受体的能力可使本发明化合物除其对T细胞的作用外产生其它抗炎活性。本发明化合物对T细胞的活性表明它们可以在治疗哮喘、变应性鼻炎、特异性皮炎和其它变应性疾病中起作用。本发明化合物对肥大细胞和嗜碱性细胞的活性可以对治疗这些疾病具有潜在的利益。
本发明化合物对T细胞的活性在治疗上述任何疾病中具有价值。此外，对T细胞、嗜中性白细胞和其它细胞的潜在结合活性可以在治疗上述任何疾病中起到附加作用。
在特定的实施方案中，不论其病因如何，本发明的化合物用于治疗上述疾病，例如，治疗移植排斥、类风湿性关节炎、多发性硬化、炎性肠疾病、狼疮、移植物抗宿主病、T细胞介导的过敏性疾病、牛皮癣、桥本氏病、巴二氏综合征、癌症、接触性皮炎、变应性疾病如变应性鼻炎，哮喘、局部缺血或再灌注损伤，或特异性皮炎，不论其是否与PTK有关。
本发明还提供了药物组合物，其中含有治疗有效量的、至少一种能治疗与蛋白酪氨酸激酶有关疾病的式Ⅰ化合物，以及药用载体或稀释剂。本发明的组合物可以含有如下所述的其它治疗剂，并例如可以通过使用常规固体或液体载体或稀释剂以及适于所需给药方式的药物添加剂(如赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂等)，按照药物制剂领域熟知的技术进行配制。
式Ⅰ的化合物可以通过任何适宜的方式给药，例如，口服，例如以片剂、胶囊、颗粒剂或散剂的形式；舌下；颊部；非肠道，如通过皮下、静脉内、肌肉内或胸骨内注射或输液技术(例如，以灭菌注射水或非水溶液剂或混悬剂)；鼻内，如通过吸入喷雾；局部，例如以霜或软膏的形式；或直肠，例如以栓剂的形式；此给药以单位剂型的形式进行，其中含有无毒药用载体或稀释剂。本发明的化合物，例如，可以以适于立即释放或延迟释放的形式给药。通过使用含有本发明化合物的适当药物组合物可以得到立即释放或延迟释放，或特别是在延迟释放的情况下，使用药具如皮下埋植物或渗透泵。本发明的化合物也可以以微脂粒的形式给药。
口服给药的组合物的例子包括混悬剂，其中可以含有，例如，用于赋形的微晶纤维素、作为助悬剂的藻酸或藻酸钠、作为粘度提高剂的甲基纤维素和例如本领域熟知的甜味剂或矫味剂；和立即释片剂，其中可以含有，例如，微晶纤维素、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁和／或乳糖和／或本领域已知的其它赋形剂、粘合剂、填料、崩解剂、稀释剂和润滑剂。本发明化合物也可以经口腔通过舌下和／或颊部给药施用。铸型片剂、压缩片剂或冻干片剂是可以使用的具体形式。组合物的实例包括将本发明的化合物(一种或多种)与速溶稀释剂如甘露醇、乳糖、蔗糖和／或环糊精配制的那些。在这些制剂中还含有高分子量赋形剂如纤维素(avicel)或聚乙二醇(PEG)。这些制剂还可以含有有助于粘膜粘附的赋形剂如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)、马来酸酐共聚物(例如，Gantrez)，以及控释试剂如聚丙烯酸共聚物(例如，Carbopol 934)。也可加入润滑剂、助流剂、矫味剂、着色剂和稳定剂以易于制造和使用。
鼻内气雾剂或吸入给药的组合物的实例包括在盐水中溶液剂，其中可以含有，例如，苄醇或其它适宜的防腐剂、提高生物利用度的吸收促进剂和／或其它本领域已知的助溶剂或分散剂。
非肠道给药组合物的实例包括注射液或混悬剂，其中可以含有，例如，适当的无毒非肠道给药用稀释剂或溶剂，如甘露醇、1，3-丁二醇、水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液或其它适宜的分散或湿润及助悬剂，包括合成的单或二甘油酯以及脂肪酸，包括油酸。
直肠给药组合物的实例包括栓剂，其中可以含有，例如，适宜的无刺激性赋形剂，如可可脂、合成甘油酯或聚乙二醇，它们在常温下是固体，但在直肠腔中液化和／或溶解以释放药物。
局部给药组合物的实例包括局部载体如Plastibase(矿物油和聚乙烯形成的凝胶)。
本发明化合物的有效量可以由本领域普通技术人员确定，并包括对于成人的举例性剂量为每天约0．1至100mg／kg体重的活性化合物，其可以以单剂量给药或以单个可分的剂量形式给药，如每天1至4次。应理解对于特定患者的特定剂量水平和给药频率是可变的，并依赖于多种因素，包括所用特定化合物的活性，该化合物代谢稳定性和作用时，患者的种族、年龄、体重、身体状况。性别和饮食，给药的方式和时间，排泄速度，药物的联合以及特定病症的严重性。被治疗的优选对象包括动物，最优选哺乳动物如人，及驯养动物如狗、猫等，它们患有与蛋白酪氨酸激酶有关的疾病。
本发明的化合物可以单独或彼此联合和／或与其它适宜的治疗剂联合，用于治疗与蛋白酪氨酸激酶有关的疾病，例如除本发明化合物以外的PTK抑制剂、抗炎药、抗增生剂、化疗剂和免疫抑制剂。
其它治疗剂的实例包括如下：环孢菌素(例如，环孢菌素A)，CTLA4-Ⅰg，抗体如抗ICAM-3，抗-ⅠL-2受体(抗-Tac)，抗-CD45RB，抗-CD2，抗-CD3(OKT-3)，抗-CD4，抗-CD80，抗-CD86，单克隆抗体OKT3，阻断CD40和gp39之间作用的试剂，如针对CD40和／或gp39的特异性抗体(即CD154)、由CD40和gp39构建的融合蛋白(CD40Ig和CD8gp39)，NF-κB功能的抑制剂，如核转位抑制剂，如脱氧精胍菌素(DSG)，非甾类抗炎药(NSAIDs)如布洛芬，甾类如泼尼松或地塞米松，金化合物，抗增殖剂如甲氨蝶呤、FK506(他克莫司，Prograf)、霉酚酸莫非替克，细胞毒药物如硫唑嘌呤或环磷酰胺，TNF-α抑制剂如替尼达帕，抗-TNF抗体或可溶性TNF受体及雷帕霉素(西罗莫司或Rapamune)及其衍生物，以及下列美国专利申请(将它们整体引入作为参考)中公开的PTK抑制剂：1998年6月15日申请的系列号No．09／097338和1998年6月15日申请的系列号No．09／094797。将下列文献及其中引用的参考文献：Hollenbaugh，D．，Douthwright，J．，McDonald，V．，and Aruffo，A．，“可裂解CD40Ig融合蛋白及与sgp39的结合”，J．Immunol．Methods(Netherlands)，188(1)，p．1-7(1995年12月15日)；Hollenbaugh，D．，Grosmaire，L．S．，Kullas，C．D．，Chalupny，N．J．，Braesch-Andersen，S．，Noelle，R．J．，Stamenkovic，I．，Ledbetter，J．A．，and Aruffo，A．，“人T细胞抗原gp39，TNF基因族的一员，是CD40受体的配体：具有B细胞共同刺激活性的gp39稳定形式的表达”，EMBO J(England)，11(12)，p 4313-4321(1992年12月)；及Moreland，L．W．等，“用重组人肿瘤坏死因子受体(p75)-Fc融合蛋白治疗类风湿性关节炎”，New England J．of Medicine，337(3)，p．141-147(1997)。
当与本发明的化合物联合使用时，可以使用上述其它治疗剂的，例如，医生手册(Physicians′Desk Reference，PDR)所指出的量，或者通过本领域普通技术人员另行测定。
下列检测可以用于确定化合物(“被测化合物”)作为PTK抑制剂的活性级别。下列实施例中描述的化合物已在一个或多个下述实验中检测，并显示了活性。
用Lck，Fyn，Lyn，Hck，Fgr或Src进行酶检测
下列检测用蛋白酪氨酸激酶用Lck，Fyn，Lyn，Hck，Fgr或Src进行。
将感兴趣的蛋白酪氨酸激酶在激酶缓冲液(20mM MOPS，pH7，10mM氯化镁)中在被测化合物的存在下孵育。通过向最终浓度为1μMATP，3．3μCi／ml[33P]γ-ATP以及0．1mg／ml酸变性烯醇化酶(按照Cooper，J．A．，Esch，F．S．，Taylor，S．S．，and Hunter，T．，“在体内和体外酪氨酸蛋白激酶利用的烯醇化酶和乳酸脱氢酶中的磷酸化位点“，J．Biol，Chem．，259，7835-7841(1984)制备)物质中加入底物引发反应。10分钟后，通过加入10％三氯乙酸，100mM焦磷酸钠停止反应，然后加入2mg／ml胎牛血清白蛋白。标记的烯醇化酶蛋白底物在4℃沉淀，收集入Packard Unfilter板中并在Topcount闪烁计数器中计数，以确定被测化合物的蛋白酪氨酸激酶抑制活性(活性与得到的标记烯醇化酶蛋白的量成反比)。试剂的确切浓度及标记的量可以按照需要变化。
此检测的优点是使用外源性底物(烯醇化酶)，具有更精确的酶动力学，并可以在96孔板中进行，这样易于自动化。此外，相当于GST-蛋白酪氨酸激酶融合蛋白而言，His激发蛋白酪氨酸激酶(如下所述)提供了更高的产率和纯度。
此蛋白酪氨酸激酶可以商购或通过本文中描述的重组方法获得。为了制备重组Lck，用Life Technologies(Gibco)杆状病毒载体pFastBacHta(商购)，在昆虫细胞中将人Lck制备为His激发的融合蛋白。通过PCR(聚合酶链反应)分离的编码人Lck的cDNA插入该载体并用制造商描述的方法表达蛋白。用亲和色谱将Lck纯化。为了在昆虫细胞中制备Lck使用的杆状病毒，见Spana，C．，O′Rourke，E．C．，Bolen，J．B．，and Fargnoli，J．，“分析在Spodoptera frugiperda细胞中以谷胱甘肽S-转移酶蛋白表达的酪氨酸激酶p561ck”，Protein expression and purification，Vol．4，p．390-397(1993)。可以使用类似的方法重组制备其它Src族激酶。
