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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610155359.5 (22)申请日 2016.03.18 (71)申请人 河南省农业科学院芝麻研究中心 地址 450002 河南省郑州市金水区花园路 116号 (72)发明人 许兰杰梁慧珍余永亮牛永光 董薇张收良李红莲 (74)专利代理机构 河南科技通律师事务所 41123 代理人 樊羿韩松 (51)Int.Cl. C07D 311/36(2006.01) C07D 311/40(2006.01) C07H 17/07(2006.01) C07H 1/08(2006.0。
2、1) G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 大豆异黄酮组分提取及测定方法 (57)摘要 本发明属涉及一种大豆异黄酮组分提取方 法， 包括以下步骤：（1） 向所得大豆粉中加入20 30倍于其重量的体积百分浓度为90%的甲醇溶 液；（2） 将步骤 （1） 所得混合物于6070条件下 超声波处理， 再离心46min， 所得上清液即为大 豆苷、 黄豆黄苷和染料木苷的提取液；（3） 将步骤 （1） 所得混合物于6070条件下机械震荡， 再 离心46min， 所得上清液即为染料木素、 黄豆苷 元的提取液。 提取之后再进行组分测定， 包括制 作标准曲线、 组分测定等步骤。 本发明对大豆提。
3、 取物中异黄酮组分的高效液相色谱测定方法进 行了系统的研究， 并对样品的前处理条件进行探 索， 可有效测定大豆提取物中各异黄酮组分的含 量。 权利要求书1页 说明书7页 附图5页 CN 105777692 A 2016.07.20 CN 105777692 A 1.一种大豆异黄酮组分提取方法， 其特征在于， 包括以下步骤： （1） 将大豆粉碎， 过0.35 m筛， 向所得大豆粉中加入2030倍于其重量的体积百分浓度 为90%的甲醇溶液； （2） 将步骤 （1） 所得混合物于6070条件下超声波处理7080min， 再以8000 12000rpm的离心速度离心46min， 去固余物， 所得上清液。
4、即为大豆苷、 黄豆黄苷和染料木 苷的提取液； （3） 将步骤 （1） 所得混合物于6070条件下机械震荡7080min， 再以8000 12000rpm的离心速度离心46min， 去除固余物， 所得上清液即为染料木素、 黄豆苷元的提 取液。 2.根据权利要求1所述大豆异黄酮组分提取方法， 其特征在于： 步骤 （1） 所述甲醇溶液 是大豆粉重量的25倍。 3.一种大豆异黄酮组分测定方法， 其特征在于， 包括以下步骤： （1） 制作标准曲线： 取异黄酮组分染料木素、 大豆苷、 黄豆黄苷、 染料木苷、 黄豆苷元的标准品分别溶于无 水甲醇中， 作为标准溶液， 并配置成一定的梯度浓度， 再利用液相色谱仪。
5、分别制作出各组分 对应的标准曲线； （2） 异黄酮组分测定 分别取权利要求1中步骤 （2） 和步骤 （3） 所得上清液送入液相色谱仪， 结合上步所得大 豆苷、 黄豆黄苷、 染料木苷、 染料木素、 黄豆苷元的标准曲线， 得到各组分含量。 4.根据权利要求3所述大豆异黄酮组分测定方法， 其特征在于： 在利用液相色谱仪制作 标准曲线和组分测定过程中， 所述染料木素的检测波长： 260nm， 所述大豆苷的检测波长： 248nm， 所述黄豆黄苷的检测波长： 257nm， 所述黄豆苷元的检测波长： 250nm， 所述染料木苷 的检测波长： 260nm。 5.根据权利要求3所述大豆异黄酮组分测定方法， 其特。
6、征在于： 所述液相色谱仪的参数 为： 色谱柱： 安捷伦L1260， EclipseXDB-C18-USPL1分析柱， 规格： 4.6250mm， 粒径： 5 m； 柱温： 4042； 进样体积： 10 L； 保留时间： 35min； 流速： 1mL/min； 流动相： 体积百分浓度 0.1%乙酸水溶液和100%甲醇； 梯度洗脱： 020min、 体积百分比2971%甲醇， 2020.01 min、 体积百分比7090%甲醇， 20.0122min、 体积百分比9090%甲醇， 22.022.01 min、 体积百分比9030%甲醇， 22.0133.0min、 体积百分比3030%甲醇。 6.。
