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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610275227.6 (22)申请日 2016.04.29 (71)申请人 宁波大学 地址 315211 浙江省宁波市江北区风华路 818号 (72)发明人 张金荣周成旭严小军陈海敏 骆其君朱鹏苗祚麻米悦 王杰 (74)专利代理机构 宁波奥圣专利代理事务所 (普通合伙) 33226 代理人 何仲 (51)Int.Cl. C07D 303/32(2006.01) C07D 301/32(2006.01) (54)发明名称 一种提取岩藻黄素用褐藻样品的前处理方 法 (57)摘。
2、要 本发明公开了一种提取岩藻黄素用褐藻样 品的前处理方法， 特点是具体步骤如下：（1） 去 杂： 将新鲜褐藻清除杂物后置清洗池中以清水充 分淋洗去除泥沙；（2） 盐渍： 在常温避光条件下， 将去杂后的褐藻置于食盐水中按浓度依次递增 梯度盐渍2-4次， 每次2-8小时；（3） 分装： 盐渍后， 取出分装密封袋， 抽真空， 置于低温处避光储存， 优点是具有提高褐藻中岩藻黄素的含量、 减少藻 体体积、 降低含水量和防腐等多种效果， 且盐渍 海藻制备岩藻黄素具有收率高和产品纯度高。 权利要求书1页 说明书5页 CN 105820142 A 2016.08.03 CN 105820142 A 1.一种提。
3、取岩藻黄素用褐藻样品的前处理方法， 其特征在于具体步骤如下： （1） 去杂： 将新鲜褐藻清除杂物后， 置于清洗池中用清水充分淋洗去除泥沙； （2） 盐渍： 在常温避光条件下， 将去杂后的褐藻置于食盐水中按浓度依次递增梯度盐渍 2-4次， 每次2-8小时； （3） 分装： 将盐渍后的褐藻取出分装密封袋， 抽真空， 置于低温处避光储存， 得到有机溶 剂法提取岩藻黄素用褐藻样品。 2.根据权利要求1所述的一种提取岩藻黄素用褐藻样品的前处理方法， 其特征在于： 所 述的常温为10-30。 3.根据权利要求1所述的一种提取岩藻黄素用褐藻样品的前处理方法， 其特征在于步 骤 （2） 中的盐渍采用梯度盐渍方。
4、法具体为： 将去杂后的褐藻置于质量浓度为10%的食盐水 中， 盐渍8小时； 再置于质量浓度为10%的食盐水中， 盐渍4小时； 最后置于饱和食盐水中， 盐 渍2小时。 4.根据权利要求1所述的一种提取岩藻黄素用褐藻样品的前处理方法， 其特征在于： 所 述褐藻为铜藻、 鼠尾藻、 羊栖菜、 海带、 马尾藻、 墨角藻、 鹅肠菜、 海蒿子、 昆布、 裙带菜、 铁钉 菜、 巨藻、 海黍子。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105820142 A 2 一种提取岩藻黄素用褐藻样品的前处理方法 技术领域 0001 本发明涉及一种褐藻样品的前处理方法， 尤其是涉及一种提取岩藻黄素用褐藻样 品的前处理方法。 背景。
5、技术 0002 岩藻黄素(fucoxanthin)， 亦称褐藻素、 岩藻黄质， 为海洋褐藻所含有的一种重要 的类胡萝 卜素， 在褐藻叶绿体的类囊体中参与光合作用， 起到光捕获和光传递的作用。 据药 理研究报道， 岩藻黄素具有多种生物学功效， 如预防老年痴呆、 抗癌、 抗炎、 预防糖尿病、 减 肥胖、 抗氧化等， 具有重要的药物开发价值， 可作为药品、 食品、 水产品饵料、 禽畜饲料等。 国 际上现已有以岩藻黄素为主要成分的保健产品、 食品、 饮料、 化妆品和岩藻黄素软胶囊上 市。 近年来， 主要以大型经济褐藻为原料进行岩藻黄素的提取和制备研究。 由于新鲜褐藻中 岩藻黄素的含量很低， 仅能约占鲜。