细胞检测
(1)细胞内酪氨酸磷酸化
将Jurkat T细胞与被测化合物一起孵育，然后通过加入抗CD3的抗体(单克隆抗体G19-4)刺激。4分钟后或在其它需要的时间内通过加入含NP-40洗涤剂的裂解缓冲液裂解细胞。通过抗磷酸酪氨酸免疫印迹实验检测蛋白的磷酸化。通过用抗ZAP-70抗体进行免疫沉淀，随后用抗磷酸酪氨酸免疫印迹法检测有价值的特定蛋白如ZAP-70的磷酸化。这些方法描述于Schieven，G．L．，Mittler，R．S．，Nadler，S．G．，Kirihara，J．M．，Bolen，J．B．，Kanner，S．B．，and Ledbetter，J．A．，“ZAP-70酪氨酸激酶、CD45和T细胞受体参与UV和双氧水诱导的T细胞信号传导”，J．Biol．Chem．，269，20718-20726(1994)，并将其引入于此作为参考。 Lck抑制剂抑制细胞内蛋白质由抗CD3抗体引起的酪氨酸磷酸化。
为了制备G19-4，见Hansen，J．A．，Martin，P．J．，Beatty，P．G．，Clark，E．A．，and Ledbetter，J．A．，“通过产业化(Workshop)单克隆抗体定义的人T淋巴细胞表面分子”，在白细胞分型I，A．Bernard，J．Boumsell，J．Dausett，C．Milstein，and S．Schlossman编(New York：Springer Verlag)，p．195-212(1984)；以及Ledbetter，J．A．，June，C．H．，Rabinovitch，P．S．，Grossman，A．，Tsu，T．T．，and Imboden，J．B．“通过CD4受体进行信号传导：由接近CD3／T细胞受体的CD4调节对抑制活性的刺激”，Eur．J．Immunol．，18，525(1988)。
(2)钙离子检测
Lck抑制剂阻断T细胞中由抗CD3抗体引起的钙离子活动化。用抗CD3抗体如单克隆抗体G19-4处理载有钙离子指示剂染料indo-1的细胞，并用流动细胞计数法通过记录在蓝／紫indo-1比率中的变化测定钙离子的活动化，方法如Schieven，G．L．，Mittler，R．S．，Nadler，S．G．，Kirihara，J．M．，Bolen，J．B．，Kanner，S．B．，and Ledbetter，J．A．，“ZAP-70酪氨酸激酶、CD45和T细胞受体参与UV和双氧水诱导的T细胞信号传导”，J．Biol．Chem．，269，20718-20726(1994)所述，将其引入于此作为参考。
(3)增殖检测
Lck抑制剂抑制用抗CD3加抗CD28抗体刺激引起生长的正常人外周血T细胞的增殖。用抗CD3的单克隆抗体(如G19-4)包被96孔板，让抗体结合，然后洗涤此板。结合在板上的抗体用来刺激细胞。将正常人外周血T细胞加入这些孔中，同时用被测化合物加抗CD28抗体以提供共同刺激。在需要的时间(如，3天)后，向这些细胞中加入[3H]-胸苷，并在进一步孵育后让标记物掺入新合成的DNA中，收获细胞并在闪烁计数器中计数以检测细胞增殖。
下列实施例说明了本发明实施方案，并不是用来限制权利要求的范围。实施例中使用的缩写定义如下。实施例的化合物提供实施例和制备它们的步骤定义(例如，“1A”指实施例1步骤A的标题化合物)，或当该化合物就是实施例的标题化合物时用实施例定义(例如，“2”指实施例2的标题化合物)。
缩写
aq．=水溶液
conc．=浓
DMSO=二甲基亚砜
EtOAc=乙酸乙酯
Et2O=乙醚
h=小时
HATU=N-[二甲基氨基-1H-1，2，3-三唑并-[4，5-b]吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸N-氧化物
MeOH=甲醇
MOPS=4-吗啉-丙磺酸
MS=质谱
Ret Time=保留时间
RT=室温
satd．=饱和
TFA=三氟乙酸
THF=四氢呋喃
实施例1
制备[6-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基)羰基]-2-苯并噻唑基]
氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
A．乙基-2-氨基-苯并噻唑-6-甲酸酯
将乙基-4-氨基苯甲酸酯(35g，212mmol)的冰醋酸(300ml)溶液加入到搅拌的硫氰酸钠(69g，848mmol)的乙酸(150ml)溶液中。将此混合物在冰水浴中冷却并通过滴液漏斗滴加溴(12ml，233mmol)的乙酸(60ml)溶液。将此反应混合物在0℃至室温下搅拌4小时，然后倒入水(1．5L)中。加入饱和碳酸钠水溶液中和此溶液。滤出沉淀，用水和乙酸乙酯洗涤，并真空干燥得到此步骤的标题化合物(31．65g，收率67．2％)。
B．乙基-2-叔丁氧羰基氧基氨基-苯并噻唑-6-甲酸酯
将1A(10g，45mmol)、二叔丁基二碳酸酯(11．78g，54mmol)和4-二甲基氨基吡啶(549mg，4．5mmol)在二氯甲烷(330ml)中的悬浮液室温下搅拌过夜。再加入二叔丁基二碳酸酯(3g，13．75mmol)。20小时后，减压浓缩此混合物并用乙酸乙酯和乙醚的1∶1混合物(200ml)稀释。滤出固体并真空干燥得到此步骤的标题化合物(10．5g，收率72．4％)。
C．2-叔丁氧羰基氧基氨基-苯并噻唑-6-甲酸
将1N氢氧化钠水溶液(931ml)加入到1B(10g，31．05mmol)在甲醇(170ml)的悬浮液中。将此混合物室温下搅拌过夜，冷却至0℃并用盐酸酸化。滤出沉淀的固体，用水洗涤并减压干燥。将固体悬浮于四氢呋喃中并减压干燥。再用甲苯稀释并减压浓缩除去水。收集固体并用五氧化二磷真空干燥得到此步骤的标题酸(8．32g，收率91％)。
D．[6-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基)羰基]-2-苯并噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
将二异丙基乙胺(1．83ml，10．48mmol)加入到搅拌的1C(2．57g，8．73mmol)、2，4，6-三甲基苯胺(1．47ml，10．48mmol)和HATU(3．98g，10．48mmol)的二甲基甲酰胺(77．1ml)混悬液中。将此溶液室温下搅拌过夜并用乙酸乙酯(70ml)稀释。用2N盐酸(80ml)洗涤此反应混合物。用乙酸乙酯(25ml)萃取水层。将乙酸乙酯萃取液合并，用2N盐酸(60ml)、盐水洗涤，干燥(硫酸钠)并浓缩。用乙醚和乙酸乙酯的4∶1的混合物(100ml)研磨此粗品残余物。收集固体并真空干燥得到此实施例的标题化合物(2．88g，收率80．1％)。
MS=412．2(M++H)。
实施例2
制备2-氨基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-6-苯并
噻唑甲酰胺三氟乙酸盐(1∶1)
将1D(77．8mg，0．19mmol)的三氟乙酸(5．3ml)溶液室温下搅拌1．5小时。减压浓缩此溶液并将残余物与乙醚共蒸发。用乙醚-己烷混合物研磨得到标题化合物(62mg，收率72％)，为米色固体。
MS=311．9(M++H)。
实施例3制备2-(乙酰基氨基)-N-(2，4，6-三甲基苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
A．乙基-2-乙酰氨基-苯并噻唑-6-甲酸酯
将1A(150mg，0．67mmol)和醋酸酐(0．18ml，1．86mmol)在二氯甲烷(19ml)和吡啶(3．7ml)中的悬浮液室温下搅拌。2小时后，再加入吡啶(3ml)和4-二甲基氨基吡啶(8．2mg，0．067mmol)。将此混合物搅拌16小时，用二氯甲烷(20ml)稀释并用2N盐酸(20ml，3×)、饱和碳酸氢钾水溶液(20ml，2×)和盐水洗涤。将此二氯甲烷萃取液干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。用乙醚-己烷混合物研磨此残余物得到此步骤的标题化合物(130mg，收率73％)。
B．2-乙酰氨基-苯并噻唑-6-甲酸
将2M氢氧化钾水溶液(5．7ml)和乙醇(8ml)加入到3A(100mg，0．38mmol)的THF(5ml)溶液中。将此均匀的溶液室温下搅拌过夜，冷却至0℃并用6M盐酸酸化。通过减压蒸馏除去大部分乙醇和THF。滤出沉淀的固体，用水洗涤并真空干燥得到此步骤的标题化合物(64mg，收率72％)，为白色固体。
C．2-(乙酰基氨基)-N-(2，4，6-三甲基苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于1D的制备，不同的是使用3B得到此实施例的标题化合物，为淡黄色固体(21．5％)。
MS=354(M++H)。
实施例4
制备2-(苯甲酰基氨基)-N-(2，4，6-三甲基苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
