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1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201210595559.4 (22)申请日 2012.12.13 C08B 37/00(2006.01) (73)专利权人 大兴安岭林格贝寒带生物科技股 份有限公司 地址 165000 黑龙江省加格达奇长虹社区鑫 源小区阿加公路道北林格贝集团 (72)发明人 姚德坤 姚德利 张亚红 姚航 黄运生 吴海龙 (74)专利代理机构 北京润平知识产权代理有限 公司 11283 代理人 王崇 CN 101812137 A,2010.08.25, CN 1546054 A,2004.11.17, CN 1670036 A,2005.09.21, W。
2、O 2006/114019 A1,2006.11.02, 高向东等 .“宁夏枸杞新品种 “宁杞 1 号” 干 果中总糖及多糖类物质的系统分析” .药物生物 技术 .1994, 第 1 卷 ( 第 2 期 ), 第 43 页 . (54) 发明名称 一种枸杞多糖的纯化新方法 (57) 摘要 本发明公开一种枸杞多糖的纯化新方法， 该 方法为 ： 将枸杞果粉碎成粗粉， 加 15 倍量 85的 甲醇回流提取 120 分钟， 滤过 ； 滤液， 回收甲醇， 浓 缩至 3 波美， 用体积比 1 1 的盐酸水将浓缩 液pH值调至2.5， 放置20分钟， 滤过 ； 滤液上广谱 型大孔树脂吸附柱， 收集洗脱液， 。
3、回收甲醇， 浓缩 干燥得多糖半成品 ； 将所得多糖半成品上硅胶层 析柱， 并以体积比 3 1 的丙酮甲醇洗杂质， 继 用体积比 7 1 的丙酮甲醇洗脱， 收集洗脱液 ； 将所收集到的多糖洗脱液进行精制得枸杞多糖成 品， 其含量在 70以上。本发明方法的最大特点 是利用大孔吸附树脂 - 硅胶层析耦合方便快捷、 原料来源丰富、 生产成本低廉、 分离效果明显、 提 取纯度高。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 苏晓樱 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书3页 CN 103030708 B 2016.04.13 CN 103030708 B 1。
4、.一种枸杞多糖的纯化新方法， 其特征在于该方法包括如下步骤： 将枸杞果粉碎成粗粉， 加入粗粉质量1520倍量的85100甲醇回流提取120 180分钟， 滤过； 滤液回收甲醇后浓缩至35波美得浓缩液， 然后用体积比1： 1的盐酸： 水溶 液将浓缩液pH值调至2.53， 放置2040分钟后滤过； 滤液上HPD400、 HPD100、 DM-130或AB- 8广谱型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用520的甲醇洗杂质， 然后用50 80的甲醇洗脱， 得多糖半成品洗脱液， 多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖 半成品； 将所得多糖半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮:甲醇的体积比为13:1的。
5、丙酮与甲醇 混合物洗杂质， 然后用丙酮:甲醇的体积比为57:1的丙酮与甲醇混合物洗脱， 得多糖洗脱 液； 将多糖洗脱液进行精制得枸杞多糖； 其中， 所述硅胶层析步骤采用湿法装柱， 保留液面， 将半成品按重量1： 1拌活化后硅胶， 并将拌好的混合物置于硅胶柱上方， 洗脱流速每分钟0.1ml/g硅胶， 硅胶活化条件为， 110摄 氏度30分钟； 采用活性炭脱色、 重结晶方法进行精制， 按4g/100ml多糖洗脱液加入针剂活性 炭， 2540摄氏度搅拌2040分钟， 滤过； 滤液回收混合试剂后浓缩干燥得中间体； 中间体 用79倍甲醇40摄氏度热溶， 滤过： 滤液放凉析出晶体， 抽滤得枸杞多糖成品。 。
6、2.如权利要求1所述的枸杞多糖的纯化新方法， 其特征在于该方法包括如下步骤： 称取粉碎成粗粉的枸杞果， 加入粗粉质量20倍量的85甲醇回流提取180分钟， 滤过； 滤液回收甲醇后浓缩至5波美得浓缩液， 然后用体积比1： 1的盐酸： 水溶液将浓缩液pH值调 至3， 放置40分钟后滤过； 滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用5 的甲醇洗杂质， 然后用50的甲醇洗脱， 得多糖半成品洗脱液， 多糖半成品洗脱液回收甲醇 后浓缩干燥得多糖半成品； 将所得多糖半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮:甲醇的体积比为1: 1的丙酮与甲醇混合物洗杂质， 然后用丙酮:甲醇的体积比为5:1的丙酮与。