6、藻重量的万分之一， 因此， 尽管经济褐藻的生物量很大， 但是以新鲜褐藻为原料制备岩藻黄素， 出现了收率低 （少于20%） 和产品纯度也较低的问题， 如何有效提高新鲜经济褐藻中岩藻黄素的含量， 提高岩藻黄素的收率和产品纯度成为高纯 度岩藻黄素的工业化、 商业化的发展瓶颈。 0003 目前， 为了提取岩藻黄素， 褐藻样品前处理方法主要依靠冷冻法。 打捞后的新鲜褐 藻具有以下特点： 1、 含水量大 （高于90%） ； 2、 常温下易腐烂变质； 3、 直接采用冷冻法， 藻体体 积很大， 占冷库面积大； 4、 岩藻黄素的含量很低 （仅能约占鲜藻重量的万分之一） 。 因此， 亟 需一种制备工艺简单、 无污。
7、染、 低能耗的褐藻样品的前处理工艺操作方法。 发明内容 0004 本发明所要解决的技术问题是提供一种能提高褐藻中岩藻黄素收率和纯度， 同时 提高岩藻黄素保存期限的提取岩藻黄素用褐藻样品的前处理方法。 0005 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为： 一种提取岩藻黄素用褐藻样品的 前处理方法， 具体步骤如下： （1） 去杂： 将新鲜褐藻清除杂物后， 置于清洗池中用清水充分淋洗去除泥沙； （2） 在常温避光条件下， 将去杂后的褐藻置于食盐水中按浓度依次递增梯度盐渍2-4 次， 每次2-8小时； （3） 分装： 将盐渍后的褐藻取出分装密封袋， 抽真空， 置于低温处避光储存， 得到有机溶 剂法提取。
8、岩藻黄素用褐藻样品。 0006 所述的常温为10-30。 温度低， 避免藻体中岩藻黄素的损失。 0007 步骤 （2） 中的梯度盐渍方法具体为： 将去杂后的褐藻置于质量浓度为10%的食盐水 中， 盐渍8小时； 再置于质量浓度为10%的食盐水中， 盐渍4小时； 最后置于饱和食盐水中， 盐 渍2小时。 按该梯度盐渍， 褐藻中岩藻黄素收率和纯度达到最佳。 0008 所述褐藻为铜藻、 鼠尾藻、 羊栖菜、 海带、 马尾藻、 墨角藻、 鹅肠菜、 海蒿子、 昆布、 裙 带菜、 铁钉菜、 巨藻、 海黍子。 说明书 1/5 页 3 CN 105820142 A 3 0009 与现有技术相比， 本发明的优点在于：。
9、 本发明一种提取岩藻黄素用褐藻样品的前 处理方法， 该方法具有制备工艺简单、 无污染、 低能耗等特点。 新鲜褐藻经过本方法前处理 的过程中， 岩藻黄素在盐水中受到保护， 避免受到环境中氧气氧化而发生降解。 同时， 褐藻 样品在食盐水中脱水， 可减少藻体胞内水分， 降低细胞内多种酶活性， 避免岩藻黄素受到酶 作用而引起降解； 食盐进入海藻细胞中， 提高渗透压， 微生物的细胞脱水， 甚至造成大部分 微生物死亡， 避免了褐藻的腐烂变质， 在褐藻的储存过程中起到防腐和提高保存期限的作 用。 通过食盐水脱水提高了新鲜褐藻中岩藻黄素的含量， 在岩藻黄素的制备过程中， 提取溶 剂的用量减少， 低温真空蒸发所。
10、得到浓缩液的体积减少， 达到了增加岩藻黄素的析出量， 提 高了岩藻黄素产品纯度和收率的目标。 综上所述， 经过本方法处理后的海藻具有岩藻黄素 的含量高 （增加一倍以上） 、 藻体体积小、 含水量低 （35%60%） 和防腐等多种效果， 以该前处 理方法得到的海藻样品用于制备岩藻黄素具有收率高 （提高一倍以上） 和产品纯度高 （大于 85%） 的特点， 从而既降低了生产成本， 又提高褐藻中岩藻黄素的收率， 提高了褐藻来源岩藻 黄素产品的产量和质量， 以满足国内、 外市场对高纯度岩藻黄素的需求。 具体实施方式 0010 以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。 0011 一、 实验方法 1、 褐藻。
