HLA-DR阳性单核细胞选择去除器及抗氧化剂用于制造该选择去除器的用途.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102223907 A (43)申请公布日 2011.10.19 CN 102223907 A *CN102223907A* (21)申请号 200980147294.8 (22)申请日 2009.11.24 2008-300176 2008.11.25 JP A61M 1/36(2006.01) A61M 1/34(2006.01) (71)申请人 旭化成可乐丽医疗株式会社 地址 日本东京都 (72)发明人 加盐裕美子 樱井正美 助川威 (74)专利代理机构 北京林达刘知识产权代理事 务所 ( 普通合伙 ) 11277 代理人 刘新宇 李茂家 (54) 发明名称 H。

2、LA-DR阳性单核细胞选择去除器及抗氧化剂 用于制造该选择去除器的用途 (57) 摘要 本发明提供抗氧化剂用于制造 HLA-DR 阳性 单核细胞选择去除器的用途， 所述 HLA-DR 阳性单 核细胞选择去除器从含抗凝血剂的血液中选择性 去除 HLA-DR 阳性单核细胞， 其中， 所述 HLA-DR 阳 性单核细胞选择去除器具备由表面未改性的聚 酯无纺布构成的细胞去除过滤器， 所述细胞去除 过滤器填充有含抗氧化剂的填充液且经辐射线灭 菌， 所述抗凝血剂为选自由柠檬酸和其盐组成的 组中的至少 1 种， 所述抗氧化剂为选自由焦亚硫 酸钠、 焦亚硫酸钾、 硫代硫酸钠、 亚硫酸氢钠、 亚硫 酸钠、 次磷。

3、酸、 抗坏血酸和抗坏血酸衍生物组成的 组中的至少 1 种。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2011.05.25 (86)PCT申请的申请数据 PCT/JP2009/006327 2009.11.24 (87)PCT申请的公布数据 WO2010/061580 JA 2010.06.03 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 13 页 附图 1 页 CN 102223920 A1/1 页 2 1. 一种抗氧化剂用于制造 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器的用途， 该 HLA-DR 阳性单 核细胞选择。

4、去除器从含抗凝血剂的血液中选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞， 所述 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器具备由表面未改性的聚酯无纺布构成的细胞去 除过滤器， 所述细胞去除过滤器填充有含抗氧化剂的填充液， 且经辐射线灭菌， 所述抗凝血剂为选自由柠檬酸和其盐组成的组中的至少 1 种， 所述抗氧化剂为选自由焦亚硫酸钠、 焦亚硫酸钾、 硫代硫酸钠、 亚硫酸氢钠、 亚硫酸钠、 次磷酸、 抗坏血酸和抗坏血酸衍生物组成的组中的至少 1 种。 2. 根据权利要求 1 所述的抗氧化剂的用途， 其中， 所述填充液含有 300ppm 以上的焦亚 硫酸钠。 3. 根据权利要求 1 或 2 所述的抗氧化剂的用途，。

5、 其中， 所述辐射线为 射线或电子射 线。 4. 一种 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器， 其用于从含抗凝血剂的血液中选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞， 所述 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器具备由表面未改性的聚酯无纺布构成的细胞去 除过滤器， 所述细胞去除过滤器填充有含抗氧化剂的填充液且经辐射线灭菌， 所述抗凝血剂为选自由柠檬酸和其盐组成的组中的至少 1 种， 所述抗氧化剂为选自由焦亚硫酸钠、 焦亚硫酸钾、 硫代硫酸钠、 亚硫酸氢钠、 亚硫酸钠、 次磷酸、 抗坏血酸和抗坏血酸衍生物组成的组中的至少 1 种。 5. 根据权利要求 4 所述的选择去除器， 其中， 所述填充液含有 3。

6、00ppm 以上的焦亚硫酸 钠。 6. 根据权利要求 4 或 5 所述的选择去除器， 其中， 所述辐射线为 射线或电子射线。 7. 一种 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器， 其具备 ： 与上游侧的第 1 流路和下游侧的第 2 流路连接的、 填充有含抗氧化剂的填充液且经辐 射线灭菌的细胞去除过滤器 ； 和 与所述第 1 流路连接且可将含抗凝血剂的血液供给到所述细胞去除过滤器的、 含有选 自由柠檬酸和其盐组成的组中的至少 1 种抗凝血剂的容器。 权 利 要 求 书 CN 102223907 A CN 102223920 A1/13 页 3 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器及抗氧化剂用于制造。