7、甲醇混合物洗脱， 得多糖洗脱液； 将多糖洗脱液进行精制得枸杞多糖。 3.如权利要求1或2所述的枸杞多糖的纯化新方法， 其特征在于该方法中所述大孔树脂 吸附步骤采用湿法装柱， 保留液面， 将调pH值后的滤液通过吸附柱， 流速每分钟0.05ml/g树 脂。 4.如权利要求1所述的枸杞多糖的纯化新方法， 其特征在于该方法中精制过程包括如 下步骤： 按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭， 25摄氏度搅拌40分钟， 滤过； 滤液回收混合试剂， 浓缩干燥得中间体； 中间体用9倍甲醇40摄氏度热溶， 滤过； 滤液放凉析出晶体， 抽滤得枸杞 多糖成品。 5.如权利要求4所述的枸杞多糖的纯化新方法， 其特征在。
8、于该方法中成品用7倍甲醇重 结晶， 过滤母液， 回收甲醇， 浓缩干燥得多糖终成品。 权利要求书 1/1 页 2 CN 103030708 B 2 一种枸杞多糖的纯化新方法 技术领域： 0001 本发明属于天然有机化学领域， 涉及一种枸杞多糖的纯化方法， 特别是涉及一种 利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法纯化枸杞多糖的新方法。 背景技术： 0002 枸杞， 学名： Lyciumchinense， 别名苟起子、 枸杞红实、 甜菜子、 西枸杞、 狗奶子、 红 青椒、 枸蹄子、 枸杞果、 地骨子、 枸茄茄、 红耳坠、 血枸子、 枸地芽子、 枸杞豆、 血杞子、 津枸杞， 是茄科枸杞属植物枸杞的果实。 含甜。
9、菜碱(betane)， 阿托品(aTCMLIBopine)， 天仙子胺 (gyoscyamine)， 枸杞多糖， 又含玉蜀黍黄质， 酸浆果红素， 隐黄质(cryptosxanthin)， 东莨 菪素(scopo-letin)， 胡萝 卜素， 硫胺素， 核黄素， 烟酸， 维生素C等， 具有滋阴明目、 除肝火、 利 于睡眠、 壮阳、 美白养颜、 延缓衰老等功效。 0003 枸杞多糖是从枸杞中提取而得的一种水溶性多糖。 已明确该多糖系蛋白多糖， 由 阿拉伯糖、 葡萄糖、 半乳糖、 甘露糖、 木糖、 鼠李糖6种单糖成分组成。 经研究表明， 枸杞多糖 是枸杞子调节免疫、 延缓衰老的主要活性成分， 可改善。
10、老年人易疲劳、 食欲不振和视力模糊 等症状， 并具有降血脂、 抗脂肪肝、 抗衰老等作用。 近年来， 人们发现天然植物枸杞中含有大 量的枸杞多糖， 由于其原料枸杞来源较广， 从中提取枸杞多糖已取得了可喜进展， 名称为 “一种枸杞多糖的提取分离方法” 的专利申请中便公开了将枸杞用烘干、 粉碎、 过筛处理， 超 声辅助提取并精制枸杞多糖的方法。 上述专利文献中的枸杞多糖提取工艺主要是经过原料 预处理、 超声波辅助萃取、 醇沉法分离等步骤精制而成， 虽然最后的枸杞多糖纯度很高， 但 其工艺本身耗费大， 实际应用效果远远不如大孔吸附树脂耦合硅胶层析法分离的效果。 发明内容 0004 本发明目的在于提供一。
11、种枸杞多糖的纯化新方法； 本发明目的还在于提供一种方 便快捷、 原料来源丰富、 生产成本低廉、 分离效果明显、 提取纯度高的利用大孔吸附树脂-硅 胶层析耦合法富集纯化枸杞多糖的方法。 0005 本发明目的是通过如下技术方案实现的。 0006 本发明枸杞多糖的纯化新方法包括如下步骤： 0007 将枸杞果粉碎成粗粉， 加入粗粉质量1520倍量的85100甲醇回流提取120 180分钟， 滤过； 滤液回收甲醇后浓缩至35波美得浓缩液， 然后用体积比11的盐酸水 溶液将浓缩液pH值调至2.53， 放置2040分钟后滤过； 滤液上HPD400、 HPD100、 DM-130或 AB-8广谱型大孔树脂吸附。
12、柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用520的甲醇洗杂质， 然后用 5080的甲醇洗脱， 得多糖半成品洗脱液， 多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得 多糖半成品； 将所得多糖半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮甲醇的体积比为131的丙同与 甲醇混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比为571的丙酮与甲醇混合物洗脱， 得多糖 洗脱液； 将多糖洗脱液进行精制得枸杞多糖， 其含量在70以上。 0008 本发明枸杞多糖的纯化新方法包括如下步骤： 说明书 1/3 页 3 CN 103030708 B 3 0009 称取粉碎成粗粉的枸杞果， 加入粗粉质量20倍量的85甲醇回流提取180分钟， 滤 过； 滤液回收甲醇后浓。
