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1、(10)申请公布号 CN 102851342 A (43)申请公布日 2013.01.02 CN 102851342 A *CN102851342A* (21)申请号 201210305037.6 (22)申请日 2012.08.24 C12P 21/06(2006.01) (71)申请人 浙江省长兴艾格生物制品有限公司 地址 313100 浙江省湖州市长兴县经济技术 开发区区间路 6 号 (72)发明人 徐克成 (74)专利代理机构 杭州天勤知识产权代理有限 公司 33224 代理人 胡红娟 (54) 发明名称 一种蛋清多肽的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种蛋清多肽的制备方法， 包。
2、 括 ： (1) 取蛋清， 均质后稀释， 制得酶解原液 ； (2) 将酶解原液循环打入固定有蛋白酶的反应器中进 行酶解反应， 酶解 0.5 1 小时后， 将酶解液连续 送入陶瓷膜过滤器进行过滤， 并将浓缩液返回至 反应器中继续酶解 ； (3) 收集滤液， 喷雾干燥制得 蛋清多肽粉。 本发明方法可以连续化进行， 反应条 件易于控制， 最终产品质量性能稳定， 而且所用设 备简单， 酶用量少， 成本低， 易于推广。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 一种蛋清。
3、多肽的制备方法， 包括 ： (1) 取蛋清， 均质后稀释， 制得酶解原液 ； (2) 将酶解原液循环打入固定有蛋白酶的反应器中进行酶解反应， 酶解 0.5 1 小时 后， 将酶解液连续送入陶瓷膜过滤器进行过滤， 并将浓缩液返回至反应器中继续酶解 ； (3) 收集滤液， 喷雾干燥制得蛋清多肽粉。 2. 根据权利要求 1 所述的蛋清多肽的制备方法， 其特征在于， 所述酶解反应的温度为 40 50， 酶解液 pH 值控制在 7.5 8.5。 3. 根据权利要求 1 所述的蛋清多肽的制备方法， 其特征在于， 固定蛋白酶的载体为碳 薄膜、 壳聚糖或无机硅藻土。 4. 根据权利要求 1 所述的蛋清多肽的制。
4、备方法， 其特征在于， 酶解反应过程中， 酶解液 处于搅拌状态， 搅拌速率为 50 200r/min。 5. 根据权利要求 1 所述的蛋清多肽的制备方法， 其特征在于， 酶解反应过程中， 通过添 加新鲜的酶解原液， 保持酶解液的总体积不变。 6. 根据权利要求 1 所述的蛋清多肽的制备方法， 其特征在于， 在打入反应器前， 所述酶 解原液加热至 40 50。 7. 根据权利要求 1 所述的蛋清多肽的制备方法， 其特征在于， 所述蛋白酶为胰蛋白酶。 8. 根据权利要求 1 所述的蛋清多肽的制备方法， 其特征在于， 过滤时， 陶瓷膜过滤器进 料端的压力为 0.13 0.15MPa。 权 利 要 求。
5、 书 CN 102851342 A 2 1/4 页 3 一种蛋清多肽的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种蛋白质多肽的制备方法， 尤其涉及一种蛋清多肽的制备方法。 背景技术 0002 蛋清蛋白质是食物中最理想的优质蛋白质， 它含有人体所必需的氨基酸， 氨基酸 的配比均衡性好， 机体利用率高达 99.6。但由于其受热易凝固、 粘度大， 限制了它在食品 加工中的应用 ； 另外蛋清中含有卵类粘蛋白、 卵抑制剂、 无花果蛋白酶抑制剂、 抗生物素蛋 白等影响消化吸收和引起过敏的蛋白， 直接食用蛋清蛋白会影响其蛋白质利用率， 甚至发 生过敏反应。 0003 蛋清蛋白经蛋白酶适度水解， 生成多肽的混。
6、合物， 通过控制其水解度， 可提高蛋白 的吸收率， 同时， 生成的多肽混合物有利于人体吸收。 一些特殊人群因对蛋白质不易消化吸 收造成营养不良， 或者因身体需要补充大量蛋白质， 或者无法自主进食。食用蛋清水解物 可以省去静脉输液 ( 如脂肪乳、 氨基酸注射液、 白蛋白注射液等 ) 的麻烦， 又可避免口服氨 基酸引起的高渗腹泻， 且费用相对较低， 更易为广大患者和家属接受。 将蛋清水解肽添加到 某些食品里， 如将蛋清纾解肽配制成蛋清肽饮料和蛋清肽果冻不仅可以提升食品的营养价 值， 同时具有良好的口感和风味。 0004 近年来， 随着生物技术的发展， 人们发现蛋白质提供人体多种氨基酸和能量外， 从。
7、 蛋白质中还释放出一些具有多种生理功能的小肽， 该些小肽不被肠道多种酶系降解可直接 被人体吸收。 许多短肽具有生物活性， 成为活性肽， 大量研究证实了活性肽具有许多特殊的 生理功能， 可以预防血栓形成， 降血压， 延缓衰老， 提高机体免疫力， 抗疲劳， 促进人体对维 生素、 氨基酸、 蛋白质、 锌、 钙、 硒、 铁、 镁、 铜等多种对人体有益的微量元素的吸收。 0005 目前， 国内外学者已对蛋清多肽的功能作了深入的研究， M igue 等通过模拟肠消 化对蛋清进行水解， 发现水解得到的 RADHP 和 YPI 这两种肽对治疗患有高血压的小白鼠有 帮助作用 (M igue lM.， A lon。