将2的游离碱(100mg，0．32mmol，通过用碳酸氢钠水溶液处理三氟乙酸盐2的二氯甲烷溶液制得)和苯甲酸酐(200mg，0．89mmol)的THF(8．9ml)和吡啶(1．8ml)中的溶液室温下搅拌过夜。再加入苯甲酸酐(200mg，0．89mmol)和4-二甲基氨基吡啶(3．9mg，0．032mmol)，并将此溶液搅拌2天。再加入4-二甲基氨基吡啶(3．9mg，0．032mmol)，并将此溶液再搅拌1小时。用二氯甲烷(40ml)稀释此混合物，用1N盐酸(15ml)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。用乙醚研磨此残余物得到白色固体，将其悬浮于二氯甲烷中，并用饱和碳酸氢钾水溶液(3×)洗涤。将二氯甲烷萃取液干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。用乙酸乙酯(15ml)研磨此粗品固体，得到标题化合物(49mg，37％)，为白色固体。
MS=416．1(M++H)。
实施例5
制备2-[(1-氧代丙基)氨基]-N-(2，4，6-三甲基
苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于4的制备，不同的是用丙酸酐，得到标题化合物5，为白色固体。
MS=367(M++H)。
实施例6
制备2-[(1-氧代丁基)氨基]-N-(2，4，6-三甲基
苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于4的制备，不同的是用丁酸酐，得到标题化合物6，为白色固体。
MS=382(M++H)。
实施例7
制备2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基]氨基]-N-(2，4，6-三甲基苯
基)-6-苯并噻唑甲酰胺
A．2-[[[苯氧基]羰基]氨基]-N-(2，4，6-三甲基苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
在0-5℃，将氯甲酸苯基酯(470mg，3mmol)滴加到搅拌的2的游离碱(311mg，1mmol)的THF(20ml)和饱和碳酸氢钾水溶液(20ml)的溶液中。将此两相混合物搅拌3小时。将THF层分离并用二氯甲烷(30ml，2x)萃取水层。将有机萃取液合并，干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。将此粗品残余物用乙酸乙酯(25ml)稀释并滤出固体，用乙酸乙酯(8ml，4x)洗涤，并真空干燥得到此步骤的标题化合物，为白色固体(269mg，62％)。
B．2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基]氨基]-N-(2，4，6-三甲基苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
将叔丁基胺(73mg，1mmol)加入到搅拌的7A(22mg，0．05mmol)的THF(5ml)溶液中。将此溶液在室温下搅拌16小时，用二氯甲烷(30ml)稀释并用2N盐酸(10ml，2x)和0．5N氢氧化钠水溶液(10ml，2x)洗涤。将此二氯甲烷萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩得到此实施例的标题化合物(17mg，80％)，为白色固体。
MS=411．1(M++H)。
实施例8
制备2-[[[双(1-甲基乙基)氨基)羰基]氨基]-N-(2，4，6-三甲
基苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于制备例7B，不同的是用二异丙基胺，得到标题化合物8，为米色固体(78．5％)。
MS=439．2(M++H)。
实施例9
制备[6-溴-4-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基)羰基]-2-苯并噻唑基]
氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
类似于1的制备，不同的是用甲基-2-氨基-6-溴-苯并噻唑-4-甲酸酯(美国专利5496816)代替1A，得到标题化合物9，为白色固体。
MS=491．8(M++H)。
实施例10
制备[4-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基)羰基]-2-苯并噻唑基]氨基甲
酸，1，1-二甲基乙基酯
将氢氧化钯(40mg)加入到9(50mg，0．1mmol)的无水乙醇(60ml)的搅拌的悬浮液中。此反应烧瓶装备氢气充气气球，通过三通连接。减压排出烧瓶中的空气，然后用此气球充入氢气。重复此操作(3x)。氢解持续过夜。通过无水硫酸镁垫过滤此反应混合物。用乙醇(10ml，3x)洗涤此残余固体。浓缩滤液并将此粗品残余物在硅胶柱上进行色谱。用在己烷中的5％乙酸乙酯洗脱，然后用在己烷中的10％和20％乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物10(37mg，88％)，为白色固体。
MS=412．1(M++H)。
实施例11
制备[6-溴-7-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻唑基]
氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
A．甲基-3-氨基-6-溴-苯甲酸酯
将氯化锡(Ⅱ)二水合物(22．56g，100mmol)加入到搅拌的甲基-2-溴-5-硝基苯甲酸酯(9g，34．61mmol)的甲醇(250ml)和浓盐酸(25ml)的溶液中。将此溶液室温下搅拌8小时，然后用饱和碳酸氢钾水溶液(600ml)处理。再加入固体碳酸氢钾(50mg)。用乙酸乙酯(200ml，5x)萃取此混合物。合并乙酸乙酯萃取液，干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。用乙酸乙酯(250ml)稀释此残余物并用盐水(50ml，2x)洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩，得到此步骤的标题化合物(7．45g，94％)，为棕色油状物。
B．甲基-2-氨基-6-溴-苯并噻唑-7-甲酸酯(11Ba)和甲基-2-氨基-6-溴-苯并噻唑-5-甲酸酯(11Bb)
类似于1A的制备，不同的是用9A代替乙基-4-氨基苯甲酸酯作为起始的苯胺。用乙酸乙酯研磨此粗品残余物得到纯11Ba(43％)。将滤液浓缩并将此残余物在硅胶柱上进行色谱。用在己烷中的10％乙酸乙酯，然后是在己烷中的20％、30％和50％乙酸乙酯洗脱，得到11Ba和11Bb(13％)的1∶1混合物，为黄色固体。
C．[6-溴-7-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
类似于1D的制备，不同的是用11Ba代替1A，得到标题化合物，为白色固体。
MS=491．9(M++H)。
实施例12
制备[7-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻唑基]氨基甲
酸，1，1-二甲基乙基酯
类似于10的制备，不同的是用11C代替9，得到标题化合物12(89％)，为白色固体。
MS=412．1(M++H)。
实施例13制备[6-溴-5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基)羰基]-2-苯并噻唑基]
氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
类似于1D的制备，不同的是用11Ba和11Bb的1∶1混合物作为起始苯并噻唑代替1A。处理后得到的粗品用乙酸乙酯稀释，并在室温下放置2小时。滤出沉淀的固体，用乙酸乙酯洗涤，并真空干燥得到标题化合物13，为白色固体。
MS=492．0(M++H)。
实施例14
制备[5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻唑基]氨基甲
酸，1，1-二甲基乙基酯
类似于10的制备，不同的是用13代替9，得到标题化合物14(63％)，为白色固体。
MS=412．1(M++H)。
实施例15
制备2-[[[苯基氨基]羰基]氨基]-N-(2，4，6-三甲基
苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
将2的游离碱(100mg，0．32mmol)、异氰酸苯基酯(119mg，1mmol)和4-二甲基氨基吡啶(10mg)在THF(2ml)和吡啶(2ml)中的溶液，室温下搅拌过夜。用二氯甲烷(30ml)稀释此混合物并用2N盐酸(20ml，2x)洗涤。用甲醇(10ml)稀释二氯甲烷萃取液，干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。将此粗品残余物用乙酸乙酯(25ml)稀释并滤出固体，用乙酸乙酯(5ml，3x)洗涤。将此白色固体悬浮于二氯甲烷(30ml)和甲醇(2ml)中，并搅拌20分钟，过滤。用二氯甲烷(5ml，3x)洗涤残余的固体，真空干燥得到标题化合物15(88mg,64％)。
