技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种6-芳基取代的喹唑啉及喹啉类化合物及 其应用。
背景技术
磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)是一种脂激酶家族成员，是PI3K/AKT/mTOR信号通路的 重要组成部分。PI3K按结构与功能的不同可分为3类。其中研究最广泛的为I类PI3K，该 类PI3K为异源二聚体，由一个调节亚基和一个催化亚基组成。调节亚基含有SH2和SH3 结构域，与含有相应结合位点的靶蛋白相作用，该亚基通常称为p85。催化亚基有4种， 即p110α，p110β，p110δ，p110γ(其中p110α，p110β，p110δ属于RTK家族，p110γ属于 GPCR家族)。PI3K根据其催化亚基的不同可分为PI3K，PI3Kβ，PI3Kδ和PI3Kγ。其中 PI3K，PI3Kβ，PI3Kγ广泛分布于各种细胞中，而PI3Kδ主要存在于白细胞。随着对PI3K 的组织分布及功能的不断认识，针对p110δ亚型开发高选择性的PI3Kδ抑制剂得到关注。 PI3Kδ抑制剂将在众多血液瘤(如CLL,ALL,MCL,FL,NHL,MM,BCL,以及DLBCL)中 发挥重要治疗作用；PI3Kδ抑制剂也有望在自身免疫性疾病如类风湿关节炎RA，多发性 硬化症MS，红斑狼疮SLE的治疗中发挥作用；此外，一些其他疾病如过敏性疾病，气道 疾病如哮喘等，也有可能通过PI3Kδ抑制剂来改善。因此开发PI3Kδ抑制剂前景看好。
idelalisib(GS-1101)是第一个广泛报道的PI3Kδ抑制剂，2013年9月idelalisib被FDA 授予突破性疗法认定，2014年idelalisib被FDA批准用于CLL,滤泡淋巴瘤(FL)和小淋 巴细胞淋巴瘤(SLL)的血液瘤的治疗。除此之外，duvelisib(IPI-145,INK-1197)，GS-9820 (CAL-120)，GSK-2269557，XL-499，TGR-1202(RP5264)，AMG-319,等处于临床研究阶 段。另外，一些专利(如WO2010055846,WO2013057711,WO2013088404)也报道了许多 体外活性较好的PI3Kδ抑制剂。目前PI3Kδ抑制剂的价值并未被完全开发，且适应症较为 狭窄，而且被批准的PI3Kδ抑制剂idelalisib毒性较大，伴有黑框标记。因此仍然需要开发 新的PI3Kδ抑制剂，已扩展它的临床适应症，并降低毒性。
发明内容
本发明的目的在于提供6-芳基取代的喹啉类化合物及其应用，提供一种新的PI3Kδ激 酶抑制剂。
本发明是通过以下技术方案来实现：
本发明公开了式(I)所示的化合物或其单一异构体；其中所述化合物任选作为药学上 可接受的盐、氘代物、水合物、溶剂合物、化学保护形式的前药或其组合，
其中：
X为N或CH；
Y1为N或CR2；
Y2为N或CR4；
Z为O,S或NR5；
W为-(CH2)n-、羰基、磺酰基；
环B为芳基，5-7元饱和单环环烷基，或5-7元饱和单杂环烷基；
R1为氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、 氨基、烷氨基、烷基烷基氨基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；
R2为氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、 氨基、烷氨基、烷基烷基氨基；
R3为氢、烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、-(CH2)mNR6aR6b、-(CH2)mOR6a、 -(CH2)mCONR6aR6b、羰基、烷基羰基、环烷基羰基、烷氨基、烷基烷基氨基、杂环烷基氨 基、芳基或杂芳基，其任选地被0或1个以下基团所取代：卤素、羟基、氨基、氰基、硝 基、羰基、C1-C10烷基、卤代C1-C10烷基、C1-C10烷氧基、C1-C10烷氨基、C1-C10烷基C1-C10烷基氨基、C3-C10环烷基、C3-C10环烷氧基、C3-C10环烷氨基、C3-C10环烷基C3-C10环烷基 氨基、C3-C10杂环烷基、C3-C10杂环烷氧基、C3-C10杂环烷氨基、C3-C10杂环烷基C3-C10杂 环烷基氨基、C6-C10芳基、C6-C10芳氧基、C6-C10芳氨基、C6-C10芳基C6-C10芳基氨基、C5-C10杂芳基、C5-C10杂芳氧基、C5-C10杂芳氨基、C5-C10杂芳基C5-C10杂芳基氨基、C2-C6烯基、 C2-C6炔基、C6-C10芳基取代的C1-C10烷基、C6-C10芳基取代的C1-C10烷氧基、C6-C10芳基 取代的C1-C10烷氨基、C5-C10杂芳基取代的C1-C10烷基氨基；
R4为氢、氨基酰基；
R5为氢、烷基；
R6a和R6b各自独立的为氢、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨烷基、烷基氨 基烷基、烷基烷基氨基烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基， 其任选地被0-3个以下基团所取代：卤素、羟基、氨基、氰基、硝基、羰基、C1-C10烷基、 卤代C1-C10烷基、C1-C10烷氧基、C1-C10烷氨基、C1-C10烷基C1-C10烷基氨基、C3-C10环烷 基、C3-C10环烷氧基、C3-C10环烷氨基、C3-C10环烷基C3-C10环烷基氨基、C3-C10杂环烷基、 C3-C10杂环烷氧基、C3-C10杂环烷氨基、C3-C10杂环烷基C3-C10杂环烷基氨基、C6-C10芳基、 C6-C10芳氧基、C6-C10芳氨基、C6-C10芳基C6-C10芳基氨基、C5-C10杂芳基、C5-C10杂芳氧 基、C5-C10杂芳氨基、C5-C10杂芳基C5-C10杂芳基氨基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C6-C10芳 基取代的C1-C10烷基、C6-C10芳基取代的C1-C10烷氧基、C6-C10芳基取代的C1-C10烷氨基、 C5-C10杂芳基取代的C1-C10烷基氨基；
或者R6a、R6b与他们相连的N一起形成3至8元饱和或不饱和单杂环，或者R6a、R6b与他们相连的N一起形成8至12元饱和或不饱和的双杂或螺杂环，其任选地被0个或1个 以下基团所取代：烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；
n和m分别独立的为0、1、2、3或4。
进一步，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐中，其中：
X为N或CH；
Y1为N或CR2；
Y2为N或CR4；
Z为O,S或NR5；
W为-(CH2)n-、羰基、磺酰基；
环B为芳基或5-7元饱和单杂环烷基；
R1为氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、 氨基、烷氨基、烷基烷基氨基；
R2为氢、卤素、氰基、硝基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基；
R3为氢、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基，其任选地被0或1个以下基团所取代：卤 素、羟基、氨基、氰基、硝基、羰基、C1-C10烷基、卤代C1-C10烷基、C1-C10烷氧基、C1-C10烷氨基、C1-C10烷基C1-C10烷基氨基；
R4为氢、氨基酰基；
R5为氢、烷基。
n为0、1、2、3或4。
更进一步地，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
X为N或CH；
Y1为N或CR2；
Y2为N或CR4；
Z为O或NR5；
W为羰基、磺酰基；
环B为苯基，四氢吡咯基，哌啶基；
R1为氢、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷氨基、烷基烷基氨 基；
R2为氢、卤素、氰基、硝基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基；
R3为氢、烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基，其任选地被0或1个以下基团所 取代：羰基、C1-C10烷基、卤代C1-C10烷基；
R4为氢、氨基酰基；
R5为氢。
式(I)结构的化合物，
在一种优选方案中，X为N或CH；
在一种优选方案中，Y1为N或CR2；
在一种优选方案中，Y2为N或CR4；
在一种优选方案中，Z为O或NR5；
在一种优选方案中，W为羰基、磺酰基；
在一种优选方案中，环B为苯基，四氢吡咯基，哌啶基；
进一步的，R1为氢、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷氨基、 烷基烷基氨基；
R2为氢、卤素、氰基、硝基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基；