7、该 选择去除器的用途 技术领域 0001 本发明涉及 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器及抗氧化剂用于制造该选择去除器 的用途。 背景技术 0002 使用白细胞去除过滤器选择性去除白细胞的技术被不断开发和改良， 用于治疗全 身性红斑狼疮、 类风湿关节炎、 多发性硬化症、 溃疡性结肠炎及克罗恩病等自身免疫性疾病 以及白血病等。目前， 开发了使用无纺布等作为过滤器的白细胞去除器。 0003 成为白细胞去除疗法的对象的疾病与各种免疫细胞所导致的免疫反应密切相关。 在免疫反应中承担重要作用的 T 细胞通过存在于其表面的抗原受体与抗原的结合而开始 活动， 但T细胞的反应中必须有抗原呈递细胞的存在。 T。

8、细胞通过抗原呈递细胞上的主要组 织相容性抗原 (MHC 抗原 ) 与抗原的组合而发生反应。 0004 人类的 MHC 抗原被称作 HLA 抗原， 白细胞中作为抗原呈递细胞的组分中表达有 HLA-DR抗原。 开始活动的T细胞通过其他白细胞组分而受到抗原呈递， 进而被活化， 免疫反 应进行。活化的白细胞引起肠上皮细胞的伤害或骨破坏， 导致疾病的发病。 0005 如此， 作为 HLA-DR 抗原阳性细胞的抗原呈递细胞可以说是与免疫反应的最初阶 段以及之后的反应都密切相关的重要免疫细胞。 0006 另外， 还已知， 对于白细胞去除器的对象疾病的类风湿关节炎或溃疡性结肠炎的 患者， 与健康人相比， 其 。

9、HLA-DR 抗原阳性细胞的比例更高 ( 参照非专利文献 1 和 2)。 0007 作为使用白细胞去除过滤器选择性去除白细胞的技术， 专利文献 1 中公开了通过 在血液中添加大量的柠檬酸， 适当减弱造血干细胞的粘着性， 从而提高造血干细胞的回收 率的方法。 0008 另外， 专利文献 2 公开了选择地去除单核细胞和 / 或单核细胞来源的巨噬细胞的 过滤器装置。 0009 现有技术文献 0010 专利文献 1 ： 日本特开平 11-322618 号公报 0011 专利文献 2 ： 日本专利第 3812909 号公报 0012 非专利文献 0013 非专利文献 1 ： Mottonen M.et.。

10、al.， Immunology， 2000， vol.100， p.238-244 0014 非专利文献2 ： Sawada K.et.al.， Jpn.J.Apheresis.， 1995， vol.14.No.1， p.48-50 发明内容 0015 发明要解决的问题 0016 包括抗原呈递细胞、 T 细胞在内的除淋巴细胞以外的白细胞组分， 有粒细胞。粒细 胞由于活性氧的产生而导致的细胞伤害性等， 因而也与疾病的发病有关。粒细胞的活化与 说 明 书 CN 102223907 A CN 102223920 A2/13 页 4 作为抗原呈递细胞的单核细胞、 通过抗原呈递而被活化的淋巴细胞密切相。

11、关。认为通过控 制白细胞的免疫反应开始阶段的抗原呈递， 可以控制大部分的免疫反应。 0017 以往的白细胞去除疗法仅仅是将免疫细胞的各个组分去除。认为， 只要能够选择 性去除免疫反应中更密切相关的抗原呈递细胞， 则白细胞去除的治疗效果的效率更为提 高。为了提高白细胞去除的治疗效果的效率， 尤其重要的是， 选择性去除通过吞食作用 ( 吞 噬 ) 摄入粒状的大抗原而进行抗原呈递的 HLA-DR 阳性单核细胞。 0018 但是， 可在临床上使用的 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器仍是未知的， 专利文献 1 和 2 中也未公开能够择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞选的装置。 0019 鉴于上述事。

12、实， 本发明要解决的课题在于， 提供可在临床上使用的 HLA-DR 阳性单 核细胞选择去除器。 0020 用于解决问题的方案 0021 本发明人等为了解决上述课题进行了深入研究， 结果发现在含柠檬酸或其盐的抗 凝剂的存在下使血液流入到具备与含抗氧化剂的填充液接触且经辐射线灭菌的细胞去除 过滤器的去除器中， 可以选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞， 进而完成了本发明。 0022 即， 本发明提供以下的抗氧化剂用于制造 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器的用 途、 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器和选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞的方法。 0023 (1)一种抗氧化剂用于制造HLA。

13、-DR阳性单核细胞选择去除器的用途， 所述HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器从含抗凝血剂的血液中选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞， 0024 所述 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器具备由表面未改性的聚酯无纺布构成的细 胞去除过滤器， 0025 所述细胞去除过滤器填充有含抗氧化剂的填充液， 且经辐射线灭菌， 0026 所述抗凝血剂为选自由柠檬酸和其盐组成的组中的至少 1 种， 0027 所述抗氧化剂为选自由焦亚硫酸钠、 焦亚硫酸钾、 硫代硫酸钠、 亚硫酸氢钠、 亚硫 酸钠、 次磷酸、 抗坏血酸和抗坏血酸衍生物组成的组中的至少 1 种。 0028 (2)上述(1)所述的抗氧化剂的用途，。