8、soM.J.， Sala icesM.， et a.l AntihypertensiveACE-inhib itory and vasod ilator prope rties of an egg whitehydro lysate ： Effect of a s imu la ted intestina l d igestionJ.Food Chem istry， 2007， 104(1) ： 163 168)。 M ara 等用蛋清水解物喂养原发性高血压鼠， 发现其对于增强抗氧化能力有着重要作用 (M ara A.M.， M artaM.， Jeanne E.， et a.l Effect。
9、 of the long-te rm intake of an egg w hite hydro lysate on the ox idativestatus and b lood lip id profile of spon taneously hypertensiveJ.Food Chem istry， 2008， 109(2) ： 361 367)。Lee 等 通过实验发现蛋清肽有治疗肠炎的作用 LeeM.， Kovacs-No lan J.， Archbo ld T.， et a.l Therapeuticpo tential of hen eggwh ite peptides for。
10、 the trea tm ent of intes tina l inflamm ationJ.Journal of Functional Foods， 2009， 1(2) ： 161 169)。 0006 目前， 国内工业化规模水解蛋白几乎都是采用间歇式直接加酶的生产方式， 首先 蛋白质底物与酶在反应器中水解， 当到达预期的水解度后， 钝化酶， 再通过盐析或者膜分离 的方法分离出多肽。间歇式生产有很多不足之处 ： 由于酶的一次性使用， 生产成本高 ； 说 明 书 CN 102851342 A 3 2/4 页 4 反应体系中反应程度难于控制， 造成了各批次间产品分子组成的差异 ； 反应结束后。
11、， 需改 变水解条件或热处理钝化酶， 增加了费用 ； 劳动强度大， 需要投入大量劳力， 人工费用高 ； 由于反应的起动与终止， 生产效率低 ； 由于反应体系中底物浓度的抑制， 导致反应速度 慢， 产品转化率偏低。 0007 公开号为 “CN 101724675 A” 公开了一种蛋清蛋白多肽的制备工艺， 该工艺将蛋清 匀浆后进行第一次酶解， 然后用 - 环糊精包裹， 接着进行第二次酶解， 最后进行吸附、 过 滤、 真空干燥， 制得无苦味的蛋清蛋白多肽粉。 该方法的缺陷同样是采用间歇式直接加酶的 方法制备多肽， 用量酶大， 成本高， 工业上应用前景较低。 发明内容 0008 本发明提供了一种蛋清多。
12、肽的制备方法， 该方法解决了传统方法用酶量大， 成本 高， 反应过程难以控制， 各批次产品差异大的问题。 0009 一种蛋清多肽的制备方法， 包括 ： 0010 (1) 取蛋清， 均质后稀释， 制得酶解原液 ； 0011 (2) 将酶解原液循环打入含固定化蛋白酶的反应器中进行酶解反应， 酶解 0.5 1 小时后， 将酶解液连续送入陶瓷膜过滤器进行过滤， 并将浓缩液返回至反应器中继续酶 解 ； 0012 (3) 收集滤液， 喷雾干燥制得蛋清多肽粉。 0013 本发明并不是将蛋白酶和蛋清液直接混合酶解， 而是将蛋清溶液置于含固定化蛋 白酶的反应器中进行反应， 蛋白酶可以重复使用， 不需进行钝化处理。
13、， 节省了酶用量， 另外 在反应器中进行操作， 各种条件易于控制， 最终产品性能均一稳定。 0014 由于蛋清本身粘度较大， 均质可以降低蛋清溶液粘度， 稀释可以提高蛋清流过反 应器的通透性， 稀释所加的水为原蛋清体积的 0.2 1.0 倍， 蛋清浓度大， 则不易流过固定 化酶的载体， 如果浓度过小， 处理效率太低。 0015 酶解温度和 pH 值对酶的活性有重要影响， 最终影响酶解效率， 虽然各种酶的最适 温度和 pH 是不同的， 可以根据需要进行调整， 但由于蛋清在酶解过程中并没有进行灭菌处 理， 容易滋生各种细菌， 特别是在连续化生产过程当中， 因此选择适当的酶解温度和 pH 值 是比较。