R3为氢、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C5-C10杂环环烷基、苯基、苯乙基、 吡啶基、吡唑基、呋喃基、咪唑基、噻吩基、三氮唑基、吡咯基、噁唑基、异噁唑基、噻 唑基、异噻唑基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、吲哚基、萘基、喹啉基、异喹啉基、苯并呋 喃基、苯并咪唑基或苯并噁唑基；其任选地被0或1个以上下述基团所取代：羰基、C1-C10烷基、卤代C1-C10烷基。
R4为氢、氨基酰基；
R5为氢。
在一种优选方案中，R2为氢、氟、氰基、硝基、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、三 氟甲氧基。
在一种优选方案中，R3为氢、甲基、乙基、乙烯基、丙基、异丙基、2，2-二甲基丙 基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、叔戊基、新戊基、己基、甲氧基、 乙氧基、丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、羟基环己基、 苯基、苯甲基、苯乙基、吡啶基、吡唑基、呋喃基、咪唑基、噻吩基、三氮唑基、吡咯基、 噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、甲基吡咯 烷基、二甲基吡咯烷基、吡咯烷取代的吡咯烷基、四氢吡咯甲基吡咯烷基、二甲氧基吡咯 烷基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢吡喃基、二甲基吗啉基、哌啶基、哌啶酮 基、羟基哌啶基、甲基哌啶基、二甲基哌啶基、四甲基哌啶基、对哌啶基哌啶基、四甲基 哌啶酮基、苯并哌啶基、噻吩并哌啶基、哌嗪基、甲基哌嗪基、哌嗪酮基、乙基哌嗪基、 苯基哌嗪基、苄基哌嗪基、环丙基甲酰基哌嗪基、乙酰基哌嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑 基、三氮唑基、四氮唑基、苯并四氢吡咯基、噻吩并四氢吡咯基、吡咯并四氢吡咯基、呋 喃并四氢吡咯基、苯并哌啶基、噻吩并哌啶基、吡咯并哌啶基、呋喃并哌啶基、苯并哌嗪 基、噻吩并哌嗪基、吡咯并哌嗪基、呋喃并哌嗪基、八氢环戊烷并吡咯基、八氢吡咯并吡 咯基、氮杂双环庚烷基、2-氧杂-6-氮杂-螺[3,3]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂-螺[3,5]壬烷基、噻喃 基、二氧代噻喃基。
进一步的，R3为甲基、羟甲基、乙基、异丙基、2，2-二甲基丙基、异丁基、叔丁基、 新戊基、叔丁氧基、乙烯基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、羟基环己基、苯基、苯 甲基、吡唑基、呋喃基、咪唑基、甲基咪唑基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、吡咯 烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、吗啉基、哌啶基、甲基哌啶基、哌嗪基、 乙酰基哌嗪基、甲基哌嗪基、噻喃基、二氧代噻喃基。
最优选地，本发明通式(I)所示的化合物包括但不限于以下所示化合物1-72。
本发明涉及的通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或者其氘 代物与一种或多种药用载体的药物组合物，其特征在于所述药物组合物为临床上或者药学 可接受的任一剂型。
本发明涉及的通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或者其氘 代物在制备治疗和(或)预防炎性疾病或者肿瘤药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明公开了6-芳基取代的喹唑啉及喹啉类化合物及其应用，该类化合物是一类新的 能够作为PI3Kδ抑制剂的化合物，通过对PI3Kδ激酶活性及PI3Kδ激酶的选择性活性测定， 证实本发明公开的化合物对PI3Kδ激酶活性具有明显的抑制作用，对PI3Kδ的活性具有明 显的选择性作用。通过对白血病细胞系的体外细胞增殖测定，显示本发明公开的化合物对 白血病细胞具有不同的抑制作用。本发明公开的化合物或其药学上可接受的盐、氘代物、 水合物、溶剂合物、化学保护形式的前药或其组合，这些化合物可以作为PI3Kδ抑制剂， 在治疗和/或预防炎性病或肿瘤中发挥作用。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是 限定。
除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求中的术语具有下述含义。
“烷基”指饱和的脂族烃基团。包括1至12个碳原子的直链或支链基团。优选含有1至 10个碳原子的中等大小烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、 戊基等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正 丁基、异丁基或叔丁基等。
“卤素”表示氟、氯、溴或碘，优选为氟。
“卤代烷基”表示烷基，优选如上所定义的低级烷基，它被一个或多个相同或不同的卤 原子取代，例如-CH2Cl、-CF3、-CCl3、-CH2CF3、-CH2CCl3等。
“环烷基”指3至8元全碳单环、全碳5元/6元或6元/6元稠和环或多环稠和环(“稠和” 环意味着系统中的每个环与系统中的其它环共享毗邻的一对碳原子)基团，其中一个或多 个环具有完全连接的π电子系统，环烷基的实例(不局限于)为环丙烷、环丁烷、环戊烷、 环戊烯、环己烷、金刚烷、环己二烯、环庚烷和环庚三烯。
“芳基”表示6至10个碳原子的全碳单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电子系 统。“芳基”包括：苯；萘等，芳基可以是取代的或未取代的。
“杂芳基”表示5至10个环原子的单环或稠合环基团，含有一个、两个、三个或四个 选自N、O或S的环杂原子，其余环原子是C，另外具有完全共轭的π电子系统。杂芳基 包括但不限于，吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、异噁唑、噻唑、吡唑、三氮唑、吡啶、 吡啶酮、嘧啶、吡嗪、哒嗪、吲哚、吲唑、氮杂吲哚、苯并咪唑、吲哚啉、吲哚酮、喹啉、 异喹啉、喹唑啉、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噁唑、噻吩并吡啶、噻吩并嘧啶等。此类基 团的优选实施例为吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、异噁唑、噻唑、吡唑、三氮唑、吡啶、 吡啶酮、嘧啶、吲唑、吲哚酮、喹啉。
“杂环烷基”表示单环或稠和环基团，在环中具有5到9个环原子，其中一个或两个环 原子是选自N、O或S(O)p(其中p是0至2的整数)的杂原子，其余环原子是C。这些环 可以具有一条或多条双键，但这些环不具有完全共轭的π电子系统。杂环烷基包括并不限 于四氢吡喃基、吗啉基、吗啉基哌啶基、噻吗啉基、二氧化噻吗啉基、二甲基吗啉基、吡 咯烷基、四氢呋喃基、甲基吡咯烷基、四氢吡咯甲基吡咯烷基、二甲基吡咯烷基、二甲氧 基吡咯烷基、哌啶基、哌啶酮基、羟基哌啶基、四甲基哌啶基、对哌啶基哌啶基、四甲基 哌啶酮基、苯并哌啶基、噻吩并哌啶基、哌嗪基、甲基哌嗪基、乙基哌嗪基、哌嗪酮基、 苯基哌嗪基、苄基哌嗪基、环丙基甲酰基哌嗪基、叔丁氧羰基哌嗪基等。
“烷氧基”表示-O-(未取代的烷基)和-O(未取代的环烷基)。代表性的实例包括但不限 于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
“烷基羰基”表示(烷基)CO-。代表性的实例包括但不限于甲基羰基、乙基羰基、丙基 羰基等。
“环烷基羰基”表示(环烷基)CO-。代表性的实例包括但不限于环丙基羰基、环丁基羰 基等。
“烷氨基”表示-NH-(未取代的烷基)和-NH-(未取代的环烷基)。代表性实例包括但不 限于甲氨基、乙氨基、丙氨基、丁氨基、环丙氨基、环丁氨基、环戊氨基、环己氨基等及 其衍生物。
“烷基烷基氨基”表示-N-(未取代的烷基1)-(未取代的烷基2)和-N(未取代的环烷 基1)-(未取代的环烷基2)。代表性实例包括但不限于甲基乙基氨基、甲基异丙基氨基、 二甲氨基、甲基环丙基氨基、二环丙氨基等及其衍生物。
“酰基”表示-COH基团或-CO(烷基)基团，其一般包括1至12个碳原子，优选包括1至 6个碳原子，进一步包括1至3个碳原子；具体如甲酰基、乙酰基、丙酰基等。
“羟基”表示-OH基团，“巯基”表示-SH基团，“氰基”表示-CN基团，“氨基”表示-NH2 基团，“硝基”表示-NO2基团，“羰基”表示-CO-基团，“磺酰基”表示-SO2-基团，“氨基酰基” 表示NH2CO-基团。
在一些实施方案中，“被一个或多个基团取代”是指在指定的原子或基团中的一个、两 个、三个或四个氢原子分别被指定范围的基团中选出的相同或不同的基团替换。