14、 其中， 所述填充液含有300ppm以上的焦亚硫 酸钠。 0029 (3)上述(1)或(2)所述的抗氧化剂的用途， 其中， 所述辐射线为射线或电子射 线。 0030 (4) 一种 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器， 其用于从含抗凝血剂的血液中选择性 去除 HLA-DR 阳性单核细胞， 0031 所述 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器具备由表面未改性的聚酯无纺布构成的细 胞去除过滤器， 0032 所述细胞去除过滤器填充有含抗氧化剂的填充液且经辐射线灭菌， 0033 所述抗凝血剂为选自由柠檬酸和其盐组成的组中的至少 1 种， 0034 所述抗氧化剂为选自由焦亚硫酸钠、 焦亚硫酸钾、 硫代硫。

15、酸钠、 亚硫酸氢钠、 亚硫 酸钠、 次磷酸、 抗坏血酸和抗坏血酸衍生物组成的组中的至少 1 种。 0035 (5) 上述 (4) 所述的选择去除器， 其中， 所述填充液含有 300ppm 以上的焦亚硫酸 钠。 0036 (6) 上述 (4) 或 (5) 所述的选择去除器， 其中， 所述辐射线为 射线或电子射线。 说 明 书 CN 102223907 A CN 102223920 A3/13 页 5 0037 (7) 一种 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器， 其具备 ： 0038 与上游侧的第 1 流路和下游侧的第 2 流路连接的、 填充有含抗氧化剂的填充液且 经辐射线灭菌的细胞去除过滤器 。

16、； 和 0039 与所述第 1 流路连接且可将含抗凝血剂的血液供给到所述细胞去除过滤器的、 含 有选自柠檬酸和其盐的至少 1 种抗凝血剂的容器。 0040 (8) 一种选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞的方法， 其为使用具备由表面未改性 的聚酯无纺布构成的细胞去除过滤器的选择去除器， 从含抗凝血剂的血液中选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞的方法， 其包含以下工序 ： 0041 利用含抗氧化剂的填充液填充所述细胞去除过滤器的工序 ； 0042 对填充有所述填充液的细胞去除过滤器进行辐射线灭菌的工序 ； 和 0043 将包含含柠檬酸或其盐的抗凝血剂的血液通液至所述过滤器装置进行过滤的工 序。

17、， 0044 所述抗凝血剂为选自由柠檬酸和其盐组成的组中的至少 1 种， 0045 所述抗氧化剂为选自由焦亚硫酸钠、 焦亚硫酸钾、 硫代硫酸钠、 亚硫酸氢钠、 亚硫 酸钠、 次磷酸、 抗坏血酸和抗坏血酸衍生物组成的组中的至少 1 种。 0046 (9) 上述 (8) 所述的方法， 其中， 所述填充液含有 300ppm 以上的焦亚硫酸钠。 0047 (10) 上述 (8) 或 (9) 所述的方法， 其中， 所述辐射线为 射线或电子射线。 0048 发明的效果 0049 本发明能够提供可在临床上安全使用的 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器。 附图说明 0050 图 1 表示本实施方式的选择去除。

18、器的一个例子的概略图。 0051 附图标记说明 0052 10 选择去除器 0053 20 第 1 流路 0054 30 含有抗凝血剂的容器 0055 40 细胞去除过滤器 0056 50 送液泵 0057 60 第 2 流路 具体实施方式 0058 以下详细地说明本发明的实施方式 ( 以下称作本实施方式。)。需要说明的是， 本 发明并非限定于以下的实施方式， 可以在其主旨范围内进行各种变形后实施。 0059 本实施方式的抗氧化剂用于制造 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器的用途为， 抗 氧化剂用于制造从含抗凝血剂的血液中选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞的、 HLA-DR 阳性 单核细。

19、胞选择去除器的用途， 0060 所述 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器具备由表面未改性的聚酯无纺布构成的细 胞去除过滤器， 0061 所述细胞去除过滤器填充有含抗氧化剂的填充液且经辐射线灭菌， 说 明 书 CN 102223907 A CN 102223920 A4/13 页 6 0062 所述抗凝血剂为选自由柠檬酸和其盐组成的组中的至少 1 种， 0063 所述抗氧化剂为选自由焦亚硫酸钠、 焦亚硫酸钾、 硫代硫酸钠、 亚硫酸氢钠、 亚硫 酸钠、 次磷酸、 抗坏血酸和抗坏血酸衍生物组成的组中的至少 1 种。 0064 与以往的白细胞去除器相比， 本实施方式中的 HLA-DR 阳性单核细胞选。