14、关键的， 本发明优选酶解反应的温度为4050， 酶解液pH值控制在7.58.5。 因 为在弱碱性和较高温条件下有助于抑制各种细菌的繁殖， 避免蛋清蛋白或多肽变质， 需要 强调的是， 最好酶解原液 pH 值就调节至 7.5 8.5 范围内， 在酶解过程中则通过添加 NaOH 溶液调节酶解液的 pH 值。 0016 在酶解前， 酶解原液就加热到 40 50， 一方面可以使酶解反应立即进行， 另外 可以使蛋清蛋白中的酶失活， 防止酶降解其中的蛋白。 0017 酶的固定化方法主要有三种 ： 包埋法、 共价结合法和物理吸附法， 每种方法均有各 自的优缺点， 载体的选择主要与反应环境相关， 需要性能稳定，。
15、 它们可以选择为碳薄膜、 壳 聚糖或无机硅藻土。 0018 由于蛋白酶固定在相应载体上， 它只能催化其周围的底物降解， 为了加快反应速 率， 酶解过程中， 酶解液处于搅拌状态， 但过快的搅拌速率会使固定化酶脱落， 从而使其失 效， 优选的， 搅拌速率为 50 200r/min。 说 明 书 CN 102851342 A 4 3/4 页 5 0019 酶解过程中， 可以通过添加新鲜的酶解原液， 保持反应器中酶解液的体积不变， 如 此便可以达到连续化生产的目的， 在一段时间内生产的产品均一性能好。 0020 所述蛋白酶可以是胃蛋白酶或胰蛋白酶， 但由于胃蛋白酶最适pH值为1.52.0， 会使反应体。
16、系处于酸性条件下， 而胰蛋白酶的最适 pH 值为 7.8 8.5 左右， 反应体系会处 于弱碱性条件下。 0021 过滤压力主要影响酶解液流过过滤器的速率， 压力太低则速率太小， 导致过滤效 率低， 而压力过大则速率太大， 易导致蛋白分子堵塞， 优选的， 过滤时陶瓷膜过滤器进料端 的压力为 0.13 0.15MPa。 0022 本发明最终的酶解液经过滤分为两部分， 透过的为滤液， 未透过的部分为浓缩液， 收集的浓缩液可以返回反应器与新鲜的酶解原液混合， 也可以收集起来， 再集中一次性送 入酶解反应器， 优选采用第一种方案， 可以达到连续化的处理， 滤液中多肽分子量一般不大 于 1000 道尔顿。
17、。 0023 本发明方法可以连续化进行， 反应条件易于控制， 最终产品质量性能稳定， 而且所 用设备简单， 用酶量小， 成本低， 易于推广。 具体实施方式 0024 实施例 1 0025 (1) 取 100 公斤新鲜鸡蛋， 去壳， 分离蛋清蛋黄， 得到 65 公斤蛋清液 ； 0026 (2) 将蛋清液通过高压均质机进行均质， 均质压力控制在 102MPa ； 0027 (3) 将均质后蛋清液内加入原体积比 20的纯水， 并调节 pH 至 7.5-8.5 ； 0028 (4) 通过板式换热器将蛋清液加热至 451 ； 0029 (5) 通过转子泵， 将预处理后蛋清液以 5L/min 的流速循环流。
18、入酶膜反应器 ( 上海 瑞派机械有限责任公司型号 ZGB-2.5)， 并通过板式换热器控制酶解温度在 40-50， 在线 检测 pH 值， 用过 pH 值调节使反应过程 pH 值控制在 7.5-8.5 之间， 循环酶解 1 小时 ； 0030 (6) 将酶解液连续送入陶瓷膜进行过滤， 陶瓷膜选用分子量为 1000 道尔顿， 过滤 压力控制在 1.3-1.5Kg/cm2； 0031 (7) 将浓缩液返回至酶膜反应器继续酶解 ； 0032 (8) 将浓缩透过液收集， 采用低温喷雾干燥进行干燥处理， 进口温度控制在 120-130， 出口温度控制在 60-63， 保持蛋白肽不失活， 得到 5 公斤蛋。
19、白肽 ； 0033 (9) 通过样品检测， 蛋白肽分子量范围 500-1000 道尔顿， 肽含量为 90。 0034 实施例 2 0035 (1) 取 100 公斤新鲜鸡蛋， 去壳， 分离蛋清蛋黄， 得到 65 公斤蛋清液 ； 0036 (2) 将蛋清液通过高压均质机进行均质， 均质压力控制在 102MPa ； 0037 (3) 将均质后蛋清液内加入原体积比 20的纯水， 并调节 pH 至 6.5-7.5 ； 0038 (4) 通过板式换热器将蛋清液加热至 451 ； 0039 (5) 取 60 克活力为 20000u/mg 中性蛋白酶溶于 800 毫升水中， 缓慢加入蛋清液 ； 0040 (。
20、6) 将已加入蛋白酶的蛋清液输入至发酵罐内， 用搅拌机在 50r/min 速度下搅拌， 在 40-50温度下反应 5 小时。 0041 (7) 将酶解液连续送入陶瓷膜进行过滤， 陶瓷膜选用分子量为 3000 道尔顿， 过滤 说 明 书 CN 102851342 A 5 4/4 页 6 压力控制在 1.5-2.0Kg/cm2； 0042 (8) 将浓缩透过液收集， 采用低温喷雾干燥进行干燥处理， 进口温度控制在 120-130， 出口温度控制在 60-63， 保持蛋白肽不失活， 得到 4.2 公斤蛋白肽 ； 0043 (9) 通过样品检测， 蛋白肽分子量范围 1000-5000 道尔顿。肽含量为 81.3。 说 明 书 CN 102851342 A 6 。