“药学上可接受的盐”表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐。这类盐包括： (1)与酸成盐，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得，无机酸包括盐酸、 氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等，有机酸包括乙酸、三氟乙酸、 丙酸、丙烯酸、己酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。(2)存在于母体化合物中的酸性质子被金 属离子代替或者与有机碱配位化合所生成的盐，金属例子例如碱金属离子、碱土金属离子 或铝离子，有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺等。
“药物组合物”指将本发明中的化合物中的一个或多个或其药学上可接受的盐、溶剂化 物、水合物或前药与别的化学成分，例如药学上可接受的载体，混合。药物组合物的目的 是促进给药给动物的过程。
“药用载体”指的是对有机体不引起明显的刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和 性质的药物组合物中的非活性成分，例如但不限于：碳酸钙、磷酸钙、各种糖(例如乳糖、 甘露醇等)、淀粉、环糊精、硬脂酸镁、纤维素、碳酸镁、丙烯酸聚合物或甲基丙烯酸聚合 物、凝胶、水、聚乙二醇、丙二醇、乙二醇、蓖麻油或氢化蓖麻油或多乙氧基氢化蓖麻油、 芝麻油、玉米油、花生油等。
前述的药物组合物中，除了包括药学上可接受的载体外，还可以包括在药(剂)学上 常用的辅剂，例如：抗细菌剂、抗真菌剂、抗微生物剂、保质剂、调色剂、增溶剂、增稠 剂、表面活性剂、络合剂、蛋白质、氨基酸、脂肪、糖类、维生素、矿物质、微量元素、 甜味剂、色素、香精或它们的结合等。
实施例1
4-(4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)氨基-6-溴喹唑啉(中间体1-c)称取4-氯-6-溴喹唑啉(1-a, 0.16g，0.58mmol)置于异丙醇(5mL)，加入4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯胺(0.14g，0.64mmol)， 氮气保护下升温至回流反应5h，冷却至室温,过滤，得白色固体1-c(0.18g，73％)。MS(ESI) m/z:[M+H]+＝426.1,428.1.
2-甲氧基-5-(4-((4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)氨基)喹唑啉-6-基)苯甲酰胺(化合物1)称取2- 甲氧基-5-溴苯甲酰胺(50mg，0.22mmol)置于50mL瓶中，加入二氧六环(5mL)，依次 加入联硼酸频那醇酯(60mg，0.24mmol)，醋酸钾(54mg,0.55mmol)，Pd(dppf)Cl2(12mg, 0.0165mmol)，氮气氛围中回流反应4h，滤液浓缩干，得粗品1-e；再加入中间体1-c(75mg， 0.22mmol)，碳酸钠(58mg，0.55mmol)，Pd(dppf)Cl2(12mg,0.0165mmol)，DME(8ml)，H2O (2ml)，氮气氛围中回流反应4h，滤液浓缩干，经柱层析分离得到黄色固体，化合物1(45.5mg， 52％)。M.p.268-270℃,MS(ESI)m/z:[M+H]+＝497.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.15(s, 1H),8.84(s,1H),8.64(s,1H),8.30(d,1H),8.18(dd,1H),8.01(d,1H),7.99(d,1H),7.88(d, 2H),7.76(s,1H),7.68(s,1H),7.47(d,2H),7.33(d,2H),3.98(s,3H),3.55-3.45(m,4H), 2.45-2.35(m,4H),2.28(s,3H)ppm.
实施例2
4-(3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)氨基-6-溴喹唑啉(中间体2-c)采用制备化合物1-c相类似 的方法可制得化合物2-c(0.43g，62％)。M.p.256-258℃,MS(ESI)m/z:[M+H]+＝426.1, 428.1.
2-甲氧基-5-(4-((3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)氨基)喹唑啉-6-基)苯甲酰胺(化合物2)采用制 备化合物1相类似的方法可制得化合物2，白色固体(168mg，68％)。M.p.205-207℃,MS (ESI)m/z:[M+H]+＝497.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),8.85(s,1H),8.62(d, 1H),8.30(d,1H),8.19(s,1H),7.99(d,3H),7.89(d,1H),7.77(s,1H),7.68(s,1H),7.51(d,1H), 7.36-7.29(m,1H),7.19(s,1H),3.98(s,3H),3.80-3.53(m,4H),2.75-2.45(m,4H),2.38(s,3H) ppm.
实施例3
4-(3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物3)制备化合物1 相类似的方法可制得化合物3(50mg，11％)。M.p.252-256℃,MS(ESI)m/z:[M+H]+＝455.2. 1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),8.95(s,1H),8.76(s,1H),8.68(s,1H),8.40-8.26 (m,1H),8.22(d,1H),8.08-7.94(m,2H),7.83(d,1H),7.49(t,1H),7.16(d,1H),7.02(d,1H), 3.94(s,3H),3.54-3.34(m,4H),2.48-2.28(m,4H),2.23(s,3H)ppm.
实施例4
4-(3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)氨基-6-溴喹啉(中间体4-c)采用制备化合物1-c相类似的 方法可制得化合物4-c(0.29g，26％)。M.p.128-130℃.
4-(3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹啉(化合物4)采用制备化合物 3相类似的方法可制得化合物4，淡黄色固体(145mg，76％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝454.2. 1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),8.73(d,1H),8.69(s,1H),8.51(d,1H),8.26(dd, 1H),8.09(d,1H),8.00-7.95(m,1H),7.51(d,2H),7.37(s,1H),7.16(d,1H),7.02(dd,1H),3.94 (s,3H),3.53(m,4H),2.45-2.35(m,4H),2.24(s,3H)ppm.
实施例5
2-甲氧基-5-(4-((3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)氨基)喹啉-6-基)苯甲酰胺(化合物5)采用制备 化合物1相类似的方法可制得化合物5，黄色固体(100mg，95％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝ 496.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),8.64(d,1H),8.49(d,1H),8.29(d,1H), 8.13-7.89(m,3H),7.75(s,1H),7.66(s,1H),7.50(d,2H),7.41-7.24(m,2H),7.14(dd,1H),7.01 (d,1H),3.97(s,3H),3.62-3.51(m,4H),2.40-2.30(m,4H),2.20(s,3H)ppm.
实施例6
4-(3-(吗啉-1-羰基)苯基)氨基-6-溴喹唑啉(中间体6-c)采用制备化合物1-c相类似的方法 可制得中间体6-c，淡黄色固体(1.72g，79％)。M.p.234-236℃,MS(ESI)m/z:[M+H]+＝413.1, 415.1.
4-(3-(吗啉-1-羰基)苯基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物6)采用制备化合物1 相类似的方法可制得化合物2，白色固体(160mg，83％)。M.p.208-210℃,MS(ESI)m/z: [M+H]+＝442.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),8.85(d,1H),8.74(d,1H),8.64(s, 1H),8.35-8.12(m,2H),7.98(dd,2H),7.89(d,1H),7.56-7.48(m,1H),7.20(d,1H),7.04(d,1H), 3.95(s,3H),3.65-3.50(m,8H)ppm.
实施例7
4-(4-(吗啉-1-羰基)苯基)氨基-6-溴喹唑啉(中间体7-c)采用制备化合物1-c相类似的方法 可制得中间体7-c，淡黄色固体(355mg，86％)。M.p.274-276℃.
