癌症治疗
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发明领域
在某些实施例中，在此提供了通过抑制STAT3 mRNA或蛋白在动物中的表达而治疗B细胞淋巴瘤的方法、化合物和组合物。此类方法、化合物和组合物有用于治疗、预防或改善B细胞淋巴瘤或肝细胞癌。
发明背景
STAT(信号转导子和转录激活子)蛋白家族是在信号转导和转录激活中发挥双重作用的DNA结合蛋白。目前，在STAT家族中存在六个不同成员(STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5及STAT6)和若干同种型(STAT1α、STAT1β、STAT3α及STAT3β)。STAT的活性由各种细胞因子和促有丝分裂刺激物调制。细胞因子结合至其受体导致激活与这些受体相关的Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK)。这使得STAT磷酸化，从而导致易位至细胞核和STAT响应基因的转录激活。磷酸化STAT上的特定酪氨酸残基导致其激活，从而导致形成STAT的同源二聚体和/或异源二聚体，这些同源二聚体和/或异源二聚体结合至特定的基因启动子序列。通过STAT激活由细胞因子介导的事件包括细胞增殖与分化和防止细胞凋亡。
STAT激活的特异性归因于特定的细胞因子，即每种STAT都响应于小数 目的特定细胞因子。还已经发现其他非细胞因子信号传导分子(例如生长因子)激活STAT。这些因子结合至与蛋白酪氨酸激酶相关的细胞表面受体也导致STAT的磷酸化。
具体而言，已经发现STAT3(亦称急性期反应因子(APRF))响应于白介素-6(IL-6)以及表皮生长因子(EGF)(Darnell,Jr.,J.E.,等人，Science(《科学》)，1994,264,1415-1421)。另外，已经发现STAT3在通过干扰素进行的信号转导中发挥重要作用(Yang,C.-H.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(《美国国家科学院院刊》)，1998,95,5568-5572)。有证据表明STAT3可以由MAPK途经加以调节。ERK2诱导丝氨酸磷酸化并且还与STAT3相关(Jain,N.，等人，Oncogene(《癌基因》)，1998,17,3157-3167)。
STAT3表达于大多数细胞类型中(Zhong,Z.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(《美国国家科学院院刊》)，1994,91,4806-4810)。它诱导涉及响应于组织损伤和炎症的基因的表达。还已经显示，STAT3通过bcl-2的表达而防止细胞凋亡(Fukada,T.，等人，Immunity(《免疫学》)，1996,5,449-460)。
近来，在转化的细胞的线粒体中检测了STAT3，并且显示有助于类似于癌细胞的糖酵解磷酸化和氧化磷酸化活性(Gough,D.J.，等人，Science《科学》，2009,324,1713-1716)。在线粒体中抑制STAT3通过激活的Ras而减弱恶性转化。除其细胞核作用之外，数据证实了在线粒体中针对STAT3的Ras介导的转化功能。
STAT3的异常表达或组成型表达与许多疾病过程相关。
发明概述
B细胞淋巴瘤是一种在临床上被分类为霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤 的B淋巴细胞血细胞癌。存在若干类型的非霍奇金淋巴瘤，其中最常见的类型是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，占全部淋巴瘤的大约30％。在美国，DLBCL每年影响约十万分之七的人口。
在此提供的若干实施例涉及以下发现：抑制JAK-STAT信号传导途径可以有用于治疗B细胞淋巴瘤。在某些实施例中，对于作为癌症治疗剂的反义化合物而言，靶向STAT3的反义化合物以出乎意料地低的剂量有用于治疗B细胞淋巴瘤(例如DLBCL)。在若干实施例中，以约15-750mg范围内的固定总周剂量向患有B细胞淋巴瘤的受试者给予在此提供的靶向STAT3的反义化合物。在某些实施例中，向患有B细胞淋巴瘤的受试者每周给予约0.2至3.5毫克的反义化合物/千克的受试者体重(0.2-3.5mg/kg/wk)的范围内的在此提供的靶向STAT3的反义化合物。此类剂量范围对于治疗癌症而言是出乎意料地低的。比较起来，作为靶向帽结合蛋白真核起始因子4E(eIF-4E)的反义寡核苷酸的LY2275796的1期研究得出的结论是在负荷和维持剂量方案下，LY2275796的最大耐受剂量(MTD)和生物有效剂量(BED)是1,000mg，但是即使在1,000mg剂量下，没有观察到肿瘤反应。(Hong D.S.等人，Clin Cancer Res.(《临床癌症研究》)201117(20):6582-91)。
详细说明
应理解，前述的一般说明以及以下的详细说明都是示例性的并且仅是解释性的并且不限制所要求的本发明。在此，单数的使用包括复数，除非另外明确说明。如在此所使用，除非另外说明，术语“或”的使用意指“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其他形式(例如，“包括(includes)”和“被包括(included)”)的使用是非限制性的。同样，除非另外明确说明，术语例如“要素”或“组分”涵盖包括一个单位的要素和组分以及包括超过一个亚单位的要素和组分。
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定义
除非提供了具体定义，否则与在此描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学结合使用的术语以及其程序和技术是本领域中熟知并且通常使用的那些。可以将标准技术用于化学合成和化学分析。在允许的情况下，所有专利、申请、公开的申请以及其他公开物、通过数据库(例如国家生物技术信息中心(NCBI))可获得的GENBANK登录号和相关的序列信息以及其他贯穿在此的披露而提及的其他数据通过引用以在此讨论的文献的部分以及以其全部内容而结合。
除非另外指明，以下术语具有以下含义：
“2’-脱氧核苷”意指包括2’-H呋喃糖基糖部分的核苷，如天然地发现存在于脱氧核糖核苷(DNA)中。在某些实施例中，2’-脱氧核苷可以包括经修饰的核碱基或可以包括RNA核碱基(例如，尿嘧啶)。
“2’-O-甲氧基乙基”(亦称2’-MOE和2’-O(CH2)2-OCH3)是指呋喃糖基(furosyl)环的2’位的O-甲氧基-乙基修饰。2’-O-甲氧基乙基修饰的糖是一种经修饰的糖。
“2’-MOE核苷”(亦称2’-O-甲氧基乙基核苷)意指包括一个2’-MOE修饰的糖部分的核苷。
“2’-取代的核苷”意指在2’-位处包括除H或OH外的取代基的核苷。除非另外指明，2’-取代的核苷不是二环核苷。
“5-甲基胞嘧啶”意指被附接至5’位的甲基修饰的胞嘧啶。5-甲基胞嘧 啶是一种经修饰核碱基。
如应用于给药量，“约”意指在某值的±12％内。例如，如果指明“该剂量是一个约15-750mg范围内的量”，则暗示该剂量是一个13-840mg范围内的量。在另一个实例中，如果指明该剂量是一个“约50mg”的量，则暗示该剂量可以是从44mg至56mg。如应用于活性水平，“约”意指在某值的±10％内。例如，如果指明“这些化合物影响STAT3的至少约70％抑制”，则暗示STAT3水平在63％与77％的范围内被抑制。
“活性药剂”意指当给予给个体时，药物组合物中的提供治疗益处的一种物质或多种物质。例如，在某些实施例中，靶向STAT3的反义寡核苷酸是一种活性药剂。
“活性靶区域”或“靶区域”意指一种或多种活性反义化合物靶向的区域。“活性反义化合物”意指减少靶核酸水平或蛋白质水平的反义化合物。
“同时给予”是指以任何方式共给予两种药剂，其中这两种药剂的药理学作用同时在患者中显现。同时给予不要求以单一的药物组合物、以相同剂型或通过相同的给予途径来给予两种药剂。这两种药剂的作用本身不需要同时显现出来。这些作用仅需要重叠一段时间并且不需要共延。
“给予”意指向个体提供药剂，并且包括但不限于由医学专家给予和自给予。
“改善”是指减轻相关疾病、障碍或病症的至少一种指标、病征或症状。可以通过本领域普通技术人员已知的主观测量或客观测量来确定指标的严重性。
“动物”是指人或非人动物，包括但不限于，小鼠、大鼠、兔、狗、猫、猪以及非人灵长类(包括但不限于猴和黑猩猩)。
“反义活性”意指可归因于反义化合物与其靶核酸杂交的任何可检测或 可测量活性。在某些实施例中，反义活性是靶核酸或由这样的靶核酸编码的蛋白的量或表达的下降。
“反义化合物”意指能够通过氢键合而经历与靶核酸杂交的寡聚化合物。反义化合物的实例包括单链和双链化合物，例如反义寡核苷酸、siRNAs和shRNA。
“反义抑制”意指与在不存在反义化合物的情况下的靶核酸水平或靶蛋白水平相比，存在与靶核酸互补的该反义化合物的情况下的靶核酸水平或靶蛋白水平的减少。
“反义寡核苷酸”意指具有一个允许与靶核酸的对应区域或区段杂交的核碱基序列的单链寡核苷酸。
“二环糖”意指通过桥联两个原子而修饰的呋喃糖基环。二环糖是一种经修饰的糖。
“二环核苷”(亦称BNA)意指具有一个糖部分的核苷，该糖部分包括连接糖环的两个碳原子的桥，从而形成二环系统。在某些实施例中，该桥连接糖环的4'-碳和2'-碳。
“帽子结构”或“末端帽子部分”意指已经被掺入在反义化合物的任一末端处的化学修饰。
“cEt”或“受约束乙基”意指具有糖部分的二环核苷，该糖部分包括连接4’-碳和2’-碳的桥，其中该桥具有以下化学式：4’-CH(CH3)-O-2’。
“受约束乙基核苷”(亦称cEt核苷)意指包括一个包含4’-CH(CH3)-O-2’桥的二环糖部分的核苷。
“化学上不同的区域(chemically distinct region)”是指反义化合物的一个区域，其以一些方式在化学上不同于同一反义化合物的另一区域。例如，一个具有2’-O-甲氧基乙基核苷酸的区域在化学上不同于一个不具有2’-O-甲 氧基乙基修饰的核苷酸的区域。
“嵌合的反义化合物”意指具有至少两个化学上不同的区域的反义化合物。
“共给予”意指向个体给予两种或更多种药剂。这两种或更多种药剂可以在单一药物组合物中，或可以在分开的药物组合物中。这两种或更多种药剂中的每种药剂都可以通过相同或不同给予途径给予。共给予涵盖平行或顺序给予。
“互补性”意指第一核酸与第二核酸的核碱基之间进行配对的能力。
“连续核碱基”意指彼此紧邻的核碱基。
“稀释剂”意指组合物中的缺乏药理活性但是药学上必要的或令人希望的成分。例如，注射组合物中的稀释剂可以是液体，例如盐溶液。
“剂量”意指在单次给予中或在指定的时间段内提供的药剂的指定量。在某些实施例中，剂量可以一个、两个或更多个大丸剂、片剂或注射剂形式给予。例如，在某些实施例中，在希望皮下给予的情况下，所希望的剂量要求不是通过单次注射容易地提供的体积，因此可以使用两次或更多次注射达到希望的剂量。在某些实施例中，经延长的时间段或连续地通过输注给予药剂。可以将剂量指明为每小时、每天、每周或每月的药剂的量。在某些实施例中，单一剂量意指向受试者给予一个剂量，并且是仅仅一个剂量。
“剂量单位”意指提供药剂的形式。在某些实施例中，剂量单位是含有冻干的ISIS 481464的小瓶。在某些实施例中，剂量单位是含有重构的ISIS 481464的小瓶。
“给药方案”是设计实现一种或多种希望的效果的剂量的组合。在某些实施例中，将剂量方案设计为迅速提供治疗效果。
“持续时间”意指活性或事件持续的一段时间。例如，负荷阶段的持续 时间是给予负荷剂量的时间段。例如，维持阶段的持续时间是给予维持剂量的时间段。
“有效量”意指足以在对药剂有需要的个体体内实现希望的生理学结果的活性药剂的量。有效量在个体之间可以取决于有待治疗的个体的健康和身体状况、有待治疗的个体的分类群、组合物的配方、个体的医学症状的评估以及其他相关因素而变化。
“第一阶段”意指开始给予并且在靶组织中可以但不一定达到药剂的稳态浓度的给药阶段。“第二阶段”意指“第一阶段”之后的给药阶段。在某些实施例中，第一阶段和第二阶段的剂量或总周剂量是不同的。
“完全互补”或“100％互补”意指第一核酸的每个核碱基在第二核酸中都具有互补核碱基。在某些实施例中，第一核酸是反义化合物并且靶核酸是第二核酸。
“缺口体(gapmer)”意指嵌合的反义化合物，在该化合物中具有多个支持RNase H切割的核苷的内部区域被定位在具有一个或多个核苷的外部区域之间，其中这些包括该内部区域的核苷在化学上不同于包括这些外部区域的该核苷或这些核苷。该内部区域可以被称作“缺口(gap)”并且这些外部区域可以被称作“翼(wing)”。
“缺口加宽的”意指具有12个或更多个连续2’-脱氧核糖核苷(其位于具有从一个至六个核苷的5’和3’翼区段之间并且紧邻5’和3’翼区段)的缺口区段的嵌合的反义化合物。
“HCC”意指肝细胞癌。它是肝癌的最常见形式并且还被称为恶性肝癌。
“杂交”意指互补核酸分子的退火。在某些实施例中，互补核酸分子包括反义化合物和靶核酸。
“过度增生性疾病”意指由细胞的快速或过度生长和增殖表征的疾病。过度增生性疾病的实例包括癌症，例如，癌、肉瘤、淋巴瘤及白血病连同相关的恶性肿瘤和转移。
“鉴定动物处于过度增生性疾病的风险之中”意指鉴定已经诊断患有过度增生性疾病的动物或鉴定易患过度增生性疾病的动物。易患过度增生性疾病的个体包括具有过度增生性疾病的一个或多个风险因素的那些，这些风险因素包括年龄较大；其他过度增生性疾病病史；烟草使用史；暴露于阳光和/或电离辐射史；以前接触某些化学品，尤其是连续接触；过去或当前被某些病毒和细菌感染；以前或当前使用某些激素疗法；遗传易感性；使用酒精；以及某些生活方式的选择，包括饮食欠佳、缺乏体育锻炼和/或超重。可以通过任何方法完成此类鉴定，包括评价个体的病史和标准临床测试或评估。
“紧邻”意指在紧邻要素之间不存在介入要素。
“抑制STAT3”意指与不存在STAT3反义化合物(例如反义寡核苷酸)的情况下的STAT3 mRNA和/或蛋白的表达水平相比，存在STAT3反义化合物(包括STAT3反义寡核苷酸)的情况下减少STAT3 mRNA和/或蛋白的表达水平。
“个体”意指选择用于治疗或疗法的人或非人动物。
“核苷间连接”是指核苷之间的化学键。
“ISIS 481464”意指具有在此结合为SEQ ID NO:12的核碱基序列“CTATTTGGATGTCAGC”的STAT3反义寡核苷酸，其中每个核苷间连接都是硫代磷酸酯核苷间连接，每个胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶，并且核苷1-3和14-16中的每个核苷都包括cEt部分。ISIS 481464与在此结合为SEQ ID NO:1的GENBANK登录号NM_139276.2的序列的核碱基3016-3031互补。
“连接的核苷”意指键合在一起的相邻核苷。
“负荷阶段”意指开始给予并且在靶组织中达到药剂的稳态浓度的给药阶段。例如，负荷阶段是在肝脏中达到反义寡核苷酸的稳态浓度的给药阶段。
“维持阶段”意指已经达到药剂的靶组织稳态浓度之后的给药阶段。例如，维持阶段是在肝脏中达到反义寡核苷酸的稳态浓度之后的给药阶段。
“错配”或“非互补核碱基”是指当第一核酸的核碱基不能与第二或靶核酸的对应核碱基配对的情况。
“经修饰的核苷间连接”是指来自天然发生的核苷间键(即，磷酸二酯核苷间键)的取代或任何变化。
“经修饰的核碱基”是指除腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶外的任何核碱基。“未经修饰的核碱基”意指嘌呤碱基腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)，以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。
“修饰的核苷酸”意指独立地具有经修饰的糖部分、经修饰的核苷间连接或经修饰核碱基的核苷酸。“经修饰的核苷”意指独立地具有经修饰的糖部分或经修饰的核碱基的核苷。
“经修饰的寡核苷酸”意指包括经修饰的核苷间连接、经修饰的糖和/或经修饰的核碱基的寡核苷酸。
“经修饰的糖”是指来自天然糖的取代或变化。
“基序”意指反义化合物中的化学上不同的区域的模式。
“天然发生的核苷间连接”意指3'至5'磷酸二酯连接。
“天然糖部分”意指DNA(2'-H)或RNA(2'-OH)中发现的糖。
“核酸”是指由单体核苷酸组成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)、单链核酸、双链核酸、小干扰核酸(siRNA)以及微小RNA (miRNA)。
“核碱基”意指能够与另一核酸的碱基配对的杂环部分。
“核碱基序列”意指独立于任何糖、连接或核碱基修饰的连续核碱基的顺序。
“核苷”意指连接至糖的核碱基。
“核苷模拟物”包括用于在寡聚化合物的一个或多个位置处替换糖或糖和碱基以及不是必然地替换连接的那些结构，例如像具有吗啉基、环己烯基、环己基、四氢吡喃基、二环或三环糖模拟物的核苷模拟物，例如非呋喃糖糖单位。核苷酸模拟物包括用于在寡聚化合物的一个或多个位置处替换核苷和连接的那些结构，例如像肽核酸或吗啉基(由-N(H)-C(＝O)-O-或其他非磷酸二酯连接而连接的吗啉基)。糖代用品与略为宽泛的术语核苷模拟物重叠，但是旨在指示仅替换糖单位(呋喃糖环)。在此提供的四氢吡喃基环示意了糖代用品的一个实例，其中该呋喃糖糖基团已经被四氢吡喃基环系统替换。
“核苷酸”意指一种核苷，该核苷具有共价连接至该核苷的糖部分的磷酸酯基团。
“脱靶效应”是指除预期的靶核酸之外，与基因的RNA或蛋白表达的调制相关的不想要的或有害的生物学效应。
“寡聚化合物”或“寡聚体”意指连接的单体亚单位的聚合物，该聚合物能够与核酸分子的至少一个区域杂交。
“寡核苷酸”意指连接的核苷的聚合物，这些核苷中的每个核苷都可以彼此独立地被修饰或不被修饰。
“肠胃外给予”意指通过注射(例如，快速注射)或输注给予。肠胃外给予包括皮下给予、静脉给予、肌内给予、动脉内给予、腹膜内给予或颅内给予(例如鞘内或脑室内给予)。
“肽”意指通过由酰胺键连接至少两个氨基酸而形成的分子。肽是指多肽和蛋白质。
“药物组合物”意指适于向个体给予的物质的混合物。例如，药物组合物可以包括一种或多种活性药剂和无菌水溶液。在某些实施例中，药物组合物在某些细胞系中在自由摄取测定中显示出活性。
“药学上可接受的衍生物”涵盖在此描述的化合物的药学上可接受的盐、共轭物、前药或异构体。
“药学上可接受的盐”意指反义化合物的生理学和药学上可接受的盐，即保留亲本寡核苷酸的希望的生物学活性并且不对其赋予不希望的毒理学效应的盐。
“硫代磷酸酯连接”意指核苷之间的连接，其中磷酸二酯键通过用硫原子替换非桥氧原子之一而被修饰。硫代磷酸酯连接(P＝S)是一种经修饰的核苷间连接。
