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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610357119.3 (22)申请日 2016.05.26 (71)申请人 青岛农业大学 地址 266109 山东省青岛市城阳区长城路 700号 (72)发明人 张敏贺淑文郝磊娜程顺峰 (74)专利代理机构 北京市诚辉律师事务所 11430 代理人 唐宁 (51)Int.Cl. C07K 14/00(2006.01) A61K 38/16(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 31/12(2006.01) (54)发明名称 一种抗菌肽CSTC。
2、24及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种抗菌肽CSTC24及其应用， 具 体涉及一种抗菌肽， 其特征在于： 所述抗菌肽的 序列如SEQIDNo.1所示。 该抗菌肽可有效杀伤 创伤弧菌、 藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌三种鱼 类致病菌， 以及传染性脾肾坏死病毒。 本发明的 抗菌肽经实验验证效果优异。 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 CN 105777875 A 2016.07.20 CN 105777875 A 1.一种抗菌肽， 其特征在于： 所述抗菌肽的序列如SEQIDNo.1所示。 2.一种如权利要求1所述的抗菌肽在制备抑制细菌的药物中的应用。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在。
3、于， 所述细菌为鱼类致病菌， 优选为创伤弧菌、 藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌。 4.一种如权利要求1所述的抗菌肽在制备抗病毒的药物中的应用。 5.一种如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述病毒选自传染性脾肾坏死病毒。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105777875 A 2 一种抗菌肽CSTC24及其应用 技术领域 0001 本发明涉及分子微生物学领域， 具体的说是一种抗菌肽及其应用。 背景技术 0002 近年来， 随着水产养殖规模的不断扩大和养殖环境的不断恶化， 各种病害也随之 频繁发生。 目前水产养殖病害控制仍以传统的抗生素药物为主。 长期使用抗生素不仅使细 菌等病原产生耐药性， 。
4、还造成药物在动物体内超量残留和养殖环境的严重污染， 已严重影 响到我国食品安全与养殖业的健康发展。 因此， 寻找能够替代传统抗生素药物的抗菌物质， 实现环境无污染、 水产品无药物残留的目标， 已成为目前养殖业健康发展的迫切需求。 抗菌 肽几乎是所有生命物种都有的重要免疫分子,具有广谱抗菌活性和抗病毒、 抗真菌、 抗寄生 虫及抗肿瘤等生物活性， 并且抗菌肽具有不易产生耐药性、 热稳定性强等传统抗生素药物 不可替代优势， 因而越来越受到人们的关注。 最近研究发现， 人类组织因子途径抑制物 (tissuefactorpathwayinhibitor,TFPI)的C末端衍生肽具有广谱抗菌和抗病毒作用，。
5、 鱼类TFPI的研究仅限于美国红鱼， 研究发现其重组蛋白和TFPI-1的C末端衍生肽对迟缓爱 德华氏菌具较强的杀菌作用。 发明内容 0003 为了克服上述缺陷， 本发明一方面提供了一种抗菌肽， 其特征在于： 所述抗菌肽的 序列如SEQIDNo.1所示。 0004 进一步地， 本发明的另一个方面提供了如上所述的抗菌肽在制备抑制细菌的药物 中的应用。 0005 进一步地， 所述细菌为鱼类致病菌， 优选为创伤弧菌、 藤黄微球菌和金黄色葡萄球 菌。 0006 进一步地， 本发明的另一个方面提供了如上所述的抗菌肽在制备抗病毒的药物中 的应用。 0007 进一步地， 所述病毒选自传染性脾肾坏死病毒。 00。
6、08 有益效果 0009 本发明的抗菌肽具有高效抑菌作用， 可以有效抑制多种致病菌和病毒， 因此可以 应用于鱼类病害防治。 具体实施方式 0010 下面结合实施例对本发明作进一步说明。 实施例旨在对本发明进行举例描述， 而 非以任何形式对本发明进行限制。 0011 实施例1 0012 本发明的抗菌肽CSTC24具序列表SEQIDNo.1中的氨基酸序列。 0013 序列SEQIDNo.1为： RRHCIKKCMKSRKHNERMIRIRRK 说明书 1/3 页 3 CN 105777875 A 3 0014 序列 0015 (a)序列特征： 0016 长度： 24 0017 类型： 氨基酸序列 。
7、0018 链型： 单链 0019 拓扑结构： 线性 0020 (b)分子类型： 蛋白质 0021 (c)假设： 否 0022 (d)反义： 否 0023 (e)最初来源： 人工合成 0024 本实施例合成的抗菌肽CSTC24按照Fmoc固相多肽合成法， 最终得到纯度大于90 的抗菌肽CSTC24。 合成时将一个Fmoc-氨基酸衍生物共价交联到树脂上， 经过树脂溶胀， 脱 保护， 称料， 投料， 反应后洗涤， 检测， 合成完毕后的洗涤和干燥后再连接下一个氨基酸， 直 至连完最后一个氨基酸， 即得到抗菌肽CSTC24的序列， 最后脱除N端Fmoc保护的氨基酸上面 的保护基Fmoc， 使N端裸露出来。
8、， 并切除树脂， 即得到纯化的抗菌肽CSTC24。 经检测， 所得抗 菌肽的序列如SEQIDNo.1所示。 本实施例的抗菌肽由苏州泰米克生物科技有限公司(苏 州， 中国)合成。 0025 实施例2 0026 抗菌肽CSTC24的应用 0027 1)创伤弧菌、 藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌的制备。 在LB培养基中培养创伤弧菌、 藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌分别至OD600为0.80， 然后室温离心(5000g)10min， 收集菌体， 将其悬浮于LB中至终浓度为2106CFU/ml。 0028 所述PBS组成成分按重量百分比计 ： 0 .8NaCl ， 0 .02KCl ， 0 .358 ， Na2。
9、HPO4.12H2O， 0.024NaH2PO4。 0029 2)抗菌肽CSTC24的杀菌活性。 将50 l上述步骤1)的菌液加入96孔细胞培养板中， 与倍比稀释的CSTC24或PBS混合， 28培养24h。 结果发现， CSTC24对创伤弧菌、 藤黄微球菌 和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为： 300 M， 5 M和40 M； 最小杀菌浓度为： 300 M， 10 M和80 M， 而PBS组则完全不能抑制细菌生长。 0030 3)抗菌肽CSTC24的抗病毒活性。 将95 M的CSTC24或PBS与1ml传染性脾肾坏死病毒 (2108CFU/ml)的PBS悬液混合， 室温放置4h。 将实验用鱼半滑舌鳎分成两组， 每组15条， 然 后将传染性脾肾坏死病毒与CSTC24(实验组)或PBS(对照组)的混合物腹腔注射半滑舌鳎， 在注射后3d和5d分别在无菌条件下取鱼的脾脏， 提取基因组DNA， 利用绝对荧光定量PCR检 测病毒拷贝数。 结果发现， 与对照组相比， 实验组病毒的拷贝数在感染后3d和5d分别下降了 1.25和106倍。 说明CSTC24对传染性脾肾坏死病毒具有显著的杀伤作用。 说明书 2/3 页 4 CN 105777875 A 4 0031 说明书 3/3 页 5 CN 105777875 A 5 0001 序列表 1/1 页 6 CN 105777875 A 6 。