7、根据权利要求3所述大豆异黄酮组分测定方法， 其特征在于： 步骤 （2） 所述液相色谱 仪的条件如下： 流动相比例： 体积百分浓度71%甲醇， 流量： 1mL/min， 进样体积： 10 L， 保留时 间： 35min， 柱温4042。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105777692 A 2 大豆异黄酮组分提取及测定方法 技术领域 0001 本发明属于农作物提取技术领域， 具体涉及一种大豆异黄酮组分提取及测定方 法。 背景技术 0002 大豆异黄酮是黄酮类化合物， 是大豆生长过程中形成的一类次级代谢产物， 是一 种生物活性物质。 由于是从植物中提取， 且与雌激素有相似结构， 因此， 大豆异。
8、黄酮又称植 物雌激素。 大豆异黄酮的雌激素作用影响到激素分泌、 代谢生物学活性、 蛋白质合成、 生长 因子活性等， 是天然的癌症化学预防剂。 随着人们生活水平的提高， 对天然生物活性物质的 需求正逐渐增大， 大豆异黄酮对人体生理代谢有益的调节作用及丰富的大豆资源， 为其开 发利用展示了广泛的市场前景， 目前正越来越受到世界各国的关注。 大豆异黄酮是多酚类 混合物， 大豆异黄酮的组成、 存在形式主要包括染料木素、 大豆黄素和黄豆黄素， 天然情况 下它们主要以7-0-葡萄糖甙形式存在。 大豆提取物中大豆异黄酮的含量是产品质量的关键 指标之一， 也是大豆异黄酮产品研究开发中首先必需解决的问题。 00。
9、03 我国大豆资源丰富， 有很大的发展潜力。 大豆在我国的可种植地区广泛， 但是种植 具有较强的区域性， 俗话 “百里不引豆” ， 因此， 不同地区生产的大豆质量参差不齐， 其异黄 酮含量也有很大差异。 目前， 国家标准依据不同指标将大豆划分等级， 但未对异黄酮的含量 进行规定。 不同等级的大豆价格差异大， 鉴于异黄酮的高附加值， 把异黄酮含量列入划分大 豆等级的标准具有实际意义。 因此， 首先就需要建立一种简便、 快捷的测定异黄酮含量的方 法， 目前的测定方法主要有比色法、 纸色谱法、 薄层色谱法、 气相色谱法、 HPLC法等， 比色法 干扰多， 专一性差， 测定结果偏差较大， 并需要进行较。
10、为复杂的样品前处理； 纸色谱法及薄 层色谱法存在分离效果差， 定量不准确等缺点， 气相色谱法采用了样品衍生后进行测定， 存 在操作繁琐， 条件不易控制、 杂质干扰严重等问题。 发明内容 0004 针对上述问题， 本发明对大豆提取物中异黄酮组分的高效液相色谱测定方法进行 了系统的研究， 并对样品的前处理条件进行探索， 提供了一种大豆异黄酮组分含量的测定 方法， 可有效测定大豆提取物中各异黄酮组分的含量， 为大豆品质分级提供可靠的依据。 0005 为解决以上技术问题， 本发明通过以下技术方案实现： 设计一种大豆异黄酮组分提取方法， 包括以下步骤： （1） 将大豆粉碎， 过0.35 m筛， 向所得大。
11、豆粉中加入2030倍 （优选25倍） 于其重量的体 积百分浓度为90%的甲醇溶液； （2） 将步骤 （1） 所得混合物于6070条件下超声波处理7080min， 再以8000 12000rpm的离心速度离心46min， 去除固余物， 所得上清液即为大豆苷、 黄豆黄苷和染料 木苷的提取液； （3） 将步骤 （1） 所得混合物于6070条件下机械震荡7080min， 再以8000 说明书 1/7 页 3 CN 105777692 A 3 12000rpm的离心速度离心46min， 去除固余物， 所得上清液即为染料木素、 黄豆苷元的提 取液。 0006 研究表明大豆异黄酮主要包括染料木素、 大豆苷、。
12、 黄豆黄苷、 染料木苷， 这几种成 分可以表征出异黄酮含量的高低， 并用以评价大豆品质高低。 0007 设计一种测定大豆异黄酮组分含量的方法， 包括以下步骤： （1） 制作异黄酮各个组分的标准曲线： 将异黄酮各个组分的标准品分别溶于无水甲醇中， 作为标准溶液， 并配置成一定的梯 度浓度， 再利用液相色谱分别制作出各组分对应的标准曲线； （2） 异黄酮组分测定 分别取权利要求1中步骤 （2） 和步骤 （3） 所得上清液送入液相色谱仪器， 结合上步所得 大豆苷、 黄豆黄苷、 染料木苷、 染料木素、 黄豆苷元的标准曲线， 得到各组分含量。 0008 液相色谱仪检测条件如下： 色谱柱： 安捷伦L126。
