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1、(10)申请公布号 CN 102140060 A (43)申请公布日 2011.08.03 CN 102140060 A *CN102140060A* (21)申请号 201110044623.5 (22)申请日 2011.02.24 C07C 50/28(2006.01) C07C 46/10(2006.01) (71)申请人 黄仁彬 地址 530021 广西壮族自治区南宁市双拥路 22 号广西医科大学药学院 (72)发明人 黄仁彬 温庆伟 林兴 焦杨 张士军 罗旭艳 黄建春 陈晓宇 荣延平 黄桂红 (74)专利代理机构 广西南宁明智专利商标代理 有限责任公司 45106 代理人 黎明天 (。
2、54) 发明名称 一种杨桃根苯醌类化学成分粗提物的提取、 分离方法 (57) 摘要 本发明公开了一种杨桃根苯醌类化学成分粗 提物的提取、 分离的方法。 该方法以酢浆草科植物 杨桃的干燥根为原料， 经乙醇或水加热回流提取， 浓缩， 再经环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取后， 将乙 酸乙酯萃取液用开放硅胶柱柱层析的方法分离得 到苯醌类化学成分粗提物。本发明将杨桃根水提 或醇提物的乙酸乙酯萃取液分别采用三氯甲烷、 环己烷为洗脱液， 用开放硅胶柱柱层析的方法， 使 杨桃根苯醌类化学成分快速分离， 该方法操作简 便， 所提取的苯醌类化学成分含量高， 成本低。本 发明可用于实验室杨桃根苯醌类化学成分粗提物 。
3、的提取、 分离， 也可用于大生产中杨桃根苯醌类化 学成分粗提物的提取、 分离。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 CN 102140065 A1/1 页 2 1. 一种杨桃根苯醌类化学成分粗提物的提取、 分离的方法， 其特征是 ： 以酢浆草科植 物杨桃的干燥根为原料， 经乙醇或水加热回流提取， 浓缩， 再经环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃 取后， 将乙酸乙酯萃取液用开放硅胶柱柱层析的方法分离得到苯醌类化学成分粗提物。 2. 根据权利要求 1 所述的杨桃根苯醌类化学成分粗提物的提取、 分离的方法， 其特征 是 ：。
4、 (1) 将杨桃根粉碎成粗粉， 加 6 9 倍量的 50 80乙醇， 浸泡 0.5 2 小时， 常压下 直接加热回流提取， 提取 1 3 次， 滤过， 合并提取液， 于 50 80减压回收乙醇 ； (2)或将杨桃根粉碎成粗粉， 加69倍量的水， 浸泡0.52小时， 常压下直接加热回 流提取， 同法提取 1 3 次， 滤过， 合并提取液， 浓缩 ； (3) 分别将步骤 (1) 或步骤 (2) 浓缩液分别用 1 4 倍量的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇 在室温条件下， 依次萃取 1 3 次， 在室温条件下， 将相同溶剂的萃取液合并、 浓缩， 取乙酸 乙酯层萃取液用 3 5 倍量三氯甲烷溶剂在开放硅胶。
5、柱及室温条件下洗脱， 合并三氯甲烷 洗脱液、 浓缩， 浓缩液再用 3 5 倍量环己烷溶剂在开放硅胶柱及室温条件下洗脱， 合并环 己烷洗脱液， 浓缩， 得杨桃根苯醌类化学成分的粗提物。 权 利 要 求 书 CN 102140060 A CN 102140065 A1/5 页 3 一种杨桃根苯醌类化学成分粗提物的提取、 分离方法 技术领域 0001 本发明属一种提取、 分离、 制备方法， 具体是一种杨桃根苯醌类化学成分粗提物的 提取、 分离方法。 背景技术 0002 杨桃根是酢浆草科植物杨桃Averrhoa carambola L.的干燥根， 杨桃根的别名有 ： 三廉根、 阳桃根、 五敛子根、 五。
6、棱子根、 三念根、 山敛根、 三敛子根、 羊桃根、 洋桃根等 ； 生于路 旁、 疏林或庭院中 ； 广东、 广西、 福建、 台湾、 云南有栽培 ； 原产马来西亚、 印度尼西亚 ； 现广 植于热带各地。 0003 杨桃在 异物志 ，临海异物 、南方草木状 ，桂南虞衡志 ，生草药性备要 ，广 东新语 ，纲目拾遗 ，南宁市药物志 ，广西中药志 ，泉州本草 ，台湾药用植物志 ，新 华本草纲要 ，中国植物志 等均有收载。 0004 杨桃植物为乔木， 高可达 12m， 分枝甚多 ； 树皮暗灰色， 内皮淡黄色， 干后茶褐色， 味微甜而涩。奇数羽状复叶， 互生， 长 10 20cm ； 小叶 5 13 片， 全。
