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1、(10)授权公告号 CN 102718650 B (45)授权公告日 2014.07.02 CN 102718650 B (21)申请号 201210191314.5 (22)申请日 2012.06.11 C07C 65/24(2006.01) C07C 51/42(2006.01) C07C 51/48(2006.01) A61K 31/192(2006.01) A61P 39/06(2006.01) (73)专利权人 中国科学院华南植物园 地址 510650 广东省广州市天河区五山乐意 居 (72)发明人 蒋跃明 杨宝 蒋国祥 (74)专利代理机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 4400。
2、1 代理人 刘明星 US 4910286 ,1990.03.20, 说明书第 1 栏第 49 行至第 8 栏第 29 行 . CN 102190692 A,2011.09.21, 说明书第 9-36 段, 图 1. Vinitha M. Thadhani et al.Novel entry into 5-decarboxydibenzofurans via Smiles rearrangement of the lichen para-depside, erythrin. Journal of Chemical Research .2010, 第 34 卷 ( 第 3 期 ), 第 154-1。
3、57 页 . (54) 发明名称 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸 及其制备方法和应用 (57) 摘要 本发明公开了 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸及其制备方法和应用。2-(2- 羟 基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸其结构式 如式 ()所示。本发明从荔枝果皮中制备分离 得到一个新的化合物 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰 基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸, 该化合物具有良好的抗氧 化活性, 其抗氧化活性显著强于食品行业常用的 合成抗氧化剂 BHT, 因此可用于制备抗氧化剂或 自由基清除剂, 具有广泛的应用前景。本发明对 于推动。
4、荔枝的深加工利用, 提升荔枝产品附加 值, 促进该行业的可持续发展具有重要的意义。 式 () 。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 马晓婧 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 (10)授权公告号 CN 102718650 B CN 102718650 B 1/1 页 2 1. 一种 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸的制备方法, 其特征在于, 包括以 下步骤 : 用体积分数40100%甲醇或乙醇水溶液浸提荔枝果皮, 将浸提液浓缩去除甲醇或 乙醇,。
5、 再加入水溶解, 先后用石油醚、 乙酸乙酯萃取, 将乙酸乙酯相浓缩得浸膏, 浸膏经硅胶 柱层析, 以氯仿 / 甲醇为洗脱剂, 从体积比 100/0 60/40 梯度洗脱, 收集氯仿 / 甲醇体积 比为 90/10 洗脱的馏分, 该馏分再经 Sephadex LH-20 凝胶柱层析, 以甲醇 / 水作为洗脱剂, 从体积比 0/100 100/0 梯度洗脱, 收集甲醇 / 水体积比 100/0 梯度洗脱的馏分, 该馏分再 上 C18 反相柱, 以甲醇 / 水作为洗脱剂, 从体积比 0/100 100/0 梯度洗脱, 收集甲醇 / 水 体积比 30/70 梯度洗脱的馏分, 即得到 2-(2- 羟基 。
6、-5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸 ; 所述的 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸的结构式如式 () 所示 2. 根据权利要求 1 所述的制备方法, 其特征在于, 所述的荔枝果皮是将新鲜的荔枝果 皮晒干或烘干后, 粉碎过 20 120 目筛的荔枝果皮粉。 3.根据权利要求1所述的制备方法, 其特征在于, 所述的用体积分数40100%甲醇或 乙醇水溶液浸提荔枝果皮, 甲醇或乙醇水溶液的用量是 5 20ml/g 荔枝果皮, 浸提的温度 为 25 80, 浸提时间为 3 24 小时。 4. 根据权利要求 1 所述的制备方法, 其特征在于, 所述的将浸提液浓缩去除甲醇。