“部分”意指核酸的限定数目的连续(即，连接的)核碱基。在某些实施例中，一个部分是靶核酸的限定数目的连续核碱基。在某些实施例中，一个部分是反义化合物的限定数目的连续核碱基。
“预防”是指将疾病、障碍或病症的发作或发展延迟或阻止从数分钟的时间段至无限期。预防还意指降低患上疾病、障碍或病症的风险。
“前药”意指以无活性形式制备、在体内或细胞内通过内源酶或其他化学品或条件的作用转化成其活性形式的治疗剂。
“副作用”意指除希望的作用以外的可归因于治疗的生理反应。在某些实施例中，副作用包括注射部位反应、肝功能测试异常、肾功能异常、肝毒性、肾毒性、中枢神经系统异常、肌肉疾病以及不适。例如，血清中的转氨酶水平增加可以表明肝毒性或肝功能异常。例如，胆红素增加可以表明肝毒 性或肝功能异常。
“信号转导子和转录激活子3核酸”或“STAT3核酸”意指编码STAT3的任何核酸。例如，在某些实施例中，STAT3核酸包括编码STAT3的DNA序列、从编码STAT3的DNA(包括含有内含子和外显子的基因组DNA)转录的RNA序列以及编码STAT3的mRNA序列。“STAT3 mRNA”意指编码STAT3蛋白的mRNA。
“单链寡核苷酸”意指不与互补链杂交的寡核苷酸。
“可特异性杂交”是指在特异性结合是所希望的条件下，即在体内测定和治疗性治疗的情况下，在生理条件下，反义化合物在反义寡核苷酸与靶核酸之间具有足够的互补性程度以诱导希望的效应，同时对非靶核酸展现出最小效应或没有效应。
“受试者”意指选择用于治疗或疗法的人。
“靶向(targeting)”或“靶向的(targeted)”意指设计和选择将与靶核酸特异性杂交并诱导希望的效应的反义化合物的过程。
“靶核酸”、“靶标RNA”、“靶标mRNA”以及“靶标RNA转录物”都是指能够被反义化合物靶向的核酸。
“靶标区段”意指反义化合物所靶向的靶核酸的核苷酸序列。“5’靶位点”是指靶标区段的最5’端核苷酸。“3’靶位点”是指靶标区段的最3’端核苷酸。
“治疗有效量”意指为个体提供治疗益处的药剂的量。
“治疗”是指给予药物组合物以实现疾病、障碍或病症的改变或改进。
“未修饰的核苷酸”意指由天然发生的核碱基、糖部分和核苷间连接组成的核苷酸。在某些实施例中，未修饰的核苷酸是RNA核苷酸(即，β-D-核糖核苷)或DNA核苷酸(即，β-D-脱氧核糖核苷)。
某些实施例
在某些方面中，提供了一种治疗受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者给予一种JAK-STAT途径抑制剂。在某些实施例中，该癌症是B细胞淋巴瘤或肝细胞癌(HCC)。
在某些方面中，提供了一种治疗受试者的B细胞淋巴瘤的方法，该方法包括向该受试者给予一种JAK-STAT途径抑制剂。
在某些方面中，提供了一种治疗受试者的癌症(例如B细胞淋巴瘤或HCC)的方法，该方法包括向该受试者给予周剂量的与编码人类STAT3的核酸互补的反义化合物，其中该剂量包括约0.2至3.5毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周(0.2-3.5mg/kg/wk)。在某些实施例中，该剂量是约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1.0mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.1mg、约3.2mg、约3.3mg、约3.4mg或约3.5mg的该反义化合物/千克的该受试者的体重。在某些实施例中，该剂量包括约1.5至3.5毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重(1.5-3.5mg/kg/wk)。在某些实施例中，该剂量是2.0毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周(2.0mg/kg/wk)。在某些实施例中，该剂量有效治疗癌症并且是可接受地耐受的。可以给予该剂量持续至少1-52周、至少1-10周、至少1-7周、至少1-5周、至少5周、至少6周或至少7周。在某些实施例中，可以向该受试者每周给予1、2、3、4、5、6或7次该剂量。在某些实施例中，向该受试者每周给予1-6次该剂量。在若干实施例中，可以在第一周期间给予6次该剂量并且在随后的每周给予1次。在某些实施例中，使用迪瓦恩 (Devine)公式将该受试者的体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，一种方法包括向患有癌症(例如B细胞淋巴瘤或HCC)的受试者给予单一剂量的药物组合物，该药物组合物包括一种与编码人类STAT3的核酸互补的反义化合物，其中该单一剂量包括约15-250mg范围内的该化合物的量。在某些实施例中，该单一剂量包括约100-250mg范围内的该化合物的量。在某些实施例中，该单一剂量是以下各项中的任一项的量：约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg或约250mg。在某些实施例中，该剂量有效治疗癌症并且是可接受地耐受的。
在某些实施例中，一种方法包括向患有癌症(例如B细胞淋巴瘤或HCC)的受试者给予总周剂量的药物组合物，该药物组合物包括一种与编码人类STAT3的核酸互补的反义化合物，其中该总周剂量包括每周约15-750mg范围内的该化合物的量。在某些实施例中，该总周剂量包括每周约100-750mg范围内的该化合物的量。在某些实施例中，该总周剂量是以下各项中的任一项的量：约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg、约400mg、约425mg、约450mg、约475mg、约500mg、约525mg、约550mg、约575mg、约600mg、约625mg、约650mg、约675 mg、约700mg、约725mg或约750mg。在某些实施例中，该剂量有效治疗癌症并且是可接受地耐受的。可以在一周内以2、3、4、5、6或7个相等的剂量给予该总周剂量，这样使得该总周剂量不超过约750mg。在某些实施例中，在一周内以3个相等的剂量给予该总周剂量。将理解的是，通过简单地将该总周剂量除以该受试者的体重(例如该受试者的理想体重)而容易地将上述总周剂量范围表示为毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周(mg/kg/wk)。例如，将上述总周剂量除以70kg的平均成人体重，在某些实施例中可以将该总周剂量表示为约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)至750mg/70kg(10.7mg/kg/wk)的量。在某些实施例中，可以将该总周剂量表示为以下各项中的任一项：约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)、约20mg/70kg(0.3mg/kg/wk)、约30mg/70kg(0.4mg/kg/wk)、约40mg/70kg(0.6mg/kg/wk)、约50mg/70kg(0.7mg/kg/wk)、约75mg/70kg(1.1mg/kg/wk)、约100mg/70kg(1.4mg/kg/wk)、约125mg/70kg(1.8mg/kg/wk)、约150mg/70kg(2.1mg/kg/wk)、约175mg/70kg(2.5mg/kg/wk)、约200mg/70kg(2.9mg/kg/wk)、约225mg/70kg(3.2mg/kg/wk)、约250mg/70kg(3.6mg/kg/wk)、约275mg/70kg(3.9mg/kg/wk)、约300mg/70kg(4.3mg/kg/wk)、约325mg/70kg(4.6mg/kg/wk)、约350mg/70kg(5.0mg/kg/wk)、约375mg/70kg(5.4mg/kg/wk)、约400mg/70kg(5.7mg/kg/wk)、约425mg/70kg(6.1mg/kg/wk)、约450mg/70kg(6.4mg/kg/wk)、约475mg/70kg(6.8mg/kg/wk)、约500mg/70kg(7.1mg/kg/wk)、约525mg/70kg(7.5mg/kg/wk)、约550mg/70kg(7.9mg/kg/wk)、约575mg/70kg(8.2mg/kg/wk)、约600mg/70kg(8.6mg/kg/wk)、约625mg/70kg(8.9mg/kg/wk)、约650mg/70kg(9.3mg/kg/wk)、约675mg/70kg(9.6 mg/kg/wk)、约700mg/70kg(10.0mg/kg/wk)、约725mg/70kg(10.4mg/kg/wk)或约750mg/70kg(10.7mg/kg/wk)。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些方面中，一种方法包括向患有癌症(例如B细胞淋巴瘤或HCC)的受试者给予一种药物组合物，该药物组合物包括一种与编码人类STAT3的核酸互补的反义化合物，其中给予该反义化合物包括：
一个负荷阶段，包括约15-750mg范围内的总周剂量，持续前1-10周，以及
一个维持阶段，包括15-250mg范围内的总周剂量，在负荷阶段之后持续至少1周。
在某些实施例中，该负荷阶段是1周、2周、3周、4周或5周。在某些实施例中，该负荷阶段包括在一周内以2、3、4、5、6或7个相等的剂量给予该化合物。在某些实施例中，该负荷阶段包括在一周内以3个相等的剂量给予该化合物。在若干实施例中，该负荷阶段中的反义化合物的总周剂量是以下各项中的任一项的量：约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg、约400mg、约425mg、约450mg、约475mg、约500mg、约525mg、约550mg、约575mg、约600mg、约625mg、约650mg、约675mg、约700mg、约725mg或约750mg。将理解的是，通过简单地将该总周剂量除以该受试者的体重(例如该受试者的理想体重)而容易地将负荷阶段 中的上述总周剂量范围表示为毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周(mg/kg/wk)。例如，将负荷阶段中的上述总周剂量除以70kg的平均成人体重，在某些实施例中可以将该总周剂量表示为约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)至750mg/70kg(10.7mg/kg/wk)的量。在某些实施例中，可以将负荷阶段中的该总周剂量表示为以下各项中的任一项：约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)、约20mg/70kg(0.3mg/kg/wk)、约30mg/70kg(0.4mg/kg/wk)、约40mg/70kg(0.6mg/kg/wk)、约50mg/70kg(0.7mg/kg/wk)、约75mg/70kg(1.1mg/kg/wk)、约100mg/70kg(1.4mg/kg/wk)、约125mg/70kg(1.8mg/kg/wk)、约150mg/70kg(2.1mg/kg/wk)、约175mg/70kg(2.5mg/kg/wk)、约200mg/70kg(2.9mg/kg/wk)、约225mg/70kg(3.2mg/kg/wk)、约250mg/70kg(3.6mg/kg/wk)、约275mg/70kg(3.9mg/kg/wk)、约300mg/70kg(4.3mg/kg/wk)、约325mg/70kg(4.6mg/kg/wk)、约350mg/70kg(5.0mg/kg/wk)、约375mg/70kg(5.4mg/kg/wk)、约400mg/70kg(5.7mg/kg/wk)、约425mg/70kg(6.1mg/kg/wk)、约450mg/70kg(6.4mg/kg/wk)、约475mg/70kg(6.8mg/kg/wk)、约500mg/70kg(7.1mg/kg/wk)、约525mg/70kg(7.5mg/kg/wk)、约550mg/70kg(7.9mg/kg/wk)、约575mg/70kg(8.2mg/kg/wk)、约600mg/70kg(8.6mg/kg/wk)、约625mg/70kg(8.9mg/kg/wk)、约650mg/70kg(9.3mg/kg/wk)、约675mg/70kg(9.6mg/kg/wk)、约700mg/70kg(10.0mg/kg/wk)、约725mg/70kg(10.4mg/kg/wk)或约750mg/70kg(10.7mg/kg/wk)。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性 (以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，该维持阶段包括在一周内以2、3、4、5、6或7个相等的剂量给予该化合物。在某些实施例中，该维持阶段中的反义化合物的总周剂量是以下各项中的任一项的量：约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg或约250mg。在某些实施例中，每周将该维持阶段中的总周剂量作为单一剂量而给予。将理解的是，通过简单地将该总周剂量除以该受试者的体重(例如该受试者的理想体重)而容易地将维持阶段中的上述总周剂量范围表示为毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周(mg/kg/wk)。例如，将上述总周剂量除以70kg的平均成人体重，在某些实施例中可以将维持阶段中的该总周剂量表示为约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)至250mg/70kg(3.6mg/kg/wk)的量。在某些实施例中，可以将该总周剂量表示为以下各项中的任一项：约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)、约20mg/70kg(0.3mg/kg/wk)、约30mg/70kg(0.4mg/kg/wk)、约40mg/70kg(0.6mg/kg/wk)、约50mg/70kg(0.7mg/kg/wk)、约75mg/70kg(1.1mg/kg/wk)、约100mg/70kg(1.4mg/kg/wk)、约125mg/70kg(1.8mg/kg/wk)、约150mg/70kg(2.1mg/kg/wk)、约175mg/70kg(2.5mg/kg/wk)、约200mg/70kg(2.9mg/kg/wk)、约225mg/70kg(3.2mg/kg/wk)或约250mg/70kg(3.6mg/kg/wk)。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的 英寸数。
在某些实施例中，一种方法包括向患有癌症(例如B细胞淋巴瘤或HCC)的受试者给予一种药物组合物，该药物组合物包括一种与编码人类STAT3的核酸互补的反义化合物，其中给予该反义化合物包括：
一个负荷阶段，约6、7、8、9或10周，以及
一个维持阶段，包括约2mg/kg/wk的剂量，在负荷阶段之后持续至少1周。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，一种方法包括向患有癌症(例如B细胞淋巴瘤)的受试者给予一种药物组合物，该药物组合物包括一种与编码人类STAT3的核酸互补的反义化合物，其中给予该反义化合物包括：
一个负荷阶段，包括约3至4mg/kg/wk范围内的剂量，持续约6、7、8、9或10周，以及
一个维持阶段，包括约2mg/kg/wk的剂量，在负荷阶段之后持续至少1周。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，一种方法包括向患有癌症(例如B细胞淋巴瘤或HCC)的受试者给予一种药物组合物，该药物组合物包括一种与编码人类STAT3的核酸互补的反义化合物，其中给予该反义化合物包括：
一个负荷阶段，包括约3mg/kg/wk的剂量，持续约8周，以及
一个维持阶段，包括约2mg/kg/wk的剂量，在负荷阶段之后持续至少1周。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，一种方法包括向患有癌症(例如B细胞淋巴瘤或HCC)的受试者给予一种药物组合物，该药物组合物包括一种与编码人类STAT3的核酸互补的反义化合物，其中给予该反义化合物包括：
一个第一阶段，包括约15-750mg范围内的总周剂量，持续前1-10周，以及
一个第二阶段，包括15-250mg范围内的总周剂量，在负荷阶段之后持续至少1周。