MS=431．1(M++H)。
实施例16
制备2-[[[(苯基甲基)氨基]羰基]氨基]-N-(2，4，6-三甲基
苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于15的制备，不同的是用异氰酸苄基酯，得到标题化合物16，为白色固体。
MS=445(M++H)。
实施例17
制备2-[[[乙基氨基]羰基]氨基]-N-(2，4，6-三甲基
苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于15的制备，不同的是用异氰酸乙酯，得到标题化合物17，为白色固体。
MS=383(M++H)。
实施例18
制备2-[[(丁基氨基)羰基]氨基]-N-(2，4，6-三甲基
苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于15的制备，不同的是用异氰酸正丁基酯，得到标题化合物18，为白色固体。
MS=411(M++H)。
实施例19至58
总方法
按照如下方法制备化合物19至58。
将适当的胺(0．08mmol)加入到7A(20mg，0．054mmol)的THF(3ml)溶液中。将此溶液室温下搅拌18小时至40小时。用二氯甲烷(5ml)稀释此反应混合物，并用1N盐酸(1．5ml，2x)和1N氢氧化钠水溶液(1．5ml，2x)洗涤。将此有机萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，得到这些实施例的标题化合物，检定见表1。
在表1中，“HPLC Ret Time”是HPLC保留时间，其是在如下条件下得到的：对于化合物19至56，YMC S5 ODS 4．6x50mm Ballastic Column，4分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速4ml／分钟，λ=220nM。对于化合物57至58，HPLC条件：Zorbax SB-C184．5mmx7．5cm短柱，8分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速2．5ml／分钟，λ=217nM。
表1
实施例59至95
总方法
按照如下方法制备化合物59至95。
将适当的胺(0．08mmol)加入到7A(20mg，0．054mmol)的THF(3ml)溶液中。将此溶液加热至45℃，保持24至72小时。用二氯甲烷(5ml)稀释此反应混合物，并用1N盐酸(3ml，2x)和1N氢氧化钠水溶液(3ml，2x)洗涤。将此有机萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，得到这些实施例化合物的粗品，将其通过HPLC(自动化制备HPLC，条件如下：YMC ODS A20x100mm柱，10分钟梯度开始于30％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．1％TFA)和70％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．1％TFA)至100％溶剂B，流速20ml／分钟，λ=220nm)。检定见下表2。
在表2中，“HPLC Ret Time”是HPLC保留时间，其是在如下条件下得到的：YMC S5 ODS 4．6x50mm Ballastic Column，4分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速4ml／分钟，λ=220nM。
表2
实施例96至140
总方法
按照如下方法制备化合物96至140。
将二异丙基乙胺(50μl，0．288mmol)加入到2的游离碱(30mg，0．096mmol)、适当的羧酸(0．115mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(17mg，0．125mmol)和乙基-3-(3-二甲基氨基)-丙基碳二亚胺盐酸盐(24mg，0．125mmol)在THF(1ml)中的混合物中。将此混合物加热至45℃，保持18至72小时。用二氯甲烷(5ml)稀释此反应混合物，并用1N盐酸(2x)和1N氢氧化钠水溶液(2x)洗涤。将此有机萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩。可以通过用二氯甲烷-乙醚研磨纯化此粗品，或通过自动化制备HPLC(如下条件：YMC ODS A 20x100mm柱，10分钟梯度开始于30％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．1％TFA)和70％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．1％TFA)至100％溶剂B，流速20ml／分钟，λ=220nm)纯化，得到这些实施例的化合物，检定见下表3。
在表3中，“HPLC Ret Time”是HPLC保留时间，其是在如下条件下得到的：对于化合物99至140，YMC S5 ODS 4．6x50mm Ballastic Column，4分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速4ml／分钟，λ=220nM。对于化合物98，HPLC条件：Zorbax SB-C184．5mmx7．5cm短柱，8分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速2．5ml／分钟，λ=217nM。对于化合物96，HPLC条件是：YMC S5 ODS 4．6x50mm Ballastic Column，4分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速3ml／分钟，λ=220nM。对于化合物97，HPLC条件是：YMC S5ODS 4．6x50mm Ballastic Column，8分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速3ml／分钟，λ=220nM。
表3
实施例141至163
总方法
按照如下方法制备化合物141至163。
A．2-叔丁氧羰基氧基氨基-苯并噻唑-6-甲酰氯
在0℃，将草酰氯的2M二氯甲烷溶液(6．8ml，13．59mmol)加入到1C(2g，6．79mmol)在二氯甲烷(25ml)的悬浮液中。加入二甲基甲酰胺(3滴)。除去冰浴并将此悬浮液在室温下搅拌3小时，然后加热至32℃，再保持3小时。用乙醚(25ml)稀释此混合物，并过滤收集固体。用乙醚将此固体洗涤几次，真空干燥得到此步骤的标题化合物(1．75g，82％)。浓缩后通过用乙醚研磨此滤液得到了另一批标题酰氯(250mg，12％)。
B．化合物141至163
将二异丙基乙胺(23μl，0．288mmol)加入到2-叔丁氧羰基氧基氨基-苯并噻唑-6-甲酰氯(34．41mg，0．11mmol)和适宜的苯胺(0．12mmol)在THF(1ml)中的混合物中。将此混合物室温下搅拌22小时。用二氯甲烷(4ml)稀释此反应混合物，并用2N盐酸(2x)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并真空浓缩。可以通过用二氯甲烷-乙醚(1∶1)研磨纯化此粗品和／或通过硅胶色谱(洗脱剂：2-5％甲醇在二氯甲烷中)纯化，并将这些实施例所得化合物检定见下表4。
在表4中，“HPLC Ret Time”是HPLC保留时间，其是在如下条件下得到的：YMC S5 ODS 4．6x50mm Ballastic Column，4分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速4ml／分钟，λ=220nM。
表4
实施例164
制备[6-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并
噻唑基]氨基甲酸，甲基酯
在0-5℃，将氯甲酸甲酯(250μl)滴加到搅拌的2的游离碱(62mg，0．2mmol)的THF(10ml)和10％碳酸氢钾水溶液(15ml)中。将此双相混合物搅拌2小时，然后用二氯甲烷(25ml)和水(20ml)稀释。将有机萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。将此粗品残余物在硅胶柱上用在己烷中的30％乙酸乙酯，随后用在己烷中的50％和70％乙酸乙酯，以及在二氯甲烷中的10％甲醇洗脱，进行色谱纯化，得到标题化合物(42mg，57％)，为白色固体。
MS=370(M++H)。
实施例165
制备2-[[(乙酰基氨基)乙酰基]氨基]-N-(2，4，6-三甲
基苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