20、择去除器 ( 以下有时仅记载为 “选择去除器” 。)， 其 HLA-DR 阳性单核细胞的去除率特别地高， 可用于 从全血、 血浆或红细胞制剂或者血小板制剂等血液来源制剂中选择性去除 HLA-DR 阳性单 核细胞。 0065 作为选择去除器使用的容器， 只要是能够具备细胞去除过滤器的容器则无特别限 定。 0066 作为选择去除器并无特别限定， 例如可举出以叠层状填充有细胞去除过滤器的容 器、 填充有卷绕成圆筒状的细胞去除过滤器的容器等。 0067 选择去除器的容器形状并无特别限定， 例如可举出圆柱状或者三棱柱状、 四棱柱 状、 六棱柱状或八棱柱状等棱柱状等。 0068 选择去除器的容器形状优选为。

21、圆筒状。 作为优选的圆筒状选择去除器， 可举出， 特 征在于血液的流向为从圆筒外周流向内侧、 集中于最内侧并从血液流出口流出的容器。另 外， 还优选使用具有容器的截面积从血液的流入口至流出口变小的形状的容器等。 0069 本实施方式中， 选择去除器中还可设置用于在处理血液时或者洗涤选择去除器时 使液体流入或流出的管、 回路等。 0070 作为选择去除器的容器的材质可以举出聚碳酸酯树脂等。 0071 本实施方式的细胞去除过滤器由未将表面改性的聚酯无纺布构成。 0072 通过使聚酯无纺布为叠层状的叠层体或者将聚酯无纺布卷绕成圆筒状， 可制成细 胞去除过滤器。 0073 本实施方式的 “未将表面改性。

22、的聚酯无纺布” 是指为了使血液与聚酯直接接触而 在无纺布的表面配置有聚酯， 并且意味着未对聚酯无纺布的表面实施亲水化处理等。 0074 亲水化处理例如可举出利用聚合物的涂布等。 0075 本实施方式的聚酯无纺布中， 由于聚酯无纺布的纤维径有助于其吸附、 过滤的能 力， 因而优选使用具有有效平均纤维径的聚酯无纺布。 0076 聚酯无纺布的纤维径过大时则接触效率降低、 过小时则凝集块等堵塞物质的吸附 量增加， 从这一观点出发， 聚酯无纺布的平均纤维径优选为 0.5m 以上且 50m 以下的范 围内、 更优选为 1m 以上且 40m 以下的范围内、 进一步优选为 1.5m 以上且 35m 以下 的范。

23、围内。 0077 本实施方式的 “平均纤维径” 是指用以下方法求得的值。 0078 从构成细胞去除过滤器的 1 张或多张聚酯无纺布中采样通过目视识别为实质上 均一的部分。 0079 在采样时， 在聚酯无纺布中， 将过滤血液时与血液透过的部分相对应的有效过滤 截面积部分划分成边长为 0.5cm 的正方形， 从中随机采样 6 个位置。进行随机采样时， 例如 通过在划分后的所有位置上指定序号， 然后使用随机数表等的方法选择必要数量的区域来 进行。对于采样的 3 个位置以上、 优选 5 个以上的各区域， 使用扫描型电子显微镜以放大倍 率 2500 倍拍摄照片。 说 明 书 CN 102223907 A。

24、 CN 102223920 A5/13 页 7 0080 对采样的各区域的中央部分及其附近位置拍摄照片， 直至拍于照片中的纤维总根 数达到每个区域超过 100 根， 测定纤维的直径。 0081 直径是指相对于纤维轴呈直角方向的纤维的宽度。 将所测定的全部纤维的直径之 和除以纤维数得到的值作为平均纤维径。 0082 其中， 在纤维的宽度的测定中， 不考虑这些情况下得到的数据 ： 0083 由于多个纤维相互重叠而被其他纤维遮挡， 从而无法测定纤维宽度的情况 ； 多个 纤维由于熔融等而变成较粗的纤维的情况 ； 直径明显不同的纤维混存的情况等。 0084 “由于多个纤维相互重叠而被其他纤维遮挡， 从而。

25、无法测定纤维宽度的情况” 是 指， 在扫描电子显微镜照片中被遮挡的情况 ；“多个纤维由于熔融等而变成较粗的纤维的情 况” 是指， 熔融成纤维径为其他纤维的平均值的 1.5 倍以上的纤维等的情况 ；“直径明显不 同的纤维混存的情况” 是指， 纤维径为其他纤维的平均值的 2 倍以上的情况。 0085 从抑制堵塞、 防止压力损失的上升、 使流动顺畅的观点出发， 聚酯无纺布的单位面 积重量优选为 20g/cm2以上且 110g/cm2以下、 更优选为 60g/cm2以上且 100g/cm2以下。 0086 本实施方式的 “细胞去除过滤器在容器中的填充密度” 是指将细胞去除过滤器填 充于容器中时的每一定。