在某些实施例中，该第一阶段是1周、2周、3周、4周或5周。在某些实施例中，该第一阶段包括在一周内以2、3、4、5、6或7个相等的剂量给予该化合物。在某些实施例中，该第一阶段包括在一周内以3个相等的剂量给予该化合物。在若干实施例中，该第一阶段中的反义化合物的总周剂量是以下各项中的任一项的量：约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg、约400mg、约425mg、约450mg、约475mg、约500mg、约525mg、约550mg、约575mg、约600mg、约625mg、约650mg、约675mg、约700mg、约725mg或约750mg。将理解的是，通过简单地将该总周剂量除以该受试者的体重(例如该受试者的理想体重)而容易地将第一阶段中的上述总周剂量范围表示为毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周 (mg/kg/wk)。例如，将第一阶段中的上述总周剂量除以70kg的平均成人体重，在某些实施例中可以将该总周剂量表示为约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)至750mg/70kg(10.7mg/kg/wk)的量。在某些实施例中，可以将第一阶段中的该总周剂量表示为以下各项中的任一项：约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)、约20mg/70kg(0.3mg/kg/wk)、约30mg/70kg(0.4mg/kg/wk)、约40mg/70kg(0.6mg/kg/wk)、约50mg/70kg(0.7mg/kg/wk)、约75mg/70kg(1.1mg/kg/wk)、约100mg/70kg(1.4mg/kg/wk)、约125mg/70kg(1.8mg/kg/wk)、约150mg/70kg(2.1mg/kg/wk)、约175mg/70kg(2.5mg/kg/wk)、约200mg/70kg(2.9mg/kg/wk)、约225mg/70kg(3.2mg/kg/wk)、约250mg/70kg(3.6mg/kg/wk)、约275mg/70kg(3.9mg/kg/wk)、约300mg/70kg(4.3mg/kg/wk)、约325mg/70kg(4.6mg/kg/wk)、约350mg/70kg(5.0mg/kg/wk)、约375mg/70kg(5.4mg/kg/wk)、约400mg/70kg(5.7mg/kg/wk)、约425mg/70kg(6.1mg/kg/wk)、约450mg/70kg(6.4mg/kg/wk)、约475mg/70kg(6.8mg/kg/wk)、约500mg/70kg(7.1mg/kg/wk)、约525mg/70kg(7.5mg/kg/wk)、约550mg/70kg(7.9mg/kg/wk)、约575mg/70kg(8.2mg/kg/wk)、约600mg/70kg(8.6mg/kg/wk)、约625mg/70kg(8.9mg/kg/wk)、约650mg/70kg(9.3mg/kg/wk)、约675mg/70kg(9.6mg/kg/wk)、约700mg/70kg(10.0mg/kg/wk)、约725mg/70kg(10.4mg/kg/wk)或约750mg/70kg(10.7mg/kg/wk)。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，该第二阶段包括在一周内以2、3、4、5、6或7个相等的剂量给予该化合物。在某些实施例中，该第二阶段中的反义化合物的总周剂量是以下各项中的任一项的量：约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg或约250mg。在某些实施例中，每周将该第二阶段中的总周剂量作为单一剂量而给予。将理解的是，通过简单地将该总周剂量除以该受试者的体重(例如该受试者的理想体重)而容易地将第二阶段中的上述总周剂量范围表示为毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周(mg/kg/wk)。例如，将上述总周剂量除以70kg的平均成人体重，在某些实施例中可以将第二阶段中的该总周剂量表示为约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)至250mg/70kg(3.6mg/kg/wk)的量。在某些实施例中，可以将该总周剂量表示为以下各项中的任一项：约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)、约20mg/70kg(0.3mg/kg/wk)、约30mg/70kg(0.4mg/kg/wk)、约40mg/70kg(0.6mg/kg/wk)、约50mg/70kg(0.7mg/kg/wk)、约75mg/70kg(1.1mg/kg/wk)、约100mg/70kg(1.4mg/kg/wk)、约125mg/70kg(1.8mg/kg/wk)、约150mg/70kg(2.1mg/kg/wk)、约175mg/70kg(2.5mg/kg/wk)、约200mg/70kg(2.9mg/kg/wk)、约225mg/70kg(3.2mg/kg/wk)或约250mg/70kg(3.6mg/kg/wk)。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，一种方法包括向患有癌症(例如B细胞淋巴瘤或HCC)的受试者给予一种药物组合物，该药物组合物包括一种与编码人类STAT3的核酸互补的反义化合物，其中给予该反义化合物包括：
一个第一阶段，持续约6、7、8、9或10周，以及
一个第二阶段，包括约2mg/kg/wk的剂量，在负荷阶段之后持续至少1周。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，一种方法包括向患有癌症(例如B细胞淋巴瘤或HCC)的受试者给予一种药物组合物，该药物组合物包括一种与编码人类STAT3的核酸互补的反义化合物，其中给予该反义化合物包括：
一个第一阶段，包括约3至4mg/kg/wk范围内的剂量，持续约6、7、8、9或10周，以及
一个第二阶段，包括约2mg/kg/wk的剂量，在负荷阶段之后持续至少1周。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，一种方法包括向患有癌症(例如B细胞淋巴瘤或HCC)的受试者给予一种药物组合物，该药物组合物包括一种与编码人类STAT3的核酸互补的反义化合物，其中给予该反义化合物包括：
一个第一阶段，包括约3mg/kg/wk的剂量，持续约8周，以及
一个第二阶段，包括约2mg/kg/wk的剂量，在负荷阶段之后持续至少1 周。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在以上实施例的任一实施例中，该B细胞淋巴瘤是非霍奇金B细胞淋巴瘤。某些方面的非霍奇金B细胞淋巴瘤的实例包括但不限于，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、粘膜相关的淋巴组织淋巴瘤(MALT)、小细胞淋巴细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤(MCL)、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、纵隔大B细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(![]()
macroglobulinemia)、结边缘区B细胞淋巴瘤(NMZL)、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤以及淋巴瘤样肉芽肿。在某些实施例中，该非霍奇金B细胞淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
在以上实施例的任一实施例中，该B细胞淋巴瘤是霍奇金B细胞淋巴瘤。
在上述实施例的任一实施例中，给予该反义化合物的剂量减少该受试者体内的肿瘤尺寸或肿瘤体积。在某些实施例中，给予该反义化合物的剂量延长该受试者的存活。在某些实施例中，给予该反义化合物的剂量治疗该受试者的癌症，例如B细胞淋巴瘤。在以上实施例的任一实施例中，该方法有效治疗该受试者的癌症并且是可接受地耐受的。
在上述实施例的某些实施例中，在向该受试者给予该反义化合物之前，将该受试者鉴定为患有癌症，例如B细胞淋巴瘤。在某些实施例中，被鉴定为患有癌症(例如B细胞淋巴瘤)的该受试者接受了或当前正在接受抗癌治疗，例如一线治疗方案。例如，在某些实施例中，该一线治疗方案是环磷酰 胺、羟基柔红霉素(hydroxydanuorubicin)、长春新碱(oncovin，vincristine)、强的松或强的松龙(CHOP)的组合。在某些实施例中，该一线治疗方案是利妥昔单抗和CHOP(R-CHOP)的组合。在某些实施例中，该受试者对于一线治疗方案(例如CHOP和/或R-CHOP)而言是难治的。
在上述实施例的任一实施例中，该反义化合物包括经修饰的寡核苷酸，该寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成，这些核苷具有一个核碱基序列，该序列包括一个具有至少12个与SEQ ID NO:1的核碱基3008至3033的等长部分互补的连续核碱基的部分，其中该核碱基序列与SEQ ID NO:1互补。
在上述实施例的任一实施例中，该反义化合物包括经修饰的寡核苷酸，该寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成，这些核苷具有一个核碱基序列，该序列包括一个具有至少12个与SEQ ID NO:1的核碱基3016至3031的等长部分互补的连续核碱基的部分，其中该核碱基序列与SEQ ID NO:1互补。
在上述实施例的任一实施例中，该反义化合物包括经修饰的寡核苷酸，该寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成，这些核苷具有一个核碱基序列，该序列包括一个具有至少12个与SEQ ID NO:2的核碱基6476至6491的等长部分互补的连续核碱基的部分，其中该核碱基序列与SEQ ID NO:2互补。
在上述实施例的任一实施例中，该反义化合物包括经修饰的寡核苷酸，该寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成，这些核苷具有一个核碱基序列，该序列包括一个具有至少12个与SEQ ID NO:1的核碱基250-286；250-285；264-285；264-282；728-745；729-745；729-744；787-803；867-883；955-978；1146-1170；1896-1920；1899-1920；1899-1919；1899-1918；1899-1916；1901-1916；1946-1963；1947-1963；2155-2205；2155-2187；2156-2179；2204-2221；2681-2696；2699-2716；3001-3033；3008-3033，3010-3033，3010-3032，3015-3033，3015-3032，3015-3031，3016-3033，3016- 3032，3016-3033；3452-3499；3460-3476；3583-3608；3591-3616；3595-3615；3595-3614；3595-3612；3675-3706；3713-3790；3715-3735；3833-3878；3889-3932；3977-4012；4067-4100；4225-4256；4234-4252；4235-4252；4235-4251；4236-4252；4306-4341；4431-4456；4439-4454；4471-4510；4488-4505；4530-4558；4539-4572；4541-4558；4636-4801；4782-4796；4800-4823；4811-4847；4813-4859；4813-4815；4813-4831；4827-4859；4827-4844；或4842-4859的等长部分互补的连续核碱基的部分，其中该经修饰的寡核苷酸的核碱基序列与SEQ ID NO:1互补。
在上述实施例的任一实施例中，该反义化合物包括经修饰的寡核苷酸，该寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成，这些核苷具有一个核碱基序列，该序列包括一个具有至少12个与SEQ ID NO:2的核碱基2668-2688；2703-2720；5000-5021；5001-5017；5697-5722；5699-5716；6475-6490；6475-6491；6476–6491；7682-7705；8078-8097；8079-8095；9862-9811；9870-9897；9875-9893；9875-9891；9877-9893；11699-11719；12342-12366；12345-12364；12346-12364；12347-12364；12353-12380；12357-12376；12358-12376；12358-12373；12360-12376；14128-14148；16863-16883；46091-46111；50692-50709；50693-50709；50693-50708；61325-61349；66133-66157；66136-66157；66136-66155；66136-66153；66138-66153；66184-66200；67067-67083；4171-74220；74199-74220；74202-74220；74171-74219；74199-74219；74202-74219；74171-74218；74199-74218；74202-74218；74723-74768；74764-74803；74782-74802；74782-74801；74782-74800；74782-74799；74783-74802；74783-74801；74783-74800；74783-74799；74862-74893；74900-74977；74902-74922；74902-74920；75070-75119；75164-75199；75254-75287；75412-75443；75421-75439； 75422-75439；75422-75438；75423-75439；75423-75438；75493-75528；75616-75643；75626-75641；75658-75699；75676-75692；75717-75745；75726-75759；75726-75745；75727-75745；75728-75745；75831-75988；75852-75969；75969-75984；75987-76056；76000-76046；76000-76032；76000-76018；76014-76046；76014-76032；76029-76046；或76031-76046的等长部分互补的连续核碱基的部分，其中该经修饰的寡核苷酸的核碱基序列与SEQ ID NO:2互补。
在某些实施例中，该经修饰的寡核苷酸的核碱基序列包括SEQ ID NO:12的序列或由SEQ ID NO:12的序列组成。在某些实施例中，该经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1或2是100％互补的。
在某些实施例中，该经修饰的寡核苷酸的核碱基序列包括描述于WO 2012/135736中的STAT3反义寡核苷酸的任一项的序列，将其通过引用以其全部内容结合在此。
在某些实施例中，该经修饰的寡核苷酸是单链的经修饰的寡核苷酸。在某些实施例中，该经修饰的寡核苷酸包括至少一个经修饰的核苷间连接。在某些实施例中，每个核苷间连接都是硫代磷酸酯核苷间连接。在某些实施例中，至少一个核苷包括经修饰的糖，例如二环糖，包括但不限于4’-CH2-O-2’桥或4’-CH(CH3)-O-2’桥。在某些实施例中，该经修饰的糖包括2’-O(CH2)2-OCH3基团。在某些实施例中，至少一个核苷包括经修饰的核碱基，例如5-甲基胞嘧啶。
在某些实施例中，该经修饰的寡核苷酸包括：
5’-翼，由1至5个连接的核苷组成；
3’-翼，由1至5个连接的核苷组成；以及
该5’-翼与该3’-翼之间的缺口，由8至12个连接的2’-脱氧核苷组成；
其中该5’-翼和该3’-翼中的至少一个包括至少一个二环核苷或一个2’-取代的核苷。在某些实施例中，该2’-取代的核苷包括2’-O(CH2)2-OCH3基团或2’-O-CH3基团。在某些实施例中，该二环核苷包括4’-CH2-O-2’桥或4’-CH(CH3)-O-2’桥。
在某些实施例中，将在此描述的药物组合物以剂量单位的形式给予(例如，注射、输注等)。在某些实施例中，此类药物组合物包括处于以下各项中的任一项的量的反义寡核苷酸：约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg、约400mg、约425mg、约450mg、约475mg、约500mg、约525mg、约550mg、约575mg、约600mg、约625mg、约650mg、约675mg、约700mg、约725mg或约750mg。将理解的是，通过简单地将该量除以该受试者的体重/周而容易地将上述反义寡核苷酸量表示为毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周(mg/kg/wk)。例如，将上述量除以70kg的平均成人体重，在某些实施例中可以将该剂量单位表示为以下各项中的任一项：约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)、约20mg/70kg(0.3mg/kg/wk)、约30mg/70kg(0.4mg/kg/wk)、约40mg/70kg(0.6mg/kg/wk)、约50mg/70kg(0.7mg/kg/wk)、约75mg/70kg(1.1mg/kg/wk)、约100mg/70kg(1.4mg/kg/wk)、约125mg/70kg(1.8mg/kg/wk)、约150mg/70kg(2.1mg/kg/wk)、约175mg/70kg(2.5mg/kg/wk)、约200mg/70kg(2.9mg/kg/wk)、约225mg/70kg(3.2mg/kg/wk)、约250mg/70kg(3.6mg/kg/wk)、约275mg/70kg(3.9mg/kg/wk)、约300mg/70kg(4.3mg/kg/wk)、约325mg/70kg(4.6mg/kg/wk)、约350mg/70kg(5.0mg/kg/wk)、约375mg/70kg(5.4 mg/kg/wk)、约400mg/70kg(5.7mg/kg/wk)、约425mg/70kg(6.1mg/kg/wk)、约450mg/70kg(6.4mg/kg/wk)、约475mg/70kg(6.8mg/kg/wk)、约500mg/70kg(7.1mg/kg/wk)、约525mg/70kg(7.5mg/kg/wk)、约550mg/70kg(7.9mg/kg/wk)、约575mg/70kg(8.2mg/kg/wk)、约600mg/70kg(8.6mg/kg/wk)、约625mg/70kg(8.9mg/kg/wk)、约650mg/70kg(9.3mg/kg/wk)、约675mg/70kg(9.6mg/kg/wk)、约700mg/70kg(10.0mg/kg/wk)、约725mg/70kg(10.4mg/kg/wk)或约750mg/70kg(10.7mg/kg/wk)。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，该反义寡核苷酸具有SEQ ID NO:12的核碱基序列。在某些实施例中，该反义寡核苷酸是ISIS 481464。