4-(4-(吗啉-1-羰基)苯基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物7)采用制备化合物1 相类似的方法可制得化合物7，淡黄色固体(88mg，80％)。M.p.194-196℃,MS(ESI)m/z: [M+H]+＝442.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.02(s,1H),8.86(d,1H),8.74(d,1H),8.66(s, 1H),8.25(dd,2H),8.00(d,2H),7.90(d,1H),7.50(d,2H),7.04(d,1H),3.95(s,3H),3.62-3.52 (m,8H).
实施例8
2-甲氧基-5-(4-((3-(吗啉-1-羰基)苯基)氨基)喹唑啉-6-基)苯甲酰胺(化合物7)采用制备化合 物1相类似的方法可制得化合物8，黄色固体(60mg，55％)。M.p.172-174℃,MS(ESI)m/z: [M+H]+＝484.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),8.83(s,1H),8.61(s,1H),8.30(d, 1H),8.19(dd,1H),8.01(dd,1H),7.96(t,2H),7.88(d,1H),7.76(s,1H),7.69(s,1H),7.60-7.46 (m,2H),7.33(d,1H),7.20(d,1H),3.98(s,3H),3.70-3.45(m,8H).
实施例9
2-甲氧基-5-(4-((4-(吗啉-1-羰基)苯基)氨基)喹唑啉-6-基)苯甲酰胺(化合物9)采用制备化合 物1相类似的方法可制得化合物9，黄色固体(54mg，47％)。M.p.178-180℃,MS(ESI)m/z: [M+H]+＝484.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),8.84(s,1H),8.64(s,1H),8.30(d, 1H),8.19(dd,1H),8.00(dd,3H),7.89(d,1H),7.76(s,1H),7.69(s,1H),7.50(d,2H),7.33(d, 1H),3.98(s,3H),3.68-3.49(m,8H)ppm.
实施例10
4-(3-(吗啉-1-羰基)苯基)氨基-6-(2-甲氧基-3-氰基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物10)采用制备化 合物1相类似的方法可制得化合物10，黄色固体(100mg，91％)。M.p.232-234℃,MS(ESI) m/z:[M+H]+＝467.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.96(s,1H),9.03(d,1H),8.87(d,1H), 8.81(d,1H),8.65(s,1H),7.69(s,1H),8.29(dd,1H),8.00-7.94(m,2H),7.89(d,1H),7.56-7.48 (m,1H),7.21(d,1H),4.09(s,3H),3.72-3.44(m,8H)ppm.
实施例11
2-甲氧基-3-硝基-5-(4-((3-(吗啉-1-羰基)苯基)氨基)喹唑啉-6-基)苯甲酰胺(化合物11)采用 制备化合物1相类似的方法可制得化合物11，黄色固体(47mg，49％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝529.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.11(s,1H),8.92(d,1H),8.65(s,1H),8.48(d,1H), 8.34-8.28(m,2H),8.12(s,1H),7.95(d,2H),7.93(s,1H),7.91(d,1H),7.56-7.48(m,1H),7.21 (d,1H),3.96(s,3H),3.72-3.45(m,8H)ppm.
实施例12
3-甲氧基-5-(4-((3-(吗啉-1-羰基)苯基)氨基)喹唑啉-6-基)苯甲酰胺(化合物12)采用制备化 合物1相类似的方法可制得化合物12，黄色固体(30mg，26％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝484.2. 1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),8.91(s,1H),8.64(s,1H),8.28(d,1H),8.17(s,1H), 7.98(s,3H),7.90(d,1H),7.60(s,1H),7.52(m,3H),7.19(d,1H),3.93(s,3H),3.72-3.52(m, 8H)ppm.
实施例13
3-三氟甲基-5-(4-((3-(吗啉-1-羰基)苯基)氨基)喹唑啉-6-基)苯甲酰胺(化合物13)采用制备 化合物1相类似的方法可制得化合物13，黄色固体(44mg，35％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝ 522.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),8.96(d,1H),8.66(s,2H),8.37(dd,3H), 8.27(s,1H),7.96(m,3H),7.79(s,1H),7.51(dd,1H),7.21(d,1H),3.73-3.43(m,8H)ppm.
实施例14
(S)-4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氨基-6-溴喹唑啉(中间体14-c)称取4-氯-6-溴喹啉(1-a, 244mg，1mmol)和(S)-1-Boc吡咯烷-3-胺(14-b,279mg，1mmol)置于DMF(10mL)，加 入DIPEA(516mg，4mmol)，升温至90℃反应5h，冷却,倾入冰水中50ml，搅拌，有固 体析出，过滤，干燥，得到白色固体14-c(308mg，78％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝393.1,395.1.
(S)-4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物14)采用制备 化合物3相类似的方法可制得化合物14，白色固体(108mg，65％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝422.2.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.71(s,1H),8.44(s,1H),7.98-7.86(m,4H),6.88(d,1H), 6.07-5.95(m,1H),4.97-4.85(m,1H),4.01(s,3H),3.82-3.90(m,1H),3.58-3.45(m,3H), 2.45-2.35(m,1H),2.20-2.10(m,1H),1.48(s,9H)ppm.
实施例15
(S)-2-甲氧基-5-((4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氨基)喹唑啉-6-基)苯甲酰胺(化合物15)采 用制备化合物3相类似的方法可制得化合物15，淡黄色固体(192mg，65％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝464.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.62(s,1H),8.53(s,1H),8.49(d,1H),8.23(d, 1H),8.09(dd,1H),7.93(dd,1H),7.77(d,2H),7.69(s,1H),7.29(d,1H),4.90-4.70(m,1H), 4.00(s,3H),3.74-3.63(m,1H),3.62-3.61(m,1H),3.51-3.47(m,1H),3.16-3.13(m,1H), 2.27-2.24(m,1H),2.15-2.02(m,1H),1.41(s,9H)ppm.
实施例16
(S)-4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧-3-氰基基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物16)采 用制备化合物3相类似的方法可制得化合物16，淡黄色固体(172mg，61％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝447.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.95(s,1H),8.72(s,1H),8.64(s,1H),8.53(s, 1H,),8.21-8.16(m,2H),7.78(d,1H),7.78(d,1H),4.81-4.76(m,1H),4.07(s,3H),3.74-3.70(m, 1H),3.52-3.49(m,1H),3.35-3.30(m,2H),2.32-2.23(m,1H),2.10-1.97(m,1H),1.42(s,9H) ppm.
实施例17
(S)-4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基-3-硝基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物17)采 用制备化合物3相类似的方法可制得化合物17，淡黄色固体(189mg，64％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝467.2.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.73(d,2H,),8.62(d,1H),8.20(s,1H),8.10-7.92 (m,2H),6.71-6.68(m,1H),5.08-4.95(m,1H),4.20(s,3H),3.85-3.95(m,1H),3.58-3.42(m, 3H),2.42-2.33(m,1H),2.25-2.08(m,1H),1.45(s,9H)ppm.
实施例18
(S)-4-(吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物18)称取上述化合物14 (100mg，0.24mmol)置于TFA(2ml)和二氯甲烷(10ml)的混合溶液中，室温搅拌反应 2h，浓度干，加入水(30ml)，二氯甲烷萃取，水层浓缩至干，得到黄色固体(65mg，85％)。 MS(ESI)m/z:[M+H]+＝322.1.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.03(d,1H,J＝5.6Hz,NH), 9.01(s,1H),8.81(d,1H),8.68(d,1H),8.42(dd,1H),8.20(dd,1H),7.95(d,1H),7.02(d,1H), 5.08-5.02(m,1H),3.94(s,3H),3.71-3.64(m,1H),3.54-3.49(m,1H),3.45-3.35(m,2H), 2.46-2.38(m,1H),2.31-2.20(m,1H)ppm.
实施例19
(S)-4-(吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基-3-氰基吡啶-3-基)喹唑啉(化合物19)采用制备化合物 18相类似的方法可制得化合物19，白色固体(101mg，96％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝347.1. MS(ESI)m/z:[M+H]+＝322.1.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.77(s,1H),8.98-8.93(m,2H), 8.81(s,1H),8.73(d,1H),8.40(dd,1H),7.94(d,1H),5.05-5.00(m,1H),4.09(s,3H),3.69-3.64 (m,1H),3.51-3.49(m,1H),3.41-3.37(m,2H),2.45-2.39(m,1H),2.28-2.23(m,1H).