11、含水量的测定方法 根据2010年版中国药典附录中水分测定法第一法 （烘干法） ： 取供试品25g， 平铺于 干燥至恒重的扁形称量瓶中， 厚度不超过5mm； 疏松供试品不超过10mm； 精密称定， 打开瓶 盖在100105干燥5小时， 将瓶盖盖好， 移置干燥器中， 冷却30分钟， 精密称定， 再在上述 温度干燥1小时， 冷却， 称重， 至连续两次称重的差异不超过5mg为止。 根据减失的重量， 计算 供试品中含水量 （%） 。 用于测定盐渍后褐藻的含水量。 0012 2、 褐藻样品中岩藻黄素的有机溶剂提取方法 将丙酮、 甲醇或6099V/V%的乙醇水溶液加入到褐藻中， 避光浸提1-24小时后抽滤，。
12、 得到浸提液； 将褐藻反复浸提直至浸提液为无色， 合并浸提液， 将浸提液于15-40条件下 进行浓缩， 直至溶液中出现大量沉淀， 过滤除去沉淀得滤液， 将滤液于4-30低温结晶2- 72h， 过滤即得红色固体岩藻黄素产品。 0013 3、 褐藻中岩藻黄素含量的测定 实验方法： 采用HPLC法。 0014 液相色谱条件： 所用仪器： Waters2695高效液相色谱仪 液相条件： 固定相为YMC-PackODS-A柱 （2504.6mm， 5 m） ； 柱温： 25； 流速： 1mL/ min； 检测波长： 450nm； 进样量： 10uL； 流动相： A:甲醇， B:水， 梯度洗脱： A相 （。
13、体积%） ， 0- 40min （20-90） ， 40-50min （90） 。 0015 4、 岩藻黄素产品收率的计算 收率 （%） =m1/m0*100% M0：提取前， 褐藻样品中岩藻黄素的总质量 （mg） ； M1：制备后， 得到岩藻黄素的总质量 （mg） 。 说明书 2/5 页 4 CN 105820142 A 4 0016 二、 具体实施例 实施例1 一种提取岩藻黄素用铜藻样品的前处理方法， 具体步骤如下： （1） 将新鲜铜藻清除杂物后置于清洗池中以清水充分淋洗去除泥沙； （2） 将净藻置于10wt%食盐水中盐渍8小时， 再转缸至饱和食盐水溶液中盐渍2小时， 将 1kg盐渍后铜藻。
14、分装密封袋内， 抽真空， 常温避光处保存； 同时另取一份净藻置于10wt%碳酸 钠溶液中盐渍8小时， 再转缸至饱和碳酸钠溶液中盐渍2小时， 将1kg盐渍铜藻分装密封袋， 抽真空， 常温避光处保存； 再另取一份净藻置于饱和硫酸钠溶液中盐渍8小时， 再转缸至饱 和硫酸钠溶液中盐渍2小时， 将1kg盐渍铜藻分装密封袋， 抽真空， 常温避光处保存。 0017 采用上述溶剂提取和低温析出法从盐渍铜藻中制备高纯度岩藻黄素。 分别取等量 盐渍前、 食盐盐渍后的铜藻样品、 饱和碳酸钠处理铜藻样品、 饱和硫酸钠处理铜藻样品进行 含水量和保存期限的测定， 然后分别利用盐渍前、 盐渍后的铜藻样品、 饱和碳酸钠处理铜。
15、藻 样品、 饱和硫酸钠处理铜藻样品提取岩藻黄素， 测定铜藻中岩藻黄素的含量、 岩藻黄素的纯 度和岩藻黄素的收率， 测定结果如下表1所示， 表1铜藻的测定结果 注： -为样品放置时间很短 （少于10小时） 。 0018 实施例2 一种提取岩藻黄素用羊栖菜样品的前处理方法， 具体步骤如下： （1） 将新鲜羊栖菜清除杂物后置于清洗池中以清水充分淋洗去除泥沙； （2） 将净藻置于20wt%食盐水中盐渍4小时， 再转缸至饱和食盐水溶液中盐渍2小时， 将 1kg盐渍后羊栖菜分装密封袋内， 抽真空， 常温避光处保存； 同时另取一份净藻置于20wt%碳 酸钠溶液中盐渍4小时， 再转缸至饱和碳酸钠溶液中盐渍2小。