26、体积的重量， 细胞去除过滤器在容器中的填充密度优选为 0.01g/ cm3以上且 0.5g/cm3以下。从提高与血液样品的接触效率、 抑制堵塞、 防止压损的上升、 使 流动顺畅的观点出发， 该填充密度更优选为 0.03g/cm3以上且 0.3g/cm3以下。 0087 本实施方式的细胞去除过滤器中填充有含抗氧化剂的填充液。 0088 本实施方式中的 “抗氧化剂” 是指， 具有易于向其他分子等给予电子的性质的原 子、 分子或离子， 抗氧化剂具有抑制细胞去除过滤器的受到氧的作用而导致的变化的性质。 0089 抗氧化剂为选自由焦亚硫酸钠、 焦亚硫酸钾、 硫代硫酸钠、 亚硫酸氢钠、 亚硫酸钠、 次磷酸。

27、、 抗坏血酸、 和抗坏血酸衍生物组成的组中的至少 1 种。 0090 作为抗坏血酸衍生物并无特别限定， 例如可举出 5- 甲基 -3， 4- 二羟基涤特纶 (5-methyl-3， 4-dihydroxytetoron， MDT) 等。 0091 抗氧化剂可使用 1 种也可混合使用 2 种以上。 0092 从处理性、 安全性的观点出发， 抗氧化剂优选焦亚硫酸钠。 0093 本实施方式中的 “细胞去除过滤器填充有填充液” 是指， 填充液保持与细胞去除过 滤器接触、 细胞去除过滤器浸渍于填充液中的状态。 0094 本实施方式中的 “填充液” 是指， 在选择去除器的制造阶段填充于选择去除器内部 的液。

28、体， 在填充液中添加有抗氧化剂。 0095 含抗氧化剂的填充液可如下制作 ： 将抗氧化剂直接添加于水或生理食盐水等生理 溶液等填充液中进行溶解， 或者将抗氧化剂预先溶解于少量的醇等溶剂中并将所得溶液添 加于填充液中， 从而制作而成。 0096 对于含抗氧化剂的溶液中的抗氧化剂的浓度， 由选择去除器所使用的抗氧化剂的 种类和灭菌条件决定其最佳浓度， 优选为 100ppm 以上且 1000ppm 以下、 更优选为 300ppm 以 上且 1000ppm 以下。 0097 本实施方式中的 “辐射线灭菌” 是指， 将填充有填充液的细胞去除过滤器中存在的 微生物杀灭或去除。 0098 本实施方式中的 “。

29、辐射线” 是指， 包括 射线、 射线、 中子束或电子射线等粒子 说 明 书 CN 102223907 A CN 102223920 A6/13 页 8 束， X 射线或 射线等电磁波在内的电离辐射线， 从常用于医疗用具的灭菌的观点出发， 辐 射线优选为电子射线或 射线。 0099 电子射线为带电粒子束， 带电粒子束对照射对象物质的原子的轨道电子或被分子 束缚的电子直接作用电力， 引起电离。 0100 射线借助与照射对象物质的原子或原子核的相互作用而产生带电粒子束， 二次 产生的带电粒子束具有电离作用。 0101 本实施方式的利用电子射线和 射线的微生物的灭菌效果是通过电离作用产生 的自由基损伤。

30、微生物的 DNA 链， 从而阻碍细胞分裂能力， 基本的灭菌原理是相同的。 0102 辐射线灭菌所使用的辐射线的照射剂量根据选择去除器中存在的细菌的种类、 细 菌的数量或者想获得的无菌性保证水平等而不同， 可以通过测定 D 值或者实施有效性检查 等而分别决定， 优选通常使用的 10kGy 以上且 100kGy 以下， 其中优选 10kGy 以上且 50kGy 以下、 特别优选 15kGy 以上且 40kGy 以下。 0103 本实施方式的 “D 值” 是指将特定微生物数量的 90杀死或者使特定微生物数量 减少至 1/10 的灭菌处理单位 ( 时间或吸收剂量等 )。 0104 与 射线相比， 电子。

31、射线由于在短时间内完成一定剂量的照射， 因而单位时间的 照射剂量(剂量率)高， 自由基的产生量一般较少， 因此有能够降低照射对象物质的氧化劣 化的倾向。认为其原因在于， 剂量率高时， 则氧在表面被消耗， 还没有扩散到内部时即被完 全消耗。 0105 认为电子射线灭菌时的聚酯的分解可能比 射线灭菌时减少， 但并不是不产生 自由基。 0106 通过使用本实施方式的 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器， 能够从含抗凝血剂的 血液中选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞。通过选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞， 与以往 的白细胞去除的治疗效果相比， 效率更为提高。 0107 本实施方式中的 “H。