7、或乙 醇, 再加入水溶解具体是将浸提液在 60 80下浓缩除去甲醇或乙醇, 再加入 1 3 倍体 积的水溶解。 5. 根据权利要求 1 所述的制备方法, 其特征在于, 所述的先后用石油醚、 乙酸乙酯萃 取, 是先用石油醚萃取 3 10 次, 再用乙酸乙酯萃取 3 10 次。 6. 荔枝果皮在制备 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102718650 B 2 1/5 页 3 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸及其制备方法 和应用 技术领域 : 0001 本发明属于天然产物领域, 具体涉及一种从荔枝中制备分离。
8、得到的新型具有抗氧 化活性的 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸及其制备方法和应用。 背景技术 : 0002 荔枝属于无患子科, 素有 “岭南果王” 之称, 为广东四大名果之一, 因其独特的口感 与良好的营养品质而深受消费者欢迎。我国是世界上最早栽培荔枝的国家, 已有两千多年 的栽培历史。荔枝果皮占到荔枝果实总重量的 15% 左右, 是荔枝加工的主要副产物。现有 研究表明, 荔枝果皮富含黄烷醇、 花色苷等重要生物活性物质。 这些物质具备良好的调节免 疫、 抑制肿瘤、 抗辐射、 抗衰老活性等。 由此可见, 荔枝果皮是良好的功能食品与化妆品的开 发原料。但目前, 有关于荔。
9、枝果皮生物活性物质组成的鉴定依然十分有限。 发明内容 : 0003 本发明的第一个目的是提供一种具有抗氧化活性的 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸。 0004 本发明的 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸, 其结构式如式 () 所示 : 0005 0006 式 () 。 0007 本发明的第二个目的是提供如式 () 所示的 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧 基 ) 苯甲酸的制备方法, 其特征在于, 包括以下步骤 : 用体积分数 40100% 甲醇或乙醇水 溶液浸提荔枝果皮, 将浸提液浓缩去除甲醇或乙醇, 再加入水溶解, 先后用。
10、石油醚、 乙酸乙 酯萃取, 将乙酸乙酯相浓缩得浸膏, 浸膏经硅胶柱层析, 以氯仿 / 甲醇为洗脱剂, 从体积比 100/060/40 梯度洗脱, 收集氯仿 / 甲醇体积比为 90/10 洗脱的馏分, 该馏分再经 Sephadex LH-20 凝胶柱层析, 以甲醇 / 水作为洗脱剂, 从体积比 0/100100/0 梯度洗脱, 收集甲醇 / 说 明 书 CN 102718650 B 3 2/5 页 4 水体积比 100/0 梯度洗脱的馏分, 该馏分再上 C18 反相柱, 以甲醇 / 水作为洗脱剂, 从体积 比 0/100100/0 梯度洗脱, 收集甲醇 / 水体积比 30/70 梯度洗脱的馏分,。
11、 即得到 2-(2- 羟 基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸。 0008 所述的荔枝果皮优选是将新鲜的荔枝果皮晒干或烘干后, 粉碎过 20120 目筛的 荔枝果皮粉。 0009 所述的用体积分数 40100% 甲醇或乙醇水溶液浸提荔枝果皮, 甲醇或乙醇水溶液 的用量是 520ml/g 荔枝果皮, 浸提的温度优选为 2580, 浸提时间为 324 小时。 0010 所述的将浸提液浓缩去除甲醇或乙醇, 再加入水溶解优选是将浸提液在 6080 下浓缩除去甲醇或乙醇, 再加入 13 倍体积的水溶解。 0011 所述的先后用石油醚、 乙酸乙酯萃取, 优选是先用石油醚萃取 310 次, 再用乙。
12、酸 乙酯萃取 310 次。 0012 本发明的第三个目的是提供荔枝果皮在制备2-(2-羟基-5-(甲氧羰基)苯氧基) 苯甲酸中的应用。 0013 本发明通过实验发现, 本发明的 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸具有 较好的抗氧化活性, 其抗氧化活性显著强于食品行业常用的合成抗氧化剂 BHT。 0014 因此本发明的第四个目的是提供 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸在 制备抗氧化剂或自由基清除剂中的应用。 0015 本发明的第五个目的是提供一种抗氧化剂或自由基清除剂组合物, 其特征在于, 含有有效剂量的 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基。