在某些实施例中，在此描述的药物组合物包括处于以下各项范围内的量的反义寡核苷酸的剂量：约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg、约400mg、约425mg、约450mg、约475mg、约500mg、约525mg、约550mg、约575mg、约600mg、约625mg、约650mg、约675mg、约700mg、约725mg或约750mg。将理解的是，通过简单地将该量除以该受试者的体重/周而容易地将上述反义寡核苷酸量表示为毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周(mg/kg/wk)。例如，将上述量除以70kg的平均成人体重，在某些实施例中可以将反义寡核苷酸的剂量表示为以下各项 中的任一项：约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)、约20mg/70kg(0.3mg/kg/wk)、约30mg/70kg(0.4mg/kg/wk)、约40mg/70kg(0.6mg/kg/wk)、约50mg/70kg(0.7mg/kg/wk)、约75mg/70kg(1.1mg/kg/wk)、约100mg/70kg(1.4mg/kg/wk)、约125mg/70kg(1.8mg/kg/wk)、约150mg/70kg(2.1mg/kg/wk)、约175mg/70kg(2.5mg/kg/wk)、约200mg/70kg(2.9mg/kg/wk)、约225mg/70kg(3.2mg/kg/wk)、约250mg/70kg(3.6mg/kg/wk)、约275mg/70kg(3.9mg/kg/wk)、约300mg/70kg(4.3mg/kg/wk)、约325mg/70kg(4.6mg/kg/wk)、约350mg/70kg(5.0mg/kg/wk)、约375mg/70kg(5.4mg/kg/wk)、约400mg/70kg(5.7mg/kg/wk)、约425mg/70kg(6.1mg/kg/wk)、约450mg/70kg(6.4mg/kg/wk)、约475mg/70kg(6.8mg/kg/wk)、约500mg/70kg(7.1mg/kg/wk)、约525mg/70kg(7.5mg/kg/wk)、约550mg/70kg(7.9mg/kg/wk)、约575mg/70kg(8.2mg/kg/wk)、约600mg/70kg(8.6mg/kg/wk)、约625mg/70kg(8.9mg/kg/wk)、约650mg/70kg(9.3mg/kg/wk)、约675mg/70kg(9.6mg/kg/wk)、约700mg/70kg(10.0mg/kg/wk)、约725mg/70kg(10.4mg/kg/wk)或约750mg/70kg(10.7mg/kg/wk)。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在此描述的组合物可以另外包含其他常规地发现于药物组合物中的处于其领域确立的使用水平的辅助组分。因此，例如，这些组合物可以包含另外的可兼容的药理学上有活性的材料，例如像止痒剂、收敛剂、局部麻醉剂或 抗炎剂。然而，当添加时，此类材料不应当过度干扰在此描述的组合物的组分的生物学活性。可以对这些配制品进行灭菌并且必要时与助剂例如防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、用于影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂和/或芬芳物质等进行混合，这些助剂不与该配制品中的这个或这些寡核苷酸发生有害的相互作用。
反义寡核苷酸可以被共价地连接至一个或多个部分或共轭物，该一个或多个部分或共轭物增强这些反义寡核苷酸的活性、细胞分布或细胞摄取。典型的共轭基团包括胆固醇部分和脂质部分。另外的共轭基团包括碳水化合物、磷脂、生物素、吩嗪、叶酸、菲啶、蒽醌、吖啶、荧光素、罗丹明、香豆素和染料。
也可以修饰反义寡核苷酸以使其具有一个或多个稳定基团，所述稳定基团通常附接于反义化合物的一端或两端以增强例如像核酸酶稳定性等性质。稳定基团中包括帽结构。这些末端修饰保护具有末端核酸的反义寡核苷酸免于被外切核酸酶降解，并且能有助于在细胞内的递送和/或定位。帽可以存在于5'-末端(5'-帽)，或在3'-末端(3'-帽)，或者可以同时存在于两个末端。帽结构在本领域中是熟知的并且包括，例如，反向脱氧碱基帽。另外，能够用于在反义化合物的一个或两个末端加帽以赋予核酸酶稳定性的3’和5’稳定基团包括那些于2003年1月16日公布的WO 03/004602中披露那些。
某些治疗
在某些方面中，提供了一种治疗患有癌症的受试者的方法，该方法包括向该受试者给予一种与人类STAT3互补的反义化合物。在某些实施例中，与人类STAT3互补的该反义化合物是如在此所描述或如披露于WO 2012/135736中。
在某些实施例中，该癌症选自B细胞淋巴瘤或肝细胞癌。在某些方面 中，提供了一种用于在治疗癌症中使用的与人类STAT3互补的反义化合物。在某些实施例中，与人类STAT3互补的该反义化合物是如在此所描述或如披露于WO 2012/135736中。在某些实施例中，该癌症选自B细胞淋巴瘤或肝细胞癌。
在某些方面中，提供了一种用于在治疗对其有需要的受试者的癌症的方法中使用的与人类STAT3互补的反义化合物，其中该方法包括向该受试者在负荷阶段中并且然后在维持阶段中给予该反义化合物，其中该负荷阶段涉及给予约15-750mg范围内的总周剂量的该化合物，持续前1-10周，并且该维持阶段涉及给予15-250mg范围内的总周剂量，在该负荷阶段后持续至少1周。在某些实施例中，与人类STAT3互补的该反义化合物是如在此所描述或如披露于WO 2012/135736中。在某些实施例中，该癌症选自B细胞淋巴瘤或肝细胞癌。
某些方面是针对与人类STAT3互补的反义化合物用于生产治疗癌症的药剂的用途。在某些实施例中，与人类STAT3互补的该反义化合物是如在此所描述或如披露于WO 2012/135736中。在某些实施例中，该癌症选自B细胞淋巴瘤或肝细胞癌。
在这些方面的任一方面的具体实施例中，该B细胞淋巴瘤是非霍奇金B细胞淋巴瘤。某些方面的非霍奇金B细胞淋巴瘤的实例包括但不限于，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、粘膜相关的淋巴组织淋巴瘤(MALT)、小细胞淋巴细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤(MCL)、伯基特淋巴瘤、纵隔大B细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、结边缘区B细胞淋巴瘤(NMZL)、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤以及淋巴瘤样肉芽肿。在某些实施例中，该非霍奇金B细胞淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
某些给药方案
在某些实施例中，根据一种给药方案给予药物组合物。在某些此类实施例中，该给药方案包括负荷阶段和维持阶段。在某些此类实施例中，该给药方案有效治疗受试者的癌症并且是可接受地耐受的。在某些实施例中，该药物组合物包括一种反义寡核苷酸。在某些实施例中，该反义寡核苷酸具有SEQ ID NO:12的核碱基序列。在某些实施例中，该反义寡核苷酸是ISIS 481464。
在某些实施例中，该负荷阶段包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或超过20个剂量。
在某些实施例中，该负荷阶段持续从1天至6个月。在某些实施例中，负荷阶段持续1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天，如从该负荷阶段的第一个剂量的给予至维持阶段的第一个剂量的给予所测量的。在某些实施例中，负荷阶段持续1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周或26周，如从该负荷阶段的第一个剂量的给予至维持阶段的第一个剂量的给予所测量的。在某些实施例中，该负荷阶段持续1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月，如从该负荷阶段的第一个剂量的给予至维持阶段的第一个剂量的给予所测量的。
在某些实施例中，在该负荷阶段期间给予的剂量低于在该维持阶段期间给予的剂量。在某些实施例中，在该负荷阶段期间给予的剂量低于在该维持阶段期间给予的剂量，以避免不希望的副作用。在某些实施例中，该不希望的副作用是肝标志物增加。在某些实施例中，该不希望的副作用是ALT增加。在某些实施例中，该不希望的副作用是AST增加。在某些实施例中，该不希望的副作用是血小板减少或中性白细胞减少。
在某些实施例中，在该负荷阶段期间给予的剂量高于在该维持阶段期间给予的剂量。在某些实施例中，在该负荷阶段期间给予的剂量高于在该维持阶段期间给予的剂量，以迅速实现STAT3 mRNA表达、STAT3蛋白表达和/或STAT3活性的稳态减少。在某些实施例中，在该负荷阶段期间给予的剂量高于在该维持阶段期间给予的剂量，以在该维持阶段中避免不希望的副作用。在某些实施例中，该不希望的副作用是肝标志物增加。在某些实施例中，该不希望的副作用是ALT增加。在某些实施例中，该不希望的副作用是AST增加。在某些实施例中，该不希望的副作用是血小板减少或中性白细胞减少。
在某些实施例中，在该负荷阶段包括超过一个剂量的情况下，在该负荷阶段期间给予的这些剂量相互是完全一样的量。在某些实施例中，在该负荷阶段期间给予的这些剂量不都是完全一样的量。在某些实施例中，在该负荷阶段期间给予的这些剂量随时间增加。在某些实施例中，在该负荷阶段期间给予的这些剂量随时间减少。
在某些实施例中，通过肠胃外给予来给予负荷剂量。在某些实施例中，该肠胃外给予是皮下给予。在某些实施例中，该肠胃外给予是静脉输注。
在某些实施例中，在该负荷阶段期间给予的这些剂量是约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1.0mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.1mg、约3.2mg、约3.3mg、约3.4mg或约3.5mg的该反义化合物/千克的该受试者的体重。在某些实施例中，该剂量是2.0毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周(2.0mg/kg/wk)。在某些实施例 中，使用迪瓦恩公式将该受试者的体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，在该负荷阶段期间给予的这些剂量是约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg、约400mg、约425mg、约450mg、约475mg、约500mg、约525mg、约550mg、约575mg、约600mg、约625mg、约650mg、约675mg、约700mg、约725mg或约750mg。将理解的是，通过简单地将该量除以该受试者的体重/周而容易地将上述反义寡核苷酸剂量表示为毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周(mg/kg/wk)。例如，将上述量除以70kg的平均成人体重，在某些实施例中可以将这些剂量表示为以下各项中的任一项：约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)、约20mg/70kg(0.3mg/kg/wk)、约30mg/70kg(0.4mg/kg/wk)、约40mg/70kg(0.6mg/kg/wk)、约50mg/70kg(0.7mg/kg/wk)、约75mg/70kg(1.1mg/kg/wk)、约100mg/70kg(1.4mg/kg/wk)、约125mg/70kg(1.8mg/kg/wk)、约150mg/70kg(2.1mg/kg/wk)、约175mg/70kg(2.5mg/kg/wk)、约200mg/70kg(2.9mg/kg/wk)、约225mg/70kg(3.2mg/kg/wk)、约250mg/70kg(3.6mg/kg/wk)、约275mg/70kg(3.9mg/kg/wk)、约300mg/70kg(4.3mg/kg/wk)、约325mg/70kg(4.6mg/kg/wk)、约350mg/70kg(5.0mg/kg/wk)、约375mg/70kg(5.4mg/kg/wk)、约400mg/70kg(5.7mg/kg/wk)、约425mg/70kg(6.1mg/kg/wk)、约450mg/70kg(6.4 mg/kg/wk)、约475mg/70kg(6.8mg/kg/wk)、约500mg/70kg(7.1mg/kg/wk)、约525mg/70kg(7.5mg/kg/wk)、约550mg/70kg(7.9mg/kg/wk)、约575mg/70kg(8.2mg/kg/wk)、约600mg/70kg(8.6mg/kg/wk)、约625mg/70kg(8.9mg/kg/wk)、约650mg/70kg(9.3mg/kg/wk)、约675mg/70kg(9.6mg/kg/wk)、约700mg/70kg(10.0mg/kg/wk)、约725mg/70kg(10.4mg/kg/wk)或约750mg/70kg(10.7mg/kg/wk)。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，可以对该负荷阶段的剂量、剂量频率和持续时间进行选择，以达到希望的效果。在某些实施例中，对这些变量进行调节，以在受试者中产生希望的药剂浓度。例如，在某些实施例中，对剂量和剂量频率进行调节，以提供足以达到希望的效果的量的药剂的血浆浓度。在某些实施例中，将血浆浓度维持在最低有效浓度(MEC)之上。在某些实施例中，以设计将浓度在10％-90％的时间、30％-90％的时间之间或50％-90％的时间之间维持在MEC之上的给药方案给予在此描述的药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物包括一种反义寡核苷酸。在某些实施例中，该反义寡核苷酸具有SEQ ID NO:12的核碱基序列。在某些实施例中，该反义寡核苷酸是ISIS 481464。
在某些实施例中，可以对该负荷阶段的剂量、剂量频率和持续时间进行选择，以达到药物组合物的希望的血浆谷浓度。在某些实施例中，该药物组合物包括一种反义寡核苷酸。在某些实施例中，该反义寡核苷酸具有SEQ ID NO:12的核碱基序列。在某些实施例中，该反义寡核苷酸是ISIS 481464。在 某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从5-100ng/mL。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从5-50ng/mL。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从10-40ng/mL。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从15-35ng/mL。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从20-30ng/mL。
在某些实施例中，可以对该负荷阶段的剂量、剂量频率和持续时间进行选择，以在1至26周内达到希望的效果。在某些实施例中，剂量是相同的并且剂量频率是变化的，以在1至26周内达到该希望的效果。在某些实施例中，剂量随时间增加并且剂量频率保持恒定。在某些实施例中，该负荷阶段的一个或多个剂量大于该维持阶段的一个或多个剂量。在某些实施例中，这些负荷剂量的每个剂量大于这些维持剂量的每个剂量。在某些实施例中，令人希望的是尽可能迅速地达到希望的效果。在某些实施例中，具有高剂量和/或高剂量频率的负荷阶段可以是令人希望的。
在某些实施例中，可以对该负荷阶段的剂量、剂量频率和持续时间进行选择，以达到可接受的安全特性。例如，在某些实施例中，可以对此类变量进行选择，以减轻药物组合物的毒性。在某些实施例中，对此类变量进行选择，以减轻肝毒性。在某些实施例中，对此类变量进行选择，以减轻肾毒性。在某些实施例中，对此类变量进行选择，以减轻血小板减少或中性白细胞减少。
在某些实施例中，剂量随时间增加。在某些实施例中，该负荷阶段的一个或多个剂量低于该维持阶段的一个或多个剂量。在某些实施例中，当ALT是正常上限的5-10倍时，安全特性是不可接受的。在某些实施例中，当ALT是正常上限的5-10倍并且胆红素比正常上限高两倍或更多倍时，安全特性是不可接受的。在某些实施例中，可接受的安全特性包括比正常上限高三倍但不超过正常上限的五倍的ALT升高。在某些实施例中，可接受的安全特性包 括比正常上限高三倍但不超过正常上限的五倍的ALT升高和不超过正常上限的两倍的胆红素升高。在某些实施例中，当给予本发明的药物组合物产生高于正常上限的三倍的ALT升高时，对剂量和/或剂量频率进行调节，以减轻ALT升高。
在某些实施例中，该维持阶段包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或超过20个剂量。
在某些实施例中，该维持阶段持续从一天至该受试者的一生。在某些实施例中，该维持阶段持续1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天，如从该负荷阶段的最后一个剂量的给予至维持阶段的最后一个剂量的给予所测量的。在某些实施例中，该维持阶段持续1周、2周、3，周、4，周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周、36周、37周、38周、39周、40周、41周、42周、43周、44周、45周、46周、47周、48周、49周、50周、51周或52周，如从该负荷阶段的最后一个剂量的给予至维持阶段的最后一个剂量的给予所测量的。在某些实施例中，该维持阶段持续1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月，如从该负荷阶段的最后一个剂量的给予至维持阶段的最后一个剂量的给予所测量的。在某些实施例中，该维持阶段持续1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年、19年、20年、21年、22年、23年、24年、25年、26年、27年、28年、29年、30年、31年、32年、33年、34年、35年、36年、37年、38年、39年、40年、41年、42年、43年、44年、45年、46年、47年、48年、49年或50年，如从 该负荷阶段的最后一个剂量的给予至维持阶段的最后一个剂量的给予所测量的。在某些实施例中，只要剂量是继续需要的、有效的且可忍受的，该维持阶段便持续。
在某些实施例中，在该维持阶段包括超过一个剂量的情况下，在该维持阶段期间给予的这些剂量相互是完全一样的。在某些实施例中，在该维持阶段期间给予的这些剂量不都是完全一样的。在某些实施例中，这些剂量随时间增加。在某些实施例中，这些剂量随时间减少。