32、LA-DR 阳性细胞” 是指， 人血液成分白细胞中的、 细胞表面表达 有 HLA-DR 抗原的血细胞。 0108 本实施方式中的 “HLA-DR 阳性单核细胞” 是指为单核细胞的 HLA-DR 阳性细胞， “HLA-DR 阳性 B 细胞” 是指为 B 细胞的 HLA-DR 阳性细胞。 0109 本实施方式中的 “含抗凝血剂的血液” 是指， 在从人体采集的新鲜血液中混合抗凝 血剂后的血液。 0110 本实施方式中的 “能够选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞” 是指， 所去除的 HLA-DR 阳性单核细胞在所去除的白细胞中所占的比例为 12以上。 0111 本实施方式中的抗凝血剂为选自由柠檬酸。

33、或其盐组成的组中的至少 1 种。 0112 作为抗凝血剂并无特别限定， 例如可举出柠檬酸钠溶液、 ACD-A 液、 CPD 液 等。ACD-A(acid-citrate-dextrose) 液是由柠檬酸钠、 柠檬酸和葡萄糖组成的溶液 ； CPD(citrate-phosphate-dextrose) 液是指柠檬酸钠、 柠檬酸、 葡萄糖和磷酸二氢钠二水合 物组成的溶液。 0113 抗凝血剂可使用 1 种， 还可混合使用 2 种以上。 0114 优选的是， 本实施方式的 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器具备 ： 与上游侧的第 1 流路和下游侧的第 2 流路连接的、 填充有含抗氧化剂的填充液且经。

34、辐射线灭菌的细胞去除 说 明 书 CN 102223907 A CN 102223920 A7/13 页 9 过滤器 ； 与所述第 1 流路连接且能够将含抗凝血剂的血液供给至所述细胞去除过滤器的、 含有选自由柠檬酸和其盐组成的组中的至少 1 种抗凝血剂的容器。 0115 选择去除器 10 例如为图 1 所记载的构成。第 1 流路 20 为连接含抗凝血剂的容器 30 和细胞去除过滤器 40 的流路。第 1 流路 20 安装于送液泵 50 上， 可以将从患者采集的血 液送液至细胞去除过滤器 40。储存于容器 30 中的抗凝血剂被供给至第 1 流路 20、 与流过 第 1 流路 20 的血液相混合。。

35、然后， 该含抗凝血剂的血液被导入到细胞去除过滤器 40 进行 过滤。第 2 流路 60 为将通过细胞去除过滤器过滤后的血液导出至细胞去除过滤器外的流 路。 0116 本实施方式的从含抗凝血剂的血液中选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞的方法 为， 通过使用具备由表面未改性的聚酯无纺布构成的细胞去除过滤器的选择去除器， 从而 能够从血液中选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞的方法， 其包含以下工序 ： 0117 利用含抗氧化剂的填充液填充所述细胞去除过滤器的工序 ； 0118 对所述填充有填充液的细胞去除过滤器进行辐射线灭菌的工序 ； 和 0119 将包含含柠檬酸或其盐的抗凝血剂的血液通液至。

36、所述过滤器装置进行过滤的工 序。 0120 本实施方式的第一工序为， 通过向选择去除器内通液填充液而填充细胞去除过滤 器的工序。 0121 本实施方式的第二工序为， 在填充液的存在下对通过第一工序而填充有填充液的 细胞去除过滤器进行辐射线灭菌的工序。 0122 辐射线灭菌的方法并无特别限定， 例如可举出对 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除 器进行包装后实施照射的方法等。 0123 对辐射线灭菌装置并无特别限定， 例如可举出JS9500型辐射线灭菌装置(AECL公 司 ) 等。 0124 本实施方式的第三工序为将含抗凝血剂的血液通液至通过第二工序进行了辐射 线灭菌的细胞去除过滤器中进行过滤的工。

37、序。 0125 通过用细胞去除过滤器对血液进行过滤， 可以将 HLA-DR 阳性单核细胞捕获于细 胞去除过滤器中， 从而选择性去除 HLA-DR 阳性单核细胞。 0126 本实施方式中， 在第三工序中进行通液血液之前将填充液中的抗氧化剂去除， 优 选预先对细胞去除过滤器进行洗涤。 洗涤所使用的溶液只要是生理性溶液则可以使用各种 溶液。 另外， 为了抑制对血液凝固因子的刺激， 可以使用在生理性溶液中添加有抗凝血剂的 溶液， 其中可优选使用生理食盐水或在生理食盐水中添加有抗凝血剂的溶液。 0127 通过使用本实施方式的选择去除器， 可以制造从血液中将 HLA-DR 阳性单核细胞 选择性去除的血液。。