将二异丙基乙胺(400μl，2．3mmol)加入到2的游离碱(50mg，0．16mmol)、N-乙酰基甘氨酸(42mg，0．36mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(49mg，0．36mmol)和乙基-3-(3-二甲基氨基)-丙基碳二亚胺盐酸盐(72mg，0．36mmol)在THF(6ml)的混合物中。将此混合物加热至50℃过夜，冷却至室温，用二氯甲烷(60ml)稀释并用2N盐酸(20ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(15ml，2x)洗涤。将二氯甲烷萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。将此残余物用二氯甲烷-甲醇(20ml，4∶1)稀释，并加入乙酸乙酯(5ml)。滤出沉淀的固体，用乙酸乙酯洗涤(5ml，3x)，并真空干燥得到此实施例的标题化合物(15mg，22．8％)。
MS=411．1(M++H)。
实施例166
制备N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基]
氨基]-6-苯并噻唑甲酰胺
A．乙基-2-[[(苯氧基)羰基]氨基]-苯并噻唑-6-甲酸酯
在0-5℃，将氯甲酸苯基酯(14．25ml，113．6mmol)滴加到搅拌的1A(8．6g，37．86mmol)的THF(300ml)和饱和碳酸氢钾水溶液(300ml)的溶液中。将此两相混合物搅拌3．5小时。将THF层分离并用二氯甲烷(150ml，2x)萃取水层。过滤收集在处理过程中出现的黄色固体沉淀，用二氯甲烷、水和乙醚洗涤。将有机萃取液合并，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩得到黄色固体。将此粗品固体合并，用乙醚(100ml)稀释，过滤，并真空干燥得到此步骤的标题化合物，为黄色固体(11．24g，85％)。
B．乙基-2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基]氨基]苯并噻唑-6-甲酸酯
将叔丁基胺(6．66ml，63．4mmol)加入到搅拌的166A(11．23g，32．33mmol)的THF(163ml)溶液中。将此混悬液在室温下搅拌16小时，滤出黄色固体，用THF、2N盐酸和0．1N氢氧化钠水溶液、水和乙醚洗涤。用二氯甲烷稀释此滤液并用2N盐酸(2x)和0．1N氢氧化钠水溶液(2x)和盐水洗涤。将此二氯甲烷萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩得到黄色固体。合并固体，将其悬浮于乙醚中，过滤，用乙醚洗涤几次并真空干燥，得到此步骤的标题化合物(10．41g，100％)。
C．2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基]氨基]苯并噻唑-6-甲酸
将2N氢氧化钾水溶液(405ml)加入到166B(10．41g，32．4mmol)的THF(90ml)和乙醇(135ml)的悬浮液中。将此混合物加热至60℃，冷却至0℃并浓缩。将此残余物冷却至0℃，并用浓盐酸酸化至pH1．0。滤出沉淀的固体，用水和乙醚洗涤。将此固体悬浮于甲苯(2x)中并减压浓缩。用乙醚(2x)重复此步骤。收集固体并用五氧化二磷真空干燥，得到此步骤的标题化合物(10g，100％收率)。
D．2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基]氨基]苯并噻唑-6-甲酸-7-氮杂-苯并三唑酯(“HOAT酯”)
将二异丙基乙胺(958μl，6．84mmol)加入到166C(500mg，1．71mmol)和HATU(778mg，2．05mmol)的二甲基甲酰胺(10ml)溶液中。将此溶液室温下搅拌过夜，用二氯甲烷稀释并用1N盐酸和水洗涤。分离二氯甲烷萃取液，干燥(硫酸镁)并浓缩。将此粗品固体用甲醇(2x)研磨，得到此步骤的标题化合物(380mg，54．3％)。通过研磨残余滤液得到第二批标题化合物(152mg，21．7％)。
E．N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基]氨基]-6-苯并噻唑甲酰胺
将双-三甲基甲硅烷基氨化钠的1M溶液(366μl，0．37mmol)加入到搅拌的2-氯-6-甲基苯胺(33．1μl，0．268mmol)的THF(2ml)溶液中。将此混合物室温下搅拌10分钟，并加入166D(100mg，0．244mmol)。加入二甲基甲酰胺(2ml)以溶解反应中所得沉淀。将此混合物室温下搅拌过夜，用二氯甲烷稀释并用1N盐酸(30ml，3x)、5％碳酸钾水溶液(20ml，2x)洗涤。将有机萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。将此粗品通过自动制备HPLC纯化(条件：YMC ODS A 20x100mm柱，10分钟梯度开始于30％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．1％TFA)和70％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．1％TFA)至100％溶剂B，流速20ml／分钟，λ=220nm)，得到此实施例的标题化合物(19．5mg，19％)。
MS=417(M++H)。
另一种方法
A(另一种)．[6-[[(2-氯-6-甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯
将二异丙基乙胺(1．67ml，6．02mmol)加入到搅拌的141A[2-叔丁氧羰基氧基氨基-苯并噻唑-6-甲酰氯](1．88g，6．02mmol)、2-氯-6-甲基苯胺(960μl，7．83mmol)在THF(40ml)中的悬浮液中。将此混合物室温下搅拌过夜，然后用二氯甲烷(100ml)稀释。用1N盐酸(2x)、1N氢氧化钠水溶液和盐水洗涤此反应混合物。将有机层干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。将此残余物用乙酸乙酯(10ml)稀释，搅拌20分钟，并加入乙醚(5ml)。5分钟后，滤出固体，并真空干燥，得到此步骤的标题化合物(940mg，37％)。
B(另一种)．2-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
将166A(另一种)(940mg，2．25mmol)在三氟乙酸(5ml)和二氯甲烷(2ml)中的溶液室温搅拌过夜。将此混合物浓缩，用二氯甲烷(100ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(2x)、水和盐水洗涤。将此二氯甲烷萃取液干燥(硫酸钠)，过滤并真空浓缩，得到此步骤的标题化合物(750mg，98％)。
C(另一种)．[6-[[(2-氯-6-甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻唑基]氨基甲酸，苯基酯
类似于实施例7A的制备，不同的是用166B(另一种)代替2的游离碱，用乙醚／乙酸乙酯(1∶1)研磨后，得到此步骤的标题化合物(92％)。
D(另一种)．N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[[(1，1-二甲基乙基)
氨基]羰基]氨基)-6-苯并噻唑甲酰胺
将166C(另一种)(680mg，1．57mmol)和叔丁基胺(196μl，1．87mmol)的THF(50ml)溶液搅拌7小时。用二氯甲烷(200ml)稀释此混合物，并用1N盐酸(50ml)、1N氢氧化钠水溶液(50ml，2x)洗涤。将有机萃取液干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。用乙醚研磨此残余物得到此实施例的标题化合物(488mg，75％)。
实施例167
制备N-(2，6-二氯苯基)-2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基]氨基]
-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于化合物166E的制备，不同的是用2，6-二氯苯胺，通过自动制备HPLC(条件：YMC ODS A 20x100mm柱，10分钟梯度开始于30％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．1％TFA)和70％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．1％TFA)至100％溶剂B，流速20ml／分钟，λ=220nm)纯化，得到标题化合物(17％)。
MS=438(M++H)。
实施例168
制备N-(4-溴-2，6-二甲基苯基)-2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]
羰基]氨基]-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于化合物166E的制备，不同的是用4-溴-2，6-二甲基苯胺，通过自动制备HPLC(条件如实施例167)纯化得到标题化合物(19％)。
MS=477(M++H)。
实施例169
制备N-(4-甲氧羰基-2，6-二甲基苯基)-2-[[[1，1-二甲基乙氧