在某些实施例中，通过肠胃外给予来给予维持剂量。在某些实施例中，该肠胃外给予是皮下给予。在某些实施例中，该肠胃外给予是静脉输注。
在某些实施例中，在该维持阶段期间的这些剂量是约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1.0mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.1mg、约3.2mg、约3.3mg、约3.4mg或约3.5mg的该反义化合物/千克的该受试者的体重。在某些实施例中，该剂量是2.0毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周(2.0mg/kg/wk)。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将该受试者的体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，在该维持阶段期间的这些剂量是约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约 160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg或约250mg。将理解的是，通过简单地将该量除以该受试者的体重/周而容易地将上述反义寡核苷酸剂量表示为毫克的该反义化合物/千克的该受试者的体重/周(mg/kg/wk)。例如，将上述量除以70kg的平均成人体重，在某些实施例中可以将这些剂量表示为以下各项中的任一项：约15mg/70kg(0.2mg/kg/wk)、约20mg/70kg(0.3mg/kg/wk)、约30mg/70kg(0.4mg/kg/wk)、约40mg/70kg(0.6mg/kg/wk)、约50mg/70kg(0.7mg/kg/wk)、约75mg/70kg(1.1mg/kg/wk)、约100mg/70kg(1.4mg/kg/wk)、约125mg/70kg(1.8mg/kg/wk)、约150mg/70kg(2.1mg/kg/wk)、约175mg/70kg(2.5mg/kg/wk)、约200mg/70kg(2.9mg/kg/wk)、约225mg/70kg(3.2mg/kg/wk)或约250mg/70kg(3.6mg/kg/wk)。在某些实施例中，使用迪瓦恩公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。
在某些实施例中，可以对该维持阶段的剂量、剂量频率和持续时间进行选择，以达到希望的效果。在某些实施例中，对这些变量进行调节，以在受试者中产生希望的药剂浓度。例如，在某些实施例中，对剂量和剂量频率进行调节，以提供足以达到希望的效果的量的在此描述的药剂的血浆浓度。在某些实施例中，将血浆浓度维持在最低有效浓度(MEC)之上。在某些实施例中，以设计将浓度在10％-90％的时间、30％-90％的时间之间或50％-90％的时间之间维持在MEC之上的给药方案给予在此描述的药物组合物。
在某些实施例中，可以对该维持阶段的剂量、剂量频率和持续时间进行选择，以达到药物组合物的希望的血浆谷浓度。在某些实施例中，该药物组 合物是一种反义寡核苷酸。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从5-100ng/mL。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从5-50ng/mL。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从10-40ng/mL。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从15-35ng/mL。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从20-30ng/mL。
在某些实施例中，可以对该维持阶段的剂量、剂量频率和持续时间进行选择，以达到希望的安全特性。例如，在某些实施例中，可以对此类变量进行选择，以减轻药物组合物的毒性。在某些实施例中，对此类变量进行选择，以减轻肝毒性。在某些实施例中，对此类变量进行选择，以减轻肾毒性。在某些实施例中，对此类变量进行选择，以减轻血小板减少或中性白细胞减少。
在某些实施例中，可以对该维持阶段的剂量、剂量频率和持续时间不时地进行调节，以达到希望的效果。在某些实施例中，针对效应(治疗效应和/或毒性效应)对受试者进行监测并且可以根据此类监测结果对该维持阶段的剂量、剂量频率和/或持续时间进行调节。
在某些实施例中，根据以下给药方案给予药物组合物，该给药方案包括第一阶段和第二阶段。在某些实施例中，该药物组合物包括一种反义寡核苷酸。在某些实施例中，该反义寡核苷酸具有SEQ ID NO:12的核碱基序列。在某些实施例中，该反义寡核苷酸是ISIS 481464。
在某些实施例中，该第一阶段包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或超过20个剂量。
在某些实施例中，该第一阶段持续从1天至6个月。在某些实施例中，第一阶段持续1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天，如从该第一阶段的第一个剂量的给予至该第二阶段的第一个剂量的给予所测量的。在某些实施 例中，第一阶段持续1周、2周、3，周、4，周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周或26周，如从该第一阶段的第一个剂量的给予至该第二阶段的第一个剂量的给予所测量的。在某些实施例中，该第一阶段持续1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月，如从该第一阶段的第一个剂量的给予至该第二阶段的第一个剂量的给予所测量的。
在某些实施例中，在该第一阶段期间给予的剂量低于在该第二阶段期间给予的剂量。在某些实施例中，在该第一阶段期间给予的剂量低于在该第二阶段期间给予的剂量，以避免不希望的副作用。在某些实施例中，该不希望的副作用是肝标志物增加。在某些实施例中，该不希望的副作用是ALT增加。在某些实施例中，该不希望的副作用是AST增加。在某些实施例中，该不希望的副作用是血小板减少或中性白细胞减少。
在某些实施例中，在该第一阶段期间给予的剂量高于在该第二阶段期间给予的剂量。在某些实施例中，在该第一阶段期间给予的剂量高于在该第二阶段期间给予的剂量，以迅速实现STAT3 mRNA表达、STAT3蛋白表达和/或STAT3活性的稳态减少。在某些实施例中，在该第一阶段期间给予的剂量高于在该第二阶段期间给予的剂量，以在该第二阶段中避免不希望的副作用。在某些实施例中，该不希望的副作用是肝标志物增加。在某些实施例中，该不希望的副作用是ALT增加。在某些实施例中，该不希望的副作用是AST增加。在某些实施例中，该不希望的副作用是血小板减少或中性白细胞减少。
在某些实施例中，在该第一阶段包括超过一个剂量的情况下，在该第一阶段期间给予的这些剂量相互是完全一样的量。在某些实施例中，在该第一 阶段期间给予的这些剂量不都是完全一样的量。在某些实施例中，在该第一阶段期间给予的这些剂量随时间增加。在某些实施例中，在该第一阶段期间给予的这些剂量随时间减少。
在某些实施例中，通过肠胃外给予来给予第一剂量。在某些实施例中，该肠胃外给予是皮下给予。在某些实施例中，该肠胃外给予是静脉输注。
在“第一阶段””和/或“第二阶段”期间能够给予的剂量的范围与可以被用于上面提及的“负荷阶段”和“维持阶段”的相同。在某些实施例中，可以对该第一阶段和/或第二阶段的剂量、剂量频率和持续时间进行选择，以达到希望的效果。在某些实施例中，对这些变量进行调节，以在受试者中产生希望的药剂浓度。例如，在某些实施例中，对剂量和剂量频率进行调节，以提供足以达到希望的效果的量的药剂的血浆浓度。在某些实施例中，将血浆浓度维持在最低有效浓度(MEC)之上。在某些实施例中，以设计将浓度在10％-90％的时间、30％-90％的时间之间或50％-90％的时间之间维持在MEC之上的给药方案给予在此描述的药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物包括一种反义寡核苷酸。在某些实施例中，该反义寡核苷酸具有SEQ ID NO:12的核碱基序列。在某些实施例中，该反义寡核苷酸是ISIS 481464。在某些实施例中，可以对该第一阶段和/或第二阶段的剂量、剂量频率和持续时间进行选择，以达到药物组合物的希望的血浆谷浓度。在某些实施例中，该药物组合物包括一种反义寡核苷酸。在某些实施例中，该反义寡核苷酸具有SEQ ID NO:12的核碱基序列。在某些实施例中，该反义寡核苷酸是ISIS 481464。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从5-100ng/mL。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从5-50ng/mL。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从10-40ng/mL。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从15-35ng/mL。在某些实施例中，该希望的血浆谷浓度是从20-30ng/mL。
在某些实施例中，可以对该第一阶段和/或第二阶段的剂量、剂量频率和持续时间进行选择，以在1至26周内达到希望的效果。在某些实施例中，剂量是相同的并且剂量频率是变化的，以在1至26周内达到该希望的效果。在某些实施例中，剂量随时间增加但是并且剂量频率保持恒定。在某些实施例中，该第一阶段的一个或多个剂量大于该第二阶段的一个或多个剂量。在某些实施例中，这些第一剂量的每个剂量大于这些第二剂量的每个剂量。在某些实施例中，令人希望的是尽可能迅速地达到希望的效果。在某些实施例中，具有高剂量和/或高剂量频率的第一阶段可以是令人希望的。
在某些实施例中，可以对该第一阶段和/或第二阶段的剂量、剂量频率和持续时间进行选择，以达到可接受的安全特性。例如，在某些实施例中，可以对此类变量进行选择，以减轻药物组合物的毒性。在某些实施例中，对此类变量进行选择，以减轻肝毒性。在某些实施例中，对此类变量进行选择，以减轻肾毒性。在某些实施例中，对此类变量进行选择，以减轻血小板减少或中性白细胞减少。
在某些实施例中，剂量随时间增加。在某些实施例中，该第一阶段的一个或多个剂量低于该第二阶段的一个或多个剂量。在某些实施例中，当ALT是正常上限的5-10倍时，安全特性是不可接受的。在某些实施例中，当ALT是正常上限的5-10倍并且胆红素比正常上限高两倍或更多倍时，安全特性是不可接受的。在某些实施例中，可接受的安全特性包括比正常上限高三倍但不超过正常上限的五倍的ALT升高。在某些实施例中，可接受的安全特性包括比正常上限高三倍但不超过正常上限的五倍的ALT升高和不超过正常上限的两倍的胆红素升高。在某些实施例中，当给予本发明的药物组合物产生高于正常上限的三倍的ALT升高时，对剂量和/或剂量频率进行调节，以减轻ALT升高。在某些实施例中，该第二阶段包括1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或超过20个剂量。在某些实施例中，该第二阶段持续从一天至该受试者的一生。在某些实施例中，该第二阶段持续1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天，如从该第一阶段的最后一个剂量的给予至该第二阶段的最后一个剂量的给予所测量的。在某些实施例中，该第二阶段持续1周、2周、3，周、4，周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周、36周、37周、38周、39周、40周、41周、42周、43周、44周、45周、46周、47周、48周、49周、50周、51周或52周，如从该第一阶段的最后一个剂量的给予至该第二阶段的最后一个剂量的给予所测量的。在某些实施例中，该第二阶段持续1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月，如从该第一阶段的最后一个剂量的给予至该第二阶段的最后一个剂量的给予所测量的。在某些实施例中，该第二阶段持续1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年、19年、20年、21年、22年、23年、24年、25年、26年、27年、28年、29年、30年、31年、32年、33年、34年、35年、36年、37年、38年、39年、40年、41年、42年、43年、44年、45年、46年、47年、48年、49年或50年，如从该第一阶段的最后一个剂量的给予至该第二阶段的最后一个剂量的给予所测量的。在某些实施例中，只要剂量是继续需要的、有效的且可忍受的，该第二阶段便持续。
在某些实施例中，在该第二阶段包括超过一个剂量的情况下，在该第二阶段期间给予的这些剂量相互是完全一样的。在某些实施例中，在该第二阶 段期间给予的这些剂量不都是完全一样的。在某些实施例中，这些剂量随时间增加。在某些实施例中，这些剂量随时间减少。
在某些实施例中，通过肠胃外给予来给予第二剂量。在某些实施例中，该肠胃外给予是皮下给予。在某些实施例中，该肠胃外给予是静脉输注。
反义化合物
寡聚化合物包括但不限于寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸类似物、寡核苷酸模拟物、反义化合物、反义寡核苷酸、以及siRNA。一种寡聚化合物可以对一个靶标核酸是“反义”的，意指能够通过氢键合经受与靶标核酸的杂交。
在某些实施例中，一种反义化合物具有如下的一个核碱基序列，当以5’至3’方向编写时，该核碱基序列包括所靶向的一个靶标核酸的靶标区段的反向互补序列。在某些此类实施例中，一个反义寡核苷酸具有如下的一个核碱基序列，当以5’至3’方向编写时，该核碱基序列包括所靶向的一个靶标核酸的靶标区段的反向互补序列。
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的反义化合物长12至30个亚单位。在某些实施例中，靶向STAT3核酸的反义化合物长14至30个亚单位。在某些实施例中，靶向STAT3核酸的反义化合物长12至22个亚单位。换言之，此类反义化合物分别是从12至30个连接的亚单位、14至30个连接的亚单位或12至22个连接的亚单位。在其他实施例中，该反义化合物是8至80、12至50、13至30、13至50、14至30、14至50、15至30、15至50、16至30、16至50、17至30、17至50、18至22、18至24、18至30、18至50、19至22、19至30、19至50、或20至30个连接的亚单位。在某些此类实施例中，这些反义化合物在长度上是8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、 33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、或80个连接的亚单位，或由以上值中任两个所定义的范围。在一些实施例中，该反义化合物是一种反义寡核苷酸，并且这些连接的亚单位是核苷酸。
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的反义寡核苷酸可以被缩短或截短。例如，可以从5’末端(5’截短)、或可替代地从3’末端(3’截短)删除单个亚单位。靶向STAT3核酸的一种缩短的或截短的反义化合物可从该反义化合物的5’末端删除两个亚单位，或可替代地，可从该反义化合物的3’末端删除两个亚单位。可替代地，所删除的核苷可贯穿该反义化合物散布，例如，在从5’末端删除了一个核苷以及从3’末端删除了一个核苷的一种反义化合物中。
当一个单一的另外的亚单位存在于一种加长的反义化合物中时，该另外的亚单位可位于该反义化合物的5’或3’端。当两个或更多个另外的亚单位存在时，所添加的亚单位可以彼此相邻，例如，在向5’末端(5’添加)或可替代地3’末端(3’添加)添加了两个亚单位的反义化合物中。可替代地，所添加的亚单位可贯穿该反义化合物散布，例如，在向5’末端添加了一个亚单位以及向3’末端添加了一个亚单位的一种反义化合物中。
有可能增加或减少一种反义化合物(例如一种反义寡核苷酸)的长度，和/或引入错配碱基而不消除活性。例如，在Woolf等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(《美国国家科学院院刊》)89:7305-7309,1992)中，针对其在卵母细胞注射模型中诱导靶标RNA切割的能力对一系列长13-25个核碱基的反义寡核苷酸进行了测试。靠近这些反义寡核苷酸的末端处具有8或11个错配碱基的在长度上25个核碱基的反义寡核苷酸能够引导该靶标mRNA的特异性切割 (尽管是与不包含错配的反义寡核苷酸相比更小的程度)。类似地，靶标特异性切割是使用13个核碱基反义寡核苷酸(包括具有1或3个错配的那些)达到。
Gautschi等人(J.Natl.Cancer Inst.(《美国国立癌症研究所杂志》)，93:463-471，2001年3月)证明了与bcl-2mRNA具有100％互补性并且与bcl-xL mRNA具有3个错配的寡核苷酸减少bcl-2和bcl-xL两者的体外和体内表达的能力。此外，这个寡核苷酸证明了强有力的体内抗肿瘤活性。
Maher和Dolnick(Nuc.Acid.Res.(《核酸研究》)16:3341-3358,1988)在一个兔网织红细胞测定中，分别将一系列串联的14个核碱基反义寡核苷酸以及一个由这些串联的反义寡核苷酸的两个或三个的序列构成的28和42个核碱基反义寡核苷酸针对其停滞人DHFR的翻译的能力进行了测试。这三个14个核碱基反义寡核苷酸中每个单独能够抑制翻译(尽管与这些28或42个核碱基反义寡核苷酸相比是更温和的水平)。
反义化合物基序
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的反义化合物具有以模式或基序安排的经化学修饰的亚单位以向这些反义化合物赋予特性，例如增强的抑制活性、增加的对靶标核酸的结合亲和力、或对被体内核酸酶降解的抗性。
嵌合的反义化合物典型地包含至少一个经修饰的区域，以赋予增加的对核酸酶降解的抗性、增加的细胞摄取、增加的对靶标核酸的结合亲和力、和/或增加的抑制活性。嵌合的反义化合物的一个第二区域可任选地充当细胞核酸内切酶RNase H的底物，该RNase H切割一个RNA:DNA双链体的RNA链。