13、0， EclipseXDB-C18-USPL1分析 柱， 规格 （mm） ： 4.6250， 粒径： 5 m； 柱温： 4042； 进样体积： 10 L； 保留时间： 35min； 流动 相： 0.1%(v/v)乙酸水溶液(A)和100%甲醇(B)； 流速： 1mL/min； 梯度洗脱： 020min、 29 71%B(v/v)， 2020.01min、 7090%B(v/v)， 20.0122min、 9090%B(v/v)， 22.0 22.01min、 9030%B(v/v)， 22.0133.0min、 3030%B(v/v)。 0009 所述染料木素的检测波长： 260nm， 大豆苷。
14、的检测波长： 248nm， 黄豆黄苷的检测波 长： 257nm， 黄豆苷元的检测波长： 250nm， 染料木苷的检测波长： 260nm。 0010 优选的， 步骤 （2） 所述液相色谱的条件如下： 流动相比例： 71%甲醇， 流量： 1mL/min， 进样体积： 10 L， 保留时间： 35min， 柱温4042。 0011 本发明具有以下积极有益技术效果： 本发明对大豆提取物中异黄酮组分的高效液相色谱测定方法进行了长期系统的分析 研究， 并对样品的前处理条件进行了大量的有益的探索试验， 提供了一种快速、 简便、 高效、 准确测定大豆异黄酮组分含量的方法， 可有效测定大豆提取物中各异黄酮组分的。
15、含量， 能 为大豆品质分级提供可靠的依据。 附图说明 0012 图1为本发明染料木素的HPLC图； 图2为本发明染料木素的标准曲线图； 图3为本发明大豆苷的HPLC图； 图4为本发明大豆苷的标准曲线图； 图5为本发明黄豆黄苷的HPLC图； 图6为本发明黄豆黄苷的标准曲线图； 图7为本发明黄豆苷元的HPLC图； 图8为本发明黄豆苷元的标准曲线图； 图9为本发明染料木苷的HPLC图； 图10为本发明染料木苷的标准曲线图。 具体实施方式 说明书 2/7 页 4 CN 105777692 A 4 0013 为了使本发明的目的、 技术方案及优点更加清楚明白， 以下结合具体实施例， 对本 发明进一步详细说。
16、明。 应当理解， 此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明， 并不用于 限定本发明。 以下实施例中所涉及的原料， 如无特别说明均为市售， 所涉及检测方法如无特 别说明， 则均为常规方法。 0014 大豆样品： 豫豆22号； 仪器： 安捷伦L1260高效液相色谱仪， AL204梅特勒-托利多电子天平 （万分之一） ， 数显 恒温超声波 （KQ3200DE） ， 电热恒温干燥箱 （DHG-9053A） ， 摇床 （IS-RDD3） 。 0015 药品及溶剂： HPLC分析使用的流动相甲醇、 纯水为色谱级， 甲醇、 无水乙醇为分析 纯， 异黄酮组分标准品购置于中国药品生物制品检定所和Sigma公司。。
17、 0016 实施例1 一种大豆异黄酮组分含量的测定方法， 包括以下步骤： 一、 异黄酮各个组分标准曲线的制作： 色谱柱： 安捷伦L1260， EclipseXDB-C18-USPL1分析柱， 规格 （mm） ： 4.6250， 粒径： 5 m； 柱温： 42； 染料木素的检测波长： 260nm， 大豆苷的检测波长： 248nm， 黄豆黄苷的检测波 长： 257nm， 黄豆苷元的检测波长： 250nm， 染料木苷的检测波长： 260nm； 进样体积： 10 L； 保留 时间： 35min； 流动相： 0.1%(v/v)乙酸水溶液(A)和100%甲醇(B)； 流速： 1mL/min； 梯度洗 脱：。