基]羰基]氨基]-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于表4的化合物的制备，用4-甲氧羰基-2，6-二甲基苯胺，得到此实施例的标题化合物(53％)。
MS=428．1(M++H)。
实施例170
制备N-(4-羟基甲基-2，6-二甲基苯基)-2-[[[1，1-二甲基乙氧
基]羰基]氨基]-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于化合物141至163的制备，不同的是使用4-羟甲基-2，6-二甲基苯胺，得到此实施例的标题化合物(71％)。
MS=456．1(M++H)。
实施例171
制备[4-甲基-6-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻唑基]
氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
A．甲基-2-氨基-4-甲基-苯并噻唑-6-甲酸酯
类似于化合物1A的制备，不同的是使用甲基-4-氨基-3-甲基苯甲酸，得到此步骤的标题化合物。
B．甲基-2，2-二-叔丁氧羰基氧基氨基-4-甲基-苯并噻唑-6-甲酸酯
将171A(1．16g，5．2mmol，纯度85％)、二叔丁基碳酸酯(2．37g，10．87mmol)和4-二甲基氨基吡啶(93mg，0．76mmol)在THF(80ml)中的悬浮液，加热至60℃，保持3．5小时。将此混合物冷却，用1N盐酸(50ml，2x)和水洗涤。将有机萃取液干燥(硫酸镁)，过滤和浓缩，得到此步骤的标题化合物(693mg，31．5％)。
C．2-叔丁氧羰基氧基氨基-4-甲基-4-苯并噻唑-6-甲酸
类似于1C的制备，不同的是使用171B，得到此步骤的标题化合物(93％)，为白色固体。
D．[4-甲基-6-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
将二异丙基乙胺(65μl，0．51mmol)加入到搅拌的171C(50mg，0．17mmol)、2，4，6-三甲基苯胺(28．4μl，0．203mmol)和苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)六氟磷酸鏻(Castro试剂，89．6mg，0．203mmol)在二甲基甲酰胺(2ml)的溶液中。将此溶液室温下搅拌40小时，并再用二氯甲烷(50ml)稀释。用1N盐酸(25ml，2x)和水洗涤此混合物，干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。将此粗品残余物用乙醚和乙酸乙酯的混合物研磨。收集固体并真空干燥，得到此实施例的标题化合物(43mg，62％)。
MS=426(M++H)。
实施例172
制备2-氨基-4-甲基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-6-苯并噻唑甲
酰胺三氟乙酸盐(1∶1)
类似于化合物2的制备，不同的是用171D，得到此实施例的标题化合物(74％)。
MS=326(M++H)。
实施例173
制备-4-甲氧基-[6-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻
唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
类似于171D的制备，不同的是使用甲基-4-氨基-3-甲氧基苯甲酸酯，得到此实施例的标题化合物。
MS=442(M++H)。
实施例174
制备2-氨基-4-甲氧基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-6-苯并噻唑
甲酰胺，三氟乙酸盐(1∶1)
类似于2的制备，不同的是使用173，得到标题化合物(82％)，为白色固体。
MS=342(M++H)。
实施例175
制备2-[[(甲基氨基)羰基]氨基]-N-(2，4，6-三甲基苯基)-6-苯并
噻唑甲酰胺
类似于15的制备，不同的是使用异氰酸甲酯，得到标题化合物(71％)，为白色固体。
MS=369(M++H)。
实施例176
制备2-[[[甲基氨基]羰基]氨基)-4-甲氧基-N-(2，4，6-三甲基苯
基)-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于175的制备，不同的是使用174，得到标题化合物(39％)，为白色固体。
MS=399(M++H)。
实施例177
制备5-甲氧基-[6-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻唑
基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
类似于171D的制备，不同的是使用甲基-4-氨基-2-甲氧基苯甲酸酯，得到此实施例的标题化合物。
MS=442(M++H)。
实施例178
制备2-氨基-N-(4-N，N-二甲基氨基-2，3，5，6-四甲基苯基)-6
-苯并噻唑甲酰胺，三氟乙酸盐(1∶1)
类似于表4化合物的制备，使用N1，N1，2，3，5，6-六甲基-1，4-亚苯基二胺二盐酸盐，通过自动制备HPLC(条件：同实施例167)纯化，得到此实施例的标题化合物。
MS=369．2(M++H)。
实施例179和180
制备5-氯-[6-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基)羰基]-2-苯并噻唑基]
氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯(179)
和7-氯-[6-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻唑基]氨基甲
酸，1，1-二甲基乙基酯(180)
A．甲基-2-氨基-5-氯-苯并噻唑-6-甲酸酯(179A)和甲基-2-氨基-7-氯-苯并噻唑-6-甲酸酯(180A)
类似于化合物1A的制备，不同的是使用甲基-2-氨基-4-氯苯甲酸酯，得到化合物179A和180A标题化合物的混合物，比例2∶1(71％)。
B．甲基-2-叔丁氧羰基氧基氨基-5-氯-苯并噻唑-6-甲酸酯(179B)和甲基-2-叔丁氧羰基氧基氨基-7-氯-苯并噻唑-6-甲酸酯(180B)
类似于化合物1B的制备，不同的是使用化合物179A和180A的混合物，得到标题化合物179B和180B(2∶1)的混合物，为黄色固体(63％)。
C．2-叔丁氧羰基氧基氨基-5-氯-苯并噻唑-6-甲酸酯(179C)和2-叔丁氧羰基氧基氨基-7-氯-苯并噻唑-6-甲酸酯(180C)
将化合物179B和180B的混合物(3．75g，10．9mmol)的乙醇(50ml)和2N氢氧化钠水溶液(27．5ml，55mmol)的溶液，室温下搅拌18小时。真空除去大部分乙醇，并将此残余物冷却至0℃，并用饱和硫酸氢钾水溶液酸化至pH1-2。滤出沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到标题酸179C和180C的混合物(4．3g，100％，2∶1)，为黄色固体。
D．5-氯-[6-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基)羰基]-2-苯并噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯(179D)和7-氯-[6-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基)羰基]-2-苯并噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯(180D)
将二异丙基乙胺(400μl，2．2mmol)加入到搅拌的化合物179C和180C(328mg，1mmol)、2，4，6-三甲基苯胺(170μl，1．1mmol)和苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)六氟磷酸鏻(Castro试剂，485mg，1．1mmol)在二氯甲烷(5ml)的悬浮液中。将此溶液室温下搅拌18小时，过滤并干燥，得到中间体苯并三唑-酯的混合物(400mg)，将其溶解于二甲基甲酰胺(5ml)中，并加入2，4，6-三甲基苯胺(560μl，4mmol)。将此溶液加热至50℃，并保持72小时，冷却并用乙酸乙酯(100ml)和水(100ml)稀释。分离乙酸乙酯层，用1N盐酸(100ml，3x)、盐水(50ml)洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。将此桔黄色固体溶解于二甲基亚砜(1ml)中，并用甲醇(5ml)稀释，然后用水(5ml)稀释。将此溶液室温下放置几小时。滤出沉淀的固体，用水(20ml)洗涤，干燥，再用DMSO-甲醇-水混合物重结晶，得到纯的标题化合物179D(45mg，10％)。
MS=447(M++H)。
通过过滤收集母液，并真空干燥得到第二批固体，为标题化合物180D(44mg，10％)。
MS=447(M++H)。
实施例181
制备2-氨基-5-羟基-N-[2，4，6-三甲基苯基]-6-苯并噻唑甲酰胺