38、 0128 本实施方式中， 制造选择性去除了 HLA-DR 阳性单核细胞的血液的方法包含以下 工序 ： 0129 利用含抗氧化剂的填充液填充细胞去除过滤器的工序、 0130 对填充有填充液的细胞去除过滤器进行辐射线灭菌的工序 ； 和 0131 将包含含柠檬酸或其盐的抗凝血剂的血液通液至过滤器装置进行过滤的工序。 0132 本实施方式的抗氧化剂用于制造 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器的用途中， 所 说 明 书 CN 102223907 A CN 102223920 A8/13 页 10 述含抗氧化剂的填充液优选为含 300ppm 以上焦亚硫酸钠的填充液。 0133 本实施方式的抗氧化剂用于。

39、制造 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器的用途中， 所 述辐射线优选为 射线或电子射线。 0134 本实施方式中， 对于 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器在临床上的使用状况， 可以 考虑以下状况， 但并无特别限定。 0135 以类风湿关节炎患者或溃疡性结肠炎患者为对象在临床上使用时， 优选每周用 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器对 3L 血液处理一次， 共计重复 5 次。 0136 本实施方式中， 对 3L 血液进行处理是指如下进行处理。 0137 首先， 向与采血回路、 送液泵、 返血回路连接的 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器 内流入 1L 与采血回路连接的生理性溶液。接着，。

40、 使 500mL 添加有抗凝血剂的生理性溶液流 入 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器。 0138 接着， 将采血回路连接于患者的肘静脉等， 将返血回路连接于患者的其他肘静脉 等。在采血回路的分支处连接与加入有抗凝剂的生理性溶液相连的导管。 0139 以 50mL/min 的流速启动送液泵 1 小时， 使 3L 添加有含抗凝血剂的生理性溶液的 血液通入选择去除器。 3L血液通过完后， 将生理性溶液与采血回路连接， 使500mL生理性溶 液流入选择去除器后， 将血液返回至患者。 0140 作为含抗凝血剂的生理性溶液的添加方法并无特别限定， 例如可举出， 以相对于 1 容量的含4(w/v)柠檬酸。

41、钠的生理性溶液， 血液为540容量的方式启动泵， 从而在血液 中添加生理性溶液的方法等。 0141 采血回路由可连接于肘静脉等的血液的导入部及连接血液导入部和选择去除器 的导管构成， 具有与连接于含抗凝血剂的生理性溶液的导管的分支。在连接于含抗凝血剂 的生理性溶液的导管上连接有可与采血回路分开控制的送液泵。 0142 本实施方式的 “血液的导入部” 是指将血液导入至导管的部分。 0143 作为血液的导入部并无特别限定， 例如可举出穿线针 (spike needle)、 采血针等。 0144 导管只要是能够送液血液和生理性溶液等且可对生物体安全地进行送液的导管， 则可以使用任意的导管。另外， 导。

42、管的材质只要是不会由于血液和生理性溶液等溶液而溶 出有害物质的材质， 则可以使用任何一种材质。 0145 作为导管并无特别限定， 例如可举出氯乙烯、 硅、 聚丙烯、 聚乙烯等。 从强度的观点 出发， 导管优选使用氯乙烯， 作为氯乙烯的具体例子可举出 LC-3000N( 旭化成可乐丽医疗 株式会社 )。 0146 送液泵只要是送液装置即可， 可以利用使用了泵等的所有公知的装置。泵的构造 优选使用滚柱泵(roller pump)、 手指式泵(finger pump)等， 优选可在20mL/min300mL/ min 的流速范围内精度良好地进行送液的泵。作为泵的具体例子， 可举出 plusauto 。

43、LC( 旭 化成可乐丽医疗株式会社 )。 0147 本实施方式中的 “生理性溶液” 是指与体液基本等渗的溶液， 按照活细胞或组织尽 可能维持正常生理机能的方式调制的溶液。 0148 作为生理性溶液并无特别限定， 例如可举出生理食盐液 ( 包含生理食盐水 )、 林格 液 (Ringer s solution)、 乳酸林格液、 醋酸林格液、 台罗德氏液 (Tyrode s solution) 等 生理性盐类溶液 ； 含葡萄糖、 葡聚糖、 肝素等糖类的溶液 ； 含抗凝剂的溶液等。 说 明 书 CN 102223907 A CN 102223920 A9/13 页 11 0149 作为生理性溶液， 还。

44、优选使用对至少添加有 1 种以上的上述示例的生理性盐类溶 液、 含糖类溶液、 含抗凝剂的溶液等的混合液进行稀释得到的溶液。 0150 生理性溶液可使用1种， 还可制成以任意比例混合有2种以上的混合液进行使用， 其中可使用生理食盐液。 0151 本实施方式中， 通过用 HLA-DR 阳性单核细胞选择去除器对从患者采集的血液进 行处理， 可获得选择性去除了 HLA-DR 阳性单核细胞的血液制剂。 0152 作为从患者采集的血液并无特别限定， 例如可举出全血、 血浆或者红细胞制剂或 血小板制剂等血液来源制剂等。 0153 实施例 0154 以下通过实施例和比较例进一步具体地说明本实施方式， 本实施方。