18、 020min、 2971%B(v/v)， 2020.01min、 7090%B(v/v)， 20.0122min、 9090% B(v/v)， 22.022.01min、 9030%B(v/v)， 22.0133.0min、 3030%B(v/v)。 0017 准确称取各个异黄酮标准品5mg， 置于100mL容量瓶中， 用无水甲醇 （色谱纯） 溶解 （超声波助溶） 并稀释至刻度， 摇匀， 用0.45 m的滤膜过滤， 滤液作为染料木素标准溶液， 浓 度为50 g/mL。 0018 （1） 染料木素 移取染料木素溶液0、 1、 2、 3、 4、 5mL， 分别置于50mL容量瓶中， 用无水甲醇定。
19、容， 浓度分 别为0、 1、 2、 3、 4、 5 g/mL的溶液， 4下避光保存备用， 高效液相色谱测定之前用0.45 m的滤 膜过滤除菌； 检测波长： 260nm。 0019 得到染料木素HPLC图和标准曲线图见图1、 2， 线性关系方程为： A=0 .0079B+ 0.0061， 其中B为峰面积， A为染料木素含量。 0020 （2） 大豆苷 移取大豆苷溶液0、 2、 4、 6、 8、 10mL， 分别置于50mL容量瓶中， 用无水甲醇定容， 浓度分别 为0、 2、 4、 6、 8、 10 g/mL的溶液， -20下避光保存备用， 高效液相色谱测定之前用0.45 m的 滤膜过滤除菌； 检。
20、测波长： 248nm。 0021 得到大豆苷HPLC图和标准曲线图见图3、 4， 线性关系方程为： A=0.0227B+0.1097， 其中B为峰面积， A为大豆苷含量。 0022 （3） 黄豆黄苷 移取大豆苷溶液0、 0.4、 0.6、 0.8、 1mL， 分别置于50mL容量瓶中， 用无水甲醇定容， 浓度 分别为0、 0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 1 g/mL的溶液， -20下避光保存备用， 高效液相色谱测定之前 用0.45 m的滤膜过滤除菌； 检测波长： 257nm。 0023 得到黄豆黄苷HPLC图和标准曲线图见图5、 6， 线性关系方程为： A=0 .0372B- 0.00。
21、42， 其中B为峰面积， A为黄豆黄苷含量。 说明书 3/7 页 5 CN 105777692 A 5 0024 （4） 黄豆苷元 移取黄豆苷元溶液0、 2、 4、 6、 8、 10mL， 分别置于50mL容量瓶中， 用无水甲醇定容， 浓度分 别为0、 2、 4、 6、 8、 10 g/mL的溶液， -20下避光保存备用， 高效液相色谱测定之前用0.45 m 的滤膜过滤除菌； 检测波长： 250nm。 0025 得到黄豆苷元HPLC图和标准曲线图见图7、 8， 线性关系方程为： A=0 .0202B- 0.0182， 其中B为峰面积， A为黄豆苷元含量。 0026 （5） 染料木苷 移取染料木。
22、苷溶液0、 2、 4、 6、 8、 10mL， 分别置于50mL容量瓶中， 用无水甲醇定容， 浓度分 别为0、 2、 4、 6、 8、 10 g/mL的溶液， -20下避光保存备用， 高效液相色谱测定之前用0.45 m 的滤膜过滤除菌； 检测波长： 260nm。 0027 得到染料木苷HPLC图和标准曲线图见图9、 10， 线性关系方程为： A=0.0202B- 0.0182， 其中B为峰面积， A为染料木苷含量。 0028 二、 异黄酮组分的提取与测定 豫豆22号， 用鼎昊源中通量组织研磨仪 （TL2010S） 粉碎30s， 用0.35 m的筛子过筛， 用万 分之一的天平称取大豆粉样品。 0。
23、029 （1） 柱温对异黄酮含量的影响 取0.2g大豆粉， 加入5mL90%的甲醇溶液， 60条件下超声80min， 样品离心速度 10000rpm， 离心时间5min； 流动相比例： 71%甲醇， 流量： 1mL/min， 进样体积： 10 L， 保留时间： 35min， 波长： 248、 250、 257、 260nm等条件下， 研究不同柱温对大豆异黄酮含量的影响。 0030 比较35、 37、 40、 42、 45等5种柱温对大豆异黄酮提取量的影响 （表1） 。 结 果表明， 在45条件下， 大豆苷、 黄豆黄苷和染料木苷含量最高， 但是染料木素和黄豆苷元 未被分离出来。 在35和37条件。