在-78℃下，将三溴化硼(300μl，3mmol)加入到177(441mg，1mmol)的二氯甲烷(7ml)溶液中。将此溶液在-78℃下搅拌1小时，在室温下搅拌1小时，用饱和碳酸氢钠水溶液稀释并真空浓缩。将此残余物用水稀释并过滤。用水、乙醚洗涤此白色固体，并真空干燥，得到此实施例的标题化合物(260mg，80％)。
MS=328(M++H)。
实施例182
制备5-叔丁氧羰基氧基-[6-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-
苯并噻唑基)氨基甲酸，1，1二甲基乙基酯
类似于1B的制备，不同的是使用181，通过硅胶色谱用二氯甲烷至在二氯甲烷中的5％甲醇梯度(甲醇增加1％)洗脱进行纯化，得到标题化合物182(25％)。
MS=428(M++H)。
实施例183
制备2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基)羰基]氨基]-N-(2，6-二甲基苯基)
-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于166E的制备，不同的是使用2，6-二甲基苯胺，经自动制备HPLC(条件：同实施例167)纯化得到标题化合物(19％)。
MS=397(M++H)。
另一种方法：
A(另)．[6-[[(2，6-二甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻唑]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯
将二异丙基乙胺(1．17ml，6．42mmol)加入到搅拌的141A[2-叔丁氧羰基氧基氨基-苯并噻唑-6-甲酰氯](1g，3．21mmol)、2，6-二甲基苯胺(473μl，3．84mmol)在THF(25ml)中的悬浮液中。将此混合物室温下搅拌过夜，然后用二氯甲烷(70ml)稀释。用1N盐酸(30ml，2x)和盐水洗涤此反应混合物。将有机层干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。将此残余物用乙醚／乙酸乙酯(1∶1)研磨，过滤并真空干燥，得到此步骤的标题化合物(475mg，37％)。
B(另)．2-氨基-N-(2，6-二甲基苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
将183A(另)(1mg，2．5mmol)在三氟乙酸(6ml)和二氯甲烷(5ml)中的溶液室温搅拌2．5小时。将此混合物浓缩，溶解于二氯甲烷并用饱和碳酸氢钠水溶液(25ml，2x)、水和盐水洗涤。将此二氯甲烷萃取液干燥(硫酸钠)，过滤并真空浓缩。用乙醚研磨此残余物，得到此步骤的标题化合物(570mg，76％)。
C(另)．[6-[[(2，6-二甲基苯基)氨基]羰基]-2-苯并噻唑]氨基甲酸，苯基酯
类似于实施例7A的制备，不同的是用183B(另)代替2的游离碱，用乙醚／乙酸乙酯(10∶1)研磨后，得到此步骤的标题化合物(98％)。
D(另)．2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基]氨基]-N-(2，6-二甲基苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
将183C(另)(46mg，0．11mmol)和叔丁基胺(14μl，0．13mmol)的THF(4ml)溶液室温下搅拌过夜。用二氯甲烷(50ml)稀释此混合物，并用1N盐酸(30ml)、1N氢氧化钠水溶液(25ml，2x)、水洗涤。将有机萃取液干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。用乙醚研磨此残余物得到此实施例的标题化合物(23mg，66％)。
实施例184至204
总方法
按照如下方法制备化合物184至204。
将适当的胺(0．086mmol)加入到183C(另)(30mg，0．072mmol)的THF(3ml)溶液中。对于脂族胺，将此溶液室温下搅拌48小时至72小时。对于苯胺，将此溶液加热至60℃，并保持72小时。用二氯甲烷(5ml)稀释此反应混合物，并用1N盐酸(2x)和1N氢氧化钠水溶液(2x)洗涤。将此有机萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，得到这些实施例的标题化合物。其中一些标题化合物需要纯化，该纯化通过自动制备HPLC，在下列条件下进行：YMC ODS 20x100mm柱，10分钟梯度开始于70％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)和30％溶剂B至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速20ml／分钟，λ=220nM)纯化，得到这些实施例的化合物。
“HPLC Ret Time”是HPLC保留时间，其是在如下条件下得到的：YMC S5 ODS 4．6x50mm Ballastic Column，4分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速4ml／分钟，λ=220nM。
实施例205至226
总方法
按照如下方法制备化合物205至226。
将适当的胺(0．086mmol)加入到166C(另)(30mg，0．072mmol)的THF(3ml)溶液中。对于脂族胺，将此溶液室温下搅拌48小时至72小时。对于苯胺，将此溶液加热至60℃，并保持72小时。用二氯甲烷(5ml)稀释此反应混合物，并用1N盐酸(2x)和1N氢氧化钠水溶液(2x)洗涤。将此有机萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，得到这些实施例的标题化合物。其中一些标题化合物需要纯化，该纯化通过自动制备HPLC，在下列条件下进行：YMC ODS 20x100mm柱，10分钟梯度开始于70％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)和30％溶剂B至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速20ml／分钟，λ=220nM纯化，得到这些实施例的化合物。
“HPLC Ret Time”是HPLC保留时间，其是在如下条件下得到的：YMC S5 ODS 4．6x50mm Ballastic Column，4分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速4ml／分钟，λ=220nM。
实施例227
制备2-[[[[(1-甲氧基羰基)环丙基]氨基]羰基]氨基-N-(2，4，6-三甲
基苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于表1中化合物的制备，用1-甲氧羰基-环丙基胺，通过制备HPLC纯化后得到此实施例的标题化合物，纯化条件：YMC ODS 20x100mm柱，10分钟梯度开始于70％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)和30％溶剂B至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速20ml／分钟，λ=220nM。MS=453(M++H)。
实施例228
制备[6-[[[(2，6-二甲基-4-苯基)苯基]氨基]羰基]-2-苯并噻唑基]
氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
类似于表4中化合物的制备，使用2，6-二甲基-4-苯基苯胺，通过硅胶色谱并用在氯仿中的1-5％甲醇洗脱纯化后，得到此实施例的标题化合物(45％)。MS=474．1(M++H)。
实施例229
制备[6-[[[(2，6-二甲基-4-(2-N，N-二甲基乙氧基)苯基]氨基]羰
基]-2-苯并噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
类似于表4中化合物的制备，使用2，6-二甲基-4-(2-N，N-二甲基乙氧基)-苯胺，通过硅胶色谱并用在氯仿中的2-5％甲醇及95∶4∶1的氯仿∶甲醇∶三乙胺洗脱纯化后，得到此实施例的标题化合物(45％)。MS=485．1(M++H)。
实施例230
制备[6-[[[(2，6-二甲基-4-(2-吗啉代乙氧基)苯基]氨基]羰基]-2
-苯并噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯
类似于表4中化合物的制备，使用2，6-二甲基-4-(2-吗啉代乙氧基)苯胺，通过硅胶色谱并用95∶4∶1的氯仿∶甲醇∶三乙胺洗脱纯化后，得到此实施例的标题化合物(18％)。MS=527．7(M++H)。
实施例231
制备2-[(环丙基羰基)氨基]-N-(2-氯-6-甲基
苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于表3中99的制备，不同的是用166B(另)，得到此实施例的标题化合物。MS=386(M++H)。
实施例232