实施例20
(S)-4-(1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基-3-氰基吡啶-5-基)喹唑啉(化 合物20)称取化合物19(50mg，0.14mmol)和四氢吡喃-4-甲酸(24mg，0.19mmol)置于 DMF(10ml)，冰浴下，加入HATU(137mg，0.36mmol)和DIPEA(46mg，0.36mmol)， 升至室温搅拌反应12h，浓度干，柱层析分离，得到黄色固体(17mg，26％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝459.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.95(s,1H),8.72(dd,1H),8.64(s,1H),8.55(d, 1H),8.28-8.18(m,2H),7.80(dd,1H),4.99-4.69(m,1H),4.08(s,3H),3.90-3.74(m,4H), 3.60-3.52(m,2H),3.43-3.22(m,2H),2.82-2.60(m,1H),2.45-2.21(m,1H),2.21-1.96(m,1H), 1.67-1.52(m,4H).
实施例21
(S)-4-(吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基-3-硝基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物21)采用制备化合物 18相类似的方法可制得化合物21，淡黄色固体(120mg，96％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝367.1.
实施例22
(S)-2-甲氧基-5-((4-(吡咯烷-3-基)氨基)喹唑啉-6-基)苯甲酰胺(化合物22)采用制备化合物 18相类似的方法可制得化合物22，白色固体(120mg，95％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝364.2. 1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.79(s,1H),8.92(s,1H),8.76(d,1H),8.35(dd,1H),8.25(d, 1H),7.97(dd,1H),7.91(d,1H),7.77(s,1H),7.72(s,1H),7.33(d,1H),5.03-4.98(m,1H),3.97 (s,3H),3.68-3.34(m,4H),2.44-2.39(m,1H),2.29-2.26(m,1H).
实施例23
(S)-2-甲氧基-5-(4-((1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)吡咯烷-3-基)氨基)喹唑啉-6-基苯甲酰胺(化合 物17)采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物23，淡黄色固体(72mg，69％)。 MS(ESI)m/z:[M+H]+＝476.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.34(m,1H),8.77(m,2H),8.22 (m,2H),7.93(dd,1H),7.82(d,1H),7.77(s,1H),7.72(s,1H),7.32(d,1H),5.04-4.85(m,1H), 3.97(s,3H),3.90-3.58(m,4H),3.52-3.25(m,4H),2.82-2.60(m,1H),2.42-2.08(m,2H), 1.65-1.53(m,4H).
实施例24
(S)-4-(1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物24) 采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物24，淡黄色固体(72mg，69％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝434.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.66(s,1H),8.64-8.62(m,1H),8.64(d,1H), 8.55(t,1H),8.19-8.13(m,2H),7.80(dd,1H),7.00(d,1H),4.99-4.69(m,1H),3.93(s,3H), 3.87-3.74(m,4H),3.70-3.52(m,2H),3.48-3.22(m,2H),2.80-2.62(m,1H),2.42-2.21(m,1H), 2.21-1.96(m,1H),1.67-1.52(m,4H).
实施例25
(S)-4-(1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基-3-硝基吡啶-5-基)喹唑啉(化 合物25)采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物25，淡黄色固体(72mg，69％)。 MS(ESI)m/z:[M+H]+＝479.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.02(t,1H),8.24(t,1H),8.70(s, 1H),7.32(d,1H),8.31(t,1H),8.23(m,1H),7.81(dd,1H),4.94-4.74(m,1H),4.11(s,3H), 3.90-3.58(m,4H),3.52-3.25(m,4H),2.72-2.60(m,1H),2.40-2.00(m,2H),1.65-1.50(m,4H).
实施例26
(S)-3-甲氧基-5-((4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氨基)喹唑啉-6-基)苯甲酰胺(化合物26)采 用制备化合物3相类似的方法可制得化合物26，灰白色固体(185mg，63％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝464.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.53(s,1H),8.36(d,1H),8.17(dd, 1H),8.15(s,1H),7.90(s,1H),7.79(d,1H),7.52(m,2H),7.49(d,1H),4.81-4.74(m,1H),3.91 (s,3H),3.76-3.70(m,1H),3.52-3.25(m,4H),2.34-2.23(m,1H),2.09-2.00(m,1H),1.41(d, 9H).
实施例27
(S)-2-甲氧基-5-(4-((1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)吡咯烷-3-基)氨基)喹唑啉-6-基)苯甲酰胺(化合 物27)采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物27，淡黄色固体(18mg，19％)。 MS(ESI)m/z:[M+H]+＝432.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.98(m,1H),8.91(s,2H),8.33 (dd,1H),8.26(d,1H),8.01(dd,1H),7.92(dd,1H),7.76(s,1H,CONH2),7.69(s,1H),7.33(d, 1H),5.12-4.95(m,1H),3.98(s,3H),3.84-3.80(m,2H),3.65-3.45(m,2H),2.45-2.12(m,2H), 1.86-1.76(m,1H),0.78-0.74(m,4H).
实施例28
(S)-3-甲氧基-5-((4-(吡咯烷-3-基)氨基)喹唑啉-6-基)苯甲酰胺(化合物28)采用制备化合物 18相类似的方法可制得化合物28，淡黄色固体(112mg，95％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝364.2. 1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.68(s,1H),8.90(s,1H),8.81(s,1H),8.39(d,1H),8.18(s,1H), 7.92(m,2H),7.54(m,3H),5.01-4.97(m,1H),3.91(s,3H),3.68-3.64(m,1H),3.52-3.49(m,1H), 3.40-3.36(m,2H),2.45-2.36(m,1H),2.34-2.28(m,1H).
实施例29
(R)-4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氨基-6-溴喹唑啉(中间体29-c)称取4-氯-6-溴喹啉(1-a, 2.88g，12mmol)和(R)-1-Boc吡咯烷-3-胺(29-b,2.2g，12mmol)置于DMF(40mL)，加入 DIPEA(6.1g，47mmol)，升温至90℃反应5h，冷却,倾入冰水中50ml，搅拌，有固体析 出，过滤，干燥，得到白色固体29-c(3.58g，74％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝393.1,395.1.
(R)-4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物29)采用制备 化合物3相类似的方法可制得化合物29，白色固体(1.15g，79％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝ 422.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.64(s,1H),8.52(s,1H),8.26(d,1H),8.18 (d,1H),8.12(d,1H),7.77(d,1H),7.00(d,1H),4.82-4.72(m,1H),3.93(s,3H),3.75-3.65(m, 1H),3.50-3.50(m,1H),3.36-3.27(m,2H),2.28-2.19(m,1H),2.04-1.99(m,1H),1.41(s,9H).
实施例30
(R)-4-(吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物30)采用制备化合物18相 类似的方法可制得化合物30，淡黄色固体(0.75g，94％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝322.1.
实施例31
(S)-4-(1-(环丙基-4-羰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物31)采用 制备化合物20相类似的方法可制得化合物31，黄色固体(56mg，46％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝390.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.50(t,1H),8.88(d,1H),8.81-8.78(m,1H),8.68(t,1H), 8.32(dd,1H),8.20-8.17(m,1H),7.86(dd,1H),7.05(d,1H),5.10-4.94(m,1H),3.94(s,3H), 3.90-3.75(m,2H),3.65-3.45(m,2H),2.46-2.11(m,2H),1.86-1.74(m,1H),0.79-0.72(m,4H).
实施例32
(S)-4-(1-(苯基-4-羰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物32)采用制 备化合物20相类似的方法可制得化合物32，黄色固体(112mg，85％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝426.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.43(s,1H),8.84-8.76(m,2H),8.69(dd,1H),8.54(dd, 1H),8.36-8.30(m,1H),8.22-8.17(m,1H),7.59-7.44(m,5H),7.06(dd,1H),5.05-4.92(m,1H), 4.01(s,3H),3.72-3.65(m,2H),3.65-3.55(m,2H),2.42-2.11(m,2H).