24、下， 只有大豆苷、 黄豆黄苷和染料木素被检测出来。 在40和 42条件下， 5个异黄酮组分均被分离出来， 且含量差异不显著， 但是42柱温条件下分离 出来的5种异黄酮组分相对高于40柱温， 因此， 可选择42作为最佳柱温。 0031 表1： 柱温对样品异黄酮含量的影响 。 0032 （2） 流动相比例对异黄酮含量的影响 取0.2g大豆粉， 加入5mL90%的甲醇溶液， 60条件下超声80min， 样品离心速度 10000rpm， 离心时间5min； 柱温： 42、 流量： 1mL/min， 进样体积： 10 L， 保留时间： 35min， 波 长： 248、 250、 257、 260nm等条。
25、件在， 研究不同流动相比例对大豆异黄酮提取量的影响。 0033 比较72%、 71%、 70%、 69%、 68%等5种流动相比例对大豆异黄酮提取量的影响 （表2） 。 结果表明， 68%甲醇为流动相时， 未能分离出染料木素和黄豆苷元。 在流动相比例为6972% 甲醇的条件下， 5种异黄酮组分均被检测到， 其中以72%甲醇检测到的含量最高， 但是其峰值 较差和对称因子较大； 因此， 选择71%甲醇作为最佳流动相比例。 0034 表2： 流动相比例对样品异黄酮含量的影响 说明书 4/7 页 6 CN 105777692 A 6 。 0035 （3） 提取液比例对异黄酮含量的影响 取0.2g大豆粉。
26、， 分别加入5mL不同浓度的甲醇溶液， 60条件下超声80min， 样品离心 速度10000rpm， 离心时间为5min； 柱温： 42、 流量： 1mL/min， 进样体积： 10 L， 保留时间： 35min， 波长： 248、 250、 257、 260nm等条件， 研究不同提取液比例对大豆异黄酮提取量的影响 （表6） 。 0036 比较100%、 90%、 80%、 70%、 60%、 50%等提取液比例对大豆异黄酮提取量的影响。 结果 表明， 在5090%甲醇提取液下， 随着甲醇浓度的下降， 5种异黄酮组分呈下降趋势， 以90%甲 醇为提取液是含量最高， 并且高于100%甲醇为提取液。
27、。 因此， 可选择90%甲醇作为最佳提取 液比例。 0037 表3： 提取液比例对样品异黄酮含量的影响 。 0038 （4） 料液比对异黄酮含量的影响 取0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5g大豆粉， 分别加入5mL90%的甲醇溶液， 60条件下超声 80min， 样品离心速度10000rpm， 离心时间为5min； 柱温： 42、 流量： 1mL/min， 进样体积： 10 L， 保留时间： 35min， 波长： 248、 250、 257、 260nm等条件在， 研究料液比对大豆异黄酮提取量 的影响 （表5） 。 0039 比较0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5g等样。
28、品量对大豆异黄酮提取量的影响。 结果表明， 在 0.1g的样品量下， 大豆苷、 黄豆黄苷、 染料木苷和染料木素等被检测出来， 而黄豆苷元未被 检测出来。 0.2g条件下检测到的5种异黄酮组分最高于其他配料比。 因此， 选择0.2g/5mL为 最佳料液比配比。 0040 表4： 料液比对样品异黄酮含量的影响 。 0041 （5） 样品离心时间对异黄酮含量的影响 取0.2g大豆粉， 加入5mL90%的甲醇溶液， 60条件下超声80min， 样品离心速度 说明书 5/7 页 7 CN 105777692 A 7 10000rpm； 柱温： 42、 流量： 1mL/min， 进样体积： 10 L， 保。
29、留时间： 35min， 波长： 248、 250、 257、 260nm等条件在， 研究样品离心时间对大豆异黄酮提取量的影响 （表3） 。 0042 比较3min、 5min、 7min等3种样品离心时间对大豆异黄酮提取量的影响。 结果表明， 3种样品离心时间下5种异黄酮组分差异不显著， 所以选择5min作为样品离心时间； 因为 5min条件下， 样品杂质沉淀较好， 上清液中杂质相对较少， 用除菌器过滤效果较好。 0043 表5： 样品离心时间异黄酮含量的影响 。 0044 （6） 离心速度对异黄酮含量的影响 取0.2g大豆粉， 分别加入5mL90%甲醇溶液， 60条件下超声80min， 样品。