13、 ) 苯氧基 ) 苯甲酸作为活性成份。 0016 本发明从荔枝果皮中制备分离得到一个新的化合物 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸, 该化合物具有良好的抗氧化活性, 其抗氧化活性显著强于食品行业常用 的合成抗氧化剂 BHT, 因此可用于制备抗氧化剂或自由基清除剂, 具有广泛的应用前景。本 发明对于推动荔枝的深加工利用, 提升荔枝产品附加值, 促进该行业的可持续发展具有重 要的意义。 附图说明 : 0017 图 1 是 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸的抗氧化活性图。 具体实施方式 : 0018 以下实施例是对本发明的进一步说明, 而不是对本。
14、发明的限制。 0019 实施例 1 : 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸的制备分离和结构鉴定。 0020 一、 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸的制备分离 0021 1) 选料 : 选择新鲜荔枝, 去果肉、 果核, 收集荔枝果皮 ; 0022 2) 干燥粉碎 : 将收集的荔枝果皮晒干或烘干, 采用粉碎机粉碎成粉末, 过 20 目筛, 获得荔枝果皮粉 ; 0023 3) 浸提 : 将荔枝果皮粉加入 5 倍体积 (5ml/g 荔枝果皮粉) 的体积分数 40% 的甲醇 水溶液中, 在 80浸提 3 小时, 过滤, 收集过滤液 ; 0024 4)。
15、有机溶剂分级 : 将上述过滤液在60下浓缩除去甲醇, 加入其1倍体积的水, 先 后用与水等体积的石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇分别萃取 3 次 ; 选择乙酸乙酯相萃取液浓缩得 说 明 书 CN 102718650 B 4 3/5 页 5 浸膏用于后续纯化。 0025 5) 取乙酸乙酯相萃取液的浸膏 (60g) , 采用硅胶柱 (200 目, 1600g) 层析, 以氯仿 / 甲醇为洗脱溶剂, 从体积比 100/060/40 范围内梯度洗脱, 收集氯仿 / 甲醇体积比 90/10 梯 度洗脱的馏分, 再将该馏分上Sephadex LH-20凝胶柱 (100g) , 以甲醇/水为洗脱溶剂, 从体 积。
16、比 0/100100/0 范围内梯度洗脱, 收集甲醇 / 水体积比 100/0 梯度洗脱的馏分, 再将该馏 分上 C18 反相柱 (5.0g) 继续纯化, 以甲醇 / 水为洗脱溶剂, 从体积比 0/100100/0 范围内 梯度洗脱, 收集甲醇/水体积比为30/70梯度洗脱的馏分, 在6080蒸发浓缩干燥, 即得到 化合物 1(35.6mg) 。 0026 采用该方法获得的化合物 1 的产率为 3050mg/kg, 纯度为 8090%。 0027 二、 化合物 1 的结构鉴定 0028 化 合 物 1 : 无 色 晶 体, ESIMS 质 谱 结 果 表 明 该 化 合 物 分 子 量 为 2。
17、88.2。1H NMR(500MHz,CDCl3) 和 13C NMR(125MHz,CDCl 3) 见表 1 : 0029 表 1 : 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸的 13C 与1H 谱化学位移 0030 0031 综上所述, 鉴定化合物 1 的结构式如式 () 所示, 名称为 : 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰 基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸, 该化合物易溶于甲醇、 丙酮、 二甲基亚砜。 0032 说 明 书 CN 102718650 B 5 4/5 页 6 0033 式 () 。 0034 1) 选料 : 选择新鲜荔枝, 去果肉、 果核, 收集荔枝果皮 ;。