实施例33
(S)-4-(1-乙酰基吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物33)采用制备化合 物20相类似的方法可制得化合物33，黄色固体(40mg，35％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝364.0. 1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.68-8.64(m,4H),8.19-8.15(m,2H),7.80(dd,1H),7.01(d,1H), 4.94-4.80(m,1H),3.93(s,3H),3.90-3.35(m,4H),2.40-2.05(m,2H),1.98(d,3H).
实施例34
(R)-4-(1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物24) 采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物34，淡黄色固体(20mg，19％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝434.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.78-8.52(m,3H),8.50-8.40(m,1H),8.19-8.15 (m,2H),7.80(dd,1H),7.01(d,1H),4.98-4.80(m,1H),3.93(s,3H),3.90-3.75(m,4H), 3.70-3.35(m,4H),2.72-2.60(m,1H),2.40-2.00(m,2H),1.65-1.50(m,4H).
实施例35
(S)-4-(1-环丙磺酰基吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物33)冰浴下， 将化合物18(80mg，0.25mmol)溶解于DMF(5ml)中，加入三乙胺(0.5ml)和环丙磺 酰氯(45mg，0.32mmol)，升至室温反应过夜，次日浓缩干，经柱层析分离(二氯甲烷：甲 醇＝80：1)得到淡黄色固体(40mg，35％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝426.0.1H-NMR(400M, DMSO-d6)δ9.82(s,1H),8.92(d,1H),8.90(s,1H),8.71(d,1H),8.36(dd,1H),8.23(dd,1H), 7.91(d,1H),7.03(d,1H),5.05-5.00(m,1H),3.94(s,3H),3.90-3.50(m,4H),3.16-3.13(m,1H), 2.48-2.24(m,2H),1.01-0.95(m,4H).
实施例36
(S)-4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-氨基嘧啶-5-基)喹唑啉(化合物36)采用制备化 合物3相类似的方法可制得化合物36，黄色固体(158mg，78％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝ 408.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),8.24(d,1H),8.50(s,1H),8.16(d,1H),8.09 (dd,1H),7.75(d,1H),6.90(s,2H),4.81-4.76(m,1H),3.73-3.50(m,2H),3.34-3.25(m,2H), 2.29-2.23(m,1H),2.05-2.00(m,1H),1.42(s,9H).
实施例37
(S)-4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-氨基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物37)采用制备化 合物3相类似的方法可制得化合物37，黄色固体(56mg，22％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝407.0. 1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.52-8.46(m,3H),8.19(d,1H),8.05(dd,1H),7.87(dd,1H),7.72 (d,1H),6.59(d,1H),6.18(s,1H),4.90-4.75(m,1H),3.85-3.45(m,4H),2.30-2.00(m,2H),1.41 (s,9H).
实施例38
(S)-4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氧基-6-溴喹唑啉(中间体38-c)称取1-Boc-3-羟基吡咯烷 (38-b,225mg，1mmol)置于无水THF(10mL)，分次加入NaH(60％,120mg，3mmol)， 室温搅拌1h，加入4-氯-6-溴喹唑啉(1-a，244mg，1mmol)，室温搅拌过夜，次日，二氯 甲烷萃取，干燥，经柱层析分离得到无色油状物，经乙醚研磨得到白色固体38-c(274mg， 70％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝393.9,395.9.
(S)-4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氧基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物38)采用制备 化合物3相类似的方法可制得化合物38，白色固体(580mg，81％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝423.0.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.82(s,1H),8.51(d,1H),8.24(s,1H),8.04(s,2H),7.92 (dd,1H),6.91(d,1H),5.91(s,1H),4.03(s,3H),3.82-3.65(m,4H),2.33(s,2H),1.49(s,9H).
实施例39
4-(1-叔丁氧羰基哌啶-4-基)氨基-6-溴喹唑啉(中间体39-c)称取4-氯-6-溴喹啉(1-a,500mg， 2mmol)和1-Boc哌啶-4-胺(39-b,410mg，2mmol)置于DMF(20mL)，加入DIPEA(1060mg， 8mmol)，升温至90℃反应6h，冷却,倾入冰水中100ml，搅拌，有固体析出，过滤，干燥， 得到淡黄色固体39-c(430mg，52％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝406.9,408.9.
4-(1-叔丁氧羰基哌啶-4-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物39)采用制备化合物 3相类似的方法可制得化合物39，白色固体(300mg，65％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝436.0. 1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.66(d,1H),8.58(s,1H),8.47(s,1H),8.18(dd,1H),8.11(d, 1H),8.04(d,1H),7.75(d,1H),7.00(d,1H),4.50-4.40(m,1H),4.08-3.98(m,2H),3.93(s,3H), 2.95-2.82(m,2H),2.00-1.90(m,2H),1.52-1.45(m,2H),1.43(s,9H).
实施例40
4-(1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)哌啶-4-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(40)制备采用制 备化合物20相类似的方法可制得化合物40，淡黄色固体(32mg，26％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝448.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.02(s,1H),8.76(s,1H),8.70-8.67(m,2H),8.28(dd, 1H),8.18(dd,1H),7.82(d,1H),7.03(d,1H),4.67-4.50(m,2H),4.15-4.11(m,1H),3.94(s,3H), 3.88-85(m,2H),3.50-3.25(m,4H),2.76-2.67(m,1H),2.08-2.00(m,2H),1.65-1.53(m,6H).
实施例41
4-(1-环丙基羰基哌啶-4-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(40)制备采用制备化合物20 相类似的方法可制得化合物41，淡黄色固体(92mg，91％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝404.0. 1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.86(d,1H),8.71(s,1H),8.68-8.67(m,2H),8.24(dd,1H),8.18 (dd,1H),7.81(d,1H),7.02(d,1H),4.64-4.63(m,1H),3.94(s,3H),3.50-3.35(m,4H),2.76-2.67 (m,1H),2.08-2.02(m,3H),1.70-1.50(m,2H),0.78-0.73(m,4H).
实施例42
(S)-4-(吡咯烷-3-基)氧基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物38-a)采用制备化合物20相 类似的方法可制得化合物42(22mg，23％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝323.0.
(S)-4-(1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)吡咯烷-3-基)氧基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物42) 采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物42(22mg，23％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝ 435.0.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.82(d,1H),8.49(t,1H),8.19(d,1H),8.4(d,2H),7.92-7.88 (m,1H),6.90(d,1H),5.95-5.93(m,1H),4.02(s,3H),4.10-3.75(m,6H),3.50-3.42(m,2H), 2.55-2.75(m,1H),2.50-2.35(m,2H),2.00-1.85(m,2H),1.72-1.55(m,2H).
实施例43
(S)-4-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)氨基-6-(4-三氟甲氧基苯基)喹唑啉(化合物36)采用制备 化合物3相类似的方法可制得化合物43，黄色固体(180mg，75％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝475.0.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.70(s,1H),7.95-7.93(m,3H),7.65(d,2H),7.32(d,2H), 6.35-6.28(m,1H),5.00-4.90(m,1H),3.74-3.35(m,4H),2.14-1.93(m,2H),1.47(s,9H).
实施例44
(S)-4-(1-环丙基吡咯烷-3-基)氨基-6-(4-三氟甲氧基苯基)喹唑啉(44)制备采用制备化合物 20相类似的方法可制得化合物44(71mg，65％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝443.0.1H-NMR(400 M,CDCl3)δ8.68(s,1H),7.96-7.89(m,3H),7.65(d,2H),7.53-7.51(m,1H,NH),7.32(d,2H), 5.10-4.90(m,1H),3.84-3.35(m,4H),2.44-2.25(m,2H),1.68-1.59(m,1H),0.95-0.66(m,4H).
实施例45
(S)-4-(1-(苯乙酰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物45)采用制备 化合物20相类似的方法可制得化合物45，黄色固体(65mg，52％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝440.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.66(d,1H),8.60(dd,1H),8.52(s,1H),8.22(d,1H), 8.16(dd,1H),8.13-8.10(m,1H),7.78(dd,1H),7.30-7.13(m,5H),7.00(d,1H),4.89-4.77(m, 1H),3.97(s,3H),3.89-3.60(m,4H),3.60-3.45(m,2H),2.36-2.05(m,2H).