30、用不同离心速 度， 离心时间为5min； 柱温： 42、 流量： 1mL/min， 进样体积： 10 L， 保留时间： 35min， 波长： 248、 250、 257、 260nm等条件在， 研究离心速度对大豆异黄酮提取量的影响 （表7） 。 0045 比较5000rpm、 8000rpm、 10000rpm等3种离心速度对大豆异黄酮提取量的影响。 结 果表明， 大豆苷、 黄豆黄苷、 染料木苷、 染料木素和黄豆苷元等5种异黄酮组分随着离心速度 的增加而增加， 选择10000rpm作为最佳离心速度。 0046 表6： 离心速度对样品异黄酮含量的影响 。 0047 （7） 超声时间对异黄酮含量的。
31、影响 取0.2g大豆粉， 加入5mL90%的甲醇溶液， 60条件下超声， 样品离心速度10000rpm， 离 心时间为5min； 柱温： 42、 流量： 1mL/min， 进样体积： 10 L， 保留时间： 35min， 波长： 248、 250、 257、 260nm等条件在， 研究超声时间对大豆异黄酮提取量的影响 （表4） 。 0048 比较20、 40、 60、 70、 80min等5种超声时间对大豆异黄酮提取量的影响。 结果表明， 随着超声时间的增加， 大豆苷、 黄豆黄苷、 染料木苷和染料木素含量增加， 而黄豆苷元随着 超声时间的增加而下降。 说明超声会破坏黄豆苷元物质。 因此， 选择。
32、80min作为最佳超声时 间。 0049 表7： 样品超声时间对样品异黄酮含量的影响 。 0050 （8） 超声温度对异黄酮含量的影响 取0.2g大豆粉， 加入5mL90%的甲醇溶液， 10、 20、 30、 40、 50、 60、 70、 80条件下超声， 样 说明书 6/7 页 8 CN 105777692 A 8 品离心速度10000rpm， 离心时间为5min； 柱温： 42、 流量： 1mL/min， 进样体积： 10 L， 保留时 间： 35min， 波长： 248、 250、 257、 260nm等条件在， 研究超声温度对大豆异黄酮提取量的影响 （表4） 。 0051 比较10、。
33、 20、 30、 40、 50、 60、 70、 80等8种超声温度对大豆异黄酮提取量的影响。 结 果表明， 在1070随着超声温度的增加， 大豆苷、 黄豆黄苷、 染料木苷和黄豆苷元含量增 加， 而染料木素随着超声温度的增加未有显著变化。 但是由于提取液 （80%甲醇） 在70已沸 腾， 所以使用60提取， 通过增加提取时间， 同样可以达到70时的效果。 0052 表8： 样品超声温度对样品异黄酮含量的影响 。 0053 （9） 震荡时间对异黄酮含量的影响 取0.2g大豆粉、 分别加入5mL90%甲醇溶液， 20条件下分别震荡12h、 24h、 48h， 离心速 度8000rpm， 离心时间为。
34、5min； 柱温： 42、 流量： 1mL/min， 进样体积： 10 L， 保留时间： 35min， 波长： 248、 250、 257、 260nm等条件在， 研究震荡时间对大豆异黄酮提取量的影响 （表7） 。 0054 在室温条件下， 比较12h、 24h、 48h等3种震荡时间对大豆异黄酮提取量的影响。 结 果表明， 异黄酮含量随着震荡时间的增加而增加； 其中大豆苷、 黄豆黄苷和染料木苷等在震 荡条件下的含量显著低于超声条件， 而染料木素和黄豆苷元震荡条件下提取比超声条件下 显著增加， 说明超声会破坏染料木素和黄豆苷元。 综上所述， 建议采用， 建议采用超声条件 提取大豆苷、 黄豆黄苷和染料木苷； 采用震荡方法提取染料木素和黄豆苷元。 0055 表9： 震荡时间对样品异黄酮含量的影响 。 说明书 7/7 页 9 CN 105777692 A 9 图1 图2 说明书附图 1/5 页 10 CN 105777692 A 10 图3 图4 说明书附图 2/5 页 11 CN 105777692 A 11 图5 图6 说明书附图 3/5 页 12 CN 105777692 A 12 图7 图8 说明书附图 4/5 页 13 CN 105777692 A 13 图9 图10 说明书附图 5/5 页 14 CN 105777692 A 14 。