7、缘， 卵形或椭圆形， 长 3 7cm， 宽 2 3.5cm， 顶端渐尖， 基部圆， 一侧歪斜， 表面深绿色， 背面淡绿色， 疏被柔毛或 无毛， 小叶柄甚短 ； 花小、 微香， 数朵至多朵组成聚伞花序或圆锥花序， 自叶腋出或着生于枝 干上， 花枝和花蕾深红色 ； 萼片 5， 长约 5mm， 覆瓦状排列， 基部合成细杯状， 花瓣略向背面弯 卷， 长810mm， 宽34mm， 背面淡紫红色， 边缘色较淡， 有时为粉红色或白色 ； 雄蕊510 枚 ； 子房 5 室， 每室有多数胚珠， 花柱 5 枚。浆果肉质， 下垂， 有 5 棱， 很少 6 或 3 棱， 横切面 呈星芒状， 长 5 8mm， 淡绿色或。
8、蜡黄色， 有时带暗红色， 种子黑褐色。花期 4 12 月， 果期 7 12 月。 0005 其对疾病有多种功效 ：广西本草选编 “固涩燥湿， 行气消滞。主治消化不良， 风 湿痹痛， 遗精， 白带” ；中药大辞典 “治头风， 关节痛” ；中华本草 “祛风除湿， 行气止痛， 涩精止带。主治风湿痹痛， 骨节风， 瘫缓不逐， 慢性头风， 心胃气痛， 遗精， 白带” 。 0006 现代研究表明， 杨桃根含 - 谷甾醇 (-sitosterol)， 羽扇豆醇 (lupeol) 和 1， 5- 二羟基 -6， 7- 二甲氧基 -2- 甲基蒽醌 -3-O- 吡喃葡萄糖甙 (1， 5-dihydroxy-6， 。
9、7-dimethoxy-2-methyl anthraquinone 3-O-glucopyranoside) 等多种化学成分。 0007 杨桃根的醇提取物、 水提取物中的多糖及其醇提液的三氯甲烷、 乙酸乙酯、 正丁醇 萃取液等部位具有明显降低动物血糖水平的作用。药理学试验表明 ： 在给药第 14 天后， 杨 桃根醇提物高、 低剂量组降糖率分别达 35.3和 33.16， 格列本脲组降糖率为 34.57 ； 各给药组小鼠血糖值与以链脲佐菌素 (streptozotocin， STZ) 所致糖尿病小鼠模型组比 较， 均有显著性差异 (P 0.01)， 说明杨桃根醇提物高、 低剂量对糖尿病小鼠有良。
10、好的降血 糖作用。而杨桃根醇提物高剂量组小鼠肝脏 SOD 值与模型组比较有差异 (P 0.05)， 高、 低剂量组与模型组比较也均能显著降低小鼠肝脏 MDA 含量 (P 0.01)， 说明杨桃根醇提物 高剂量组能明显提高糖尿病小鼠机体的抗氧化能力， 同时减少过氧化脂质体在机体中的沉 积， 从而防止过氧化脂质体对机体的损害。 说 明 书 CN 102140060 A CN 102140065 A2/5 页 4 0008 在杨桃根水提物的多糖研究方面， 与以链脲佐菌素 (streptozotocin， STZ) 所致 糖尿病小鼠模型组比较， 高、 低剂量组有明显的降血糖作用 (P 0.01)， 其。
11、血糖下降百分 率分别达到 35.35和 33.39 ； 高、 低剂量组小鼠的空腹血清胰岛素明显低于糖尿病模型 组小鼠 (P 0.01) ； 而高、 低剂量组小鼠的胰岛素敏感指数明显高于糖尿病模型组小鼠 (P 0.01) ； 高、 低剂量组小鼠的胸腺、 脾脏重量明显高于模型组小鼠的重量 (P 0.01) ； 其 胸腺指数及脾脏指数也明显高于模型组(P0.01)。 其水提物的降血糖机制可能为增强机 体对胰岛素的敏感性以及改善胰岛 细胞的分泌有关。 0009 以上研究说明杨桃根提取物具有预防糖尿病及其并发症的发生和发展的功效。 目 前， 杨桃根的化学成分研究报导较少。 发明内容 0010 为了进一步。
12、研究杨桃根内在化学成分的类型、 性质及相关的提取、 分离技术工艺， 本发明研究并提供一种杨桃根苯醌类化学成分粗提物的提取、 分离方法。 0011 本发明的技术方案是 ： 0012 以酢浆草科植物杨桃的干燥根为原料， 经乙醇或水加热回流提取， 浓缩， 再经环己 烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取后， 将乙酸乙酯萃取液用开放硅胶柱柱层析的方法分离得到苯醌 类化学成分粗提物。 0013 具体操作步骤如下 ： 0014 (1) 将杨桃根粉碎成粗粉或最粗粉， 加 6 9 倍量的 50 80乙醇， 浸泡 0.5 2 小时， 常压下直接加热回流提取， 提取 1 3 次， 滤过， 合并提取液， 于 50 80减压回。
13、收 乙醇。 0015 (2)或将杨桃根粉碎成粗粉或最粗粉， 加69倍量的水， 浸泡0.52小时， 常压 下直接加热回流提取， 同法提取 1 3 次， 滤过， 合并提取液， 浓缩。 0016 (3) 分别将步骤 (1) 或步骤 (2) 浓缩液分别用 1 4 倍量的环己烷、 乙酸乙酯、 正 丁醇在室温条件下， 依次萃取 1 3 次 ； 在室温条件下， 将相同溶剂的萃取液合并、 浓缩， 取 乙酸乙酯层萃取液用 3 5 倍量三氯甲烷溶剂在开放硅胶柱及室温条件下洗脱， 合并三氯 甲烷洗脱液、 浓缩， 浓缩液再用 3 5 倍量环己烷溶剂在开放硅胶柱及室温条件下洗脱， 合 并环己烷洗脱液， 浓缩， 得杨桃根。