实施例46
(S)-4-(1-叔丁氧羰基哌啶-3-基)氨基-6-溴喹唑啉(中间体46-c)称取1-Boc-3-氨基哌啶(46-b, 500mg，2.5mmol)置于无水DMF(10mL)，加入4-氯-6-溴喹唑啉(1-a，610mg，2.5mmol)， DIPEA(1290mg，10mmol)，升温至90℃反应6h，冷却,倾入冰水中50ml，搅拌，有固体 析出，过滤，干燥，得到淡黄色固体46-c(920mg，90％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝406.9,408.9.
(S)-4-(1-叔丁氧羰基哌啶-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物46)采用制备化 合物3相类似的方法可制得化合物46，白色固体(652mg，75％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝ 436.0.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.68(s,1H),8.45(d,1H),7.92(s,2H),7.88(t,1H),7.79(s, 1H),6.86(d,1H),4.42-4.39(m,1H),4.02(s,1H3),3.80-3.36(m,4H),1.86-1.65(m,4H),1.42(s, 9H).
实施例47
(S)-4-(1-(环丁基甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物47)采用 制备化合物20相类似的方法可制得化合物47，黄色固体(22mg，12％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝404.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.05-8.90(m,1H),8.75-8.66(m,3H),8.25-8.16(m,2H), 7.82(d,1H),7.02(d,1H),4.96-4.80(m,1H),3.94(s,3H),3.85-3.75(m,1H),3.65-3.55(m,1H), 3.50-3.40(m,2H),3.32-3.20(m,1H),2.38-2.23(m,6H),1.95-1.75(m,2H).
实施例48
(S)-4-(1-(2，2-二甲基丙酰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物48) 采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物48，黄色固体(125mg，65％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝406.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.74(d,1H),8.97(s,1H),8.83(d,1H),8.68(d, 1H),8.37(dd,1H),8.18(dd,1H),7.88(d,1H),7.05(d,1H),5.00-4.93(m,1H),3.94(s,3H), 3.89-3.65(m,2H),3.60-3.35(m,2H),2.51-2.34(m,2H),1.21(s,9H).
实施例49
(S)-4-(1-(环戊基甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物49)采用 制备化合物20相类似的方法可制得化合物49，黄色固体(75mg，38％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝418.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.66(d,1H),8.62(t,1H),8.53(d,1H),8.25(t,1H),8.16 (dd,1H),8.13-8.10(m,1H),7.78(dd,1H),7.00(d,1H),4.90-4.70(m,1H),3.93(s,3H), 3.82-3.60(m,2H),3.55-3.39(m,2H),2.88-2.81(m,1H),2.38-2.00(m,2H),1.85-1.45(m,8H).
实施例50
(S)-4-(1-(环己基甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物50)采用 制备化合物20相类似的方法可制得化合物50，黄色固体(35mg，17％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝432.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.66(d,1H),8.62(s,1H),8.53(d,1H),8.34-8.22(m, 1H),8.20-8.08(m,2H),7.79(dd,1H),7.00(dd,1H),4.90-4.74(m,1H,CH),3.93(s,3H), 3.84-3.41(m,4H),2.46-2.19(m,2H),2.19-1.95(m,1H),1.75-1.15(m,10H).
实施例51
(S)-4-(1-(3，3-二甲基丁酰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物51) 采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物51，黄色固体(112mg，56％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝420.0.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.70(d,1H),8.43(dd,1H),7.98-7.81(m,4H),6.86 (dd,1H),6.46(d,1H),5.00-4.85(m,1H),4.02(s,3H),3.92-3.60(m,4H),2.55-2.15(m,4H), 1.79(s,3H),1.07(s,3H),1.02(s,3H).
实施例52
(S)-4-(1-(丙酰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物52)采用制备化 合物20相类似的方法可制得化合物52，黄色固体(4mg，18％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝ 378.0.
实施例53
(S)-4-(1-(丙烯酰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物53)采用制备 化合物35相类似的方法可制得化合物53，黄色固体(38mg，35％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝376.1.1H-NMR(400M,CDCl3)δ9.31(d,1H),8.44(d,1H),8.28-8.19(m,2H),6.86(dd,1H), 6.92(d,1H),6.55-6.40(m,1H),6.35-6.20(m),5.72-5.50(m,2H),5.50-5.40(m,1H),4.03(s, 3H),3.92-3.30(m,4H),2.55-2.15(m,2H).
实施例54
(S)-4-(1-(2-呋喃甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物54)采用制 备化合物20相类似的方法可制得化合物54，黄色固体(34mg，28％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝416.0.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.69(s,1H),8.54-8.34(m,2H),7.94-7.79(m,4H),7.38(s, 1H),6.91(dd,1H),6.73-6.68(m,1H),6.39(s,1H),5.25-5.03(m,1H),4.30-4.05(m,2H),3.96(s, 3H),3.95-3.75(m,2H),2.50-2.25(m,2H).
实施例55
(S)-4-(1-(4-羟基环己基甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物55) 采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物55，黄色固体(2mg，16％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝448.0.
实施例56
(S)-4-(1-(环丙基甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基-3-氰基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物56) 采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物56，黄色固体(156mg，50％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝415.0.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.71-8.68(m,3H),8.29-8.27(m,1H),7.98-7.88(m, 3H),5.25-4.90(m,1H),4.25-3.95(m,2H),4.13(s,3H),3.85-3.70(m,2H),2.55-2.45(m,2H), 1.80-1.62(m,1H),1.08-0.65(m,4H).
实施例57
(S)-4-(1-(环丙基甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基-6-(2-甲氧基-3-硝基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物57) 采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物57，黄色固体(7mg，21％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝435.0.
实施例58
(S)-4-(1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)哌啶-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物58) 采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物58，黄色固体(91mg，59％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝448.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.64-8.59(m,1H),8.48(s,1H), 8.19(dd,1H),8.15-8.00(m,2H),7.78(d,1H),7.00(d,1H),4.59-4.05(m,3H),3.93(s,3H), 4.00-3.76(m,4H),3.10-2.90(m,2H),2.75-2.65(m,1H),2.10-1.95(m,2H),1.90-1.80(m,2H), 1.70-1.45(m,4H).
实施例59
(S)-4-(1-(环丙基甲酰基)哌啶-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物59)采用制 备化合物20相类似的方法可制得化合物59，黄色固体(95mg，68％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝404.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.67-8.48(m,3H),8.20-8.05(m,3H),7.77(d,1H),7.00 (d,1H),4.59-4.05(m,3H),3.93(s,3H),3.30-3.00(m,2H),2.13-2.00(m,1H),2.00-1.55(m,4H), 0.80-0.55(m,4H).
实施例60
(S)-4-(1-(环丁基甲酰基)哌啶-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物60)采用制 备化合物20相类似的方法可制得化合物60，黄色固体(114mg，79％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝418.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.60(d,1H),8.49(d,1H),8.18(dd,1H), 8.11(d,1H),8.04(d,1H),7.76(dd,1H),6.99(d,1H),4.59-3.95(m,3H),3.93(s,3H),3.00-2.60 (m,3H),2.30-2.00(m,4H),2.00-1.40(m,6H).
实施例61
(S)-4-(1-(2，2-二甲基丁酰基)哌啶-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物61)采 用制备化合物20相类似的方法可制得化合物61，黄色固体(60mg，42％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝420.0.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.61(s,1H),8.47(s,1H),8.19-8.04 (m,3H),7.77(d,1H),6.99(d,1H),4.59-4.50(m,1H),4.40-4.10(m,2H),3.93(s,3H),2.89-2.60 (m,2H),2.15-2.05(m,1H),1.90-1.70(m,2H),1.45-1.30(m,1H),1.25(s,9H).