具有缺口体基序的反义化合物被视为嵌合的反义化合物。在缺口体中，内部区域位于外部区域之间，该内部区域具有支持RNase H切割的多个核苷 酸，该外部区域具有在化学上不同于内部区域的核苷的多个核苷酸。在具有缺口体基序的反义寡核苷酸的情况中，该缺口区段通常充当内切核酸酶切割的底物，而翼区段包括经修饰的核苷。在某些实施例中，缺口体的各区域由构成每个不同的区域的糖部分的类型来区分。用于区分缺口体的各区域的糖部分的类型在有些实施例中可包括β-D-核糖核苷、β-D-脱氧核糖核苷、2'-修饰的核苷(这样的2’-修饰的核苷可包括2’-MOE和2’-O-CH3等等)、以及双环糖修饰的核苷(这样的双环糖修饰的核苷可包括具有受约束的乙基的那些)。在某些实施例中，翼可以包括若干经修饰的糖部分，包括例如2’-MOE和受约束的乙基。在某些实施例中，翼可包括若干经修饰的和未经修饰的糖部分。在某些实施例中，翼可以包括2’-MOE核苷、受约束的乙基核苷和2’-脱氧核苷的不同组合。
每个不同的区域可包括统一的糖部分、变体、或交替的糖部分。翼-缺口-翼基序常被描述为“X-Y-Z”，其中“X”代表5’翼的长度，“Y”代表缺口的长度，而“Z”代表3’翼的长度。“X”和“Z”可包括统一的、变体的、或交替的糖部分。在某些实施例中，“X”和“Y”可以包括一个或多个2’-脱氧核苷。“Y”可以包括2’-脱氧核苷。如此处使用的，描述为“X-Y-Z”的一个缺口体具有如下的构型，以使得该缺口的位置紧邻该5’-翼和该3’翼中每个。因此，在该5’-翼和缺口、或该缺口和该3’-翼之间不存在介入的核苷酸。在此所述的反义化合物中的任一种可具有一个缺口体基序。在某些实施例中，“X”和“Z”是相同的，在其他实施例中，它们是不同的。在某些实施例中，“Y”是8与15个之间的核苷。X、Y、或Z可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30或更多个核苷中任一个。
在某些实施例中，在此提供的缺口体包括例如具有基序1-9-1的11- mer。
在某些实施例中，在此提供的缺口体包括例如具有基序1-9-2、2-9-1或1-10-1的12-mer。
在某些实施例中，在此提供的缺口体包括例如具有基序1-9-3、2-9-2、3-9-1、1-10-2或2-10-1的13-mer。
在某些实施例中，在此提供的缺口体包括例如具有基序1-9-4、2-9-3、3-9-2、4-9-1、1-10-3、2-10-2或3-10-1的14-mer。
在某些实施例中，在此提供的缺口体包括例如具有基序1-9-5、2-9-4、3-9-3、4-9-2、5-9-1、1-10-4、2-10-3、3-10-2或4-10-1的15-mer。
在某些实施例中，在此提供的缺口体包括例如具有基序2-9-5、3-9-4、4-9-3、5-9-2、1-10-5、2-10-4、3-10-3、4-10-2或5-10-1的16-mer。
在某些实施例中，在此提供的缺口体包括例如具有基序3-9-5、4-9-4、5-9-3、2-10-5、3-10-4、4-10-3或5-10-2的17-mer。
在某些实施例中，在此提供的缺口体包括例如具有基序4-9-5、5-9-4、3-10-5、4-10-4或5-10-3的18-mer。
在某些实施例中，在此提供的缺口体包括例如具有基序5-9-5、4-10-5或5-10-4的19-mer。
在某些实施例中，在此提供的缺口体包括例如具有基序5-10-5的20-mer。
在某些实施例中，该反义化合物具有“翼体(wingmer)”基序，该基序具有翼-缺口或缺口-翼构型，即如以上针对缺口体构型所描述的X-Y或Y-Z构型。因此，在此提供的翼体构型包括但不限于例如5-10、8-4、4-12、12-4、3-14、16-2、18-1、10-3、2-10、1-10、8-2、2-13、5-13、5-8或6-8。
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的反义化合物具有2-10-2缺口体基 序。
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的该反义化合物具有3-10-3缺口体基序。
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的该反义化合物具有5-10-5缺口体基序。
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的该反义化合物具有1-10-5缺口体基序。
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的该反义化合物具有3-10-4缺口体基序。
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的该反义化合物具有2-10-4缺口体基序。
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的该反义化合物具有4-9-3缺口体基序。
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的该反义化合物具有缺口加宽的基序。
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的该反义化合物具有以下糖基序中的任一种：
k-d(10)-k
e-d(10)-k
k-d(10)-e
k-k-d(10)-k-k
k-k-d(10)-e-e
e-e-d(10)-k-k
k-k-k-d(10)-k-k-k
e-e-e-d(10)-k-k-k
k-k-k-d(10)-e-e-e
k-k-k-d(10)-k-k-k
e-k-k-d(10)-k-k-e
e-e-k-d(10)-k-k-e
e-d-k-d(10)-k-k-e
e-k-d(10)-k-e-k-e
k-d(10)-k-e-k-e-e
e-e-k-d(10)-k-e-k-e
e-d-d-k-d(9)-k-k-e
e-e-e-e-d(9)-k-k-e
其中，k是受约束的乙基核苷，e是2’-MOE取代的核苷，并且d是2’-脱氧核苷。
在某些实施例中，该反义寡核苷酸具有如以下的式A所述的一个糖基序：(J)m-(B)n-(J)p-(B)r-(A)t-(D)g-(A)v-(B)w-(J)x-(B)y-(J)z
其中：
每个A独立地是一个2’-取代的核苷；
每个B独立地是一个双环核苷；
每个J独立地是一个2’-取代的核苷或一个2’-脱氧核苷；
每个D是一个2’-脱氧核苷；
m是0-4；n是0-2；p是0-2；r是0-2；t是0-2；v是0-2；w是0-4；x是0-2；y是0-2；z是0-4；g是6-14；
其条件是：
m、n、以及r中至少一个不是0；
w和y中至少一个不是0；
m、n、p、r、以及t的总和是从2至5；并且
v、w、x、y、和z的总和是从2至5。
靶核酸、靶区域以及核苷酸序列
编码STAT3的核苷酸序列包括但不限于以下各项：GENBANK登录号 NM_139276.2(在此结合为SEQ ID NO:1)和从核苷酸4185000至4264000截短的GENBANK登录号NT_010755.14的互补体(在此结合为SEQ ID NO:2)。
应理解的是，在此包含的每个SEQ ID NO中陈述的序列都独立于对糖部分、核苷间连接或核碱基的任何修饰。这样，由SEQ ID NO限定的反义化合物可以独立地包括一个或多个对糖部分、核苷间连接或核碱基的修饰。由Isis编号(Isis No)描述的反义化合物指示核碱基序列和基序的组合。
在某些实施例中，靶区域是靶核酸的结构上限定的区域。例如，靶区域可以涵盖3’UTR、5’UTR、外显子、内含子、外显子/内含子接合区(exon/intron junction)、编码区、翻译起始区、翻译终止区或其他限定的核酸区域。可以通过登录号从序列数据库(例如NCBI)获得STAT3的结构上限定的区域并且将此类信息通过引用结合在此。在某些实施例中，靶区域可以涵盖从靶区域内的一个靶区段的5’靶位点至同一靶区域内的另一个靶区段的3’靶位点的序列。
靶向包括反义化合物与其杂交的至少一个靶区段的确定，这样使得出现希望的效果。在某些实施例中，该希望的效果是mRNA靶核酸水平减少。在某些实施例中，该希望的效果是由靶核酸编码的蛋白水平的减少或与靶核酸相关的表型改变。
靶区域可以包含一个或多个靶区段。靶区域内的多个靶区段可以是重叠的。可替代地，它们可以是不重叠的。在某些实施例中，靶区域内的靶区段由不超过约300个核苷酸分开。在某些实施例中，靶区域内的靶区段由靶核酸上的多个核苷酸分开，这些核苷酸是、是约、不超过、不超过约250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10个核苷酸，或由上述值的任意两个限定的范围。在某些实施例中，靶区域内的靶区段由靶核酸 上的不超过或不超过约5个核苷酸分开。在某些实施例中，靶区段是连续的。考虑了由具有在此列出的5’靶位点或3’靶位点中的任一个的起始核酸的范围限定的靶区域。
适合的靶区段可以发现于5’UTR、编码区、3’UTR、内含子、外显子或外显子/内含子接合区内。包含起始密码子或终止密码子的靶区段也是适合的靶区段。适合的靶区段可以特定地排除某一结构上限定的区域，例如起始密码子或终止密码子。
适合的靶区段的确定可以包括将靶核酸的序列与整个基因组中的其他序列相比较。例如，可以使用BLAST算法在不同核酸之间鉴定具有相似性的区域。这种比较可以防止选择以非特异性方式与除选定的靶核酸之外的序列(即，非靶序列或脱靶序列)杂交的反义化合物序列。
反义化合物在活性靶区域中的活性可以有变化(例如，如由靶核酸水平的百分比减少所限定的)。在某些实施例中，STAT3 mRNA水平的减少指示STAT3表达的抑制。STAT3蛋白水平的减少也指示靶标mRNA表达的抑制。另外，表型改变指示STAT3表达的抑制。在某些实施例中，减少的细胞生长、减少的肿瘤生长和减少的肿瘤体积可以指示STAT3表达的抑制。在某些实施例中，与癌症相关的症状的改善可以指示STAT3表达的抑制。在某些实施例中，恶病质的减少指示STAT3表达的抑制。在某些实施例中，癌症标志物的减少可以指示STAT3表达的抑制。
杂交
在一些实施例中，杂交发生在于此披露的反义化合物与STAT3核酸之间。最常见的杂交机制涉及核酸分子的互补核碱基之间的氢键键合(例如，沃森-克里克、胡斯坦或反向胡斯坦氢键键合)。
杂交能在不同的条件下发生。严谨条件依赖于序列，并且由待杂交的核 酸分子的性质和组成决定。
测定序列是否能够与靶核酸特异性杂交的方法是本领域公知的。在某些实施例中，在此提供的反义化合物与STAT3核酸特异性杂交。
互补性
当足够数目的反义化合物的核碱基能与靶核酸中对应的核碱基氢键键合时，所述反义化合物和所述靶核酸彼此互补，由此将产生期望的作用(例如，对靶核酸例如STAT3核酸的反义抑制)。
反义化合物和STAT3核酸之间的非互补核碱基可以被容忍，只要该反义化合物仍然能够与靶核酸特异性地杂交。另外，反义化合物可以杂交到STAT3核酸的一个或多个区段上，使得间插或相邻区段不涉及在杂交事件中(例如，环结构、错配或发夹结构)。
在某些实施例中，在此提供的反义化合物或其指定部分与或至少与STAT3核酸、其靶区域、靶区段或具体部分70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％互补。反义化合物与靶核酸的百分比互补性可以使用常规方法测定。
例如，在反义化合物的20个核碱基中有18个与靶区域互补并因此可特异性杂交的反义化合物代表百分之九十的互补性。在该实例中，剩余的非互补核碱基可以与互补核碱基成簇或散布，不需要彼此连续或与互补核碱基连续。因此，长度为18个核碱基，具有由与靶核酸完全互补的两个区域侧接的四个非互补核碱基的反义化合物将与靶核酸具有77.8％的总互补性，并且因此将包含在本发明的范围内。使用本领域已知的BLAST程序(基本局部比对搜索工具)和PowerBLAST程序(Altschul等人，J.Mol.Biol.(《分子生物学杂志》)，1990,215,403 410；Zhang和Madden,Genome Res.(《基因组研究》)，1997,7,649 656)可以常规地确定反义化合物与靶核酸区域的百分比 互补性。可以通过例如使用史密斯(Smith)和沃特曼(Waterman)算法(Adv.Appl.Math.(《应用数学进展》)，1981,2,482 489)的Gap程序(Wisconsin Sequence Analysis Package(威斯康星序列分析软件包)，用于Unix的版本8，Genetics Computer Group(遗传学计算机集团)，University Research Park,Madison Wis.(威斯康星州麦迪逊大学科技园))，使用默认设置确定百分比同源性、序列同一性或互补性。
在某些实施例中，在此提供的反义化合物或其具体部分与靶核酸或其具体部分完全互补(即，100％互补)。例如，反义化合物可以是与STAT3核酸、或其靶区域、或靶区段或靶序列完全互补的。如在此使用的，“完全互补”是指反义化合物的每个核碱基都能够与靶核酸的对应核碱基进行精确碱基配对。例如，20个核碱基反义化合物与400个核碱基长的靶序列完全互补，只要存在与该反义化合物完全互补的靶核酸的相应的20个核碱基部分。当提及该第一和/或第二核酸的具体部分时，也可以使用完全互补。例如，30个核碱基的反义化合物的20个核碱基部分与400个核碱基长的靶序列可以是“完全互补”。该30个核碱基的寡核苷酸的20个核碱基部分与该靶序列(如果该靶序列具有相应的20个核碱基部分，其中每个核碱基与该反义化合物的20个核碱基部分互补)是完全互补的。同时，整个30个核碱基的反义化合物可以完全或可以不完全与靶序列互补，取决于该反义化合物的剩余10个核碱基是否也与该靶序列互补。
非互补核碱基的位置可以是在反义化合物的5’末端或3’末端。可替代地，一个或多个非互补核碱基可以在反义化合物的内部位置。当存在两个或更多个非互补核碱基时，它们可以是连续的(即连接的)或不连续的。在一个实施例中，非互补核碱基位于缺口体反义寡核苷酸的翼区段。
在某些实施例中，长度是，或长度高达11、12、13、14、15、16、17、 18、19、或20个核碱基的反义化合物相对于靶核酸例如STAT3核酸或其具体部分包括不多于4、不多于3、不多于2、或不多于1个非互补核碱基。
在某些实施例中，长度是，或长度高达11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个核碱基的反义化合物相对于靶核酸例如STAT3核酸或其具体部分包括不多于6、不多于5、不多于4、不多于3、不多于2、或不多于1个非互补核碱基。
在此提供的反义化合物还包括与靶核酸的一部分互补的那些。如在此使用的，“部分”是指靶核酸的一个区域或区段内确定数目的连续的(即连接的)核碱基。一“部分”也可以指反义化合物的确定数目的连续核碱基。在某些实施例中，反义化合物与靶区段的至少8个核碱基的部分是互补的。在某些实施例中，反义化合物与靶区段的至少9个核碱基的部分是互补的。在某些实施例中，反义化合物与靶区段的至少10个核碱基的部分是互补的。在某些实施例中，反义化合物与靶区段的至少11个核碱基的部分是互补的。在某些实施例中，反义化合物与靶区段的至少12个核碱基的部分是互补的。在某些实施例中，反义化合物与靶区段的至少13个核碱基的部分是互补的。在某些实施例中，反义化合物与靶区段的至少14个核碱基的部分是互补的。在某些实施例中，反义化合物与靶区段的至少15个核碱基的部分是互补的。还构思了与靶区段的至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或更多个核碱基的部分或由这些值中任意两个限定的范围互补的反义化合物。
同一性
本文提供的反义化合物也可以与特定核苷酸序列、SEQ ID NO或由特定Isis编号代表的化合物或其部分具有确定的百分比同一性。如本文使用的，如果反义化合物具有与本文公开的序列相同的核碱基配对能力，那么该反义化合物与本文公开的该序列是同一的。例如，代替披露的DNA序列中的胸腺嘧 啶而含有尿嘧啶的RNA可以被认为与该DNA序列是同一的，因为尿嘧啶和胸腺嘧啶均与腺嘌呤配对。还涵盖本文描述的反义化合物的缩短和延长形式以及相对于本文提供的反义化合物具有非同一性碱基的化合物。非同一性碱基可以彼此相邻或分散在整个反义化合物中。反义化合物的百分比同一性根据相对于与它进行比较的序列具有同一性碱基配对的碱基数来计算。
在某些实施例中，反义化合物或其部分与在此披露的这些反义化合物或SEQ ID NO的一个或多个，或其部分具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。
在某些实施例中，反义化合物部分与靶核酸的相同长度部分相比。在某些实施例中，8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、或25个核碱基部分与靶核酸的相同长度部分相比。
在某些实施例中，反义寡核苷酸的部分与靶核酸的相同长度的部分相比。在某些实施例中，8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、或25个核碱基部分与靶核酸的相同长度部分相比。
修饰
核苷是碱基-糖组合。核苷的核碱基(也称作碱基)部分通常是杂环碱基部分。核苷酸是进一步包括与核苷的糖部分共价连接的磷酸基团的核苷。对于那些包含呋喃戊糖基糖(pentofuranosyl sugar)的核苷，磷酸基团可以与糖的2′、3′或5′羟基部分连接。寡核苷酸通过相邻核苷彼此共价连接形成，从而形成线性聚合寡核苷酸。在寡核苷酸结构中，磷酸基团通常是指形成寡核苷酸的核苷间连接。
对反义化合物的修饰包括替代或改变核苷间连接、糖部分或核碱基。修饰的反义化合物相对于天然形式通常是优选的，原因是期望的性质，例如，例如，增强的细胞摄取、增强的对靶核酸的亲和力、在核酸酶存在时增加的 稳定性、或增加的抑制活性。
化学修饰的核苷也可以用于增加缩短或截短的反义寡核苷酸对其靶核酸的结合亲和力。因此，使用具有这类化学修饰核苷的较短的反义化合物通常能获得可比的结果。
经修饰的核苷间连接
RNA和DNA中天然存在的核苷间连接是3′到5′的磷酸二酯连接。具有一个或多个修饰的，即非天然存在的核苷间连接的反义化合物通常被选择为优于具有天然存在的核苷间连接的反义化合物，原因是期望的性质，例如像，增强的细胞摄取、增强的对靶核酸的亲和力、和在核酸酶存在时增加的稳定性。
具有经修饰的核苷间连接的寡核苷酸包括保留磷原子的核苷间连接以及不含磷原子的核苷间连接。代表性的含磷核苷间连接包括但不限于磷酸二酯、磷酸三酯、磷酸甲酯、氨基磷酸酯和硫代磷酸酯。制备含磷和非含磷连接的方法是熟知的。