14、苯醌类化学成分的粗提物。 0017 目前， 已从杨桃根苯醌类化学成分的粗提物分离出含量较高的单体化合物 2- 十二烷基 -6- 甲氧基 -2， 5- 二烯 -1， 4- 环己二酮 (2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2， 5-diene-1， 4-dione)， 其分子式为 C19H30O3， 结构式如下 ： 0018 0019 本发明的优点是 ： 0020 本发明将杨桃根水提或醇提物的乙酸乙酯层萃取液分别采用三氯甲烷、 环己烷为 说 明 书 CN 102140060 A CN 102140065 A3/5 页 5 洗脱剂， 用开放硅胶柱柱层析的方法， 使杨桃根苯醌类化。
15、学成分快速分离， 该方法操作简 便， 所提取的苯醌类化学成分含量高， 成本低。 本发明可用于实验室杨桃根苯醌类化学成分 粗提物的提取、 分离， 也可用于大生产中杨桃根(阳桃根、 羊桃根、 洋桃根)苯醌类化学成分 粗提物的提取、 分离。 具体实施方式 0021 本发明采用的杨桃根药材是酢浆草科植物杨桃 Averrhoa carambola L. 的干燥 根， 它具有祛风除湿， 行气止痛， 涩精止带等功效。主治风湿痹痛， 骨节风， 头风， 心胃气痛， 遗精， 白带， 尿路结石等。现代药理学试验研究表明杨桃根的醇提物、 水提物或其三氯甲 烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取物还具降低动物血糖水平的作用。 0。
16、022 为了进一步研究杨桃根的化学物质组成， 为它的降低血糖作用机制研究提供物质 基础。我们研究出了一种简便、 可行的杨桃根苯醌类化学成分粗提物的提取、 分离方法。本 发明研究以杨桃根醇提取液或水提取液的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取部位及苯醌类化 学成分粗提物重量 (g) 作为考察指标。 0023 下面结合实施例对本发明作进一步描述。 0024 实施例 1 0025 1. 取杨桃根药材 12.0kg 粉碎成最粗粉， 加 8 倍量的 60乙醇， 浸泡 30 分钟， 常压 下直接加热回流提取， 提取 3 次， 滤过， 合并醇提取液。 0026 2.醇提液在60条件下减压回收乙醇， 浓缩液分别用。
17、3倍量的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取 3 次， 并分别合并相同溶剂的萃取液 ； 在室温下， 减压浓缩、 干燥， 分别得 5.3g、 76.6g、 153g 和 553g 的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取物和醇提物。 0027 3. 取乙酸乙酯层萃取物， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱上， 在室温条件下， 用 4 个体积的三氯甲烷洗脱， 合并三氯甲烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得洗脱馏份 9.4g。 0028 4. 再取三氯甲烷的洗脱馏份， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱 上， 在室温条件下， 用 4 个体积的环己烷洗脱， 合并环己烷洗脱液， 浓缩。
18、， 干燥， 得杨桃根苯 醌类化学成分粗提物 1.2g ； 并从该粗提物中分离出 0.35g 的 2- 十二烷基 -6- 甲氧基 -2， 5-二烯-1， 4-环己二酮(2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2， 5-diene-1， 4-dione)， 其分子 式为 C19H30O3， 结构式如下 ： 0029 0030 实施例 2 0031 1. 取杨桃根药材 12.0kg 粉碎成最粗粉， 加 6 倍量的 70乙醇， 浸泡 60 分钟， 常压 下直接加热回流提取， 提取 2 次， 滤过， 合并醇提取液。 说 明 书 CN 102140060 A CN 102140065 A。