实施例62
(S)-4-(1-(环戊基甲酰基)哌啶-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物62)采用制 备化合物20相类似的方法可制得化合物62，黄色固体(27mg，34％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝432.1.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.63-8.57(m,1H),8.49(d,1H),8.18(d,1H), 8.15-8.02(m,2H),7.77(dd,1H),7.00(d,1H),4.59-4.10(m,3H),3.94(s,3H),3.10-2.98(m,2H), 2.70-2.60(m,1H),2.10-1.50(m,12H).
实施例63
(S)-4-(1-(3，3-二甲基丁酰基)哌啶-3-基)氨基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物63)采 用制备化合物20相类似的方法可制得化合物63，黄色固体(7mg，24％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝434.0.
实施例64
(S)-4-(1-(环丁基甲酰基)吡咯烷-3-基)氧基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物64)采用 制备化合物20相类似的方法可制得化合物64，淡黄色油状物(37mg，43％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝405.0.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.81(s,1H),8.49(t,1H),8.19(d,1H),8.05-8.03 (m,2H),7.92-7.89(m,1H),6.90(d,1H),5.95-5.92(m,1H),4.03(s,3H),3.91-3.63(m,4H), 3.30-3.15(m,1H),2.48-2.35(m,4H),2.25-1.90(m,4H).
实施例65
(S)-4-(1-(2，2-二甲基丙酰基)吡咯烷-3-基)氧基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物65) 采用制备化合物20相类似的方法可制得化合物65，黄色固体(48mg，56％)。MS(ESI)m/z: [M+H]+＝407.0.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.83(s,1H),8.49(d,1H),8.20(s,1H),8.04(d,2H), 7.90(dd,1H),6.91(dd,1H),5.98-5.89(m,1H),4.03(s,3H),4.03-3.85(m,4H),2.40-2.30(m, 2H),1.31(s,9H).
实施例66
(S)-4-(1-(环丙基甲酰基)吡咯烷-3-基)氧基-6-(2-甲氧基吡啶-5-基)喹唑啉(化合物66)采用 制备化合物20相类似的方法可制得化合物66，黄色固体(40mg，46％)。MS(ESI)m/z:[M+H]+＝391.0.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.82(d,1H),8.51(d,1H),8.23(d,1H),8.08-8.04(m,2H), 7.92(dd,1H),6.91(d,1H),6.03-5.95(m,1H),4.03(s,3H),3.95-3.70(m,4H),2.55-2.30(m,2H), 1.75-1.55(m,1H),1.12-0.95(m,2H),0.85-0.72(m,2H).
采用相似的方法可制备化合物67，68，69，70，71，72.
测试一：本发明化合物对PI3Kδ激酶活性的测定
测试方法：将测试的化合物样品用DMSO溶解，配制10mM母液，然后把化合物加到筛选 体系中，化合物检测浓度范围是0.1nM–10μM，按照3倍梯度进行稀释，每个浓度做两个复孔。 所有的酶反应体系组成如下：40mMTris,pH7.4,10mMMgCl2,0.1mg/mlBSA,1mMDTT,10 μMATP,激酶，激酶底物；同时加入不同浓度的待筛化合物，组成50μl 的反应体系，在30℃下反应40分钟，后用荧光素酶的方法检测体系内的ADP含量，再反应5 分钟后，在MD-SpectraMaxM5多功能酶标仪上检测化学发光信号，化学发光信号值强度与酶 活性抑制成正比。检测到的化学发光信号值，代入如下公式： ％activity＝{(Lu药物–Lu本底)/(Lu酶–Lu本底)}×100％,然后用GraphpadPrism5软件 处理，计算出化合物的IC50值。本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测试，本发明化 合物对PI3Kδ的IC50值见表1所示。
表1本发明化合物对PI3Kδ激酶的IC50值
A表示IC50<10nM；B表示IC50范围10-20nM；C表示IC50范围20-100nM；D表示100-500nM E表示IC50>500nM；-表示未测试。
结论：本发明优选化合物对PI3Kδ激酶活性具有明显的抑制作用。
测试二：本发明化合物对PI3K激酶的选择性活性的测定
采用上述相似的方法，测试本发明化合物对PI3K激酶的各个亚型(包括PI3Kα，PI3Kβ， PI3Kδ和PI3Kγ)的活性。本发明化合物对PI3K激酶的各个亚型(包括PI3Kα，PI3Kβ，PI3Kδ 和PI3Kγ)的活性见表2所示。
表2本发明化合物对PI3K激酶各个亚型的IC50值
-表示未测试。
结论：本发明优选化合物对PI3Kα，PI3Kβ，PI3Kδ和PI3Kγ的IC50值的表明，本发明化 合物对PI3Kδ的活性具有明显的选择性作用。
测试三：本发明化合物对白血病细胞系的体外细胞增殖测定
测试方法：采用MTT测定本发明化合物对多种白血病细胞系(例如；Ramos细胞， RPMI-8226细胞,Raji细胞)的细胞增殖抑制。将测试的化合物样品和阳性药用DMSO溶解， 配制成一系列浓度梯度的母液(1000μM，100μM，10μM，1μM)。使用RPMI1640培养基， 胎牛血清，胰蛋白酶，MTT,青霉素，链霉素等实验材料。于96孔板每孔加入浓度为8000-10000 个/mL的细胞悬液200μL，置于37℃，5％CO2培养箱中，24h后，加入样品溶液，2μL/孔，设 三孔，置于37℃，5％CO2培养箱中孵育72h，于2000转/min的离心机，离心10min，弃去上清 液，加入2μL/孔的MTT，孵育4h弃去上清液，每孔加入150Μldmso,溶解后用全自动酶标仪测 490nm和570nm下的光密度值(OD)，以溶液对照处理的肿瘤细胞为对照组，按照下式求得化 合物对白血病细胞的抑制率。细胞抑制率＝(1-给药组平均OD值/对照组平均OD值)×100％, 在抑制率的基础上通过改良寇氏法计算出IC50值。以SAHA作为阳性对照药进行测试。本发明 化合物的细胞活性通过此试验进行测试，其中代表性化合物对白血病细胞系Ramos细胞的抑制活性 见表3所示。
表3本发明化合物对Ramos细胞的IC50值
另外本发明中代表性化合物对白血病细胞系Raji细胞的抑制活性与Ramos细胞的活性相 似。本发明中代表性化合物对白血病细胞系RPMI-8226细胞细胞的抑制活性也表现出一定的 抑制活性。
结论：本发明优选化合物对白血病细胞具有不同的抑制作用，说明本发明优选化合物对不 同细胞类型具有不同的效力。
测试四：本发明化合物对Raji细胞的AKT磷酸化的抑制的测定
在RPMI1640和10％FBS中培养Raji细胞并保存。37℃下利用测试化合物期望的浓度培 养这些细胞2小时，在37℃用抗人IgM(5μg/mL)刺激20分钟。4℃下离心，使用300μL裂解缓 冲液制备全细胞提取物。裂解产物收集上层清液。通过PathScan磷酸-Akt1(Ser473)ELISA试 剂盒分析所述上层清液中Akt的磷酸化水平。
测试五：化合物编号20体内药代性质测试
化合物的体内药代实验采用SD大鼠进行。选取6只健康的雄性SD大鼠(体重范围为 180g至240g)，以10mg/kg的灌胃给药方式(i.g处方为5％DMA+5％SolutolHS-15)，采 血时间点为：5min,15min,30min,1h,2h,4h,6h,8h,10h,and24h采集血样约0.3mL至 肝素化Eppendorf管中，4℃下，4000rpm离心5min。血浆经蛋白沉淀(1％HCOOH酸化 的CH3CN下)后，结果分析采用WinNonlin5.2软件，按统计距理论求算化合物10mg/kg 后的药代动力学参数。本发明化合物20的体内药代数据见表4所示。
表4本发明化合物20的体内药代数据
aIdelalisib的数据为FDA官方申报材料的数据(处方为：0.5％w/v Carboxymethylcellulose/0.1％v/vTween80)；b化合物20的处方为：5％DMA+10％solutol.
结论：化合物20在10mg/kg的给药剂量下，在SD大鼠体内，体内暴露量达到了524hr*ng/mL， 半衰期达2.99h，表现出良好的药代性质。