制备2-[(2-甲基-环丙基羰基)氨基]-N-(2-氯-6-甲基苯基)
-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于231的制备，不同的是用2-甲基-环丙烷甲酸，得到此实施例的标题化合物。MS=400(M++H)。
实施例233
制备2-[(2，2-二氯-1-甲基-环丙基羰基)氨基]-N-(2-氯-6
-甲基苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于231的制备，不同的是用2，2-二氯-1-甲基-环丙烷甲酸，得到此实施例的标题化合物。MS=469(M++H)。
实施例234
制备2-[(1-羟基-环丙基羰基)氨基]-N-(2-氯-6-甲基
苯基)-6-苯并噻唑甲酰胺
类似于231的制备，不同的是用1-羟基-环丙烷甲酸，得到此实施例的标题化合物。MS=402(M++H)。
实施例235至282以及467至478
总方法
按照如下方法制备化合物235至282以及467至478。将二异丙基乙胺(50μl，0．288mmol)加入到化合物166B(另)(30mg，O．096mmol)、羧酸(0．115mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(17mg，0．125mmol)和乙基-3-(3-二甲基氨基)-丙基碳二亚胺盐酸盐在THF(1ml)中的混合物中。将此混合物加热至45℃，保持18至72小时。用二氯甲烷(5ml)稀释此反应混合物，并用1N盐酸(2x)和1N氢氧化钠水溶液(2x)洗涤。将此有机萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并变速真空浓缩。可以通过用二氯甲烷-乙醚研磨纯化此粗品，或通过自动化制备HPLC(如下条件：YMC ODS 20x100mm柱，10分钟梯度开始于70％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)和30％溶剂B至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速20ml／分钟，λ=220nM)纯化，得到这些实施例的化合物。
“HPLC Ret Time”是HPLC保留时间，其是在如下条件下得到的：对于化合物235至271以及化合物467-478，YMC S5 ODS 4．6x50mmBallastic Column，4分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，O．2％磷酸)至保持2分钟的100％溶剂B(90％甲醇，10％水，O．2％磷酸)，流速4ml／分钟，λ=220nM。对于化合物272-282，HPLC条件：Phenomenex-Prime S5 4．6x50mm柱，2分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至保持1分钟的100％溶剂B(90％甲醇，10％水，O．2％磷酸)，流速5ml／分钟，λ=220nM。
实施例283至322
总方法
按照如下方法制备化合物283至322。将二异丙基乙胺(50μl，0．288mmol)加入到化合物183B(另)(30mg，0．096mmol)、羧酸(0．115mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(17mg，0．125mmol)和乙基-3-(3-二甲基氨基)-丙基碳二亚胺盐酸盐(24mg，0．125mmol)在THF(1ml)中的混合物中。将此混合物加热至45℃，保持18至72小时。用二氯甲烷(5ml)稀释此反应混合物，并用1N盐酸(2x)和1N氢氧化钠水溶液(2x)洗涤。将此有机萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并变速真空浓缩。可以通过用二氯甲烷-乙醚研磨纯化此粗品，或通过自动化制备HPLC(如下条件：YMC ODS 20x100mm柱，10分钟梯度开始于70％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)和30％溶剂B至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速20ml／分钟，λ=220nM)纯化，得到这些实施例的化合物。
“HPLC Ret Time”是HPLC保留时间，其是在如下条件下得到的：YMC S5 ODS 4．6x50mm Ballastic Column，4分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至保持2分钟的100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速4ml／分钟，λ=220nM。
实施例323至337
总方法
按照如下方法制备化合物323至337。将二异丙基乙胺(50μl，0．288mmol)加入到化合物2的游离碱(30mg，0．096mmol)、羧酸(0．115mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(17mg，0．125mmol)和乙基-3-(3-二甲基氨基)-丙基碳二亚胺盐酸盐(24mg，0．125mmol)在THF(1ml)中的混合物中。将此混合物加热至45℃，保持18至72小时。用二氯甲烷(5ml)稀释此反应混合物，并用1N盐酸(2x)和1N氢氧化钠水溶液(2x)洗涤。将此有机萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并变速真空浓缩。可以通过用二氯甲烷-乙醚研磨纯化此粗品，或通过自动化制备HPLC纯化这些粗品，其条件如下：YMC ODS 20x100mm柱，10分钟梯度开始于70％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)和30％溶剂B至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速20ml／分钟，λ=220nM。
“HPLC Ret Time”是HPLC保留时间，其是在如下条件下得到的：对于化合物327至334，YMC S5 ODS 4．6x50mm Ballastic Column，4分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，保持2分钟，流速4ml／分钟，λ=220nM。对于化合物323-326和335-337，HPLC条件：YMC S5 ODS 4．6x50mm BallasticColumn，4分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％TFA)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．1％磷酸)，保持2分钟，流速4ml／分钟，λ=220nM。
实施例338至466
总方法
按照如下方法制备化合物338至466。将适当的胺(0．086mmol)加入到166A(30mg，0．072mmol)的THF(3ml)溶液中。将此溶液在57℃下搅拌48时至72小时。用二氯甲烷(5ml)稀释此反应混合物，并用1N盐酸(2x)和1N氢氧化钠水溶液(2x)洗涤。将此有机萃取液干燥(硫酸钠)，过滤并真空浓缩，得到这些实施例的标题化合物。其中一些标题化合物需要纯化，该纯化通过自动制备HPLC，在下列条件下进行：YMC ODS 20x100mm柱，10分钟梯度开始于70％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)和30％溶剂B至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，流速20ml／分钟，λ=220nM。
“HPLC Ret Time”是HPLC保留时间，其是在如下条件下得到的：对于化合物387-388；390-405；422；426-428；431-466，Phenomenex-Prime S5 C18 4．6x30mm，2分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，保持1分钟流速5ml／分钟，λ=220nM。对于化合物338-340；344-345；347-386；389；406-421；423-425；429-430，Phenomenex-LUNA S5 C184．6x30mm，2分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．1％TFA)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．1％TFA)，保持1分钟，流速5ml／分钟，λ=220nM。对于化合物341-343和346，YMC S5 ODS 4．6x50mmBallastic Column，4分钟梯度开始于100％溶剂A(10％甲醇，90％水，0．2％磷酸)至100％溶剂B(90％甲醇，10％水，0．2％磷酸)，保持2分钟，流速4ml／分钟，λ=220nM。