19、4/5 页 6 0032 2.醇提液在60条件下减压回收乙醇， 浓缩液分别用3倍量的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取 3 次， 并分别合并相同溶剂的萃取液 ； 在室温下， 减压浓缩、 干燥， 分别得 5.9g、 80.3g、 146g 和 531g 的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取物和醇提物。 0033 3. 取乙酸乙酯层萃取物， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱上， 在室温条件下， 用 4 个体积的三氯甲烷洗脱， 合并三氯甲烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得洗脱馏份 10.3g。 0034 4. 再取三氯甲烷的洗脱馏份， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱。
20、 上， 在室温条件下， 用 4 个体积的环己烷洗脱， 合并环己烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得杨桃根苯 醌类化学成分粗提物 1.5g。 0035 实施例 3 0036 1. 取杨桃根药材 12.0kg 粉碎成最粗粉， 加 9 倍量的 80乙醇， 浸泡 120 分钟， 常 压下直接加热回流提取， 提取 1 次， 滤过， 合并醇提取液。 0037 2.醇提液在70条件下减压回收乙醇， 浓缩液分别用3倍量的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取 3 次， 并分别合并相同溶剂的萃取液 ； 在室温下， 减压浓缩、 干燥， 分别得 6.4g、 82.1g、 135g 和 494g 的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃。
21、取物和醇提物。 0038 3. 取乙酸乙酯层萃取物， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱上， 在室温条件下， 用 2 个体积的三氯甲烷洗脱， 合并三氯甲烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得洗脱馏份 10.8g。 0039 4. 再取三氯甲烷的洗脱馏份， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱 上， 在室温条件下， 用 3 个体积的环己烷洗脱， 合并环己烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得杨桃根苯 醌类化学成分粗提物 1.5g。 0040 实施例 4 0041 1. 取杨桃根药材 12.0kg 粉碎成最粗粉， 加 6 倍量的 50乙醇， 浸泡 120 分钟， 常 压下直接加热。
22、回流提取， 提取 2 次， 滤过， 合并醇提取液。 0042 2.醇提液在60条件下减压回收乙醇， 浓缩液分别用3倍量的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取 3 次， 并分别合并相同溶剂的萃取液 ； 在室温下， 减压浓缩、 干燥， 分别得 4.5g、 69.3g、 182g 和 526g 的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取物和醇提物。 0043 3. 取乙酸乙酯层萃取物， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱上， 在室温条件下， 用 4 个体积的三氯甲烷洗脱， 合并三氯甲烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得洗脱馏份 7.9g。 0044 4. 再取三氯甲烷的洗脱馏份， 与等量层析硅胶混匀。
23、后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱 上， 在室温条件下， 用 4 个体积的环己烷洗脱， 合并环己烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得杨桃根苯 醌类化学成分粗提物 0.7g。 0045 实施例 5 0046 1. 取杨桃根药材 12.0kg 粉碎成最粗粉， 加 6 倍量的水， 浸泡 30 分钟， 常压下直接 加热回流提取， 提取 3 次， 滤过， 合并水提取液。 0047 2.水提液在60条件下减压回收乙醇， 浓缩液分别用2倍量的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取 3 次， 并分别合并相同溶剂的萃取液 ； 在室温下， 减压浓缩、 干燥， 分别得 4.2g、 55.4g、 189g 和 635g 的环己烷。