在某些实施例中，靶向STAT3核酸的反义化合物包括一个或多个经修饰的核苷间连接。在某些实施例中，该经修饰的核苷间连接是硫代磷酸酯连接。在某些实施例中，反义化合物的每个核苷间连接均为硫代磷酸酯核苷间连接。
经修饰的糖部分
在此提供的反义化合物可以任选地包含一个或多个核苷，其中糖基是经修饰的。此类糖经修饰的核苷可以赋予反义化合物以核酸酶稳定性、增加的结合亲和力或一些其他的有益的生物学特性。在某些实施例中，核苷包括经化学方法修饰的呋喃核糖环部分。经化学方法修饰的呋喃核糖环的实例包括但不限于，取代基的添加(包括5'和2'取代基；非偕环原子的桥接以形成二 环核酸(BNA)；核糖基环氧原子被S、N(R)或C(R1)(R)2(R＝H、C1-C12烷基或保护基)替换；及其组合。经化学方法经修饰的糖的实例包括2'-F-5'-甲基取代的核苷(其他披露的5',2'-双取代的核苷参见PCT国际申请WO 2008/101157，公布于8/21/08)；核糖基环氧原子被S替换，在2'-位处具有另外的取代(参见公布的美国专利申请US 2005/0130923，公布于2005年6月16日)；或可替代地，BNA的5'-取代(参见PCT国际申请WO 2007/134181，公布于11/22/07，其中LNA被例如5'-甲基或5'-乙烯基基团取代)。
具有经修饰的糖部分的核苷的实例包括但不限于包括5'-乙烯基、5'-甲基(R或S)、4'-S、2'-F、2'-OCH3以及2'-O(CH2)2OCH3取代基的核苷。2’处的取代基还可以选自烯丙基、氨基、叠氮基、硫代、O-烯丙基、O-C1-C10烷基、OCF3、O(CH2)2SCH3、O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)以及O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中每个Rm和Rn独立地是H或经取代的或未经取代的C1-C10烷基。
如在此使用的，“二环核苷”是指经修饰的、包括二环糖部分的核苷。二环核苷的实例包括但不限于在4'和2'核糖基环原子之间包括桥的核苷。在某些实施例中，在此提供的反义化合物包括一个或多个二环核苷，其中该桥包括4’至2’二环核苷。此类4’至2’二环核苷的实例包括但不限于具有以下式的核苷：4'-(CH2)-O-2'(LNA)；4'-(CH2)-S-2'；4'-(CH2)2-O-2'(ENA)；4'-CH(CH3)-O-2'及4'-C-H(CH2OCH3)-O-2'及其类似物(参见美国专利7,399,845，发行于2008年7月15日)；4'-C(CH3)(CH3)-O-2'及其类似物(参见公布的PCT国际申请WO 2009/006478，公布于2009年1月8日)；4'-CH2-N(OCH3)-2'及其类似物(参见公布的PCT国际申请WO 2008/150729，公布于2008年12月11日)；4'-CH2-O-N(CH3)-2'(参见公布的美国专利申请 US 2004/0171570，公布于2004年9月2日)；4'-CH2-N(R)-O-2'，其中R是H、C1-C12烷基或保护基(参见美国专利7,427,672，发行于2008年9月23日)；4'-CH2-C(H)(CH3)-2'(参见Chattopadhyaya，等人，J.Org.Chem.(《有机化学杂志》)，2009,74,118-134)；以及4'-CH2-C(＝CH2)-2'及其类似物(参见公布的PCTT国际申请WO 2008/154401，公布于2008年12月8日)。还参见例如：Singh等人，Chem.Commun.(《化学通讯》)，1998,4,455-456；Koshkin等人，Tetrahedron(《四面体》)，1998,54,3607-3630；Wahlestedt等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(《美国国家科学院院刊》)，2000,97,5633-5638；Kumar等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.(《生物有机化学与医药化学快报》)，1998,8,2219-2222；Singh等人，J.Org.Chem.(《有机化学杂志》)，1998,63,10035-10039；Srivastava等人，J.Am.Chem.Soc.(《美国化学会志》)，129(26)8362-8379(2007年7月4日)；Elayadi等人，Curr.Opinion Invens.Drugs(《研究用药物当前观点》)，2001,2,558-561；Braasch等人，Chem.Biol.(《化学与生物学》)，2001,8,1-7；Orum等人，Curr.Opinion Mol.Ther.(《分子治疗学当前观点》)，2001,3,239-243；美国专利号U.S.6,670,461、7,053,207、6,268,490、6,770,748、6,794,499、7,034,133、6,525,191、7,399,845；公布的PCT国际申请WO 2004/106356、WO 94/14226、WO 2005/021570及WO 2007/134181；美国专利申请号US 2004/0171570、US 2007/0287831和US 2008/0039618；以及美国专利序列号12/129,154、60/989,574、61/026,995、61/026,998、61/056,564、61/086,231、61/097,787及61/099,844；和PCT国际申请号PCT/US 2008/064591、PCT/US 2008/066154和PCT/US 2008/068922。前述二环核苷中的每一者都可以被制备为具有一个或多个立体化学糖构型，包括例如α-L-呋喃核糖和β-D-呋喃核糖(参见PCT国际申请PCT/DK 98/00393，在1999年3 月25日公开为WO 99/14226)。
在某些实施例中，BNA核苷的二环糖部分包括但不限于在呋喃戊糖基糖部分的4'与2’位置之间具有至少一个桥的化合物，其中此类桥独立地包括1个或从2至4个独立地选自-[C(Ra)(Rb)]n-、-C(Ra)＝C(Rb)-、-C(Ra)＝N-、-C(＝NRa)-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-O-、-Si(Ra)2-、-S(＝O)x-以及-N(Ra)-的连接的基团；
其中：
x是0、1、或2；
n是1、2、3、或4；
Ra和Rb各自独立地是H、保护基、羟基、C1-C12烷基、经取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、经取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、经取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、经取代的C5-C20芳基、杂环基、经取代的杂环基、杂芳基、经取代的杂芳基、C5-C7脂环基、经取代的C5-C7脂环基、卤素、OJ1、NJ1J2、SJ1、N3、COOJ1、酰基(C(＝O)-H)、经取代的酰基、CN、磺酰基(S(＝O)2-J1)、或次硫酸基(sulfoxyl)(S(＝O)-J1)；并且
每个J1和J2独立地是H、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、酰基(C(＝O)-H)、取代的酰基、杂环基、取代的杂环基、C1-C12氨基烷基、取代的C1-C12氨基烷基或保护基。
在某些实施例中，二环糖部分的桥是-[C(Ra)(Rb)]n-、-[C(Ra)(Rb)]n-O-、-C(RaRb)-N(R)-O-或–C(RaRb)-O-N(R)-。在某些实施例中，该桥是4'-CH2-2'、4'-(CH2)2-2'、4'-(CH2)3-2'、4'-CH2-O-2'、4'-(CH2)2-O-2'、4'-CH2-O-N(R)-2'以及4'-CH2-N(R)-O-2'-，其中每个R独立地是H、保护基或C1-C12烷基。
在某些实施例中，二环核苷进一步由异构构型限定。例如，包括4’-2’亚 甲基-氧基桥的核苷可以处于α-L构型或处于β-D构型。先前，α-L-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA's已经被掺入到显示反义活性的反义寡核苷酸中(Frieden等人，Nucleic Acids Research(《核酸研究》)，2003,21,6365-6372)。
在某些实施例中，如以下所描绘，二环核苷包括但不限于(A)α-L-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA、(B)β-D-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA、(C)乙烯氧基(4’-(CH2)2-O-2’)BNA、(D)氨基氧基(4’-CH2-O-N(R)-2’)BNA、(E)氧基氨基(4’-CH2-N(R)-O-2’)BNA、(F)甲基(亚甲基氧基)(4’-CH(CH3)-O-2’)BNA、(G)亚甲基-硫代(4’-CH2-S-2’)BNA、(H)亚甲基-氨基(4’-CH2-N(R)-2’)BNA、(I)甲基碳环(4’-CH2-CH(CH3)-2’)BNA以及(J)丙烯碳环(4’-(CH2)3-2’)BNA。
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其中Bx是碱基部分并且R独立地是H、保护基或C1-C12烷基。
在某些实施例中，二环核苷具有式I：
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其中：
Bx为杂环碱基部分；
-Qa-Qb-Qc-是-CH2-N(Rc)-CH2-、-C(＝O)-N(Rc)-CH2-、-CH2-O-N(Rc)-、-CH2-N(Rc)-O-或-N(Rc)-O-CH2；
Rc是C1-C12烷基或氨基保护基；并且
Ta和Tb彼此独立地是H、羟基保护基、共轭基、反应性磷基、磷部分或至支撑介质的共价附接物。
在某些实施例中，二环核苷具有式II：
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其中：
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb彼此独立地是H、羟基保护基、共轭基、反应性磷基、磷部分或至支撑介质的共价附接物；
Za是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、经取代的C1-C6烷基、经取代的C2-C6烯基、经取代的C2-C6炔基、酰基、经取代的酰基、经取代的酰胺、巯基或经取代的硫代。
在一个实施例中，这些经取代的基团各自独立地经取代基单或多取代，这些取代基独立地选自卤素、氧、羟基、OJc、NJcJd、SJc、N3、OC(＝X)Jc、 以及NJeC(＝X)NJcJd，其中Jc、Jd和Je各自独立地是H、C1-C6烷基、或经取代的C1-C6烷基并且X是O或NJc。
在某些实施例中，二环核苷具有式III：
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其中：
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb彼此独立地是H、羟基保护基、共轭基、反应性磷基、磷部分或至支撑介质的共价附接物；
Zb是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、经取代的C1-C6烷基、经取代的C2-C6烯基、经取代的C2-C6炔基或经取代的酰基(C(＝O)-)。
在某些实施例中，二环核苷具有式IV：
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其中：
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb彼此独立地是H、羟基保护基、共轭基、反应性磷基、磷部分或至支撑介质的共价附接物；
Rd是C1-C6烷基、经取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、经取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或经取代的C2-C6炔基；
qa、qb、qc和qd各自独立地是H、卤素、C1-C6烷基、经取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、经取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或经取代的C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、经取代的C1-C6烷氧基、酰基、经取代的酰基、C1-C6氨烷基或经取代的C1-C6氨烷基；
在某些实施例中，二环核苷具有式V：
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其中：
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb彼此独立地是H、羟基保护基、共轭基、反应性磷基、磷部分或至支撑介质的共价附接物。
qa、qb、qe和qf各自独立地是氢、卤素、C1-C12烷基、经取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、经取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、经取代的C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、经取代的C1-C12烷氧基、OJj、SJj、SOJj、SO2Jj、NJjJk、N3、CN、C(＝O)OJj、C(＝O)NJjJk、C(＝O)Jj、O-C(＝O)NJjJk、N(H)C(＝NH)NJjJk、N(H)C(＝O)NJjJk或N(H)C(＝S)NJjJk；
或qe与qf一起是＝C(qg)(qh)；
qg和qh各自独立地是H、卤素、C1-C12烷基或经取代的C1-C12烷基。
亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA单体腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、5-甲基-胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶的合成及制备，连同其寡聚反应和核酸识别特性已经得以描述(参见例如，Koshkin等人，Tetrahedron(《四面体》)，1998,54,3607-3630)。BNA及其制备还描述于WO 98/39352以及WO 99/14226中。
还已经制备了亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA、亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA和2'-硫代-BNA的类似物(参见例如，Kumar等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.(《生物有机化学与医药化学快报》)，1998,8,2219-2222)。还描述了锁定核苷类似物的制备，这些类似物包括寡脱氧核糖核苷酸双链体作为核酸聚合酶的底物(参见例如，Wengel等人，WO 99/14226)。另外，作为新颖的构象受限的高亲和力寡核苷酸类似物的2'-氨基-BNA的合成已经描述于现有技术中(参见例如，Singh等人，J.Org.Chem.(《有机化学杂志》)，1998,63,10035-10039)。此外，已经制备了2'-氨基-和2'-甲基氨基-BNA's并且先前已经报道了它们与互补RNA和DNA链的双链体的热稳定性。
在某些实施例中，二环核苷具有式VI：
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其中：
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb彼此独立地是H、羟基保护基、共轭基、反应性磷基、磷部分或至支撑介质的共价附接物；
qi、qj、qk和ql各自独立地是H、卤素、C1-C12烷基、经取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、经取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、经取代的C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、经取代的C1-C12烷氧基、OJj、SJj、SOJj、SO2Jj、NJjJk、N3、CN、C(＝O)OJj、C(＝O)NJjJk、C(＝O)Jj、O-C(＝O)NJjJk、N(H)C(＝NH)NJjJk、N(H)C(＝O)NJjJk或N(H)C(＝S)NJjJk；并且
qi和qj或ql和qk一起是＝C(qg)(qh)，其中qg和qh各自独立地是H、卤 素、C1-C12烷基或经取代的C1-C12烷基。
已经描述了一种具有4'-(CH2)3-2'桥的碳环型二环核苷和烯基类似物桥4'-CH＝CH-CH2-2'(参见例如，Freier等人，Nucleic Acids Research(《核酸研究》)，1997,25(22),4429-4443和Albaek等人，J.Org.Chem.(《有机化学杂志》)，2006,71,7731-7740)。碳环型二环核苷的合成及制备，连同其寡聚反应和生化研究已经得以描述(参见例如，Srivastava等人，J.Am.Chem.Soc.(《美国化学会志》)2007,129(26),8362-8379)。
如在此所使用，“4’-2’二环核苷”或“4’至2’二环核苷”是指包括呋喃糖环的二环核苷，该呋喃糖环包括连接2’碳原子和4’碳原子的桥。
如在此使用的，“单环核苷”是指包括经修饰的糖部分的核苷，该经修饰的糖部分不是二环糖部分。在某些实施例中，核苷的糖部分、或糖部分类似物可以是在任何位置经修饰的或经取代的。