16、时， 将1kg盐渍羊栖菜分装密封 袋， 抽真空， 常温避光处保存； 再另取一份净藻置于20wt%氯化钾溶液中盐渍4小时， 再转缸 至饱和氯化钾溶液中盐渍2小时， 将1kg盐渍羊栖菜分装密封袋， 抽真空， 常温避光处保存。 说明书 3/5 页 5 CN 105820142 A 5 0019 采用溶剂提取和低温析出法从盐渍羊栖菜中制备高纯度岩藻黄素。 分别取等量盐 渍前、 食盐盐渍后的羊栖菜样品、 饱和碳酸钠处理羊栖菜样品， 进行含水量和保存期限的测 定， 然后分别利用盐渍前、 食盐盐渍后的羊栖菜样品、 饱和碳酸钠处理羊栖菜样品、 饱和氯 化钾处理羊栖菜样品提取岩藻黄素， 测定褐藻中岩藻黄素的含量。
17、、 岩藻黄素的纯度和岩藻 黄素的收率， 测定结果如下表2所示。 0020 表2羊栖菜的测定结果 注： -为样品放置时间很短 （少于10小时） 。 0021 实施例3 一种提取岩藻黄素用马尾藻样品的前处理方法， 具体步骤如下： （1） 将新鲜马尾藻清除杂物后置于清洗池中以清水充分淋洗去除泥沙； （2） 将净藻置于10wt%的食盐水中， 盐渍8小时； 再置于20wt%的食盐水中， 盐渍4小时； 最 后置于饱和食盐水中， 盐渍2小时， 将1kg盐渍后马尾藻分装密封袋内， 抽真空， 常温避光处 保存； 同时另取一份净藻置于10wt%的碳酸钠溶液中， 盐渍8小时， 再置于20wt%碳酸钠溶液 中盐渍4小。
18、时， 再转缸至饱和碳酸钠溶液中盐渍2小时， 将1kg盐渍马尾藻分装密封袋， 抽真 空， 常温避光处保存； 再另取一份净藻置于10wt%氯化钾溶液中盐渍8小时， 再置于20wt%氯 化钾溶液中盐渍4小时， 再转缸至饱和氯化钾溶液中盐渍2小时， 将1kg盐渍马尾藻分装密封 袋， 抽真空， 常温避光处保存。 0022 采用溶剂提取和低温析出法从盐渍马尾藻中制备高纯度岩藻黄素。 分别取等量盐 渍前、 食盐盐渍后的马尾藻样品、 饱和碳酸钠处理马尾藻样品， 进行含水量和保存期限的测 定， 然后分别利用盐渍前、 食盐盐渍后的马尾藻样品、 饱和碳酸钠处理马尾藻样品、 饱和氯 化钾处理马尾藻样品提取岩藻黄素， 。
19、测定褐藻中岩藻黄素的含量、 岩藻黄素的纯度和岩藻 黄素的收率， 测定结果如下表3所示。 0023 表3马尾藻的测定结果 说明书 4/5 页 6 CN 105820142 A 6 注： -为样品放置时间很短。（少于10小时） 。 0024 由上述表1-3可知， 经过本方法前处理后的海藻具有岩藻黄素含量高 （增加一倍以 上） 、 藻体体积小、 含水量低 （35%60%） 和防腐等多种效果， 以该前处理方法得到的海藻样 品用于有机溶剂法制备岩藻黄素， 具有收率高 （提高一倍以上） 和产品纯度高 （大于85%） 的 效果， 从而既降低了生产成本， 又提高褐藻中岩藻黄素的收率， 提高了褐藻来源岩藻黄素产。
20、 品的产量和质量。 并且食盐水处理褐藻具有以下优点： 1、 食盐水安全性高， 可食用， 食盐残 留不会增加褐藻的毒性； 2、 食盐作为大宗商品， 经济实惠， 简单易得； 3、 食盐水为中性， 避免 岩藻黄素遇酸、 遇碱而降解。 0025 上述海藻除铜藻和羊栖菜外， 还包括鼠尾藻、 海带、 墨角藻、 鹅肠菜、 海蒿子、 昆布、 裙带菜、 铁钉菜、 巨藻， 在此不一一例举。 0026 当然， 上述说明并非对本发明的限制， 本发明也并不限于上述举例。 本技术领域的 普通技术人员在本发明的实质范围内做出的变化、 改型、 添加或替换， 也应属于本发明保护 范围。 说明书 5/5 页 7 CN 105820142 A 7 。