24、、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取物和醇提物。 说 明 书 CN 102140060 A CN 102140065 A5/5 页 7 0048 3. 取乙酸乙酯层萃取物， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱上， 在室温条件下， 用 4 个体积的三氯甲烷洗脱， 合并三氯甲烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得洗脱馏份 6.2g。 0049 4. 再取三氯甲烷的洗脱馏份， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱 上， 在室温条件下， 用 2 个体积的环己烷洗脱， 合并环己烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得杨桃根苯 醌类化学成份粗提物 0.5g ； 并从该粗提物中分离出 0.12g 的 。
25、2- 十二烷基 -6- 甲氧基 -2， 5-二烯-1， 4-环己二酮(2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2， 5-diene-1， 4-dione)， 其分子 式为 C19H30O3， 结构式同上。 0050 实施例 6 0051 1. 取杨桃根药材 12.0kg 粉碎成最粗粉， 加 7 倍量的水， 浸泡 60 分钟， 常压下直接 加热回流提取， 提取 2 次， 滤过， 合并水提取液。 0052 2.水提液在70条件下减压回收乙醇， 浓缩液分别用3倍量的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取 3 次， 并分别合并相同溶剂的萃取液 ； 在室温下， 减压浓缩、 干燥， 分别得 4。
26、.3g、 49.7g、 192g 和 649g 的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取物和醇提物。 0053 3. 取乙酸乙酯层萃取物， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱上， 在室温条件下， 用 4 个体积的三氯甲烷洗脱， 合并三氯甲烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得洗脱馏份 6.3g。 0054 4. 再取三氯甲烷的洗脱馏份， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱 上， 在室温条件下， 用 3 个体积的环己烷洗脱， 合并环己烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得杨桃根苯 醌类化学成分粗提物 0.5g。 0055 实施例 7 0056 1. 取杨桃根药材 12.0kg 粉碎。
27、成最粗粉， 加 9 倍量的水， 浸泡 30 分钟， 常压下直接 加热回流提取， 提取 3 次， 滤过， 合并水提取液。 0057 2.水提液在80条件下减压回收乙醇， 浓缩液分别用3倍量的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取 3 次， 并分别合并相同溶剂的萃取液 ； 在室温下， 减压浓缩、 干燥， 分别得 4.5g、 50.5g、 217g 和 637g 的环己烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取物和醇提物。 0058 3. 取乙酸乙酯层萃取物， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱上， 在室温条件下， 用 4 个体积的三氯甲烷洗脱， 合并三氯甲烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得洗脱馏份 6.5g。 0059 4. 再取三氯甲烷的洗脱馏份， 与等量层析硅胶混匀后， 装在 10 倍量的开放硅胶柱 上， 在室温条件下， 用 4 个体积的环己烷洗脱， 合并环己烷洗脱液， 浓缩， 干燥， 得杨桃根苯 醌类化学成分粗提物 0.5g。 说 明 书 CN 102140060 A 。