如在此使用的，“2’-修饰的糖”是指在2’位置处经修饰的呋喃糖基糖。在某些实施例中，此类修饰包括选自以下的取代基：卤化物，包括但不限于经取代的和未经取代的烷氧基、经取代的和未经取代的硫代烷基、经取代的和未经取代的氨基烷基、经取代的和未经取代的烷基、经取代的和未经取代的烯丙基、以及经取代的和未经取代的炔基。在某些实施例中，2’修饰选自以下取代基，包括但不限于：O[(CH2)nO]mCH3、O(CH2)nNH2、O(CH2)nCH3、O(CH2)nONH2、OCH2C(＝O)N(H)CH3以及O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2，其中n和m是从1至约10。其他2'-取代基还可以选自：C1-C12烷基；经取代的烷基；烯基；炔基；烷芳基；芳烷基；O-烷芳基或O-芳烷基；SH；SCH3；OCN；Cl；Br；CN；CF3；OCF3；SOCH3；SO2CH3；ONO2；NO2；N3；NH2；杂环烷基；杂环烷芳基；氨基烷基氨基；聚烷基氨基；经取代的甲硅烷基；RNA切割基团；报告子基团；嵌入子；用于改进药代动力学的基团；以及用于改 进反义化合物的药效学特性的基团以及具有类似活性的其他取代基。在某些实施例中，经修饰的核苷包括2’-MOE侧链(参见例如，Baker等人，J.Biol.Chem.(《生物化学杂志》)，1997,272,11944-12000)。与未经修饰的核苷以及与其他经修饰的核苷(例如2’-O-甲基、O-丙基、和O-氨基丙基)相比，此类2'-MOE取代已经被描述为具有改进的结合亲和力。还已经显示，具有2'-MOE取代基的寡核苷酸是基因表达的反义抑制剂，在体内使用中具有有前途的特征(参见例如，Martin,P.,Helv.Chim.Acta(《瑞士化学学报》)，1995,78,486-504；Altmann等人，Chimia,1996,50,168-176；Altmann等人，Biochem.Soc.Trans.(《生物化学学会会报》)，1996,24,630-637；以及Altmann等人，Nucleosides Nucleotides(《核苷与核苷酸》)，1997,16,917-926)。
如在此使用的，“经修饰的四氢吡喃核苷”或“经修饰的THP核苷”是指用六元四氢吡喃“糖”取代正常核苷中的呋喃戊糖基残基的核苷(糖代用品)。经修饰的THP核苷包括但不限于在本领域中称为己糖醇核酸(HNA)、安尼妥(anitol)核酸(ANA)、甘露醇核酸(MNA)(参见Leumann,CJ.Bioorg.& Med.Chem.(《生物有机化学与医药化学》)(2002)10:841-854)、氟代HNA(F-HNA)的核苷或具有式X的那些化合物：
化学式X：
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其中独立地对于所述至少一个具有式X的四氢吡喃核苷类似物中的每一个：
Bx为杂环碱基部分；
T3和T4各自独立地是将四氢吡喃核苷类似物连接至反义化合物的核苷间连接基团或T3和T4之一是将四氢吡喃核苷类似物连接至反义化合物的核苷间连接基团并且T3和T4中的另一个是H、羟基保护基、连接的共轭基团或5'或3'-末端基；
q1、q2、q3、q4、q5、q6及q7各自独立地是H、C1-C6烷基、经取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、经取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或经取代的C2-C6炔基；并且
R1和R2之一是氢并且另一个选自卤素、经取代的或未经取代的烷氧基、NJ1J2、SJ1、N3、OC(＝X)J1、OC(＝X)NJ1J2、NJ3C(＝X)NJ1J2以及CN，其中X是O、S或NJ1，并且每个J1、J2和J3独立地是H或C1-C6烷基。
在某些实施例中，提供了具有式X的经修饰的THP核苷，其中qm、qn、qp、qr、qs、qt以及qu各自是H。在某些实施例中，qm、qn、qp、qr、qs、qt以及qu中的至少一个不是H。在某些实施例中，qm、qn、qp、qr、qs、qt以及qu中的至少一个是甲基。在某些实施例中，提供了具有式X的THP核苷，其中R1和R2之一是F。在某些实施例中，R1是氟并且R2是H；R1是甲氧基并且R2是H，并且R1是甲氧基乙氧基并且R2是H。
如在此使用的，“2’-修饰的”或“2’-取代的”是指包括一种糖的核苷,该糖在2’位置处包括不是H或OH的取代基。2’-修饰的核苷包括但不限于二环核苷，其中连接该糖环的两个碳原子的桥连接该糖环的2’碳和另一个碳,以及具有非桥接2’取代基的核苷，例如烯丙基、氨基、叠氮基、硫代、O-烯丙基、O-C1-C10烷基、-OCF3、O-(CH2)2-O-CH3、2'-O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)、或O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中Rm和Rn各自独立地是H或经取代的或未经取代的C1-C10烷基。2’-修饰的核苷可以进一步包括其他修饰， 例如在该糖的其他位置处和/或在核碱基处。
如在此所使用，“2’-F”是指在2’位处包括氟基团的糖。
如在此使用的，“2’-OMe”或“2’-OCH3”或“2’-O-甲基”各自是指包括一种糖的核苷,该糖在糖环的2’位置处包括-OCH3基团。
如在此使用的，“寡核苷酸”是指包括多个连接的核苷的化合物。在某些实施例中，该多个核苷中的一个或多个是经修饰的。在某些实施例中，寡核苷酸包括一个或多个核糖核苷(RNA)和/或脱氧核糖核苷(DNA)。
在本领域中还已知许多其他可以用来修饰用以掺入进反义化合物中的核苷的二环和三环糖代用品环系统(参见例如，综述文章：Leumann,J.C,Bioorganic & Medicinal Chemistry(《生物有机化学与医药化学》)，2002,10,841-854)。
此类环系统可以经历不同的另外的取代以增强活性。
用于制备经修饰的糖的方法是本领域技术人员熟知的。
在具有经修饰的糖部分的核苷酸中，为了与适合靶核酸的杂交，保持核碱基部分(天然的、经修饰的或其组合)。
在某些实施例中，反义化合物包括一个或多个具有经修饰的糖部分的核苷酸。在某些实施例中，经修饰的糖部分是2’-MOE。在某些实施例中，这些2’-MOE修饰的核苷酸排列在缺口体基序中。在某些实施例中，该经修饰的糖部分是cEt。在某些实施例中，这些cEt修饰的核苷酸遍及缺口体基序的翼而排列。
组合物和用于配制药物组合物的方法
可以将反义寡核苷酸与药学上可接受的活性或惰性物质混合以制备药物组合物或配制品。组合物和用于配制药物组合物的方法取决于多个标准，包括但不限于给药途径、疾病程度、或待给予的剂量。
可在药物组合物中利用靶向STAT3核酸的一种反义化合物，这是通过将该反义化合物和一种适合的药学上可接受的稀释剂或载体组合。药学上可接受的稀释剂包括磷酸盐缓冲盐水(PBS)。PBS是一种适合在有待肠胃外递送的组合物中使用的稀释剂。因此，在一个实施例中，在此所述的方法中采用的是一种药物组合物，该药物组合物包括靶向STAT3核酸的反义化合物和药学上可接受的稀释剂。在某些实施例中，该药学上可接受的稀释剂是PBS。在某些实施例中，该反义化合物是反义寡核苷酸。
包括反义化合物的药物组合物囊括任何药学上可接受的盐、酯、或此类酯的盐、或任何其他寡核苷酸，这些寡核苷酸在被给予至一种动物(包括人类)后能够提供(直接或间接)生物上具有活性的代谢物或其残余物。因而，例如，本文还起草涉及反义化合物的药学上可接受的盐、前药、这些前药的药学上可接受的盐、和其他生物等效物。合适的药学上可接受的盐包括，但不限于，钠盐和钾盐。
前药可以包括在反义化合物的一端或两端掺入另外的核苷，所述核苷在体内通过内源核酸酶切割，以形成活性反义化合物。
共轭的反义化合物
反义化合物可以与一个或多个部分或共轭物共价连接，所述部分或共轭物增强所得反义寡核苷酸的活性、细胞分布或细胞摄取。典型的共轭基团包括胆固醇部分和脂质部分。另外的共轭基团包括碳水化合物、磷脂、生物素、吩嗪、叶酸、菲啶、蒽醌、吖啶、荧光素、罗丹明、香豆素和染料。
也可以修饰反义化合物以使其具有一个或多个稳定基团，所述稳定基团通常附接于反义化合物的一端或两端以增强例如像核酸酶稳定性等性质。稳定基团中包括帽结构。这些末端修饰保护具有末端核酸的反义化合物免于被外切核酸酶降解，并且能有助于在细胞内的递送和/或定位。帽可以存在于5'- 末端(5'-帽)，或在3'-末端(3'-帽)，或者可以同时存在于两个末端。帽结构在本领域中是熟知的并且包括，例如，反向脱氧碱基帽。另外，能够用于在反义化合物的一个或两个末端加帽以赋予核酸酶稳定性的3’和5’稳定基团包括那些于2003年1月16日公布的WO03/004602中披露那些。
某些反义化合物
在某些实施例中，有用于治疗B细胞淋巴瘤的处于以上描述的剂量和给药方案的反义化合物包括描述于WO 2012/135736中的反义寡核苷酸的任一种，将其通过引用以其全部内容结合在此。适于治疗B细胞淋巴瘤的描述于WO 2012/135736中的反义化合物的实例包括但不限于描述于下表1和2中的那些：
表1
靶向STAT3的cEt和MOE嵌合的反义寡核苷酸(SEQ ID NO:1)
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表2
靶向STAT3的嵌合的反义寡核苷酸(SEQ ID NO:2)
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某些联合疗法
在某些实施例中，在此提供的一种或多种药物组合物与一种或多种其他药剂共给予。在某些实施例中，此类一种或多种其他药剂被设计来治疗与在此提供的这一种或多种药物组合物相同的疾病、障碍或病症。在某些实施例中，此类一种或多种其他药剂被设计来治疗与在此提供的这一种或多种药物组合物不同的疾病、障碍或病症。在某些实施例中，此类一种或多种其他药剂被设计来治疗在此提供的一种或多种药物组合物的不希望的副作用。在某些实施例中，在此提供的一种或多种药物组合物与另一种药剂共给予，以治 疗该其他药剂的不希望的作用。在某些实施例中，在此提供的一种或多种药物组合物与另一种药剂共给予，以产生组合效应。在某些实施例中，在此提供的一种或多种药物组合物与另一种药剂共给予，以产生协同效应。
在某些实施例中，同时给予在此提供的一种或多种药物组合物和一种或多种其他药剂。在某些实施例中，在不同时间给予在此提供的一种或多种药物组合物和一种或多种其他药剂。在某些实施例中，将在此提供的一种或多种药物组合物和一种或多种其他药剂一起制备在单一配制品中。在某些实施例中，分开制备在此提供的一种或多种药物组合物和一种或多种其他药剂。在某些实施例中，一种或多种其他药剂包括全反式维甲酸、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、博莱霉素、卡铂、卡培他滨、顺铂、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞苷、柔红霉素、多西他赛、去氧氟尿苷、阿霉素、表阿霉素、埃博霉素、依托泊苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、伊马替尼、氮芥、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、米托蒽醌、奥沙利铂、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星、长春花碱、长春新碱、长春地辛或长春瑞滨。在某些实施例中，一种或多种其他药剂包括环磷酰胺、羟基柔红霉素、长春灭瘟碱(长春新碱)、强的松或强的松龙(CHOP)的组合。在某些实施例中，一种或多种其他药剂包括利妥昔单抗和CHOP(R-CHOP)的组合。在某些实施例中，一种或多种其他药剂包括另一种反义寡核苷酸。在某些实施例中，另一种反义寡核苷酸是第二STAT3反义寡核苷酸。
在某些实施例中，一种或多种其他药剂包括分子靶向疗法。在某些实施例中，该分子靶向疗法是EGFR抑制剂、mTOR抑制剂、HER2抑制剂或VEGF/VEGFR抑制剂。在某些实施例中，EGFR抑制剂包括吉非替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、西妥昔单抗、帕尼单抗(panitumumbo)。在某些实施例中，mTOR抑制剂包括依维莫司和替西罗莫司。在某些实施例中，HER2抑制 剂包括曲妥珠单抗和拉帕替尼。在某些实施例中，VEGF/VEGFR抑制剂包括帕唑帕尼、贝伐单抗、舒尼替尼以及索拉非尼。
在某些实施例中，在此提供的一种或多种药物组合物与放射疗法一起给予。在某些实施例中，与放射疗法同时给予一种或多种药物组合物。在某些实施例中，在放射疗法之前给予一种或多种药物组合物。在某些实施例中，在放射疗法之后给予一种或多种药物组合物。在某些实施例中，贯穿放射疗法方案在不同时间点给予一种或多种药物组合物。
在某些实施例中，放射疗法有用于抑制肿瘤生长。在某些实施例中，放射疗法有用于增加总体存活率。在某些实施例中，与在此提供的一种或多种药物的给予结合使用的放射疗法与单独使用任一疗法相比是有利的，因为放射疗法和给予一种或多种药物两者对于以有效毒性达到有效的抗增殖反应而言是受限的。
在某些实施例中，内科医师设计一种治疗方案，该治疗方案包括放射疗法和给予在此提供的一种或多种药物组合物两者。在某些实施例中，内科医师设计一种治疗方案，该治疗方案包括放射疗法、给予在此提供的一种或多种药物组合物和给予一种或多种其他化疗剂。
实例
非限制性披露和通过引用结合
尽管在此描述的某些化合物、组合物以及方法已经根据某些实施例特定地进行了描述，但以下实例仅用以说明某些实施例并且不是旨在限制它们。在本申请中引用的各个参考文献通过引用以其全文结合在此。
实例1：用STAT3反义寡核苷酸治疗患有晚期B细胞淋巴瘤的患者的1期、开放标签研究
研究了STAT3反义寡核苷酸ISIS 481464的静脉输注在患有晚期B细胞 淋巴瘤的患者体内的效果。征募患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的患者进行此项研究。
相对于其肿瘤状态患者的入选标准是肿瘤对于至少一种现有技术的抗癌全身疗法而言应该是复发性的或难治的，和/或对于这些肿瘤而言不存在标准疗法；根据用于实体瘤的RECIST版本1.1、或根据用于非霍奇金淋巴瘤、用于NHL肿瘤的国际研讨会疗效标准(International Workshop Response Criteria for Non-Hodgkin’s Lymphoma for NHL tumors)(Cheson,B.D.等人，J.Clin.Oncol.(《临床肿瘤学杂志》)1999,17:1244；Cheson,B.D.等人，J.Clin.Oncol.(《临床肿瘤学杂志》)2007,25(5):579-86)或根据用于其他晚期癌症的适当标准，其疾病应该是可测量的或可评价的。RECIST(实体瘤的疗效评价标准(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors))是在实体瘤疾病的临床试验中使用的国际公认的一套准则。
一个符合以上标准的患者是一个患有DLBCL的63岁男性，在此将其指定为患者#1001。在开始治疗之前，患者#1001在隔膜的上方和下方都显示出多个高代谢腺病的区域，包括锁骨上区、左气旁管区、右乳内区、心包区、左乳内区、肝前区、腹膜后区以及肠系膜区。另外，该患者遭受疲劳、恶心、盗汗、劳累性气促以及周围神经病。该患者还记录了5-6天的右侧腹胀以及相关疼痛。按以下治疗期开始患者治疗，该治疗期包括在第一阶段期间给予3个负荷剂量的ISIS 481464：在周期0的第1、3和5天给予3-hr静脉输注的2mg/kg理想体重的ISIS 481464。使用迪瓦恩公式确定理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.(《药理学年评》)2000.34:1066-1069)：对于男性(以kg计)＝50+2.3kg/超过5英尺的英寸数；对于女性(以kg计)＝45.5+2.3kg/超过5英尺的英寸数。然后，在第二阶段中通过每周给予一次(周期1和以后)2mg/kg理想体重的ISIS 481464继续治疗，直到由于 任何其他原因出现疾病进展、不可接受的毒性或患者停止。在偶数周期结束时进行疾病评估。
在每个偶数周期时通过正电子发射断层术(PET)扫描评价肿瘤病灶，从周期2，第15天开始。根据RECIST准则，当所有靶标病灶都已经消失时，实现完全肿瘤响应。当与给药前肿瘤病灶直径的总和相比，所有肿瘤病灶的直径总和减少至少30％时，实现部分响应。如果有的话，按照RECIST准则计算病灶直径的总和(Eisenhauer,E.A.等人，Eur.J.Cancer(《欧洲癌症杂志》)45:228-247,2009)。
在用ISIS 481464治疗28天后，该患者报告疲劳和盗汗减少，并且很好地耐受治疗。
在用ISIS 481464治疗49天后，进行PET扫描并且显示肿瘤尺寸减少55％。肿瘤在所有区室中均减少，但是最为显著是在锁骨上区、旁管区、心包区以及肠系膜区中。
在用ISIS 481464治疗91天后，患者#1001进行第二次PET扫描并且发现在第一次描述中观察到的部分响应保持在肿瘤尺寸减少55％。
在用ISIS 481464治疗133天后，患者#1001进行第三次PET扫描并且发现该部分响应保持在肿瘤尺寸减少55％。
在用ISIS 481464治疗162天后，将另外的治疗中断了一个月，在此期间患者#1001进行第四次PET扫描并且该部分响应保持在肿瘤尺寸减少55％。患者#1001预定进行另外的扫描。
实例2：用STAT3反义寡核苷酸治疗患有晚期/转移性肝细胞癌的患者的1期、开放标签研究
在正在进行的临床试验中正在研究STAT3反义寡核苷酸ISIS 481464的静脉输注在患有晚期/转移性肝细胞癌的患者体内的效果。
在描述于这个方案中的研究中，将在第1周期间以1mg/kg的起始剂量向患有晚期/转移性肝细胞癌的患者静脉内3x地给予AZD9150，随后每周给予1x，并且将通过修改给予的单位剂量和/或给予间隔来在后续群组中逐步增强或逐渐减弱剂量强度，从而确定患有晚期/转移性肝细胞癌(HCC)的患者的最大耐受剂量和推荐的II期剂量。
在研究的剂量逐步增强阶段后，将征募另外的患者用于剂量扩张阶段，以进一步探索在所选的一个或多个剂量/计划下的安全性、可耐受性、药代动力学以及生物学活性。被包括在此项研究中的患者对于一线全身性治疗(索拉非尼)而言是复发性的、难治的、不能耐受的或不大可能从中受益的。
迄今为止，已经完成了1mg/kg和1.5mg/kg群组。从1mg/kg群组中，4个患者留在研究中病情稳定超过3个月。在1.5mg/kg群组中也已经看到了病情稳定。随着试验进展，将进一步监测这些患者和将来的患者的临床活性。
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