45、式并非仅限定 于这些实施例。 0155 实施例 1 0156 将聚对苯二甲酸乙二醇酯 (PET) 无纺布 ( 平均纤维径 2.3m、 单位面积重量 90g/ m2、 厚度 0.45mm) 剪切成直径 6.8mm 的圆状， 重叠 11 张而制成细胞去除过滤器， 将该细胞去 除过滤器层叠在直径 6.8mm、 容器容量 1mL 的聚乙烯制的柱中 (Movicol( 注册商标 )、 公司 )( 填充密度 0.14g/cm3)。用焦亚硫酸钠水溶液 ( 焦亚硫酸钠 ： 林纯药 ) 填充柱 内， 将该柱放入纸壳箱中进行包装， 并照射 25kGy 的 射线进行灭菌处理。将所得的圆柱 作为选择去除器。水溶液中焦。

46、亚硫酸钠的浓度为 800ppm。 0157 从健康人志愿者采集血液， 向其中添加作为抗凝血剂的含有 4 (w/v) 柠檬酸钠 水合物的柠檬酸钠液 (Citramin( 注册商标 )、 扶桑药品 )， 使得柠檬酸钠液为 9.1 (v/v)， 将所得的人新鲜血液 ( 柠檬酸钠水合物的最终浓度为 0.36g/100mL) 作为过滤前样品。 0158 通过通液生理食盐水(大塚生食注(注册商标)、 大塚制药)对灭菌过的选择去除 器进行洗涤， 以 0.18mL/ 分钟对过滤前样品过滤 10 分钟。将此时从出口流出的血液作为过 滤后样品， 用于以下的测定。 0159 使用自动血球数测定装置(Sysmex S。

47、F-3000(东亚医用电子制)测定过滤前后的 白细胞浓度， 由下式 (1) 计算白细胞去除率。 0160 式 (1) ： 0161 白细胞去除率 ( ) 1-( 过滤后白细胞浓度 / 过滤前白细胞浓度 )100 0162 比较例 1 0163 除了填充水 ( 不含焦亚硫酸钠 ) 作为填充液之外， 通过与实施例 1 相同的方法获 得白细胞去除器。 0164 添加作为抗凝血剂的含有 10mg/100mL 甲磺酸萘莫司他的溶液， 使得甲磺酸萘莫 司他溶液 (Futhan( 注册商标 )、 鸟居药品、 以下相同。) 为 12 (v/v)， 将所得的人新鲜血 液 ( 甲磺酸萘莫司他的最终浓度为 1.2m。

48、g/100mL) 作为过滤前样品。使用上述白细胞去除 器， 利用与实施例 1 相同的方法对过滤前样品进行过滤。测定白细胞浓度， 计算白细胞去除 率。 0165 比较例 2 0166 添加作为抗凝血剂的含有 10mg/100mL 甲磺酸萘莫司他的溶液， 使得甲磺酸 萘莫司他溶液为 12 (v/v)， 将所得的人新鲜血液 ( 甲磺酸萘莫司他的最终浓度为 说 明 书 CN 102223907 A CN 102223920 A10/13 页 12 1.2mg/100mL) 作为过滤前样品。使用实施例 1 的选择去除器， 利用与实施例 1 相同的方法 对过滤前样品进行过滤。测定白细胞浓度， 计算白细胞去。

49、除率。 0167 比较例 3 0168 除了使用与比较例 1 同样地制作的白细胞去除器之外， 利用与实施例 1 相同的方 法对过滤前样品进行过滤。测定白细胞浓度， 计算白细胞去除率。 0169 实施例 2 4 0170 除了在与实施例 1 同样制作的柱内填充 100ppm、 300ppm 或 1000ppm 的焦亚硫酸钠 水溶液之外， 利用与实施例 1 相同的方法计算白细胞去除率。 0171 实施例 5 0172 将按照以 12 (v/v) 含有作为抗凝血剂的 ACD-A 液 ( 含有 0.8柠檬酸、 2.2柠 檬酸钠、 2.2葡萄糖溶液， 社 ) 的方式添加了 ACD-A 液的人新鲜血液作为过滤前样 品。使用实施例 1 的选择去除器， 利用与实施例 1 相同的方法对过滤前样品进行过滤。测 定白细胞浓度， 计算白细胞去除率。 0173 将实施例 1 5 和比较例 1 3 的结果示于表 1。 0174 本实施方式中使用的 HLA-DR 阳性单核细胞的选择性去除的试验方法如下所述。 0175 试验例 1 0176 使过滤前、 过滤后样品分别与进行了荧光标记的抗 HLA-DR 抗体 (BECTON， DICKINSON AND COMPANY.) 反应， 利用流式细胞仪 (FACS Calibur、 。