18、 0035 2) 干燥粉碎 : 将收集的荔枝果皮晒干或烘干, 采用粉碎机粉碎成粉末, 过 120 目 筛, 获得荔枝果皮粉 ; 0036 3) 浸提 : 将荔枝果皮粉加入 20 倍体积 (ml/g 荔枝果皮粉) 的体积分数为 100% 甲 醇水溶液, 在室温浸提 24 小时, 过滤, 收集滤过液 ; 0037 4)有机溶剂分级 : 将上述滤过液在80浓缩除去甲醇, 加入其3倍体积的水, 先后 用与水等体积的石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇分别萃取 10 次 ; 选择乙酸乙酯相萃取液浓缩后 得浸膏用于后续纯化。 0038 后续纯化步骤与实施例 1 相同, 由此得到并鉴定为 2-(2- 羟基 -5-(。
19、 甲氧羰基 ) 苯 氧基 ) 苯甲酸。 0039 采用该方法获得的2-(2-羟基-5-(甲氧羰基)苯氧基)苯甲酸的产率为7090mg/ kg, 纯度为 8090%。 0040 实施例 3 : 0041 1) 选料 : 选择新鲜荔枝, 去果肉、 果核, 收集荔枝果皮 ; 0042 2) 干燥粉碎 : 将收集的荔枝果皮晒干或烘干, 采用粉碎机粉碎成粉末, 过 60 目筛, 获得荔枝果皮粉 ; 0043 3) 浸提 : 将荔枝果皮粉加入 10 倍体积 (ml/g 荔枝果皮粉) 的体积分数为 40% 乙醇 水溶液, 在 50浸提 12 小时, 过滤, 收集滤过液 ; 0044 4)有机溶剂分级 : 将。
20、上述滤过液在70浓缩除去乙醇, 加入其2倍体积的水, 先后 用与水等体积的石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇分别萃取 6 次 ; 选择乙酸乙酯相萃取液浓缩后得 浸膏用于后续纯化。 0045 后续纯化步骤与实施例 1 相同, 得到并鉴定为 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧 基 ) 苯甲酸。 0046 采用该方法获得的2-(2-羟基-5-(甲氧羰基)苯氧基)苯甲酸的产率为6080mg/ kg, 纯度为 8090%。 0047 实施例 4 : 0048 1) 选料 : 选择新鲜荔枝, 去果肉、 果核, 收集荔枝果皮 ; 说 明 书 CN 102718650 B 6 5/5 页 7 0049 。
21、2) 干燥粉碎 : 将收集的荔枝果皮晒干或烘干, 采用粉碎机粉碎成粉末, 过 60 目筛, 获得荔枝果皮粉 ; 0050 3) 浸提 : 将荔枝果皮粉加入 10 倍体积 (ml/g 荔枝果皮粉) 的体积分数 100% 乙醇 水溶液, 在 50浸提 12 小时, 过滤, 收集滤过液 ; 0051 4)有机溶剂分级 : 将上述滤过液在70浓缩除去乙醇, 加入2倍体积的水, 先后用 与水等体积的石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇分别萃取 6 次 ; 选择乙酸乙酯相萃取液浓缩后得浸 膏用于后续纯化。 0052 后续纯化步骤与实施例 1 相同, 得到并鉴定为 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧 基。
22、 ) 苯甲酸。 0053 采用该方法获得的2-(2-羟基-5-(甲氧羰基)苯氧基)苯甲酸的产率为6080mg/ kg, 纯度为 8090%。 0054 实施例 5 : 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸的抗氧化活性评价 0055 采用1.1-二苯基-2-苦肼基 (DPPH) 自由基清除活性方法检测样品的抗氧化活性。 0056 测试方法细节如下 : 样品为 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯甲酸。 0057 将样品溶于甲醇配制成合适浓度。样品管为 0.1ml 样品 +2.9ml 0.1mmol/L DPPH 甲醇溶液 ; 对照管为 0.1ml 样品。
23、 +2.9ml 甲醇 ; 空白管为 0.1ml 样品溶剂 (甲醇) +2.9ml 0.1mmol/LDPPH 甲醇溶液。在室温下静置 30min 后测定 517nm 处的光吸收值, 以 BHT 作为阳 性对照。计算公式如下 : 0058 DPPH 自由基清除活性 1 (A样品 A对照)/A空白100% 0059 抗氧化活性结果如图 1 所示。结果表明, 2-(2- 羟基 -5-( 甲氧羰基 ) 苯氧基 ) 苯 甲酸的抗氧化活性显著强于食品行业常用的合成抗氧化剂 BHT。因此可以将其用于制备抗 氧化剂或自由基清除剂。 说 明 书 CN 102718650 B 7 1/1 页 8 图 1 说 明 书 附 图 CN 102718650 B 8 。