13、缩至5波美得浓缩液， 然后用体积比11的盐酸水溶液将浓缩液pH值 调至3， 放置40分钟后滤过； 滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用 5的甲醇洗杂质， 然后用50的甲醇洗脱， 得多糖半成品洗脱液， 多糖半成品洗脱液回收 甲醇后浓缩干燥得多糖半成品； 将所得多糖半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮甲醇的体积比 为11的丙酮与甲醇混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比为51的丙酮与甲醇混合物 洗脱， 得多糖洗脱液； 将多糖洗脱液进行精制得枸杞多糖。 0010 所述大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱， 保留液面， 将调pH值后的滤液通过吸附柱， 流速每分钟0.05ml/g树脂。 0。
14、011 所述硅胶层析步骤采用湿法装柱， 保留液面， 将半成品按重量11拌活化后硅胶， 并将拌好的混合物至于硅胶柱上方， 洗脱流速每分钟0.1ml/g硅胶。 硅胶活化条件为， 110摄 氏度30分钟。 0012 本发明中采用活性炭脱色、 重结晶方法进行精制。 按4g/100ml洗脱液加入针剂活 性炭， 2540摄氏度搅拌2040分钟， 滤过； 滤液， 回收混合试剂， 浓缩干燥得中间体； 中间 体用79倍甲醇40摄氏度热溶， 滤过： 滤液放凉析出晶体， 抽滤得枸杞多糖成品。 0013 本发明中精制过程包括如下步骤： 0014 按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭， 25摄氏度搅拌40分钟， 滤过。
15、； 滤液， 回收混合 试剂， 浓缩干燥得中间体； 中间体用9倍甲醇40摄氏度热溶， 滤过； 滤液放凉析出晶体， 抽滤 得枸杞多糖成品。 0015 本发明中精制过程中成品用7倍甲醇重结晶， 过滤母液， 回收甲醇， 浓缩干燥得多 糖半成品。 0016 本发明应用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法富集纯化枸杞多糖， 对枸杞多糖的吸 附选择性良好， 吸附快解析也快， 吸附容量较大； 原料来源丰富， 生产成本低廉， 分离效果明 显， 提取纯度高， 可以得到含量45以上的多糖半成品和含量70以上的多糖终产品， 克服 了常规提取率相对较低、 提取纯度低的缺点。 0017 本发明选用理化性质稳定、 表面积较大、 交。
16、换速度较快、 机械强度高、 抗污染能力 强、 热稳定性好的大孔吸附树脂， 不容于酸、 碱及有机媒， 对有机物选择性较好， 不受无机盐 类及强离子低分子化合物存在的影响， 可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附多糖， 吸 附快、 解析也快， 吸附容量较大。 0018 本发明选用硅胶层析法纯化并结合活性炭与重结晶精制， 分离效果更佳。 具体实施方式： 0019 实施例1： 0020 称取枸杞果10kg， 粉碎成粗粉， 加18倍量90的甲醇回流提取140分钟， 滤过； 滤 液， 回收甲醇， 浓缩至4波美， 用体积比11的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至2.8， 放置40分 钟， 滤过； 滤液上HPD100。
17、型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用15的甲醇洗杂质， 然后用70的甲醇洗脱， 得多糖半成品洗脱液， 多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得 多糖半成品； 将所得多糖半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮甲醇的体积比为21的丙酮与甲 醇混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比为61的丙酮与甲醇混合物洗脱， 得多糖洗脱 说明书 2/3 页 4 CN 103030708 B 4 液2L； 加入80g针剂活性炭， 30摄氏度搅拌30分钟， 滤过； 滤液， 回收混合试剂， 浓缩干燥得中 间体35g； 中间体用8倍甲醇40摄氏度热溶， 滤过： 滤液放凉析出晶体， 抽滤得枸杞多糖成品 20g， 含量78。 。
18、0021 实施例2： 0022 称取枸杞果15kg， 粉碎成粗粉， 加20倍量95的甲醇回流提取160分钟， 滤过； 滤 液， 回收甲醇， 浓缩至5波美， 用体积比11的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至3， 放置40分钟， 滤过； 滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用10的甲醇洗杂质， 然 后用60的甲醇洗脱， 得多糖半成品洗脱液， 多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多 糖半成品； 将所得多糖半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮甲醇的体积比为11的丙酮与甲醇 混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比为71的丙酮与甲醇混合物洗脱， 得多糖洗脱液 3.5L； 加入140g针剂活性。
19、炭， 40摄氏度搅拌40分钟， 滤过； 滤液， 回收混合试剂， 浓缩干燥得 中间体60g； 中间体用9倍甲醇40摄氏度热溶， 滤过： 滤液放凉析出晶体， 抽滤得枸杞多糖成 品32g， 含量76.3。 0023 实施例3： 0024 称取枸杞果20kg， 粉碎成粗粉， 加15倍量87的甲醇回流提取120分钟， 滤过； 滤 液， 回收甲醇， 浓缩至3波美， 用体积比11的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至2.5， 放置40分 钟， 滤过； 滤液上AB-8型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用5的甲醇洗杂质， 然 后用80的甲醇洗脱， 得多糖半成品洗脱液， 多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多 。
20、糖半成品； 将所得多糖半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮甲醇的体积比为31的丙酮与甲醇 混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比为51的丙酮与甲醇混合物洗脱， 得多糖洗脱液 5L； 加入200g针剂活性炭， 25摄氏度搅拌20分钟， 滤过； 滤液， 回收混合试剂， 浓缩干燥得中 间体70g； 中间体用8倍甲醇40摄氏度热溶， 滤过： 滤液放凉析出晶体， 抽滤得枸杞多糖成品 36g， 含量77.5。 0025 实施例4： 0026 称取枸杞果5kg， 粉碎成粗粉， 加20倍量98的甲醇回流提取160分钟， 滤过； 滤液， 回收甲醇， 浓缩至3波美， 用体积比11的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至2.6， 。
21、放置40分钟， 滤过； 滤液上DM-130型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用5的甲醇洗杂质， 然后 用50的甲醇洗脱， 得多糖半成品洗脱液， 多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖 半成品； 将所得多糖半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮甲醇的体积比为11的丙酮与甲醇混 合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比为71的丙酮与甲醇混合物洗脱， 得多糖洗脱液 1200ml； 加入48g针剂活性炭， 40摄氏度搅拌25分钟， 滤过； 滤液， 回收混合试剂， 浓缩干燥得 中间体20g； 中间体用7倍甲醇40摄氏度热溶， 滤过： 滤液放凉析出晶体， 抽滤得枸杞多糖成 品12g， 含量78.2。 说明书 3/3 页 5 CN 103030708 B 5 。